CC BY
11
22
ПЕДИАТРИЯ № 6, 2004 г.
© Бударина H.A., 2003
H.A. Бударина
ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ ПРИ ОСТРОМ ВИРУСНОМ
ГЕПАТИТЕ В У ДЕТЕЙ
ММА им. И.М. Сеченова, Москва; ОГМА, ЦНИЛ ОГМА, г. Омск, РФ
Изучено содержание основных провоспалительных цитокинов ( ФНОа, Il.niß, ИЛ6) и проти-воспалительного ИЛ4 в сыворотке крови при остром вирусном гепатите В (ОВГВ) методом ИФА у 49 детей в возрасте от 7 до 14 лет. Установлено, что ОВГВ у детей сопровождается изменением баланса цитокинов провоспалительной и противовоспалительной направленности. Эти изменения выражаются как повышением содержания основных факторов межклеточных взаимодействий, так и нарушением их выработки. Динамика уровней провоспалительных и противовоспалительных цитокинов подтверждает взаимосвязь реакций неспецифической резистентности и механизмов приобретенного иммунитета. Нарушение функционирования системы регуляторных цитокинов может быть одним из механизмов развития неблагоприятных исходов ОВГВ (развитие острой печеночной недостаточности, формирование первично хронических и хронических форм и/или перехода в цирроз печени и гепатокарциному).
Authors studied level of main serum pro-inflammatory cytokines (TNF-a; IL-1P; IL-6) and antiinflammatory cytokine (IL-4) in 49 patients with acute viral hepatitis B (AVHB) in the age 7—14 years old with usage of IFA method. They showed that pediatric AVHB was accompanied by misbalance of pro- and anti-inflammatory cytokines. This misbalance presents both as high level of main interleukines and as disorders of their production. Dynamic of pro- and anti-inflammatory cytokines level proves interrelation between reactions of non- specific protection and mechanisms of acquired immunity. Disorders in regulatory cytokines system can be one of possible mechanisms of poor outcome (acute hepatic failure, development of chronic and primarily chronic hepatitis and or cirrhosis or hepatocellular carcinoma development).
Глубина познания материального субстрата болезни (вплоть до молекулярного уровня) позволяет сказать об истинной ее сущности, определить терапевтическую тактику и профилактические мероприятия [1]. Совершенствование диагностики и лечения вирусных гепатитов (ВГ), в том числе у детей, несомненно, связано со знанием клеточных и молекулярных механизмов воспаления в печени, раскрывающих сущность патологического процесса [2-5].
В последние годы показано важнейшее значение цитокинов в осуществлении противовирусного иммунитета и регуляции воспаления. Независимо от этиологии основная роль в развитии воспалительной реакции в печени принадлежит ФНОа, участвуют ИЛ1Р, ИЛ6, ИЛ8. Ведущую роль в инициации реакций клеточного иммунитета играет выброс активированными макрофагами регуляторных ци-токинов — ФНОа и ИЛ10. ИЛ10 принадлежит ключевая роль в активации Т-лифоцитов, которые и определяют клеточный характер специфического иммунного ответа [5—10].
Вместе с тем течение ИБУ-инфекции определяется сложным взаимодействием между различными составляющими антивирусного иммунитета. Гуморальный иммунный ответ, в ходе которого
появляются нейтрализующие антитела, необходим для эффективного клиренса вируса. Нейтрализующие антитела синтезируются активированными B-клетками. В активации B-клеток принимает непосредственное участие ИЛ6 [3, 5, 11, 12].
Процесс чрезмерной активации макрофагов сдерживают противовоспалительные цитокины, в том числе ИЛ4. Они осуществляют контроль за регуляцией продукции цитокинов провоспали-тельной направленности [7—9].
Представленные в литературе данные о цито-кинах при ВГ, особенно у детей, немногочисленны, не являются однозначными и окончательными. Это определяет актуальность их дальнейшего исследования.
