Цитокинодиагностика Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Медицинская Иммунология 2003, Т.5, № 3-4 ©2003, СПб РОРААКИ

ЦИТОКИНОДИАГНОСТИКА

ИНТЕРЛЕЙКИН-6 У РАЗЛИЧНЫХ ГРУПП НАСЕЛЕНИЯ КРУПНОГО ПРОМЫШЛЕННОГО ГОРОДА

Аппельганс Т.В.. Махов В.А., Панёв Н.И., Новикова Т. А., Орлова Г.И., Кречетова О.Н.

Государственный институт усовершенствования врачей, Новокузнецк, Россия

Проблема адаптации человека к жизни в условиях мощного воздействия неблагоприятных антропогенных факторов и возможности компенсаторно-приспособительных реакций организма имеет как научно-теоретический, так и практический, прикладной аспекты.

Согласно сетевой теории организации и регуляции иммунной системы, в узловых точках её находятся отдельные иммунокомпетентные клоны. Решающая роль в регуляции деятельности иммунной системы принадлежит системе цитокинов.

Согласно литературным данным, изучение уровня цитокинов у различных групп населения позволит оценить их регуляторную роль не только на иммунный, но и на общий гомеостаз при различной антропогенной нагрузке на организм человека. Особенно интересен в этом отношении 1Ь-6.

Целью нашего исследования являлось изучение уровня 1Ь-6 у разных групп населения крупного промышленного города при различной интенсивности антропогенной нагрузки.

Уровень 1Ь-6 оценивался у практически здорового мужского населения крупного промышленного города (г. Новокузнецк, Кемеровской области), занятого в металлургической промышленности. Определение концентрации 1Ь-6 в сыворотке крови проводили методом иммуноферментно-го анализа (ИФА) на тест-системах «РгоСоп 1Ь-6» (ООО «Протеиновый контур», Санкт-Петербург, Россия) по инструкции производителя.

Отмечена значительная гетерогенность уровня 1Ь-6 в сыворотке крови среди изученной группы, однако при статистической обработке данных выявлено, что 60% всех значений вошли в интервал 50-83 пг /мл. Также отмечено достоверное последовательное снижение концентрации 1Ь-6 в сыворотке крови при увеличении суммарного промышленного воздействия на организм человека - от 107,6±26,5 пг/мл в контрольной группе до 41,8± 14,9 в группе с умеренным воздействием промышленных факторов и до 26,4±3,9 (р<0,05) в группе с максимальным суммарным воздействием промышленных факторов металлургического производства.

Таким образом, при воздействии мощных промышленных воздействий выявлено относительное снижение концентрации 1Ь-6 в сыворотке крови.

ОЦЕНКА УРОВНЯ TNF-a КАК ПРОГНОСТИЧЕСКОГО МАРКЕРА РЕМИССИИ ПРИ КОНСЕРВАТИВНОЙ ТЕРАПИИ БОЛЕЗНИ ГРЕЙВСА

Бабенко А.Ю.. Благосклонная Я.В.,

Красильникова Е.И.

Санкт -Петербургский государственный медицинский университет им.акад.И.ПЛавлова, кафедра факультетской терапии

Роль цитокинов, в частности, туморнекротизирующе-го фактора-a (TNF-a) в развитии болезни Грейвса и оценке ее активности интенсивно изучается.

Целью настоящего исследования явилось изучение частоты ремиссии при лечении мерказолилом и ее сохранение в отдаленные сроки после отмены терапии и значения уровня TNF-a как прогностического маркера наступления ремиссии.

Уровень общего трийодтиронина (ТЗ) и тироксина (Т4) определялись радиоизотопными методами (в норме: ТЗ -1,6-2,5 нмоль/л, Т4 - 60-160 нмоль/л). Концентрация TNF-a определялась иммуноферментным методом с использованием ТОО “Протеинового контура” (норма 0-50 пг/мл для возрастных групп 18-60 лет). Полученные данные были подвергнуты статистической обработке на компьютере с применением программы Excel 6.0. Использовались методы вариационной и непараметрической статистики, корреляционного анализа.

Было обследовано 28 пациентов с болезнью Грейвса, у которых на момент включения был доказанный по клиническим и лабораторным (общий трийодтиронин - 5,7±0,53 нмоль/л, общий тироксин - 238,5±16,3 нмоль/л) данным тиреотоксикоз. Средний возраст больных 38,3+2,4 года. Уровень TNF-a был исследован у всех больных до начала лечения и составлял 281±83,4 пг/мл и у 22 человек через 1-2 года терапии и составлял 56,37±13,04 пг/мл, что было достоверно ниже исходного уровня.

Через год от начала терапии ремиссия была достигнута у 50% больных. У больных, не достигших ремиссии, терапия была продолжена, и к концу 2-го года лечения ремиссия была достигнута еще у 15% больных. Таким образом, за два года лечения ремиссия наступила у 65% больных. При этом в группе больных, достигших ремиссии, исходный уровень TNF-a составлял 158±98,1 пг/мл, а при годовом контроле 37,86+12,72 пг/мл. У больных, не достигших ремиссии, исходный уровень TNF-a составлял 326,15± 137,9 пг/мл, что было выше исходного уровня TNF-a больных, достигших ремиссии, однако различия были не достоверны. Уровень TNF-a у больных, не достигших ремиссии, через 1-2 года от начала терапии составлял 74,88± 13,36 пг/мл,

что достоверно выше, чем у больных с ремиссией заболевания.

У больных, достигших ремиссии, терапия была отменена, и через 3 года после отмены лечения эти больные вновь были обследованы. Ремиссия сохранялась у 36,4 % больных (8 человек), а у 13,6 % больных, имевших ремиссию в течение 1-2 лет, развился рецидив заболевания. При этом, после перераспределения больных по группам (ремиссия/рецидив) различия в исходном уровне ТОТ-сс еще более нивелировались: 232,3+127,33 пг/мл в группе больных с ремиссией, 287,7±132,13 пг/мл в группе больных без ремиссии. В то же время различия в динамике уровня ТОТ-а на фоне лечения в этих двух группах стали еще более выраженными: в группе больных с ремиссией 36± 11,43 пг/мл, а в группе больных без ремиссии -82,6+14,34 пг/мл (р<0,01).

На основании изложенных данных можно сделать вывод о том, что исходный уровень ТОТ-а не играет прогностической роли как маркер наступления ремиссии, однако его динамика на фоне лечения может использоваться как маркер ремиссии: у больных с ремиссией уровень ТОТ-сс снижается до нормы, а у больных без ремиссии его уровень остается повышенным. Таким образом, ТОТ-а можно рассматривать как маркер активности иммунного процесса при болезни Грейвса.

ВЛИЯНИЕ РЕЦЕПТОРНОГО АНТАГОНИСТА ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 НА ПРОЛИФЕРАЦИЮ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ РЕВМАТИЧЕСКИХЗАБОЛЕВАНИЯХУДЕТЕЙ

БатянГ.М.. Зафранская М.М.*

Белорусская медицинская академия последипломного образования, Международный государственный экологический университет им АД. Сахарова *

При ревматических заболеваниях патогенетическая терапия, в первую очередь, направлена на раннее селективное подавление активации Т-лимфоцитов и макрофагов, снижение синтеза и инактивации провоспа-лительных цитокинов. Последнее направление получило распространение под названием антицитокино-вой терапии.

Цель работы: изучить влияние рецепторного антагониста интерлейкина-1 (1Ь-Ша) на пролиферацию лимфоцитов периферической крови детей с ювенильным ревматоидным артритом (ЮРА), системной красной волчанкой (СКВ) и системным склерозом (СС).

Материалы и методы. Обследовано 32 ребенка с диагнозом СКВ, 54 ребенка с ЮРА и 29 детей с диагнозом СС. Контрольную группу составили 70 практически здоровых детей в возрасте от 4-х до 15 лет. Функциональная активность Т- и В-лимфоцитов определялась культуральным методом по пролиферативному ответу в реакции бластной трансформации лимфоцитов с митогенами и 1Ь-Ша (Гос-НИИ особо чистых биопрепаратов, опытное производство “Цитокин”, Санкт-Петербург, Россия).

Результаты. У детей с СКВ установлена повышенная аутореактивность мононуклеаров периферической крови, которая характеризовалась достоверным увеличением индекса пролиферативной активности при добавлении минимальной концентрации ФГА в сочетании со сниженной активностью клеток на оптимальную концентрацию данного лектина. При СС не было выявлено достоверных

изменений функциональных характеристик лимфоцитов. У больных ЮРА установлено достоверное повышение спонтанной пролиферации лимфоцитов (985,5±47,7 имп/ мин, 571,9±92,6 в контроле, р<0,05) в сочетании со снижением пролиферативного ответа клеток на оптимальную концентрацию ФГА. Обнаруженные дефекты могут быть связаны с нарушениями на различных уровнях передачи активационного сигнала в клетку.

