CC BY
7
и Вестерн блот, тогда как ПЭМ позволила визуализировать отдельные железосодержащие наночастицы в цитоплазме и нуклеоплазме клеток, со средним диаметром 32 ± 4 нм. Было показано, что в составе наночастиц присутствуют железо и кислород. Генетическая метка не оказывала влияния на жизнеспособность и пролиферацию клеток, а наличие железосодержащих наночастиц в инкап-сулинах позволило визуализировать МСК в головном мозге крысы методом МРТ как после стереотаксического, так и после интраартериального введения. Было продемонстрировано, что интенсивность МР-сигнала оставалась на постоянном уровне в течение 7 дней после стереотак-сического введения клеток в головной мозг животных.
Литература: 1. Giessen, T.W. Elife, 2019. V. 8. e46070.
ЦИТОПРОТЕКТИВНЫЙ ЭФФЕКТ СЕКРЕТОМА
МСК ЖИРОВОЙ ТКАНИ
М.А. Габриелян, П.А. Ахметова, В.Д. Муренце1
ФГБОУ ВО Ставропольский государственный
медицинский университет Минздрава России,
Ставрополь, Россия
e-mail: gabrjeivanmara16@gmaii.com
Ключевые слова: цитопротективный эффект, МСК, секретом, фибробласты.
Недавние исследования показали, что скорее молекулы, продуцируемые МСК (секретом), особенно содержащиеся во внеклеточных везикулах, а не сами клетки, отвечают за регенерацию тканей [1, 2].
Первичные культуры МСК жировой ткани крысы, полученные путем ферментативной диссоциации кол-лагеназой, культивировались в среде DMEM с 5% эмбриональной телячьей сыворотки при 37°С и 5% СО2 в инкубаторе ИЛМ-170-01 (ЛамСис, Россия). Для получения секретома МСК, клетки на 3-ем пассаже помещались в стерильный раствор фосфатного буфера на 24 ч при комнатной температуре, после чего надо-садочную жидкость фильтровали и центрифугировали при помощи многофункциональной центрифуги Thermo Scientific SL 16R (Thermo, Германия).
Клетки культуры фибробластов легкого взрослой крысы (Sigma-Aldrich, США) рассеивались в 24-лу-ночные планшеты и культивировались в течение суток в стандартных условиях с добавлением полученного секретома (опыт) и без (контроль). Клетки обеих групп подвергались 2-часовому оксидативному стрессу, индуцированному воздействием раствора перекиси водорода (60 мкМ) [3].
Определение количества живых и погибших клеток проводили с помощью окрашивания клеток флуоресцентными красителями кальцеином АМ (Sigma-Aldrich, США) и йодидом пропидия (Sigma-Aldrich, США). Клетки открепляли от культурального пластика с помощью коктейля Accutase (Sigma-Aldrich, США). Клетки окрашивали в среде L-15 (Sigma-Aldrich, США) с 1% эмбриональной телячьей сыворотки, содержащей 1 мкг/мл кальцеина АМ и 2 мкг/мл йодида пропидия, в течение 25 минут при 37°С. Анализ живых и погибших клеток осуществляли с использованием проточного цитометра Novocyte 3000 (ACEA Biosciences, США).
Клетки опытной группы показали статистические достоверно более высокую в сравнении с контролем жизнеспособность (на 24,05%). Полученные данные
свидетельствуют в пользу наличия цитопротективного эффекта секретома МСК.
Литература:
1. Mitchell R., Mellows B., Sheard J. et al. Stem Cell Res Ther. 2019 V. Apr 5. № 10(1). P. 116.
2. Haque N., Widera D., Govindasamy V. et al. Curr Mol Med. 2022. № 22(2). P. 120.
3. Сазонова Е.Н., Яковенко Д.В., Лебедько О.А. и др. Дальневосточный медицинский журнал. 2015. № 4. С. 80.
ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДПОЛАГАЕМОЙ ПРОГЕНИТОРНОЙ ПОПУЛЯЦИИ СТРОМЫ ЭНДОМЕТРИЯ МЫШИ НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ ОНТОГЕНЕЗА
А.О. Гайдамака, Л.Ш. Измайлова, Е.А. Воротеляк
Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва, Россия
e-mail: stadtrand@yandex.ru
Ключевые слова: Эндометрий, гетерогенность стромаль-ной популяции, мезенхимная стволовая клетка (МСК)
Эндометрий является внутренней оболочкой матки. В ходе менструального цикла он проходит фазы пролиферации, дегенерации и регенерации. Эти процессы связаны с активностью стволовой популяции эндометрия. Существует несколько маркеров стволовой популяции эндометрия, которые были обнаружены в строме эндометрия человека. Предполагается, что они маркируют популяцию МСК. Локализация некоторых маркеров, например, CD90, ограничивается функциональным слоем и периваскуляр-ной областью в базальном слое. CD146, в свою очередь, маркирует перициты. Известно, что процентное соотношение клеток, экспрессирующих эти маркеры меняется в течение менструального цикла. Эндометрий мыши также подвергается изменениям в ходе эстрального цикла, однако они не так выражены, как у человека. О прогениторной популяции клеток эндометрия мыши и ее локализации имеются лишь фрагментарные данные.