Основной задачей нашей работы явилось изучение особенностей продукции цитокинов при остром ВГ В (ОВГВ) у детей.
Материалы и методы исследования
Для решения поставленной задачи обследовали детей, больных ОВГВ и находившихся на лечении в инфекционном отделении ГМБ № 1 г. Омск (главный врач д.м.н. В.В. Мамонтов). Всего обследовано 49 детей в возрасте от 7 до 14 лет. Заболевание протекало в типичной легкой (14), среднетя-
H.A. Бударина
23
желой (23) и тяжелой (12) форме. У 34 (69,39%) пациентов отмечалось циклическое течение, а у 15 (30,61%) — наклонность к затяжному.
Диагноз верифицирован выделением маркеров HBV-инфекции (HBsAg и анти-HBcIgM ), присутствием ДНК HBV и отсутствием маркеров других гепатитов (А, С, D, G).
Маркеры вирусов гепатитов определяли методом ИФА с использованием тест-систем производства «Вектор-Бест» (Новосибирск) — анти-HAV, анти-НВс суммарные, анти-Hbc IgM; анти-HDV суммарные; производства «Диагностические системы» (Н. Новгород) — анти-HBsAg, анти-HBcAg, анти-HCVIgG, анти-HCVIgMs, анти-HDVIgM; производства «Cobas» (Roche Diagnostics, Швейцария) — HbeAg; производства «Гепастрип» (Ниармедик, Москва) — HBsAg.
Определение ДНК HBV проводили методом ПЦР в ЦНИИЭ МЗ РФ (В.П. Чуланов) с использованием набора «Ампли Сенc-HBV-470 /ВКО 770». Выделение ДНК HBV проводили методом аффинной сорбции на селикогеле с использованием набора ДНК-сорб В.
Определение цитокинов проводили методом ИФА с использованием диагностических тест-систем ООО «Протеиновый контур» (С.-Петербург) в лаборатории ЦНИЛ ОГМА (зав. ЦНИЛ д.м.н. Долгих Т.Н.).
Результаты и их обсуждение
Содержание цитокинов в сыворотке крови отражено в таблице. Как видно из таблицы, на 1-й неделе желтухи ФНОа определяется у половины больных. При обследовании на 2—4-й неделях ФНОа обнаруживается у большинства пациентов (65,71—90,91%). Концентрация ФНОа на 1-й неделе желтухи достоверно превышает показатель контрольной группы (р<0,05). Наиболее высокие показатели ФНОа отмечены при обследовании на 2—3-й неделях желтухи (соответственно 237,43± 66,15 и 145,88±41,44 пкг/мл). В последующем уровень ФНОа снижался, однако у 41,48% больных он оставался повышенным в периоде реконва-лесценции.
Анализ индивидуальных значений свидетельствует о выраженной вариабельности концентрации ФНОа. Индивидуальные уровни колеблются от нулевых до 1738,5 пкг/мл. У большинства больных уровень ФНОа в 2—15 раз превышал аналогичный показатель в контрольной группе. Гиперпродукция ФНОа (свыше 1000 пкг/мл) отмечена у единичных больных. Причем высокая продукция сохраняется в течение всего заболевания. Необходимо отметить, что у 48% детей на 1-й и у 34% на 2-й неделе желтухи ФНОа не был выявлен. Все эти больные по данным ретроспективной оценки имели затяжное течение болезни. У 3 детей через 6 месяцев документирован исход в хронический гепатит.
ИЛ1Р на 1-й неделе выявлялся у половины больных в концентрации, достоверно превышающей аналогичный показатель контрольной группы (р<0,05). В динамике уровень ИЛ1Р повышался, в связи с чем различия в уровнях становятся достоверными (р<0,05) по сравнению с 1-й неделей
желтухи. К периоду реконвалесценции у большинства больных ИЛ 1Р снижался, у 2 7,78% пациентов — оставался повышенным. Индивидуальные значения ИЛ1Р существенно различаются — от нулевых значений до 3673 пкг/мл. У большинства больных уровень ИЛ1Р повышался в 2—10 раз по сравнению с контролем. Гиперпродукция ИЛ1Р, исчисляемая 1000 пкг/мл, отмечена у тех же больных, у которых отмечались высокие уровни ФНОа. Вместе с тем высок процент лиц с концентрацией ИЛ1Р ниже пороговых значений (48,28% на 1-й и 43,24% на 2-й неделях желтухи). Большинство из этих больных имели затяжное течение болезни.