Наиболее выраженные изменения при изучении влияния IL-IRa in vitro установлены в группе детей с ЮРА. Выявлено снижение как спонтанной пролиферации лимфоцитов при добавлении данного препарата, так и ответа клеток на оптимальную концентрацию ФГА (2554,5±772,0, 8114,7±993,0 в контроле, р<0,01). Это свидетельствует о подавлении IL-IRa митоген-индуцированной активации Т-лимфоцитов - инициирующего фактора в развитии ювенильного ревматоидного артрита.

Заключение. Выраженные нарушения в иммунной системе при ЮРА обуславливают применение иммунотерапии. Полученные in vitro данные о влиянии IL-IRa на функциональную активность лимфоцитов периферической крови подтверждают возможность использования данного препарата в комплексном лечении больных ЮРА.

ОСОБЕННОСТИ ЦИТОКИНОВОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА (IL-1Р, IFN-v, TNF-cc, IL-4) У ПОДРОСТКОВ, СТРАДАЮЩИХ АТОПИЧЕСКИМ ДЕРМАТИТОМ

БулинаО.В.. Калинина Н.М., Горланов И.А.

Санкт -Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия, кафедра дерматовенерологии; Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины МЧС России, НИЛ клеточного и гуморального иммунитета, Санкт-Петербург

Введение. Роль иммунной системы в этиопатогенезе атопического дерматита общеизвестна. На современном этапе представляет научный интерес исследование цито-кинового профиля при аллергическом воспалении.

Целью и задачами исследования было оценить степень участия цитокинов IL-ip, IFN-y, TNF-a и IL-4 в патогенезе атопического дерматита у подростков.

Материалы и методы. Были обследованы 62 подростка (33 мальчика и 29 девочек), больных атопическим дерматитом, в возрасте от 10 до 16 лет, находившихся на лечении в кожном отделении клинической больницы СПбГПМА в период обострения заболевания.

Используемые методы - иммунологические.

Основные результаты:

1. Уровень IL-1P в сыворотке крови и при спонтанной продукции был повышен у 30 подростков, страдающих атопическим дерматитом, - в 48% случаев.

2. IL-1P при индуцированной продукции был снижен в 92% случаев (57 пациентов).

3. Уровень IFN-y в сыворотке крови был увеличен у 25 подростков, больных атопическим дерматитом, - 40% случаев.

4. Спонтанная продукция IFN-y характеризовалась повышенными значениями в 42% случаев (26 человек).

5. Анализ индуцированной продукции IFN-y выявил снижение данного цитокина у 60 подростков в периоде обострения атопического дерматита (97%).

6. При оценке уровня TNF-a в сыворотке в 39% случаев регистрировались увеличенные значения данного параметра (24 пациента).

7. У 37 подростков, больных атопическим дерматитом, отмечалось повышение спонтанной продукции TNF-a (60%).

8. При изучении индуцированной продукции TNF-a было выявлено снижение этого цитокина в 47% случаев (29 подростков).

9. Уровень IL-4 в сыворотке крови был повышен у 23 подростков (37%).

10. При спонтанной продукции увеличение IL-4 наблюдалось в 27% случаев (17 пациентов).

11. Индуцированная продукция характеризовалась снижением IL-4 в 63% случаев (39 подростков).

Заключение. Регистрировалась положительная корреляция степени выявленных иммунологических нарушений с тяжестью клинических проявлений атопического дерматита у подростков.

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ИНТЕРЛЕЙКИНА-б И ФАКТОРОВ НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ

ВиктороваТ.В.. Якупова Э.В.. БакировБ.А.*, Калимуллина Д.Х.*, Макарова О.В., ГринчукО.В.

Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук, Россия;

* Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека, Россия

Множественная миелома (ММ) относится к группе лимфопролиферативных злокачественных новообразований системы крови. При этом заболевании в организме преимущественно накапливается опухолевый клон плазматических клеток, продуцирующих гомогенные моноклональные иммуноглобулины. Плазматические клетки и В-лимфоциты активно продуцируют различные цитокины, в том числе интерлейкин 6 (IL-6), фактор некроза опухолей a (TNFa) и другие. Цитокины, ингибируя апоптоз и являясь пара- и/ или аутокринными факторами роста, оказывают влияние на пролиферацию опухолевых клеток и, следовательно, играют роль в патогенезе ММ и прогрессировании заболевания. В работах ряда авторов установлена взаимосвязь между концентрацией IL-6 и TNFa в сыворотке крови и тяжестью клинического течения ММ (Nachbauretal., 1991) злокачественных лимфом (Salles et al., 1996). В этой связи, нельзя исключить, что варианты полиморфизма генов цитокинов, наиболее важных в патогенезе ММ, находятся в ассоциации со степенью их экспрессии и, следовательно, определяют сроки манифестации, тяжесть клинического течения и исход заболевания.

С целью изучения ассоциации полиморфных вариантов генов цитокинов с предрасположенностью к множественной миеломе (ММ) и различным клиническим формам заболевания методом ПЦР проведен молекулярно-генетический анализ полиморфизма -174G-»C промоторной области гена интерлейкина 6 (IL-6), полиморфизма -308G—>А промоторной области гена фактора некроза опухолей a (TNFa ) и полиморфизма +252А—Ю гена фактора некроза опухолей Р (TNFP) у больных из Башкортостана. В анализ взято 69 больных ММ из Башкортостана, в том числе 19 пациентов с агрессивным течением ММ, 26 - с доброкачественной фор-

мой, 24 - с неопределенной формой заболевания. В качестве контроля обследовано 102 человека, отобранных в соответствии с этнической принадлежностью, полом и возрастом исследуемой группы больных. При сравнительном анализе особенностей распределения частот генотипов и аллелей исследованных полиморфных участков генов IL-6, TNFa и TNFP между больными ММ контрольной группой достоверных отличий не обнаружено. По характеру распределения частот генотипов гена IL-6 между больными с агрессивным и доброкачественным течением ММ выявлены статистически значимые различия (х2=7.30; р=0,03). Частота генотипа СС, обусловливающего низкий уровень экспрессии гена IL-6, у больных с доброкачественной формой ММ составила 0.35, тогда как в группе больных с агрессивным течением заболевания генотип С С не встречался. Ассоциации полиморфных вариантов генов TNFa и TNFP с предрасположенностью к заболеванию и с формами клинического течения ММ не обнаружено. При анализе комбинаций генотипов полиморфных локусов генов TNF показано существенное возрастание частоты варианта TNFa*GG/TNFp*AG у больных по сравнению с контролем, на долю которого приходилось 38,4% у больных против 18,4% (%2=5,73, р<0,05; OR= 2,4). При сопоставлении данных, полученных для больных ММ с различными вариантами течения заболевания, установлено, что у больных с агрессивным течением ММ частота варианта TNFa*GG/TNFP*AG составляет 39,8% (OR= 2.6). Таким образом, становится очевидным, что у больных MB с сочетанием генотипа G/G по гену TNFa и A/G-гено-типа в гене LTa имеется повышенный риск развития тяжелых поражений дыхательной системы. На основании полученных результатов можно предположить, что полиморфные варианты генов цитокинов ассоциированы с предрасположенностью к ММ и различным формам заболевания. Генотип СС полиморфного локуса -174G—»C промоторной области гена IL-6, ассоциирован с благоприятным течением ММ. Комбинация генотипов TNFa*GG/TNFP*AG достоверно чаще выявляется у больных ММ, преимущественно у пациентов с агрессивной формой течения заболевания. Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения полиморфизма генов цитокинов, вовлеченных в патогенез ММ, с целью прогнозирования предрасположенности к заболеванию и вариантам клинического течения.

ОСОБЕННОСТИ ЦИТОКИНОВОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ КИСТОЗНОЙ БОЛЕЗНЬЮ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

ГазимоваВ.Г.. Бушуева Т.В., Казанцева С.В., Лан С.М.

Екатеринбургский медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промышленных предприятий;

Уральская государственная медицинская академия

Изучение иммунного статуса женщин при доброкачественных заболеваниях молочной железы имеет значение для разработки мероприятий по предотвращению развития злокачественных новообразований. Определение содержания цитокинов в сыворотке крови и кистозном содержимом расширяет представления о патогенезе кистозной болезни, который изучен недостаточно.

