CC BY
19
УДК :616.98:576.893.161.21-085
Учет некоторых показателей цитокинового статуса и клеточного иммунитета в комплексном лечении больных воспалительными заболеваниями урогенитального тракта
Ярошенко А.А.
Институт дерматологии и венерологии АМН Украины, Харьков
ВРАХУВАННЯ ДЕЯКИХ ПОКАЗНИК1В ЦИТОКИНОВОГО СТАТУСУ I КЛ1ТИННОГО 1МУН1ТЕТУ В КОМПЛЕКСНОМУ Л1КУ-ВАНН1 ХВОРИХ 13 ЗАПАЛЬНИМИ ЗАХВО-РЮВАННЯМИ СЕЧОСТАТЕВОГО ТРАКТУ Ярошенко О.О.
Вивчався вплив шдуктору ендогенних Ытерферошв Кагоцелу на деякi показники цитокинового статусу i клiтинного iмунiтету у 31 хворого на сечостатеву Ыфек-цю та у 34 здорових донорiв. Найбiльшi рiвнi досль джуваних цитокишв (/РЫ-а, ТЫР-а, /^-8) у сироватц кровi рееструвалися у груп хворих до одержання те-рапи, при збiльшеннi спонтанно! iндукцií ТЫР-а та /^-8 (Р < 0,05). Середн рiвнi ТЫР-а в Ыдукованих пробах (Пiрогенал, Кагоцел) були ютотно зниженi у хворих до проведення !м терапií, при одночасному пщви-щеннi iндукцií /^-8. Вивчення мононуклеарiв з екс-преаею рецепторiв СО3+, 004+ показало, що най-бiльшi середнi рiвнi вищевказаних цитокиыв рееструвалися в груп здорових, а найменшi - у груп хворих до лiкування (76 % i 35 %, вщповщно, Р < 0,05). Ком-плексне застосування кагоцелу у хворих з урогешталь-ними 1ПСШ нормалiзувало показники /РЫ-а, ТЫР-а, /^-8, а також процентний вмют мононуклеарiв з експ-ресiею рецепторiв С03+, С04+.
THE ACCOUNT OF SOME PARAMETERS OF THE CYTOKINE STATUS AND CELLULAR IMMUNITY IN THE COMPLEX TREATMENT OF PATIENTS WITH URINO-GENITAL INFLAMMATORY DISEASES Yaroshenko A. A.
The influence of endogenous interferon inductor Kagocel on some indices of the cytokine status and cellular immunity in 31 patients with urino-genital STI and 34 healthy donors has been investigated. The greatest levels of IFN-a, TNF-a, IL-8 in blood serum have been registered in the group of patients before therapy, with an increased level of spontaneous TNF-a and IL-8 induction (P < 0,05). Average TNF-a levels in the induced tests (Pyrogenal, Kagocel) have been essentially lowered in the patients before therapy in view of simultaneous increase of IL-8 induction. The study of mononuclear cells with CD3+ and CD4+ receptors expression has shown that the greatest average levels of the cytokines have been recorded in healthy volunteers, and the lowest ones - in the patients before treatment (76 % and 35 % respectively, P < 0,05). The Kagocel complex treatment of patients with urino-genital STI has been normalized IFN-a, TNF-a, IL-8 indices and increased the percentage of mononuclear cells with CD3+ and CD4+ receptors expression.
Инфекционно-воспалительные заболева ния (ИВЗ) урогенитального тракта являются широко распространенными заболеваниями у человека, преимущественно вызываемые инфекциями, передающимися половым путем (ИППП). Клинически важно, что вовлечение в воспалительный процесс обеих (мочевой и половой) систем обуслов-
лено [1]:
- их тесным анатомическим расположением;
- общими кровоснабжением и лимфатической системой;
- развитием в эмбриогенезе органов данных систем из единого зародышевого листка.
Следует сказать, что ИППП, как главный этиологический фактор ИВЗ урогени-тального тракта, насчитывает более 20 инфекций и характеризуются высокой конта-гиозностью и быстрым распространением среди определенных групп населения [2]. Отмечено, что данная категория инфекций очень часто выступает в виде ассоциаций различных бактерий, что усугубляет течение болезни, а также затрудняет диагностику и лечение [3]. По данным многочисленных авторов, главная роль в развитии ИВЗ урогенитального тракта принадлежит Chla-mydia trachomatis [4], хотя в последнее время отмечено увеличение частоты регистрации случаев трихомониаза, который выявляется у 5-10 % всех женщин и у 20-65 % пациенток с гинекологической патологией [5]. Следует также отметить немаловажную роль в развитии ИВЗ мочеполовой системы мико-плазменной инфекции, а именно Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis, которые наиболее часто выделяются из половых органов, а также характеризуются бессимптомным носительством в уретре, влагалище, прямой кишке у 20-75 % населения [6].
