CC BY
72
Медицинская Иммунология 2007, Т. 9, № 4-5, стр. 509-512 © 2007, СПб РО РААКИ
Краткие сообщения
ЦИТОКИНЫ У БОЛЬНЫХ РАКОМ молочной ЖЕЛЕЗЫ В ПРОЦЕССЕ ЛУЧЕВОЙ терапии - влияние применения биологически Активной добавки к пище дезоксирибонуклеиновой кислоты из молок лососевых рыб с витамином с в качестве средства сопровождения
Федянина Л.Н.
Лаборатория иммунологии, Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, г. Владивосток
Резюме. Изучено влияние применения биологически активной добавки (БАД) к пище ДНКаС, включающей биологически активное вещество (БАВ) ДНК из молок лососевых рыб и витамин С в качестве средства сопровождения лучевой терапии у женщин, больных раком молочной железы (РМЖ), на динамику и уровень цитокинов сыворотки крови: ранних гемопоэтических факторов (IL-3, GM-CSF, TNFa) и баланс маркерных цитокинов Th1 и ТО2 ответа (IFNy , IL-10). Установлено иммуномодулирующее действие БАД ДНКаС в отношении всех исследуемых цитокинов. Но в большей степени и статистически значимо, БАД ДНКаС корригирует уровень цитокина GM-CSF, повышает низкий уровень IFNy и TNFa, снижает высокий уровень IL-10, способствуя, таким образом, восстановлению недостаточности клеточного звена иммунной системы, стабилизации системы кроветворения и полноценной реализации базисного метода лечения онкозаболеваний.
Ключевые слова: цитокины, рак молочной железы, БАД.
Fedyanina L.N.
CYTOKINES IN BREAST CANCER PATIENTS DURING RADIATION THERAPY: COMPLEMENTARY
effects of biologically active food additive containing salmon soft roe and vITAMIN C
Abstract. We studied some effects of a biologically active food additive (BAFA) «DNAaC» which contains DNA from salmon soft roe and vitamin C as active substances. This BAFA was investigated as a complementary remedy during radiation therapy of women with breast cancer (BrC), with respect to dynamics and levels blood serum cytokines, i.e., early hematopoietic factors (IL-3, GM-CSF, TNFa), and balance of marker cytokines for Th1- and Th2-response (IFNy, IL-10). It was shown that «DNAaC» has modulating effect on secretion of all investigated cytokines. There was, however, a higher and statistically valid corrective effect upon GM-CSF,
------------------------------------------------- along with increase of initially low IFNy and TNFa
Адрес для перепиасш concentrations, and reduction of initially high IL-10
Федянина Людмила Николаевна, levels. Hence, «DNAaC» contributes to improvement
cm.c. лаборатории иммунологии of cell-mediated immune deficiency, stabilization
НИИЭМСО РАМН. of hematopoietic system, and brings about tolerance
690087, г. Bладuвосток, ул. Сельская, L to basic treatment approaches in oncological diseases.
Тел./факс: (4232) 44-14-38. (Med. Immunol., 2007, vol. 9, N 4-5, pp 509-512)
E-mail: [email protected]
509
Федянина Л.Н.
Медицинская Иммунология
Введение
Онкобольные, получающие лучевую терапию, находятся под воздействием двух главных составляющих их патологического состояния: основного онкозаболевания и дополнительно повреждающего ионизирующего излучения, которые вызывают серьезные изменения в иммунном ответе организма и не позволяют в полной мере реализовать базисные методы лечения [1, 5, 7, 13]. Поэтому включение иммуномодуляторов, нивелирующих иммуносупрессирующее действие лучевой терапии в ее комплекс как средств сопровождения, у онкологических больных является вполне оправданным [13]. Наиболее адекватным вариантом в таких случаях является использование препаратов, обладающих минимальной токсической и антигенной нагрузкой на организм, не имеющих большого числа противопоказаний к применению, оказывающих позитивное воздействие при простых схемах введения. Средствами, отвечающими вышеуказанным требованиям, могут быть и некоторые БАД к пище, естественно прошедшие всестороннее медико-биологическое тестирование и имеющие объективные доказательства иммунотропных эффектов.