Цель исследования: обосновать роль иммунных нарушений в развитии кистозной болезни молочной железы.

113,1 40 ,05

Рис.1. Содержание цитокинов в сыворотке крови у женщин при кистозной болезни молочной железы.

1 - IL-4; 2 -IL-6; 3 -TNFa.

Материалы и методы: уровень провоспалительных цитокинов IL-6, TNFa и противовоспалительного - IL-4 определяли ИФА-методом. Всего была исследована сыворотка 110 женщин, страдающих кистозной болезнью молочной железы. Контрольную группу составили 30 здоровых женщин в возрасте от 18 до 35 лет. Кистозная жидкость была получена во время пункции кисты молочной железы под контролем УЗИ у 80 женщин.

Результаты исследования: при сравнении с контрольной группой было выявлено достоверное повышение содержания цитокинов в сыворотке крови.

При кистозной болезни молочной железы, но при различных сопутствующих заболеваниях по сравнению с контрольной группой содержание интерлейкинов очень вариабельно. Так, самое высокое содержание IL-4 выявлено в группе с сопутствующей гинекологической патологией и составило 175,3±61,53 пкг/мл, IL-6 и TNFa максимальны в группе с патологией щитовидной железы и составляют 459,6±189 и 176,6+83,0 пкг/мл соответственно. Такие высокие показатели, скорее всего связаны с развитием системного ответа на наличие сочетанной патологии: молочной железы и других органов.

При изучении кистозной жидкости нами был выявлен, единственный цитокин-TNFa, концентрация, которого составила 157,1 ±72,68 пкг/мл, а в сыворотке-90, 11±16,67 пкг/мл.

Таким образом, изучаемые интерлейкины участвуют в патогенезе кистозной болезни молочной железы как на местном, так и на системном уровне.

ЦИТОКИНЫТ-ХЕЛПЕРОВ ПЕРВОГО И ВТОРОГО типов В СЫВОРОТКЕ ЖИТЕЛЕЙ АЛТАЙСКОГО КРАЯ, ПОДВЕРГШИХСЯ РАДИАЦИОННОМУ ВОЗДЕЙСТВИЮ В РЕЗУЛЬТАТЕ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ СЕМИПАЛАТИНСКОГО ПОЛИГОНА

Гришина Л.В.. Сенникова Ю.А.*, Соловьева Н.Ю., Крысов С.В., Сенников С.В., Козлов В.А.

*ГУ научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН;

Новосибирская медицинская академия,

Новосибирск, Россия

В исследованиях, выполненных ранее, нами было показано увеличение распространенности основных имму-

нопатологических синдромов (ИПС) у жителей Алтайского края, подвергшихся радиационному воздействию в результате деятельности Семипалатинского полигона. Кроме того, у этих групп обследуемых лиц были выявлены изменения в пролиферативной активности и субпопуля-ционной структуре иммунокомпетентных клеток, нарушение продукции IL-2 и IL-4 МНК ПК и повышение сывороточных уровней провоспалительных цитокинов. Полученные данные свидетельствуют о нарушениях функционирования иммунной системы жителей Алтайского края, подвергшихся радиационному воздействию, и, в частности, в ее регуляторном звене. Известно, что баланс цитокинов, продуцируемых Т-хелперами первого и второго типов оказывает регуляторное влияние на функциональные свойства иммунокомпетентных клеток и определяет тип иммунного реагирования. В связи с этим, целью настоящего исследования явилось дальнейшее изучение регуляторного звена иммунной системы, а именно - уровня цитокинов Т-хелперов первого и второго типа (IL-2, ИНФу и IL-4, IL-10 - соответственно) в сыворотке крови жителей Алтайского края. Были обследованы жители Угловского района Алтайского края, наиболее пострадавшие в результате ядерного испытания 1949 года. Контрольную группу составили практически здоровые доноры г. Новосибирска. Содержание цитокинов в сыворотке определяли элект-рохемилюминесцентным методом с помощью меченых поли- и моноклональных антител. Выявлено достоверное увеличение сывороточных концентраций цитокинов IL-2, IFNy, IL-4, IL-10 у всей группы обследованных, в отдельных населенных пунктах, а также при анализе по поколениям. Также установлено, что увеличение сывороточных концентраций IL-4 и IFN-y наблюдается только на фоне увеличения провоспалительных цитокинов выше определенной пороговой величины, что позволяет говорить, что изменения в продукции провоспалительных цитокинов при радиационном воздействии являются ведущими в патогенетическом влиянии радиационного воздействия на цитокиновую сеть. Таким образом, в сыворотке крови лиц, подвергшихся радиационному воздействию, выявлено повышение содержания как цитокинов, продуцирующихся Тх-1 (IL-2 и IFNy), так и цитокинов, продуцирующихся Тх-2 (IL-4, IL-10), что свидетельствует об активации иммунной системы. Можно полагать, что выявленные изменения в регуляторном звене иммунной системы, в частности, в продукции иммунорегуляторных цитокинов, в изменении баланса цитокинов Т-хелперов первого и второго типов в сыворотке крови жителей Алтайского края, подвергшихся радиационному воздействию, лежат в основе нарушений функционирования иммунной системы и увеличения распространенности ИПС.

ЦИТОКИНЫ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ У ДЕТЕЙ

ДеркачВ.В.. Просекова Е.В., Вафина Т.П.

Владивостокский государственный медицинский университет, Детская городская клиническая больница, Дальневосточный филиал НИИ КИ СО РАМН, Владивосток, Россия

Показатели заболеваемости атопическим дерматитом (АД) среди детей в развитых странах колеблются от 13 до 37%. По данным эпидемиологических исследований (ISAAC) во Владивостоке (2000г.), симптомы АД зафиксированы у 12,41 ±0,64% первоклассников и 9,23±0,56% восьмиклассников. Определяющим механизмом хрони-

ческого аллергического воспаления при АД является иммунологический дисбаланс Thl/Th2 и нарушение в системе цитокинов.

Цель исследования состояла в изучении диагностической ценности и информативности мониторинга концентрации сывороточных IL-4, IL-8, TNFa и INFy в оценке степени тяжести, активности, прогнозе и эффективности терапии аллергического воспаления у детей с АД,

В течение года обследовано 30 детей в возрасте от 1 года до 16 лет с атопическим дерматитом. Определение цитокинов в сыворотке крови проводили иммунофермент-ным методом в «сэндвич» варианте реактивами «R&D diagnostics Inc.» (USA). Мониторинг содержания сывороточных IL-4, IL-8, TNFa и INFy проводили при терапии антигистаминными и мембраностабилизирующими средствами, энтеросорбентами и препаратами корригирующими нарушения в системе желудочно-кишечного тракта. Контрольную группу составили 10 здоровых сверстников. При оценке степени тяжести АД использовали индекс «SCORAD» и у 3 пациентов (10%) была диагностирована тяжелая форма атопического дерматита, а в 60% случаев -среднетяжелая, 30% - легкая.

При АД у детей в период обострения заболевания выявлено увеличение содержания в крови IL-4 в 92% случаев, IL-8 и TNFa почти у половины детей в исследуемой группе. Концентрация данных цитокинов составила 29,72±2,96 pg/ml, 132,58±27,93 pg/ml и 35,13+4,01 pg/ml соответственно, при низких показателях уровня сывороточного INFy (42,28±2,49 pg/ml против 90,4±4,20 pg/ml в контрольной группе р<0,01 ). В период ремиссии заболевания не зафиксировано нормализации данных показателей.

Степень и интенсивность нарастания концентрации IL-4, IL-8, TNFa в сыворотке крови детей с АД зависели от активности, тяжести и длительности воспалительного процесса. В литературе отмечено, что клетками мишенями для IL-8 могут служить активированные IL-3 эозино-филы, базофилы и кератиноциты, а TNFa контролирует степень активации нейтрофилов, участвует в регуляции экспрессии молекул адгезии, ответственных за избирательную адгезию эозинофилов в очаге воспаления, то есть является медиатором, ответственным за развитие поздней фазы атопической реакции, и опосредует хронизацию аллергического воспаления.

Проведенный мониторинг содержания в сыворотке крови IL-4, IL-8, TNFa и INFy отметил, что данные цитокины могут использоваться как маркеры выраженности и тяжести аллергического воспаления при АД и как критерий оценки адекватности противовоспалительной и иммунокорригирующей терапии при данном заболевании у детей.

ОСОБЕННОСТИ СИСТЕМЫ ИНТЕРФЕРОНА И ПРОДУКЦИИ ИНТЕРЛЕЙКИНА- 4 У БЕРЕМЕННЫХ С БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ

ЕфановА.А.., Шугинин И.О., Ткачева И.И., Паршина О.В., Гусева Т.С.