Исходя из механизмов иммунного ответа, при инфекционном процессе первыми включаются неспецифические факторы защиты. При этом для эффективного фагоцитоза, особенно внутриклеточных возбудителей, должна произойти активация фагоцитов, которую обеспечивают ряд факторов, в том числе цитокины и интерфероны. В состав данных цитокинов входят, в том числе, и фактор некроза опухолей (ФНО) и интерлейкин 8 (IL-8), которые берут активное участие в инфекционном процессе. IL-8 активирует нейтрофилы, а ФНО - также моноциты и макрофаги, усиливая тем самым их цитотоксичность и фагоцитарные возможности. Данные цитокины также являются и хемокинами для вышеуказанных фагоцитов, что способствует их хемотаксису в очаг воспаления. Следует сказать, что ин-терфероны также играют немаловажную роль в инфекционном процессе, что проявляется в усилении фагоцитоза, цитотоксич-ности Г-лимфоцитов, а также увеличении экспрессии молекул главного комплекса ги-стосовместимости (ГКГ) I и II типов [7]. Отмечено, что существует ряд индукторов эн-
догенных интерферонов, одним из которых является Кагоцел, представляющий собой гетероцепный полимер, получаемый из кар-боксиметилцеллюлозы и госсипола, обладающий химиотерапевтической активностью в отношении различных вирусов и бактерий. Отмечено, что основным механизмом действия Кагоцела является способность индуцировать продукцию позднего интерферона, являющегося смесью а- и в-интерферонов. При этом максимальные концентрации в крови возникают уже через 48 часов, а продолжительность интерферонового ответа длится до 4-5 суток. Установлено также, что Кагоцел способен индуцировать в культуре клеток здоровых лиц продукцию ФНО и Л-8 [8, 9]. Однако влияние данного идукто-ра итерферона на синтез вышеуказанных цитокинов и интерферона а практически не изучалось.
Цель работы - изучение влияния индуктора эндогенных интерферонов Кагоцела (НИАРМЕДИК, Россия) на некоторые показатели цитокинового статуса и клеточного иммунитета у лиц, страдающих урогени-тальной инфекцией, передающейся половым путем.
Материалы и методы. При выполнении работы был обследован 31 человек (11 женщин и 10 мужчин возрастом от 19 до 32 лет - в среднем 26,6 ± 2,3 года), страдающий ИВЗ мочеполовой системы; давность заболевания - от одного до пяти лет. Все больные имелись субъективные симптомы и объективные признаки воспаления со стороны половых органов. По этиологии ИВЗ больные распределили следующим образом:
- хламидиоз (моноинфекция) - 8 больных;
- трихомоноз (моноинвазия) - 11;
- микоплазмоз (моноинфекция) - 4 больных.
У остальных 8 больных наблюдались различные сочетания смешанной инфекции.
Проводилась лабораторная диагностика:
- хламидиоза - с помощью реакции прямой иммунофлуоресценции (ПИФ) и поли-меразной цепной реакции (ПЦР);
- трихомониаза - с применение бактери-оскопического и бактериологического методов.
Для исследования применяли модифицированную питательную среду СКДС, разра-
1-4 (10)' 2007 Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
ботанную в Институте дерматологии и венерологии АМН Украины. Выявление дрож-жеподобных грибов, уреаплазменной инфекции и сопутствующих бактерий проводили согласно «Ушфшацп лабораторних методiв дослщження в дiагностицi захворювань, що передаються статевим шляхом» [10] и Приказа МЗ № 535 «Про ушфшащю мшробю-логiчних (бактерюлопчних) методiв дослщ-ження, застосовуваних у клшшо^агностич-них лабораторiях лшувально-профшактич-них установ».
Этиотропное лечение больных проводилось в зависимости от этиологии и в соответствии с методиками лечения ИПП, рекомендованными МОЗ Украины [11]. Больные обследовались как до комплексного лечения с применением Кагоцела, так и после лечения.
Контрольную группу составили 32 человека без клинических признаков болезней, аналогичного состава по возрасту и полу.