ИЛ6 выявлялся на 1-й неделе желтухи у большинства больных в концентрации, достоверно превышающей уровень ИЛ6 в группе контроля (р<0,05). На 2-й неделе уровень ИЛ6 оставался повышенным (р<0,05). С 3-й недели уровень ИЛ6 не отличался от контроля. Среднее значение ИЛ6 было ниже, чем уровни ИЛ1Р и ФНОа. Вариабельность индивидуальных уровней была также менее выражена, чем для ФНОа и ИЛ1р. Наиболее высокие показатели ИЛ6 отмечались на 1—2-й неделях желтухи.
ИЛ4 выявлялся у большинства больных с 1-й недели желтухи. Уровень ИЛ4 на 1-й неделе был повышен, хотя разница по сравнению с группой здоровых была недостоверна. В динамике концентрация ИЛ4 повышалась, наиболее высокий уровень был отмечен на 2-й неделе желтухи (р<0,001). С 3-й недели отмечалось постепенное снижение концентрации ИЛ4. В периоде реконвалесценции уровень ИЛ4 у 53,8% больных оставался повышенным. Индивидуальные значения уровня ИЛ4 колебались от нулевых значений до 330,8 пкг/мл. Однако вариабельность концентрации ИЛ4 была несколько меньше, чем ФНОа и ИЛ1р. Преимущественно наблюдалась концентрация ИЛ4, в 2— 5 раз превышающая группу контроля.
Полученные нами результаты совпадают с данными исследований других авторов [13, 14], также отмечающих повышение ИЛ1Р и ФНОа при ОВГВ.
К сожалению, в данных работах не изучено содержание ИЛ4 при ОВГВ. ИЛ4 продуцируется СД4+, СД8+ лимфоцитами, В-лимфоцитами, макрофагами и принимает участие в дифференциров-ке ТЬО в ТЬ1 и ТЬ2. Наиболее высокие его показатели были отмечены на 2-й неделе желтухи, что совпадает со второй специфической фазой иммунного ответа и подтверждает роль ИЛ4 в качестве регулятора специфического иммунитета. Наличие в крови больных ОВГВ провоспалительных цито-кинов индуцирует секрецию противовоспалительных цитокинов, в том числе ИЛ4, которые предназначены сдерживать процесс чрезмерной активации макрофагов, ведущий к разрушительным последствиям. Поэтому повышение ИЛ4 закономерно и с позиции единой цитокиновой системы, регулирующей воспалительные процессы в организме.
Таблица
Частота обнаружение и средний уровень основных цитокинов при остром гепатите В у детей
Недели желтухи ФНОа, пкг/мл ИЛ1Р, пкг/мл ИЛ6, пкг/мл ИЛ4, пкг/мл
число детей частота обнаружения М ±ш число детей частота обнаружения М±ш число детей частота обнаружения М±ш число детей частота обнаружения М±ш
абс. % абс. % абс. % абс. %
1-я 25 13 52 100,73±21,171) 29 16 55,17 209,42±57,161) 16 12 75,0 83,04±28,441) 21 15 71,43 53,35±10,58
2-я 35 23 65,17 237,43±66,151) 37 21 56,76 351,43±98,731) 27 17 62,96 70,31±20,351) 26 26 100 150,8±39,821)
3-я 16 12 75 145,88±41,441) 17 14 82,35 546,68±152,721) 13 9 69,23 44,85±17,91 12 12 100 54,41±4,461)
4-я 22 20 90,91 55,81±11,161), 2) 20 14 70,0 324,06±126,61) 15 15 100 35,45±5,221) 22 20 90,91 40,03±9,01
5-я 18 13 72,22 91,95±28,881) 20 10 50 17,42±3,90 11 11 100 32,68±14,07 20 17 85,0 54,61±20,39
6—10-я 26 12 46,15 68,31±31,59 16 9 56,95 203,2±73,421) 24 22 91,67 26,14±6,022) 32 26 81,25 61,92±20,291)
Контрольна я группа 20 20 100 27,41±5,91 20 19 95 26,23±8,84 20 15 75,0 16,47±4,20 20 17 85,0 23,81±10,11
р<0,05: 1) при сравнении показателей с контрольной группой; 2) при сравнении показателей на 1-й неделе желтухи.