Московский областной научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии; Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Россия, Москва

Введение. Атопическая бронхиальная астма относится к заболеваниям, в патогенезе которых лежат стой-

кие иммунопатологические реакции. Нарушения функции Т-лимфоцитов с преобладанием активности Th2 клеток и, соответственно, изменением уровня цитокинов и IgE у таких больных. Основной маркер ТЬ-1зве-на - интерферон у способен ингибировать эффекты IL-4, а его содержание косвенно может отражать функциональную активность Th-1- регуляторов клеточного иммунитета. Высокая частота акушерских и перинатальных осложнений у беременных с бронхиальной астмой делает несомненно актуальными исследования, направленные на оптимизацию тактики лечения таких пациенток.

Цель: повышение эффективности терапии у беременных с бронхиальной астмой.

Задачи:

- изучение интерферонового статуса (IFN) при бронхиальной астме различной степени тяжести у беременных.

- выявить особенности продукции IL-4 у данной категории беременных.

- дать оценку интерферонкорригирующей терапии с учетом выявленных нарушений.

Материалы и методы: под нашим наблюдением находилось 84 беременных, страдающих атопической бронхиальной астмой различной степени тяжести. Наряду с общеклиническим обследованием определяли характеристики ИФС: сывороточный интерферон, способность лейкоцитов к продукции альфа-интерферона (a-IFN), гамма-интерферона (y-IFN) и интерлейкина-4 (IL-4) спонтанную и индуцированную конкановалином А (КонА) методом ELISA.

Результаты: исследования показали, что у беременных с бронхиальной астмой имеются нарушения функционирования системы IFN, степень выраженности которых зависит от тяжести бронхиальной астмы. Легкое и среднее течение заболевания сопровождалось умеренным угнетением лейкоцитов к продукции альфа и гамма IFN и нормальным сывороточным (cbiB.-4;a-IFN-64; y-IFN- 8-16 МЕ/мл). При тяжелом течении отмечалось более выраженное угнетение интерфероногенеза с преимущественным подавлением у- функции (сыв.-8; a-IFN-32-64; y-IFN- 4 МЕ/мл). Выявлены особенности функционирования системы IFN в период обострения бронхиальной астмы. При стойком течении заболевания и проведении интерферонкорригирующей терапии: сывороточный- менее 4, a-IFN-128-256; y-IFN-16 МЕ/мл). Обострение: сывороточный -4-8, a-IFN-256; y-IFN- 4 МЕ/мл). При коррекции выявленных нарушений препаратом виферон отмечено снижение сывороточного интерферона, повышение способности лейкоцитов к продукции a-IFN и тенденция к повышению у-IFN. Применение лечебного плазмафереза (ПФ) у данной категории больных выявило положительное интерферон-корригирующее действие, причем ответ лейкоцитов на выработку альфа и гамма IFN более значительный: (сыв,-

4, a-IFN-256; y-IFN- 16 МЕ/мл). При исследовании способности лейкоцитов к продукции IL-4 нами выявлено, что спонтанная продукция у здоровых беременных составила -13,61мкг/мл(медиана). У беременных с астмой была выше - 17,02 мкг/мл. Стимуляция клеток Кон А у здоровых беременных привела к увеличению выработки IL-4 в два раза (23,84 мкг/мл), подобного эффекта у больных бронхиальной астмой не было (с 17,02 до 19,95 мкг/мл), причем при тяжелом течении заболевания ответа вообще не наблюдалось.

Заключение: выявленные нарушения ИФС и особенности продукции IL-4 у беременных, страдающих бронхи-

альной астмой разной степени тяжести, диктуют необходимость индивидуального подхода к интерферонкорриги-рующей терапии таких больных.

ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ “ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ-а” (Т№-(х) ПОСЛЕ РАДИКАЛЬНОГО ХИРУРГИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ РАКА ПИЩЕВОДА (РП)

Керимов М.М.

Медицинский университет,

Баку, Азербайджан

Введение.Фактор некроза опухоли-а (ТКТ-а) - белок с иммуномодуляторными функциями. Рецепторы к ТЫБ-а свойственны преимущественно лимфоидным и макро-фагальным клеткам. Есть единичные сообщения об их содержании также в опухолевой ткани различных раков. Между тем, само присутствие 'ПЧЕ-а и его возможное прогностическое значение при раке пищевода (РП) после радикального хирургического лечения остаются практически не изученными.

Цель: оценить прогностическую ценность иммуногис-тохимического содержания ТЫБ-а в опухолевой ткани РП при метастазировании после радикального хирургического лечения.

Материал и методы. Общий контингент исследования составлен 132 больными, прооперированными по поводу РП в 1991-2002 гг. В 48-ми наблюдениях (36,4%) иммуногистохимически в опухолевой ткани изучен ТОТ-а стандартным набором авидин-биотиновой реакции с применением мышиных моноклональных антител к ТОТ-а человека (“Ыоуосав^а”) У отмеченных больных прослежена динамика метастазирования РП в течение первых 2-х лет после радикального хирургического лечения. Содержание специфически окрашенного продукта реакции оценено ви-зуально-полуколичественно по 4-х балльной шкале. Цифровые данные обработаны методами статистики для непараметрических критериев с вычислением коэффициента корреляции (г) и критерия Пирсона (-Й) при уровне доверительной вероятности Р=0,95.

Основные результаты. ТОТ-а идентифицирован в 43-х из 48 случаев (89,6%).Он преимущественно обнаружен в клетках опухолевой стромы, а не паренхимы РП. Лишь у 7 пациентов (14,6%) позитивный субстрат выявлен как в лимфоцитах, в плазмацитах, гистиоцитах в строме опухоли, так и на поверхности отдельных атипичных эпителиальных клеток при “высоко-дифференцированной аденокарциноме” пищевода. При этом в 9 наблюдениях его содержание “очень высокое” (4,0 б.), в 18 - “высокое” (3,0 б), в 8 - “среднее” (2,0 б.) и в 8 - “низкое” (1,0 б.).

Метастазы РП среди указанных 48 наблюдений в течение первых 2-х лет после радикального хирургического лечения выявлены у 27 пациентов (56,3%). При этом во всех 16 случаях с “низким и средним” содержанием Т№-а в опухолевой ткани отмечен метастатический рост опухоли спустя 6,0-11,0 месяцев после операции, тогда как “очень высокое” содержание субстрата находится в обратно-пропорциональной связи с метастазированием. Доказано, что содержание ТОТ-а достоверно отрицательно сопрягается с частотой метастазирования РП после радикального хирургического лечения больных (г=-0,42; ■7^=54,4; р<0,05).

Заключение. Таким образом, повышенное иммуноги-стохимическое содержание ТОТ-а в опухолевой ткани яв-

ляется положительным прогностическим фактором при РП и подавляет послеоперационный метастатический потенциал процесса.

АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ В ГЕНАХ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ a (TNFa) И ЛИМФОТОКСИНА a (LTa) С ТЯЖЕСТЬЮ ТЕЧЕНИЯ ЛЕГОЧНОЙ ПАТОЛОГИИ У БОЛЬНЫХ МУК0ВИСЦИД030М

Корытина Г.Ф., Янбаева Д .Г., Викторова Т.В.

Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук, Уфа

Муковисцидоз (MB) - одно из частых наследственных, аутосомно-рецессивных летальных заболеваний, характеризующееся системным поражением экзокринных желез. В основе биохимического дефекта при MB лежит нарушение структуры и функции трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза, кодируемого соответствующим геном. У 95 % больных MB доминируют изменения со стороны органов дыхания. Существенное повышение вязкости бронхиального секрета нарушает мукоцилиарный клиренс, что облегчает бактериальную адгезию и способствует развитию инфекционного процесса. Легочная инфекция вызывает у больных выраженный иммунный ответ, который характеризуется интенсивной миграцией ней-трофилов, продуцирующих значительное количество свободных радикалов и протеолитических ферментов. Кроме того, в бронхиальном секрете таких больных обнаруживается повышенное количество провоспалительных цито-кинов. Чрезмерное воспаление сопровождается массивной деструкцией легочной ткани. В ранней фазе острого воспаления нейтрофилы и альвеолярные макрофаги высвобождают в большом количестве фактор некроза опухоли (TNFa), мощный провоспалительный цитокин. Он играет важную роль в развитии воспаления, так как индуцирует синтез макрофагами каскада интерлейкинов, в котором наиболее важными являются интерлейкин-1, интерлейкин-

6, интерлейкин-8.