На Дальнем Востоке достаточно широко распространена БАД к пище ДНКаС, в основе которой лежит БАВ — ДНК из молок лососевых рыб и витамин С. Показано in vitro ее выраженное иммуномодулирующее действие, в том числе влияние на секрецию цитокинов, преимущественно способствующих активации Т-клеточной системы иммунитета. БАВ ДНК обладает также противоопухолевыми и радиопротекторными свойствами, повышает неспецифическую резистентность организма [2, 4, 10, 11, 12]. Целью настоящей работы явилось изучение динамики цитокинов у больных РМЖ, получающих лучевую терапию и в комплексе лечения в качестве сопроводительного средства БАД ДНКаС.
Материалы и методы
В исследование были включены 55 женщин РМЖ II и III степени тяжести заболевания, проходивших курс послеоперационной лучевой терапии в радиологическом отделении Приморского краевого онкологического диспансера. Лечение больных проводилось на аппарате РОКУС-М в течение 20-22 дней по стандартной схеме радиотерапии. Было сформировано 2 группы больных. Больные первой группы (31 человек) наряду со стандартным лечением получали БАД к пище ДНКаС по 1 грамму в сутки в течение 30 дней. Вторую (контрольную) группу составили 24 женщины, получавшие только стандартное лечение.
Возраст пациенток составил от 39 до 69 лет, соотношение больных РМЖ II и III степени тяжести заболевания в контрольной группе составило 1,8:1, в основной — 1,4:1. Данные биомедицинские исследования проводили с разрешения Комитета по биомедицинской этике ГУ НИИЭМ СО РАМН.
Изучали динамику цитокинов IL-3, GM-CSF, TNFa, IFNy, IL-10 (уровень и частоту выявления в сыворотке крови больных), которые причастны к процессам канцерогенеза, лучевой болезни, вторичных иммунодефицитов наряду с их другими функциями. Показатели оценивали дважды (в 1 и 30 сутки от начала приема препарата), а также в сравнении с показателями цитокинового статуса практически здоровых людей — доноров дальневосточного региона, которые принимали за норму [6]. Уровни цитокинов определяли в сыворотке крови методом сэндвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа с помощью наборов Duoset (Genzyme diagnostics, Кембридж, США) согласно прилагаемой инструкции.
БАД к пище ДНКаС разработана учеными ФГУП «Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр» (ТИНРО-центр) г. Владивостока, разрешена к применению, выпускается в таблетках по 1 грамму. В ее состав входит БАВ ДНК из молок лососевых рыб (79,02% ДНК, 7,8% белка, 2,1% липидов, 10,68% воды) и витамин С [2, 8, 9].
Статистическую обработку полученных результатов исследований проводили с помощью пакета прикладных программ «Statistica 6,0 for Windows 2000» с применением непараметрического Т-критерия Уилкоксона [3].
Результаты и обсуждение
Данные исследований показали, что у больных РМЖ всех групп обследуемых к началу получения стандартного курса послеоперационной лучевой терапии зафиксированы изменения в профиле цитокинов сыворотки крови, свидетельствующие о дисрегуляции этих показателей (табл. 1):
— показатели IL-3, GM-CS, IFNy были ниже нормы, значительно повышена концентрация TNFa, и только содержание IL-10 не отличалось от показателей практически здоровых людей;
— выражена недостаточность продукции Th1-клетками IFNy в сравнении с IL-10, в основном вырабатываемого ^2-клетками иммунной системы, индекс соотношения этих цитокинов равен 0,4, при должном 0,9. Дисбаланс цитокинов, вероятно,
510
2007, Т. 9, № 4-5
Цитокины при раке молочной железы
ТАБЛИЦА 1. УРОВНИ ЦИТОКИНОВ В ПГ/МЛ У БОЛЬНЫХ РМЖ, ПОЛУЧАЮЩИХ БАД ДНКаС В КОМПЛЕКСЕ ЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ, В сравнении С БОЛЬНЫМИ, получающими Только лучевую терапию, И ПРАКТИЧЕСКИ ЗДОРОВЫМИ ЛЮДЬМИ - ДОНОРАМИ
№ п/п Исследуемые цитокины Цитокины у доноров Цитокины у бол получающих БАД ьных ДНКаС Цитокины у больных контрольной группы
1 день 30 день Достоверность различий p 1/30 дни 1 день 30 день Достоверность различий p 1/30 дни
1. IL-3 4,8±0,3 1,89±0,55 1,91±0,56 р = 0,89 2,9±0,9 3,0±0,7 р > 0, 05
2. GM-CSF 4,0±2,0 6,7±2,2 8,5±3,1 р > 0,05 4,0±2,0 3,2±1,0 р > 0,05
3. TNFa 4,3±1,2 27,9±5,1 33,4±8,6 р > 0,048 31,4±4,8 32,7±4,2 р > 0,05
4. IFNy 12,7±1,5 3,72±1,28 11,19±6,21 р = 0,29 4,9±1,4 10,2±5,7 р > 0,05
5. IL-10 13,9±0,7 14,9±4,1 15,0±7,4 р = 0,048 13,4±5,7 10,5±4,6 р > 0,05
Примечание: р 1/30 - достоверность различий в уровне цитокинов у больных на 1 и 30 сутки лучевой терапии и приема ДНКаС.