Уровень TNF-а, ^^а, /¿-8 исследовался в сыворотке крови, а также в надосадках, полученных при культивации в течение 24 часов исследуемых проб крови с и без добавления индукторов (Пирогенал, Кагоцел). Исследование уровней TNF-а, IFN-а, /¿-8 производилось с помощью иммунофермент-ных тест-систем (Табл. 1) производства ООО «Укрмедсервис» (Донецк, Украина). Выбранные для исследования тест-системы характеризуются быстротой выполнения анализа (до 4 час. 30 мин.), высокой чувствительностью и воспроизводимостью результатов (коэффициент вариации не более 5 %). Клеточный состав мононуклеаров крови определяли исходя из показателей экспрессии ими
Таблица 1 - Средние уровни цитокинов в сыворотке и надосадках, полученных при культивации в исследуемой(до и после лечения) и контрольной группах (Ме ± т)
Исследуемые цитокины в сыворотке и надосадках: спонтанных и стимулированных (пг/мл). Г руппы обследуемых
Здоровые Исследуемая группа
до лечения после лечения
а сыворотка спонтанная Пирогенал Кагоцел 0 ± 0,83 159,5 ± 49 2849 ± 48 1616 ± 160 34,1 ± 9,5* 268,3 ± 17,4* 2020 ± 202* 944 ± 122** 0,65 ± 1,1 166 ± 43,3 2421± 194 1116±246
/¿-8 сыворотка спонтанная Пирогенал Кагоцел 0 ± 0,4 1530 ± 428 19280 ±1604 8604 ± 220 45,5 ± 11,3* 4032 ± 1249* 25117±1962* 10242 ± 714** 2,0 ± 0,7 1160 ± 482 17032±2715 8738 ±621
ПРИМЕЧАНИЯ: * - статистически значимое отличие (р < 0,05) от значения в группе здоровых и исследуемой группе после лечения; **- статистически значимое отличие (р < 0,05) от значения в группе здоровых.
рецепторов С03+, СБ4+ [12].
Проводимая статистическая обработка полученного материала включала анализ средних величин, проверку распределения вариационного ряда на нормальность. В связи с тем, что распределение большинства вариационных рядов отличалось от нормального, вычислялась медиана (Ме), ошибка медианы (т), Ж-критерий Вилкоксона с испольлзованием программы "Medstat".
Результаты и обсуждения. При изучении средних уровней (Ме) цитокинов (TNF-а, /¿-8) в сыворотке, а также в надосадках, полученных при культивации в спонтанном и индуцированном режиме, (Табл. 1) выявле-
но, что наибольшие средние уровни TNF-а в сыворотке и в спонтанной пробе регистрировались в исследуемой группе до лечения: они составили 34,1±9,5 и 268,3 ± 17,4 пг/мл, соответственно, что отличалось от аналогичного показателя в контрольной группе и группе больных, прошедших терапию (Р < 0,001). При этом, в пробах, стимулированных Пирогеналом и Кагоцелом, наибольшие медианы наблюдались в группе здоровых лиц и составили 2849 ± 48 и 1616 ± 160 пг/мл, соответственно (Р < 0,001). Изучение среднего уровня /¿-8 показало, что наибольшие средние уровни данного цито-кина в исследуемых группах (как в сыворот-
ке, так и в спонтанных и индуцированных пробах) регистрировались в группе больных до получения терапии, что отличалось от аналогичного показателя в группах здоровых и больных, прошедших лечение (Р < 0,05). Проведенная терапия обусловила нормализацию вышеуказанных показателей. При изучении уровня №Ы-а (Табл. 2) в сыворотке крови, наибольшие средние уровни его (13,4 ± 2,3 пг/мл) регистрировались в группе больных до получения ими лечения (Р < 0,05). При этом в надосадочной жидкости индуцированных проб (Кагоцелом) уровень интерферона а был существенно снижен по сравнению с контрольной группой (Р < 0,05).
Проведение лечения обусловило восстановление данного показателя. Исследование средних уровней показателей клеточного
иммунитета (Рис. 1), а именно мононуклеа-ров с экспрессией рецепторов СБ3+, СБ4+, во всех опытных группах показало, что наибольшие средние уровни регистрируются в группе здоровых и составляют 76 % и 35 %, соответственно. При этом наименьшие медианы СВ3+, СБ4+ выявлены в группе больных до прохождения терапии, где они составили 40 % и 18,5 %, соответственно, что отличается от средних уровней СВ3+, СБ4+ в других группах (Р < 0,05). Проведение лечения обусловило повышение количества клеток, экспрессирующих вышеуказанные антигены.
Таким образом, при комплексном лечении больных ИВЗ мочеполовой системы кагоцелом нормализовались уровни ШЫ-а, ТЫЕ-а, 1Ь-8 в сыворотке и культивируемых пробах в спонтанном и индуцированном режиме,
Таблица 2 - Средние уровни ШЫа в сыворотке и надосадках полученных при культивации в исследуемой
(до и после лечения) и контрольной группах (Ме ± т)
ШЫа в сыворотке и надосадках: спонтанных и стимулированных (пг/мл). Группы обследуемых
Здоровые Исследуемая группа
до лечения после лечения
ШЫа сыворотка Кагоцел 0 ± 0,4 9,0 ± 0,5 13,4 ± 2,3* 4,0 ± 0,3* 1,3 ± 0,5 7,2 ± 0,5
ПРИМЕЧАНИЕ: * — статистически значимое отличие (р < 0,05) от значения в группе здоровых лиц.