Было обнаружено, что определенные мутации в генах, кодирующих соответствующие цитокины, значительно изменяют уровень их экспрессии, что может влиять на развитие хронического воспалительного процесса. Гены TNFa и LTa расположены в пределах главного комплекса гистосовместимости III класса на хромосоме 6 в области 6р21.3. Показано, что генетический полиморфизм, локализованный в положении -308 промоторного участка гена TNFa (-308G—>А), ассоциирован с повышенной экспрессией гена in vitro. Полиморфизм в 1-м интроне гена LTa обусловлен заменой аденина на гуанин в 252 положении гена (+252А—>G). Известно, что сочетание определенных аллелей в генах TNFa и LTa, приводит к повышению продукции фактора некроза опухоли и является фактором риска таких тяжелых заболеваний, как бронхиальная астма и хронический обструктивный бронхит.

Для выявления роли полиморфных вариантов в генах TNFa и LTa на тяжесть течения легочной патологии у больных муковисцидозом (MB) нами проведен анализ полиморфизмов (-308G—>А) гена TNFa и (+252А—>G) гена LTa у больных MB и у здоровых индивидов. Проанализирована ДНК 61 больных MB: 33 больных со средней тяжестью течения легочной патологии, 28 больных с тяжелым течением. В качестве конт-

роля использована ДНК 169 здоровых индивидов. ДНК выделяли из лейкоцитов периферической крови стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции. Изучение полиморфизмов в генах TNFa и LTa проводилось методом анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ). Для этого проводили гидролиз амплифицированного фрагмента ДНК, включающего необходимый участок ДНК рестриктазой Neo I фирмы “Сибэнзим” в стандартных условиях. Фрагменты ДНК разделяли электрофоретически в 8%-ном полиакриламидном геле с последующим окрашиванием раствором бромистого этидия (0,1мкг/мл) в течение 15 минут и визуализацией в проходящем ультрафиолетовом свете.

Результаты. При анализе локуса (-308G-»A) гена TNFa различий между исследуемыми группами не обнаружено. Анализ полиморфного локуса (+252А—>G) гена LTa показал, что у больных MB по сравнению с контролем достоверно выше частоты генотипов G/G (10,2% против 3,6% в контроле) и A/G (50,8% против 41,4% в контроле) (р<0,025). Среди больных MB со средней тяжестью течения значительно чаще встречаются индивиды с гомозиготным генотипом G/G (16,2%) как по сравнению с контролем, так и по сравнению с группой больных MB с тяжелым течением (х2=3,84, р<0,05). С другой стороны, у больных MB с тяжелым течением бронхо-легочных поражений индивиды с гетерозиготным генотипом А/G составляют 60,7%, что значительно выше по сравнению с контрольной группой (%2=8,23, р<0,01 ). Ассоциацию полиморфных вариантов генов TNFa и LTa, с тяжестью легочных поражений при MB наиболее полно можно оценить при анализе сочетаний различных комбинаций генотипов данных генов.

Среди больных MB в целом достоверно выше доля индивидов с сочетанием генотипа G/G по гену TNFa и А/ G-генотипа в гене LTa (37,3% у больных и 18,4% в контроле; %2=7,45, р<0,01; OR= 2,65) и увеличена до 6,8% частота комбинации A/G-генотипа в гене TNFa и G/G-генотипа в гене LTa. При сопоставлении данных, полученных для больных MB с различной степенью тяжести бронхо-легочных нарушений, отмечено, что у больных MB с тяжелым течением на долю индивидов с комбинацией генотипа G/G по гену TNFa и A/G-генотипа в гене LTa приходится 46,4% (х2= 9,18, p<0,003;OR= 3,86). Таким образом, становится очевидным, что у больных MB с сочетанием генотипа G/G по гену TNFa и A/G-генотипа в гене LTa имеется повышенный риск развития тяжелых поражений дыхательной системы.

Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения полиморфизма генов, вовлеченных в патогенез воспалительных заболеваний органов дыхания, с целью выявления генетических маркеров неблагоприятного течения заболевания.

ДИСБАЛАНС УРОВНЯ ПРО-И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ КАК ОСНОВА ФОРМИРОВАНИЯ БЕССИМПТОМНОГО НОСИТЕЛЬСТВА УСЛОВНО-ПАТОГЕННОЙ И ПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРЫ У ПЕРВИЧНЫХ ДОНОРОВ ПЛАЗМЫ КРОВИ

Кузнецов В.Ф., Орлова Е.Г., Ланин Д.В.,

Маслов Ю.Н., Клюева Т. А.

ФГУП М3 РФ «Пермское НПО «Биомед», Пермь

С позиций клинической иммунологии выявление бессимптомного носительства условно-патогенной и патогенной микрофлоры рассматривается как лабораторный маркер иммунной недостаточности, свидетельствующий

о неполноценности эффекторных звеньев иммунной системы. Однако до настоящего времени нет системных представлений о патогенезе этого состояния.

Целью работы. Исследовать уровень сывороточных IL-ip, IFNy, IL -4 у практически здоровых первичных доноров плазмы крови - носителей патогенной и условно-патогенной микрофлоры (УПМ).

Материалы и методы. Обследуемую группу составили 92 первичных донора плазмы крови в возрасте от 18 до 60 лет с отсутствием клинических проявлений грубой соматической патологии, обследованных в соответствии с инструкцией М3 РФ по медицинскому освидетельствованию доноров крови, плазмы, клеток крови. Содержание сывороточных IL-ip, IFNy, IL-4 определяли с использованием стандартных наборов для ИФА-анализа (ООО «Ци-токин», СПб и ООО «Протеиновый контур», СПб). Исследовали грибковую и аэробную бактериальную микрофлору с поверхности небных миндалин. Наряду с этим оценивали показатели иммунного статуса. В качестве контроля использовали группу первичных доноров, у которых носительства УПМ и патогенной флоры на поверхности небных миндалин выявлено не было. Достоверность результатов оценивали по непараметрическому критерию Вилкоксона суммы рангов. Анализ качественных признаков проводили с использованием критерия достоверности разности выборочной доли.

Основные результаты. У 41 % первичных доноров плазмы крови выявлено носительство УПМ и патогенных микроорганизмов. Из них у 30% обнаружено носительство монокультуры Candida albicans, у 22% - St. Aureus, у 18% St. Aureus в ассоциации с Candida albicans, у 30% - другие УПМ (в связи с малочисленностью выборки данные по этой группе не представлены). Показано, что в группе сравнения выборочная доля доноров, у которых значение IL-ip было отлично от нуля, была достоверно больше, чем у носителей УПМ и патогенной микрофлоры (табл.). С другой стороны, концентрация IL-4 при ассоциированном носитель-стве St. Aureus и Candida albicans была достоверно повыше-

Таблица. ЦИТОКИНОВЫЙ СТАТУС НОСИТЕЛЕЙ УСЛОВНО-ПАТОГЕННОЙ И ПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРЫ

Показатель (пг/мл) Группа Сравнения Candida albicans St. aureus Candida albicans St. aureus

IL-ip 0(0-145,2) 0 0 0

Р 0,38 0# 0# 0*

IL-4 27,2 (0-144,8) 31,7(16,7-44,8) 78,0 (39,0-117,0) 421,7 (246,7-914,1)*

IFN-y 89,3 (72,8-146,1) 111,2 (93,5-150,3) 130,1 (111,0-153,5) 65,7 (54,0 - 88,9)

Данные в таблице представлены в виде медианы и квартилей; * - р<0,05 по непарному критерию Вилкоксона суммы рангов;

Р - доля доноров, концентрация 11.-1 р в сыворотке крови которых отлична от нуля; * - р<0,05 по критерию разности выборочных долей

на. Изменения концентрации IFNy выявлено не было. Таким образом, бессимптомное носительство УПМ и патогенной микрофлоры на слизистой миндалин не только не сопровождалось повышением уровня провоспалительно-го цитокина IL-1(3, но отмечалось его отсутствие в сыворотке крови, на фоне увеличения выработки противовоспалительного цитокина IL-4, что, по-видимому, и определяет отсутствие развития воспалительной реакции.

Заключение. Выявление контаминации слизистых патогенными и УПМ у доноров является лабораторным маркером, характерным для иммунной недостаточности. Патогенетической основой нарушения местных защитных реакций, по-видимому, является недостаточность выработки IL-1|3 и дисбаланс уровня про- и противовоспалительных цитокинов.

ИССЛЕДОВАНИЕ ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ У ПАЦИЕНТОВ С АТОПИЧЕСКИМ ДЕРМАТИТОМ И БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ В РАЗЛИЧНЫЕ ФАЗЫ ТЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ

КурамшинаД.В.. Старостина Н.М.,

Сенников С.В., Козлов В. А.