обусловлен множеством факторов, прежде всего, наличием собственно опухолевого процесса, возникновение которого уже говорит о нарушении функции клеточного иммунитета, так как контроль за ростом и регрессией опухоли осуществляют Т-клетки. Это может быть связано с воздействием на организм предыдущих курсов лечения — оперативного вмешательства, предоперационной химио-и радиотерапией, побочным эффектом которых является угнетение системы иммунитета, в основном Т-клеточного ее звена [1, 7, 13].
За период проведения лучевой терапии у всех групп больных уровни IL-3, IL-10, TNFa практически не изменились. Уровень GM-CSF у больных, получающих БАД ДНКаС, увеличился в 1,3 раза, у больных контрольной группы несколько снизился. Уровни IFNy возросли у больных как в контрольной группе, так и в группе женщин, получающих БАД, в 2,1 и 3 раза соответственно (табл. 1). Однако все изменения были статистически не значимыми и носили характер тенденции. Учитывая, что полученные результаты могут быть в числе прочих факторов, обусловлены гетерогенностью исходных данных, мы изучали
ТАБЛИЦА 2. ДИНАМИКА УРОВНЕЙ ЦИТОКИНОВ В ПГ/МЛ У БОЛЬНЫХ РМЖ, ПОЛУЧАЮЩИХ БАД ДНКаС В КОМПЛЕКСЕ ЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ, В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ИХ ИСХОДНОГО УРОВНЯ
№ п/п Исследуемые цитокины Группа больных с исходно средне-нормальным уровнем n = 19 Группа больных с исходно высоким уровнем n = 12
1 сутки 30 сутки p 1/30 сутки 1 сутки 30 сутки p 1/30 сутки
1. IL-3 0,5±0,2 1,3±0,4 р = 0,18 4,4±1,5 2,0±1,1 р > 0,054
2. GM-CSF 0,5±0,2 8,6±4,4 р < 0,02 18,8±4,6 6,9±2,9 р < 0,05
3. TNFa 18,3±3,7 28,2±8,6 р < 0,05 57,1±4,8 36,7±9,4 р > 0,05
4. IFNy 1,2±0,4 16,2±9,9 р < 0,05 10,9±4,6 1,5±0,8 р > 0,062
5. IL-10 1,8±1,0 12,1±6,6 р > 0,048 79,6±27,5 20,3±12,1 р < 0,054
влияние ДНКаС на изменение уровней цитокинов и частоту случаев их повышения и понижения у больных в зависимости от их начального уровня. Для этого все больные, получавшие БАД, были разделены на группы с исходно средненормальными и исходно высокими показателями (табл. 2).
Полученные результаты позволили выявить статистически достоверные изменения, свидетельствующие о выраженном иммуномодулирующем действии БАД ДНКаС.
Направленность динамики цитокинов практически не изменилась. Наиболее чувствительным к действию БАД ДНКаС оказался гемопоэтический цитокин GM-CSF, колебания уровня которого как в сторону увеличения, так и в сторону снижения были статистически значимыми. Причем у больных с его исходно средне-нормальным уровнем повышение GM-CSF у 66,7% женщин было очень показательным, концентрация его возросла в 17 раз, снижение же у больных с его высоким уровнем было не столь выразительным, в 75,0% случаев и лишь в 2,7 раза.
511
Федянина Л.Н.
Медицинская Иммунология
Однако другой гемопоэтический цитокин, IL-3, практически не реагировал на воздействие БАД ДНКаС. Наблюдалась только подобная тенденция к повышению уровня IL-3 в 2,6 раза у 59,1% больных с его исходно средне-нормальным уровнем и снижение в 2,2 раза его концентрации в 66,7% случаев в группе обследуемых с исходно высокими его значениями. Не намного ниже, но также достоверно и демонстративно в 81,3% случаев в 13,5 раз увеличился уровень IFNy y больных с его исходно средне-нормальной концентрацией. В группе с исходно высокими показателями IFNy в 80% случаев происходило снижение содержания этого цитокина, не достигшее, однако, статистически значимых величин.