Н.А. Бударина
25
Повышение ИЛб, выпаленное нами у больных ОВГВ, может быть связано с повышением пролифе-ративиой активности гепатоцитов [7 9].
ИЛ 1(5 является основным активатором лим^-цитои, в том числе и цитотоксических (7], поотому его низкий уровень в сыноротке крови или отсутствие свидетельствуют о невозможности полноценного клеточного ответа. Вероятно, больные, не имеющие повышения ИЛ1|), янляются претендентами на исход острого гепатита в хронический или на возникновение первично хронического гепатита.
Заключение
Таким образом, анализ полученных данных показывает, что ОВГВ у детей сопровождается изменением баланса цитокинов провоспалитель-
ной и нротивоиосналителыюй иапранленности. Эти изменения выражаются как повышением содержания оснокных факторов межклеточных взаимодействий, так и нарушением их нмработки. Уронни цитокинов и и меньшей степени частота их выявде» ния различаются в зависимости от сроков болезни. Динамика уровней про воспалительных и протиио-воспалительиых цитокинов подтиерждает нзаимо-связь реакции неспецифической резистентности и механизмов приобретенного иммунитета. Нарушение фуикционироиания системы регуляториых цитокинов может быть одним из механизмов разлития неблагоприятных исходов ОВГВ (нозникноке-ние острой печеночной недостаточности, формнро-нание неркично хронических и хронических форм и/или перехода и цирроз печени и гепаггокарциному).
Н.А. Бударина
Цитокиновый профиль при остром вирусном гепатите В у детей
ЛИТЕРАТУРА
1. Серов В.В. //Арх. пат. — 2001. — № 1. — С. 3—5.
2. Ивашкин В.Г. // Рос. журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. — 1998. — Т. 8, № 5. — С. 7—13.
3. Майер К.П. Гепатит и последствия: Пер. с нем. — М., 1999.
4. Учайкин В.Ф. Руководство по инфекционным болезням у детей. — М., 1998.
5. Шерлок Ш., Дули Дж. Заболевания печени и желчных путей: Пер. с англ. — М., 1999.
6. Возианов А.Ф., Бутенко А.К., Зак К.П. Цитокины: биологические и противоопухолевые средства. К., 1998.
7. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С., Воробьев А.А. Эндогенные иммуномодуляторы. —С-Петербург, 1992.
8. Пальцев М.А., Иванов А. А. Межклеточные взаимодействия. — М., 1995.
9. Ярилин А.А. // Иммунология. — 1997. — № 5. — С. 7—14.
10. Koziel M.J. // Seminars in liver disease. — 1999. — Vol. 19, № 2. — P. 157—169.
11. Banatvala J., Damme P.V., Oechen S. // Медицина для всех. — 2001. — № 1. — С. 21—24.
12. Соринсон С.Н. Вирусный гепатит. — Л., 1987.
13. Буковская C.H., Медуницын Н.В., Невская Л.В. и др. // Иммунология. 1995. № 6. — С. 54—56.
14. Волчкова Е.В., Умбетова К.Т., Алленов М.Н. и др. // Рос. журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — Приложение № 12. — 2001. — Т. 11, № 1. — С. 7.