ГУ Научно-исследовательский институт Клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия

Как показывают исследования, аллергическим заболеваниям подвержено 20-30% всей популяции человечества. Учитывая, что атопический дерматит (АД) и бронхиальная астма (БА) являются наиболее распространенными в популяции и яркими представителями этой группы заболеваний, представляется актуальным изучить особенности основных иммунологических механизмов их формирования и течения.

Нашей задачей было провести сравнительный анализ продукции мононуклеарами периферической крови (МНК ПК) и сывороточного содержания ряда провоспалитель-ных и противовоспалительных цитокинов у пациентов с АД и атопической БА в стадии обострения и ремиссии с целью выяснения иммунопатогенетических особенностей течения данных заболеваний.

Нами проводилась оценка продукции мононуклеарами периферической крови и содержания в сыворотке цитокинов IL-4, IL-10 и IFN-y у 30-ти пациентов с АД и 20-ти с БА в стадию клинических проявлений и стадию ремиссии заболеваний. Определение содержания цитокинов в сыворотке крови и супернатантах 48- и 72-часовых культур МНК ПК, интактных и стимулированных митогеном (КонА), проводилось методом электрохемолюминесценции.

Как при БА, так и при АД, в фазу обострения по сравнению с ремиссией отмечалось повышение сывороточной концентрации IL-10 (в обострение mediana 31 pg/1 и 564pg/

1 соответственно, в ремиссию mediana 6 pg/1 и 296 pg/1 соответственно) и IFN-y (в обострение mediana 63,5 pg/1 и 566 pg/1 соответственно, в ремиссию mediana 56,5 pg/1 и 269 pg/1 соответственно). В данном контексте IFN-y может рассматриваться как провоспалительный цитокин, тем более, что, по литературным данным, существует прямая корреляция между содержанием этого цитокина в супернатантах культур цельной крови пациентов с атопической Б А в стадии обострения со степенью гиперреактивности дыхательных путей и эозинофилией ПК. Нами также исследовалась спонтанная и КонА-стимулированная

секреция IL-4 мононуклеарами (МНК) ПК пациентов с БА и АД в различные стадии течения этих заболеваний. Спонтанная секреция этого цитокина оказалась выше по сравнению со стимулированной как в фазу ообстрения, так и в фазу ремиссии Б А и АД, причем в отличие от IL-10 и IFN-y, для которых наблюдался значительно более высокий уровень экспрессии при АД, экспрессия IL-4 при обоих заболеваниях оказалась сопоставимой. В стадии ремиссии как при БА, так и при АД отмечались достоверно более высокие показатели спонтанной секреции МНК ПК IL-4, что связано по-видимому с истощением МНК в стадии обострения.

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о наличии активации в стадии обострения таких атопических заболеваний, как Б А и АД, как Th-1 типа, так и Th-2 типа, с существованием определенных различий в уровне экспрессии таких плеотропных цитокинов как IL-10 и IFN-y при данных заболеваниях. Учитывая неоднозначность полученных результатов, существует необходимость более детального исследования механизмов иммунопатогенеза Б А и АД с целью разработки патогенетически обоснованных подходов к иммуноактивной терапии данных заболеваний.

ИЗМЕНЕНИЕ ЦИТОКИНОВОГО БАЛАНСА ПРИ РАЗВИТИИ И УТЯЖЕЛЕНИИ СИСТЕМНОЙ ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ РЕАКЦИИ У БОЛЬНЫХ СХИРУРГИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИЕЙ

Останин A.A.. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Шевела Е.Я., Курганова Е.В., Черных Е.Р.

ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия

Введение. Общепризнано, что нарушение баланса между про- и противовоспалительными цитокинами во многом определяет характер течения и исход гнойно-сеп-тического процесса, и соответственно, направленность иммунокоррекции, которая должна использоваться в комплексном лечении больных с гнойно-хирургической патологией. Однако отсутствие доступных методов диагностики, которые бы четко фиксировали смещение баланса в том или ином направлении, а также неясность, на каком этапе клинического развития происходит трансформация системной воспалительной реакции в системный противовоспалительный ответ с формированием глубокой иммунодепрессии, затрудняет правильный выбор стратегии проведения иммунотерапии.

Цель. Охарактеризовать изменения баланса про- и противовоспалительных цитокинов на этапах клинической манифестации и прогрессии синдрома системного воспалительного ответа (SIRS).

Материалы и методы. Обследовано 235 больных с гнойно-хирургической патологией, включая 195 больных с хирургическим сепсисом (по классификации Чикагской согласительной конференции ACCP/SCCM, 1991). Для исследования баланса про- и противовоспалительных цитокинов использовали оценку биологической активности сыворотки крови. При этом оценивалась воспалительная активность (ИВА) в тесте усиления продукции перекиси водорода лейкоцитами доноров, а также супрессорная активность (ИСА) в тесте ингибиции КонА-индуцированной пролиферации мононуклеарных клеток доноров. Содержание цитокинов (TNF-a, IL1-RA) в сыворотке определяли с помощью ИФА тест-систем (ООО «Цитокин», Санкт-

Г руппы ИВА (расч.ед.) ИСА (расч.ед.) TNF (пкг/мл) IL1-RA (пкг/мл) |Ц|-РАЯЫР (расч.ед.)

Доноры п=14 М ± SE (диапазон) 1,57 + 0,09 (1,04-2,0) 0,95 ± 0,04 (0,8-1,05) 32 ±3 (28 - 35) 160 + 25 (74-190) 4,4 ± 0,6 (2,5-10)

клиническая манифестация SIRS

SIRS (-) п=40 1,67 + 0,1 0,91 ± 0,05 44 ± 10 456±108 11 ±3,0

Cena4c/SIRS(+) п=195 1,40 ± 0,05 0,66 ± 0,02** 85 ±8* 1530±120* 26 ± 3,0*

Клиническая прогрессия SIRS

SIRS П=105 1,33 ±0,06 0,70 ± 0,03 93 ± 12 1360±170 20,7 ± 3,8

SIRS/ПОН п=88 1,51 ±0,09 0,60 ± 0,02* 76 ±11 1730±160* 32,3 ± 4,5*

Степень тяжести полиорганных нарушений

ПОН (SOFA <6) п=56 1,53 + 0,1 0,64 ± 0,04 68 ± 10 1230 + 226 20,6 ± 4,2

ПОН (SOFA >7) п=32 1,48 ±0,18 0,55 ± 0,04 82 ±20 2200±159* 43,3 ± 6,9*

Септический шок

На пике шока п=31 1,85 ±0,2 0,47 ± 0,03 72 ±26 2180 ±207 49 ± 8,8

После шока п=16 0,82 ± 0,2* 0,55 ± 0,06 108 ±22 1790 + 302 22 ±6

Петербург). Сывороточную концентрацию IL-10 в свободной и связанной форме определяли с помощью ИФА тест-систем (ACCUCYTE hIL-10, CYTIMMUNE, USA).

Результаты. Установлено, что клиническая манифестация SIRS ассоциируется с достоверным усилением супрессорной активности сыворотки и сдвигом баланса преимущественно в сторону противовоспалительных цито-кинов (таблица). О такой направленности изменений ци-токинового баланса свидетельствует увеличение индекса соотношения IL1-RA/TNF, который у больных с сепси-сом/SIRS почти в 6 раз превышал показатель в группе здоровых доноров, и более чем в 2 раза - в группе SIRS-негативных больных. Содержание в сыворотке IL-10 также было достоверно выше у больных с клиникой SIRS (26160±7240 vs 15120+2860 (диапазон 7830 - 20040) у доноров и 13800±3220 пкг/мл у SIRS-негативных больных).

При клинической прогрессии SIRS, утяжелении поли-органной недостаточности и развитии септического шока усиление супрессорной активности сыворотки и сдвиг цитокинового баланса достигают максимальной степени выраженности.

Заключение. Клиническая манифестация и прогрессия SIRS, и соответственно, утяжеление хирургического сепсиса ассоциируется со сдвигом баланса в сторону противовоспалительных цитокинов. Очевидно, что проводимая иммунокоррекция у таких больных должна быть нацелена на восстановление баланса за счет усиления активности цитокинов с иммуностимулирующими свойствами (например, с помощью препаратов цитокинов IL-2, IFN-y, G-CSF, IL-12).

ПРОДУКЦИЯ IL-2 ИIL-4 МОНОНУКЛЕАРАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ СПЛЕНЭКТОМИЮ

Павлова И.E.. Бубнова JI.H., ГлазановаТ.В., Розанова O.E., Каргин В.Д.