На первом этапе работы криосрезы матки взрослой мыши на разных стадиях эстрального цикла окрашивали антителами к широкой панели маркеров. Иммуногистохимическое окрашивание выявило гетерогенность в строме эндометрия мыши на всех стадиях онтогенеза (Е18,5, Р5 и взрослая мышь) по маркеру CD146. Гетерогенность по распределению иммунофлуоресцентно-го окрашивания CD90 была обнаружена только в эндометрии взрослой мыши и у эмбриона на стадии E18.5.
Строма, положительно окрашенная на CD146, представлена или отдельными клетками или образует тяжи в стромальном компартменте, а также определяется вокруг стенок сосудов и маточных желез. Окраска на CD146 коло-кализована на срезах эндометрия с положительной окраской на CD90. К CD90+ области относится строма, подлежащая люминальному эпителию и маточным железам.
В тотальной фракции клеток эпителия и стромы, выделенных из эндометрия мыши на разных стадиях цикла была проанализирована экспрессия маркеров CD90 и CD146 при помощи метода проточной цитофлу-ориметрии. Были выделены следующие субпопуляции: эпителиальные клетки EPCAM+/CD90low- и 2 популяции стромальных клеток EPCAM-/CD90- и EPCAM-/ CD90+. В фазе эструса и эструса, индуцированного Е2, наблюдалась наибольшая медиана интенсивности флуоресценции (MFI) CD90+ популяции.
Полученные данные важны для определения различий в свойствах и локализации стволовой популяции у мыши и у человека. Понимание этих различий необходимо для изучения эндометрия человека с использованием мыши в качестве модельного объекта. Работа выполнена за счет гранта Российского Научного Фонда (проект № 21-74-30015).
РЕМОДЕЛИРОВАНИЕ НЕЙРОГЛИИ В ПОЯСНИЧНОМ УТОЛЩЕНИИ СПИННОГО МОЗГА ПОСЛЕ КОНТУЗИОННОЙ ТРАВМЫ В НИЖНЕГРУДНОМ ОТДЕЛЕ У МИНИ-СВИНЕЙ
Р.Р. Гарифулин, М.А. Давлеева, Э.И. Бариев, С.С. Таргачев, Р.Х. Ахметов, И.С. Минязева, В.П. Петрова, А.Р. Хамитов, А.А. Измайлов, Р.Р. Исламов
ФГБОУ ВО Казанский ГМУ Минздрава России, Казань, Россия
e-mail: ravil.l16rus@mail.ru
Ключевые слова: контузионная травма спинного мозга, нейроглия, мини-свинья, поясничное утолщение.
Многочисленные научные работы, посвященные изучению травмы спинного мозга (ТСМ), нацелены на исследование реактивной нервной ткани, непосредственно прилегающей к очагу поражения спинного мозга. При этом, патологические сдвиги градиентно распространяется в ростральном и каудальном направлениях от эпицентра нейротравмы. Феномен отдаленных вторичных повреждений имеет важное значение в посттравматическом восстановлении спинного мозга и является актуальным направлением для разработки принципов нейро-реабилитации пациентов с ТСМ.
Цель исследования — иммунофлуоресцентный анализ клеток нейроглии в поясничном утолщении спинного мозга через 60 сут после моделирования контузионной травмы на уровне Th8-Th9 у мини-свиней.
В исследовании были использованы самки мини-свиней (вьетнамская вислобрюхая) весом 20-25 кг (n=8): интактные животные (n=4) и опытные животные с конту-зионной ТСМ (n=4). Дозированную контузионную травму вызывали между позвонками Th8 и Th9 с помощью металлического стержня массой 50 г, падающего с высоты 50 см на открытый спинной мозг. Через 60 суток после моделирования нейротравмы поясничный отдел спинного мозга процессировали для иммунофлуоресцентного исследования.
