CC BY
19
48
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
и Вестерн блот, тогда как ПЭМ позволила визуализировать отдельные железосодержащие наночастицы в цитоплазме и нуклеоплазме клеток, со средним диаметром 32 ± 4 нм. Было показано, что в составе наночастиц присутствуют железо и кислород. Генетическая метка не оказывала влияния на жизнеспособность и пролиферацию клеток, а наличие железосодержащих наночастиц в инкап-сулинах позволило визуализировать МСК в головном мозге крысы методом МРТ как после стереотаксического, так и после интраартериального введения. Было продемонстрировано, что интенсивность МР-сигнала оставалась на постоянном уровне в течение 7 дней после стереотак-сического введения клеток в головной мозг животных.
Литература: 1. Giessen, T.W. Elife, 2019. V. 8. e46070.
ЦИТОПРОТЕКТИВНЫЙ ЭФФЕКТ СЕКРЕТОМА
МСК ЖИРОВОЙ ТКАНИ
М.А. Габриелян, П.А. Ахметова, В.Д. Муренце1
ФГБОУ ВО Ставропольский государственный
медицинский университет Минздрава России,
Ставрополь, Россия
e-mail: gabrjeivanmara16@gmaii.com
Ключевые слова: цитопротективный эффект, МСК, секретом, фибробласты.
Недавние исследования показали, что скорее молекулы, продуцируемые МСК (секретом), особенно содержащиеся во внеклеточных везикулах, а не сами клетки, отвечают за регенерацию тканей [1, 2].
Первичные культуры МСК жировой ткани крысы, полученные путем ферментативной диссоциации кол-лагеназой, культивировались в среде DMEM с 5% эмбриональной телячьей сыворотки при 37°С и 5% СО2 в инкубаторе ИЛМ-170-01 (ЛамСис, Россия). Для получения секретома МСК, клетки на 3-ем пассаже помещались в стерильный раствор фосфатного буфера на 24 ч при комнатной температуре, после чего надо-садочную жидкость фильтровали и центрифугировали при помощи многофункциональной центрифуги Thermo Scientific SL 16R (Thermo, Германия).
Клетки культуры фибробластов легкого взрослой крысы (Sigma-Aldrich, США) рассеивались в 24-лу-ночные планшеты и культивировались в течение суток в стандартных условиях с добавлением полученного секретома (опыт) и без (контроль). Клетки обеих групп подвергались 2-часовому оксидативному стрессу, индуцированному воздействием раствора перекиси водорода (60 мкМ) [3].
Определение количества живых и погибших клеток проводили с помощью окрашивания клеток флуоресцентными красителями кальцеином АМ (Sigma-Aldrich, США) и йодидом пропидия (Sigma-Aldrich, США). Клетки открепляли от культурального пластика с помощью коктейля Accutase (Sigma-Aldrich, США). Клетки окрашивали в среде L-15 (Sigma-Aldrich, США) с 1% эмбриональной телячьей сыворотки, содержащей 1 мкг/мл кальцеина АМ и 2 мкг/мл йодида пропидия, в течение 25 минут при 37°С. Анализ живых и погибших клеток осуществляли с использованием проточного цитометра Novocyte 3000 (ACEA Biosciences, США).
Клетки опытной группы показали статистические достоверно более высокую в сравнении с контролем жизнеспособность (на 24,05%). Полученные данные
свидетельствуют в пользу наличия цитопротективного эффекта секретома МСК.
Литература:
1. Mitchell R., Mellows B., Sheard J. et al. Stem Cell Res Ther. 2019 V. Apr 5. № 10(1). P. 116.
2. Haque N., Widera D., Govindasamy V. et al. Curr Mol Med. 2022. № 22(2). P. 120.
3. Сазонова Е.Н., Яковенко Д.В., Лебедько О.А. и др. Дальневосточный медицинский журнал. 2015. № 4. С. 80.
ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДПОЛАГАЕМОЙ ПРОГЕНИТОРНОЙ ПОПУЛЯЦИИ СТРОМЫ ЭНДОМЕТРИЯ МЫШИ НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ ОНТОГЕНЕЗА
А.О. Гайдамака, Л.Ш. Измайлова, Е.А. Воротеляк
Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва, Россия
e-mail: stadtrand@yandex.ru
Ключевые слова: Эндометрий, гетерогенность стромаль-ной популяции, мезенхимная стволовая клетка (МСК)
Эндометрий является внутренней оболочкой матки. В ходе менструального цикла он проходит фазы пролиферации, дегенерации и регенерации. Эти процессы связаны с активностью стволовой популяции эндометрия. Существует несколько маркеров стволовой популяции эндометрия, которые были обнаружены в строме эндометрия человека. Предполагается, что они маркируют популяцию МСК. Локализация некоторых маркеров, например, CD90, ограничивается функциональным слоем и периваскуляр-ной областью в базальном слое. CD146, в свою очередь, маркирует перициты. Известно, что процентное соотношение клеток, экспрессирующих эти маркеры меняется в течение менструального цикла. Эндометрий мыши также подвергается изменениям в ходе эстрального цикла, однако они не так выражены, как у человека. О прогениторной популяции клеток эндометрия мыши и ее локализации имеются лишь фрагментарные данные.
На первом этапе работы криосрезы матки взрослой мыши на разных стадиях эстрального цикла окрашивали антителами к широкой панели маркеров. Иммуногистохимическое окрашивание выявило гетерогенность в строме эндометрия мыши на всех стадиях онтогенеза (Е18,5, Р5 и взрослая мышь) по маркеру CD146. Гетерогенность по распределению иммунофлуоресцентно-го окрашивания CD90 была обнаружена только в эндометрии взрослой мыши и у эмбриона на стадии E18.5.
Строма, положительно окрашенная на CD146, представлена или отдельными клетками или образует тяжи в стромальном компартменте, а также определяется вокруг стенок сосудов и маточных желез. Окраска на CD146 коло-кализована на срезах эндометрия с положительной окраской на CD90. К CD90+ области относится строма, подлежащая люминальному эпителию и маточным железам.
В тотальной фракции клеток эпителия и стромы, выделенных из эндометрия мыши на разных стадиях цикла была проанализирована экспрессия маркеров CD90 и CD146 при помощи метода проточной цитофлу-ориметрии. Были выделены следующие субпопуляции: эпителиальные клетки EPCAM+/CD90low- и 2 популяции стромальных клеток EPCAM-/CD90- и EPCAM-/ CD90+. В фазе эструса и эструса, индуцированного Е2, наблюдалась наибольшая медиана интенсивности флуоресценции (MFI) CD90+ популяции.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