Российский НИИ гематологии и трансфузиологии, Санкт-Петербург, Россия

Ранее нами было показано, что у больных, перенесших посттравматическую спленэктомию, наблюдается повышенная спонтанная продукция целого ряда провоспали-тельных цитокинов (TNFa, IL-1 ß, IFN-y, IL-6). Поэтому представляет существенный интерес дальнейшее изучение способности клеток иммунной системы к секреции как противовоспалительных, так и провоспалительных цитокинов у пациентов, перенесших спленэктомию.

Цель нашей работы: изучить способность мононукле-аров периферической крови к спонтанной и индуцированной продукции IL-2 и IL-4.

Материалы и методы: нами обследованы 14 пациентов: 7 человек в возрасте от 16 до 40 лет через 1-3 года после спленэктомии, выполненной в связи с травмой (1 -ая гр.) и 7 человек в возрасте от 11 до 35 лет через 0,5-5 лет после спленэктомии, выполненной в связи с гематологическим заболеванием (идиопатическая тромбоцитопения). На момент обследования у всех пациентов отсутствовали какие-либо симптомы острого или хронического воспаления. Группу сравнения составили 10 доноров крови. Для оценки способности мононуклеаров периферической крови к продукции цитокинов проводили определение концентрации IL-2 и IL-4 с помощью стандартного метода твердофазного иммуно-ферментного анализа (тест-системы ООО “Протеиновый контур”, Санкт-Петербург) в супернатантах мононуклеар-ных клеток периферической крови после их 24-часового культивирования при 37С с 5% С02. В качестве индукторов использовали фитогемагглютинин -10 мкг на 200,000 клеток.

Результаты: полученные нами данные свидетельствуют о том, что у пациентов как первой, так и второй группы, перенесших спленэктомию, наблюдается повышенная (в 2 раза и более ) по сравнению с контрольной группой способность к спонтанной и индуцированной продукции IL-2, при этом спонтанный и индуцированный синтез IL-4 существенно снижен. Такие изменения со стороны цитокинпродуци-рующей способности мононуклеаров периферической крови свидетельствуют о том, что после спленэктомии, выполненной по разным причинам, у пациентов преобладают Thl. Возможно такая реакция является компенсаторной на развитие Т-клеточного иммунодефицита, развивающегося и сохраняющегося на протяжении длительного времени после иммунокомпрометирующей операции.

Y-IFN ИIL-10 У БОЛЬНЫХ С ОСТРОЙ И ХРОНИЧЕСКОЙ ФОРМАМИ ГЕПАТИТОВ ВИС

ПриймягиЛ.С.1, Тефанова В.Т.1 ,Талло Т.Г.1,

Шмидт Е.В.2, Сувидов B.C.3, Оргулас К. А.3

1 Институт экспериментальной и клинической медицины, Таллинн; 2Больница Пуру, Кохтла-Ярве; 3Таллиннская детская больница, Эстония

Введение. Дисбаланс про- (Thl) и противовоспалительных (Th2) цитокинов имеет важное значение как в патогенезе, так и в оценке активности воспалительного

процесса при многих вирусных инфекциях, в том числе вирусном гепатите В и С.

Цель исследования: определение уровня сывороточных y-IFN (Thl) и IL-10 (Th2) цитокинов и их соотношения в качестве показателей иммунного ответа при острой и хронической формах течения вирусных гепатитов В (HBV) и С (HCV).

Материалы и методы. Количественное содержание у-IFN и IL-10 определяли ИФА-методом с использованием коммерческих тест-систем Diaclone Research, Франция, в сыворотке крови 33 больных с хроническим (преимущественно активным) и 10 пациентов с острым вирусным гепатитом В и/или С, а также 8 детей с различными онко-гематологическими заболеваниями в стадии ремиссии и наличием хронической HBV и/или HCV инфекции.

Диагноз вирусного гепатита был установлен на основании наличия специфических маркеров вирусов гепатита В и С и характерных клинико-биохимических данных. Наличие в сыворотке крови ДНК HBV и РНК HCV определяли методом полимеразной цепной реакции.

Результаты. Сравнительная оценка содержания y-IFN и IL-10 в сыворотке крови показала достоверное (Р<0,05 и Р<0,01 соответственно) увеличение концентрации данных цитокинов у больных всех трех исследуемых групп по сравнению с контролем, независимо от этиологии заболевания. При этом самые высокие значения изучаемых цитокинов отмечены у больных с острой формой вирусного гепатита. В этой же группе больных высокие показатели уровня y-IFN и IL-10 коррелировали с высокой активностью AJIT. Средние значения концентрации IL-10 у больных с острым гепатитом достоверно (Р<0,01) были выше, чем при хронической форме заболевания.

Заключение. Таким образом, у больных с острой и хронической формами вирусных гепатитов В и С, по сравнению с контролем, значимо повышено содержание в сыворотке крови как npo-(y-IFN), так и противовоспалительных (IL-10) медиаторов. Наиболее выраженный сдвиг цитокинового баланса в сторону противовоспалительного (IL-10) цитокина показан при остром гепатите.

ДИНАМИКА ИНТЕРЛЕЙКИНА 4 (IL-4) И ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ a (TNFot) ПРИ АЛЛЕРГИЧЕСКОМ РИНИТЕ У ДЕТЕЙ

Просекова Е.В.. Шестовская Т.Н., Родионова О.М., Нетесова С.Ю.

Владивостокский государственный медицинский университет, Дальневосточный филиал НИИКИ СО РАМН, Детская городская клиническая больница, Владивосток, Россия

Хроническое воспаление при аллергическом рините (АР) опосредуется IgE иммунными реакциями и дисбалансом в системе цитокинов. IL-4 и IL-13 инициируют сигналы дифференцировки В-клеток в плазматические IgE-секретирующие клетки. Повышенная локальная экспрессия цитокинов ТЬ2-типа в слизистой оболочке носовой полости, являясь отличительной особенностью АР, определяет избирательное рекрутирование и выживание эозинофилов. TNFa, активируя нейтрофилы и участвуя в избирательной адгезии эозинофилов в очаге воспаления, опосредует позднюю фазу аллергического воспаления.

Анализ динамики концентрации IL-4 и TNFa в назальном секрете и сыворотке крови у детей с АР в разные

периоды заболевания при различной терапии определил цель и задачи настоящего исследования.

Под наблюдением находилось 25 детей в возрасте от 6 до 14 лет с круглогодичным АР, у 10 из них ринит сочетался с бронхиальной астмой (БА). Определение цитокинов в назальном секрете и сыворотке крови проводили имму-ноферментным методом в «сэндвич» варианте реактивами «R&D Diagnostics Inc» США в динамике.

Проведенные исследования отметили повышенное содержание TNFa (3,22±0,32 pg/ml) и IL-4 (48,36±2,7 pg/ml) в назальном секрете и сыворотке крови (4,89± 0,96 pg/ml и 35,05+3,4 pg/ml соответственно). В назальном секрете уровень TNFa в период обострения АР был значимо выше такового в период клинической ремиссии (6,10+0,60 pg/ml и 1,39±0,50 pg/ml соответственно при р<0,01). Минимальное содержание TNFa в назальном секрете зафиксировано у детей с фармакологической ремиссией на фоне терапии топическими глюкокортикоидными препаратами. При исследовании назального секрета после проведения аллергопроб отмечено значительное повышение уровня TNFa. В сыворотке крови содержание TNFa у детей с сочетанием АР и БА в несколько раз превышало показатели у детей с изолированным АР. В последнем случае в период обострения в назальном секрете концентрация IL-4 превышала значения сывороточного IL-4, а при сочетании АР и БА уровень IL-4 в сыворотке был значимо выше, чем у детей с изолированным АР.

Результаты исследования зафиксировали, что динамика TNFa и IL-4 в назальном секрете отражает активность, тяжесть и направленность аллергического воспаления при АР. Мониторинг IL-4 и TNFa в назальном секрете информативен в оценке выраженности патологического процесса и эффективности проводимой терапии при АР.

ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИНТЕРЛЕЙКИНА-1сс У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ ПАНКРЕАТИТОМ

РевтовичМ.Ю.. Леонович С.И., Борткевич Л.Г., Бадыгина H.A.

Белорусский государственный медицинский университет; ОО “Белорусский Зеленый Крест”, г.Минск, Республика Беларусь

Введение. В развитии и прогрессировании острого панкреатита важную роль отводится выбросу провоспа-лительных цитокинов, одним из которых является интерлейкин- la.