Статистически достоверно в 1,5 раза вырос уровень TNFa в сыворотках крови у 73,3% больных с его исходно средне-нормальными показателями, а у 66,7% больных с исходно высокой концентрацией TNFa к 30-м суткам наблюдалась только тенденция к ингибиции его выработки.
Исследование результатов иммуномодулирующего действия ДНКаС на IL-10 показало, что у 50% больных с исходно средне-низким содержанием IL-10 к 30-м суткам отмечалась тенденция к его повышению, а в группе с исходно высокими показателями в 81,8% случаев — статистически достоверное снижение в 3,9 раза.
Таким образом, применение БАД ДНКаС к пище в качестве средства сопровождения лучевой терапии у больных РМЖ оказывает модулирующее действие в отношении всех исследуемых цитокинов сыворотки крови больных. В большей степени, БАД ДНКаС корригирует уровень гемопоэтического цитокина GM-CSF, повышает низкий уровень IFNy и TNFa, снижает высокий уровень IL-10, способствуя восстановлению недостаточности клеточного звена иммунной системы, стабилизации системы кроветворения и полноценной реализации базисного метода лечения онкозаболеваний.
Список литературы
1. Барышников А.Ю. Взаимоотношение опухоли и иммунной системы организма // Практическая онкология. — 2003. — Т. 4. — № 3. — С. 127-130.
2. Беседнова Н.Н., Эпштейн Л.М. Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок рыб — перспективы клинического применения: В помощь практическому врачу. — Владивосток: ТИНРО-центр, 2002. - 38 с.
3. Гланц С. Медико-биологическая статистика. — М.: Практика, 1999. — 500 с.
4. Касьяненко Ю.И., Эпштейн Л.М., Гажа А.К., Беседнова Н.Н., Гуляков М.Б., Шу-ваев В.Т Биологически активная пищевая добавка — дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок лососевых // Известия ТИНРО. — 1999. — Т. 125. — С. 139-143.
5. Козлов В.К., Молчанов О.Е., Жари-нов Г.М. Иммунотерапия рекомбинантными цитокинами в лечении онкологических больных // Успехи клинической иммунологии и аллергологии / Под ред. А.В. Караулова. — 2002. — Т 3. — С. 263-279.
6. Маркелова Е.В. Система цитокинов у больных с острыми повреждениями легких и клинико-иммунологическое обоснование терапии лей-кинфероном: Автореф. дисс. ... д-ра мед. наук. — Владивосток, 2000. — 50 с.
7. Мирошник О.А. Возможности иммуномодулирующей терапии в комплексном лечении онкологических больных // Оппортунистические инфекции: проблемы и перспективы: Сб. научн. тр. — Омск: Омская мед. акад., 2002. — С. 21-32.
8. Гаймула М.А, Кална В.Х., Микстайс У.Я., Эпштейн Л.М. Способ получения ДНК из молок рыб. — № 915446; Заявлено 10.10.80; Опубл. 01.07. 91.
9. Рег. удостоверение № 004977 от 30.10.2002.
10. Федянина Л.Н. Влияние ДНК из молок лососевых рыб на секрецию цитокинов клетками крови доноров // Мед. иммунология. — 2005. — Т. 7, № 5-6. — С. 617-619.
11. Федянина Л.Н., Зайцева Е.А., Эпштейн Л.М., Беседнова Н.Н., Сомов Г.П. Влияние ДНК из молок лососевых рыб на Т-клеточный иммунитет в эксперименте // Антибиотики и химиотерапия. — 2005. — № 2-3. — С. 14-17.
12. ФедянинаЛ.Н., Потапова В.В., Беседнова Н.Н., Эпштейн Л.М. и др. Влияние низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб на кроветворение в эксперименте // Антибиотики и химиотерапия. — 2004. — Т 49, № 4. — С. 7-10.
13.Чернецова Л.Ф., Зотов П.Б. Иммунотерапия сопровождения ликопидом больных распространенными формами злокачественных новообразований // Рос. онкол. журн. — 2001. — № 5. — С. 301-307.
поступила в редакцию 02.10.2006 отправлена на доработку 27.10.2006 принята к печати 30.05.2007
512