Поперечные срезы спинного мозга толщиной 20 мкм окрашивали с помощью антител против маркеров астро-цитов (GFAP), олигодендроцитов (Olig2) и микроглии (Iba 1). Экспрессию GFAP и Iba 1 оценивали как относительную имммунопозитивную площадь в процентах, количество 0Нд2-иммунопозитивных ядер подсчитывали с учетом окраски ядер с помощью DAPI. Результаты представлены как средняя ± стандартная ошибка среднего.
Анализ экспрессии GFAP показал увеличение относительной GFAP-позитивной площади в поясничном утолщении у опытных животных как в передних (26,99 ± 0,97 %), так и в задних (18,37 ± 2,06, %) рогах, при сравнении с интактными животными (10,15 ± 0,6% и 16,9 ± 1,14%, соответственно). Относительная Iba 1 -позитивная площадь была также больше у опытных животных в передних (18,73 ± 0,49%) и задних (15,38 ± 0,63%) рогах, при сравнении с интактными животными (9,53 ± 0,94% и 8,13 ± 0,28%, соответственно). Количество
ОПд2-положительных ядер у интактных мини-свиней составило 13 ± 0,93 в передних и 11,33± 1,23 в задних рогах. При этом у опытных мини-свиней было выявлено меньшее количество ОПд2-положительных ядер как в передних (4,67 ± 0,61), так и в задних (3,67 ± 0,33) рогах.
Таким образом, увеличение площади, занимаемой астроцитами и клетками микроглии, а также снижение количества олигодендроглиальных клеток в поясничном утолщении спинного мозга через 60 сут после контузи-онной травмы в нижнегрудном отделе у мини-свиней свидетельствуют о вторичных патологических изменениях в нервной ткани, удаленной от эпицентра нейротравмы.
АНТИОКСИДАНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ВИТАМИНА
Е И ЭКСТРАКТА АМЛЫ НА ЦИБРИДЫ
А.Д. Гелетканич, Е.Б. Жигмитова2 3,
Е.Е. Безсонов2 3
1 РХТУ им. Д.И. Менделеева, Москва, Россия
2 ФГБНУ РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского, Москва, Россия
3 Институт общей патологии и патофизиологии, Москва, Россия
e-mail: artiom.geletkanich@yandex.ru
Ключевые слова: антиоксиданты, митохондрии, мутации,
цибриды, гетероплазмия, атеросклероз.
В развитие атеросклероза вовлечено множество факторов и дисфункция митохондрий в клетках пораженной области, может занимать ключевую роль в возникновении и прогрессировании заболевания [1]. Митохондриальная дисфункция проявляется в виде мутаций мтДНК, вызывая окислительный стресс, ухудшенному развитию АТФ [2]. Явление, когда мутированная мтДНК может сосуществовать с не мутировавшей мтДНК, называется гетероплазмией. Антиоксиданты, например, витамин Е (VE) и Emblica officinalis (EO), теоретически могут снижать степень окислительного стресса [3,4]. Удобной моделью для изучения роли ми-тохондриальных мутаций являются цибриды. Поскольку мутации мтДНК могут быть связаны со степенью активации моноцитов, были использованы цибриды, полученные из моноцитарной линии THP-1 с разной мтДНК пациентов с атеросклерозом.
THP-1, TCN-521, LSM1 культивировали 48 ч с VE и EO с концентрацией 15 и 500х103 мг/л соответственно. Выживаемость была высокой с VE 96-98%, но с EO была относительно низкой 75-86%. После инкубации с анти-оксидантами измеряли гетероплазмию мутаций, связанных с атеросклерозом: T3336C, C3256T, C5178A [1]. VE не повлиял на гетероплазмию THP-1, но у TCN-521 смог уменьшить на 4,4 ± 1,82 % у мутации C5178A. Клетки линии LSM1 мутации T3336C уменьшилась с 50 ± 0,7% до 39 ± 3,1%, а при мутации C3256T увеличилась на 6,4 ± 1,5%. При культивировании с ЭА гетероплазмия у THP-1 на всех мутациях снизилась от 2,4 ± 0,6% до 9,9 ± 2%, у TCN-521 и LSM1 максимальное снижение отмечено у мутации T3336C на 8,3 ± 2,4% и 8,2 ± 2,5% соответственно. Работа выполнена при поддержке Российского Научного Фонда, грант № 22-25-00480.
Литература:
1. Bezsonov E.E., Sobenin I.A., Orekhov A.N. Int J Mol Sci 2021;
22(8): 4080
2. Mitrofanov K.Y. et al. Experimental and Molecular Pathology. —
2016. — Т. 100. — № . 1. — С. 87-91.