80 70 60 50 40 30 20 10 0
7К
здоровые
до лечения после лечения
Группы обследуемых
■ ОР3 пОР4
Рисунок 1. Средние уровни (Ме) мононуклеаров крови с экспрессией рецепторов СБ3+, СБ4+ (%) в исследуемой (до и после лечения) и контрольной группах.
1-4 (10)' 2007 Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология
а также нормализовалось процентное содержание мононуклеаров с экспрессией рецепторов CD3+, CD4+, что подтверждается в наличии отличий между медианами вышеуказанных показателей в группе больных до лечения и прошедших терапию (Р < 0,05). При этом значимое (Р > 0.05) отличие отсутствовало между аналогичным показателем в группе здоровых и больных прошедших лечение.
Выводы
1 Наибольшие средние уровни исследуемых цитокинов (IFN-a, TNF-a, IL-8) в сыворотке крови регистрировались в группе больных до получения терапии, при увеличении уровня спонтанной индукции TNF-a и IL-8 клетками их крови (Р < 0,05).
2. Средние уровни TNF-a в индуцирован -
ЛИТЕРАТУРА
1. Мавров И.И. Половые болезни: Руковод. для врачей. - Харьков: ФАКТ, 2002. -788 с.
2. Венцмвський Б. М., Товстановська В. О. 1нфекцп, що передаються статевим шляхом // Мистецтво лшування. - 2004. -№ 6. - С. 52-55.
3. Дмитриев Г. А. Наиболее распространенные урогенитальные инфекции: диагностика и терапия // Справочник поликлинического врача. - 2004. - № 3. - С. 53-56.
4. Мавров Г. И. Хламидийные инфекции: биология возбудителей, патогенез, клиника, диагностика, лечение, профилактика. -К.: Геркон, 2005. - 524 с.
5. Мавров Г.И., Шаповалова О.В., Никитен-ко И.Н., Башкатова Е.В. Клинико-эпиде-миологические аспекты трихомониаза на современном этапе // Журн. дерматовенерологии и косметологии им. Н.А. Тор-суева. - 2004. - № 1-2. - С. 7-11.
6. Башмакова М. А., Савичева А. М. Гениталь-ные микоплазмы и микоплазменные инфекции // Здоровье женщины. - 2006. -№ 4. - С. 185-190.
7. Якобисяк М. 1мунолопя. - Вшниця: Нова Книга, 2004. - 660 с.
ных пробах (Пирогенал, Кагоцел) были существенно снижены у больных до проведения им терапии, при одновременном повышении индукции /¿-8 на данные стимуляторы.
3. Изучение мононуклеаров с экспрессией рецепторов СБ3+, СБ4+ показало, что наибольшие средние уровни вышеуказанных цитокинов регистрировались в группе здоровых - 76 % и 35 %, соответственно, а наименьшие - в группе больных до лечения (Р < 0,05).
4. Комплексное применение кагоцела у больных с ИВЗ урогенитального тракта нормализовало показатели /FN-а, TNF-а, /¿-8, а так же процентное содержание мононуклеаров с экспрессией рецепторов СВ3+, СБ4+.
8. Галегов Г.А., Наровлянский А.Н., Сарым-саков А.А., Мезенцева М.В., Полонский В.О., Гомес Л.А., Нестеренко В.Г., Ершов Ф.И. Действие препарата кагоцел на репродукцию вируса герпеса // Вопр. виру-сол. - 2002. - № 4. - С. 42-44.
9. Тутушкина Т.В., Шульженко А.Е. Влияние терапии кагоцелом на показатели имму-нограммы пациентов с генитальной формой хронической рецидивирующей герпес-вирусной инфекции // Физиология и патология иммунной системы. - 2004. -№ 4. - С. 24-30/
10. Мавров 1.1., Белозоров О.П, Тацька Л.С. Ушфшащя лабораторних методiв досль дження в дiагностицi захворювань, що передаються статевим шляхом. - Хармв, 2000. - 120 с
11. Методики лшування i профшактики ш-фекцш, як передаються статевим шляхом. - Харюв: Факт, 2001. - С. 34-38.
12. Иммуноцитохимия и моноклональные антитела в онкогематологии / Пинчук В .Г., Глузман Д. Ф., Надгорная В. А. и др. - К : Наук. думка, 1990. - 232 с.