Материал и методы. У 43 больных острым панкреатитом на 1 и 10 сутки лечения (мужчин-33, женщин-10; средний возраст 37,5±2,49 года и 52,114,79 года соответственно) проведено исследование уровня IL-la в сыворотке крови и перитонеальном экссудате (16 больных) с помощью набора ООО “Цитокин” (Санкт-Петербург) на основе “сэн-двич”-метода твердофазного иммуноферментного анализа. В зависимости от суммы баллов прогноза по схеме В.Б.Краснорогова и соавт.(1999) нами выделены следующие группы: 1-я группа (1,3-2,5 баллов)- 20 человек; 2-я группа (2,6-4,4 баллов)- 23 человека.

Результаты. Сравнение групп больных показало превышение сывороточного уровня IL-la у пациентов 2 группы (297,3±54,57 пг/мл) по сравнению с пациентами 1 группы (129,4+4,0 пг/мл, (р<0,01)). При этом уровень данного цитокина у пациентов с гнойно-воспалительными осложнениями был выше по сравнению с пациентами с неосложненным течением заболевания (Т=41,0; р<0,05). Повыше-

ние 1Ь- 1а отмечено за 9,5±2,5 суток до возникновения гнойно- воспалительных осложнений, определяемых клинически, и составило на 10 сутки 437,6±41,95 пг/мл. Это рассматривалось нами как проявление инфицирования очагов некроза, что предопределило коррекцию антибактериальной терапии (максипим+метронидазол) и позволило избежать гнойных осложнений у этой группы больных. Более тяжелое течение панкреатита (2 группа) характеризовалось превалированием системного уровня цитокина (268,3±26,41 пг/мл) над таковым в перитонеальном экссудате (183,9±21,31 пг/мл, р<0,05). В первой группе наблюдалось инверсия данного соотношения-143,7±6,23 пг/ мл и 554,9±62,95 пг/мл соответственно, (р<0,01). Итак, 1Ь-1а может выступать маркером не только тяжести острого панкреатита, но и развития гнойно-воспалительных осложнений.

АЛГОРИТМ ПРИМЕНЕНИЯ ОТЕЧЕСТВЕННОГО РЕКОМБИНАНТНОГО ЭРИТРОПОЭТИНА ПРИ АНЕМИЯХ ВУРГЕНТНОЙ ГИНЕКОЛОГИИ

Ререкин И. А.

Медицинский институт Орловского государственного университета; Орловская областная клиническая больница, Орел, Россия

Отмеченный в последнее время стабильный рост ур-гентной гинекологической заболеваемости представляется актуальной задачей практического здравоохранения. По многообразию метаболических сдвигов, возникающих в организме женщины с острой патологией гениталий, данные заболевания занимают одно из ведущих мест в структуре гинекологической патологии, зачастую приводя к развитию полиорганной недостаточности. Одним из синдромов нарушенной адаптации в данной группе больных являются анемии - постгеморрагические, связанные с внут-рибрюшными и маточными кровотечениями (эктопическая беременность, апоплексия яичника, дисфункция яичников, структурная патология эндометрия, миома матки и др.) и токсические (при острых воспалительных заболеваниях, особенно с деструкцией органа). Наиболее распространенными методами терапии анемий являются гемотрансфузии (компонентная, инфузионно-трансфузионная) и назначение препаратов железа. Однако гемотрансфузии становятся все менее безопасной операцией, так как сопряжены с риском инфицирования и дополнительной сенсибилизацией организма в стрессовой ситуации. Лечение препаратами железа, как правило, длительное и при ургентных заболеваниях недостаточно эффективно. Поэтому разработка новых способов коррекции анемий, в частности с использованием рекомбинантного эритропоэти-на (РЭПО), является наиболее перспективной.

В связи с этим, целью работы явилось изучение клинической эффективности использования РЭПО и разработка алгоритма его применения при анемиях в ургентной гинекологии.

В настоящей работе использовался отечественный препарат «Эпокрин» (содержащий рекомбинантный эрит-ропоэтин и сывороточный альбумин человека в изотоническом буфере в дозе 2000 МЕ/мл), который был применен в комплексном лечении 40 женщин среднего возраста: 32,3±3,4 года. Контрольную группу составили 40 больных (средний возраст - 34,1+2,3), получавших традиционную терапию, включавшую применение препаратов железа,

переливание крови и ее компонентов. Выбор способа введения препарата (подкожный или внутривенный) зависел от степени выраженности кровотечения и тяжести анемии, которые оценивались по клиническим и лабораторным критериям. При внутривенном введении препарата в качестве инфузата использовался физиологический раствор или реополиглюкин. В случаях быстрой остановки кровотечения (преимущественно маточные кровотечения и неглубокие нарушения состояния эритрона) использовалось подкожное введение эпокрина в дозе 2000 МЕ/мл через день (на курс 3 инъекции). Осложнений при применении эпокрина не отмечалось. Кроме того, учитывая дефицит уровня железа в организме больных с анемиями, параллельно с применением РЭПО в аналогичном с ним режиме назначались препараты железа по разработанной нами схеме: внутривенно феррум-лек, а при подкожном введении РЭПО - таблетированный тардиферрон.

Контролем эффективности РЭПО-терапии в указанных группах больных являлось повышение количества эритроцитов и ретикулоцитов, а также уровней гемоглобина и гематокрита в динамике лечения на 1-2 и 5-7 сутки лечения (послеоперационного периода). Кроме того, учитывая важное значение иммунных механизмов в развитии и исходе ургентных заболеваний, нами исследована динамика показателей системного иммунитета на фоне РЭПО-терапии. Установлено, что использование данного метода лечения приводило к более быстрому, чем у больных контрольной группы, повышению исходно сниженного количества CD4+, CD8+ - регуляторных лимфоцитов, а также нормализации числа клеток, экспрессирующих ранние и поздние маркеры активации.

Анализ полученных данных показал высокую клиническую эффективность препарата, способствующую быстрой и устойчивой нормализации показателей состояния эритрона и иммунного статуса и приводящую к сокращению сроков лечения.

СИНТЕЗ НЕКОТОРЫХ цитокинов - позитивных И НЕГАТИВНЫХ РЕГУЛЯТОРОВ ГЕМОПОЭЗА -У БОЛЬНЫХ АПЛАСТИЧЕСКОЙ АНЕМИЕЙ

Розанова O.E.. Бубнова Л.Н.

Российский НИИ гематологии и трансфузиологии, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Множество цитокинов, продуцируемых клетками иммунной системы, относятся к гемопоэтичес-ким ростовым факторам, являются неотъемлемой частью нормального кроветворения и оказывают влияние на все его этапы. В зависимости от характера этого влияния их условно разделяют на позитивные и негативные регуляторы гемопоэза. К позитивным регуляторам относятся те факторы, которые поддерживают пролиферацию ППСК, эритроидных, миелоидных и лимфоидных предшественников, стимулируя соответствующие ростки кроветворения (различные КСФы, зритропоэтин (ЕПО), IL-1, -3, -6, -11 и т.д.). Другие цитокины (TNF, IFN, ТФР), напротив, могут снижать клоногенность всех типов предшественников гемопоэтических клеток и в силу этого относятся к негативным регуляторам гемопоэза. Исследование гемопоэтических факторов является наиболее актуальным при заболеваниях, связанных с нарушением гемопоэза, к которым относится, прежде всего, апластическая анемия (АА). В настоящее время внимание исследователей концентрируется на изучении иммунологических механизмов разви-

тия АА, поскольку именно клетки иммунной системы являются основными продуцентами большинства вышеперечисленных гемопоэтических факторов.

С целью выяснения иммуноопосредованных аспектов патогенеза АА, задачей настоящей работы явилось исследование синтеза некторых факторов, влияющих на эрит-ро-, тромбо- и гранулопоэз,- то есть те звенья гемопоэза, которые являются наиболее уязвимыми при АА. Для этого у больных определяли собственный уровень ЕПО, а также продукцию мононуклеарами периферической крови и костного мозга таких цитокинов, как 1Ь-1Р, 1Ь-6, №N7 и ТЫБа.

Методы исследования. Содержание ЕПО в сыворотке крови и синтез цитокинов исследовали с помощью стандартного метода ИФА у 37 больных тяжелой А А. В работе использовали диагностикумы фирм “К&В”(США) и “Протеиновый контур”(СПб, Россия). Продукцию цитокинов исследовали в супернатантах мононуклеарных клеток периферической крови и костного мозга (2х106 кл/мл) после их 24-часового культивирования при 37°С без добавления стимуляторов (спонтанная) и в присутствии соответствующих индукторов синтеза цитокинов.

Результаты. Уровень ЕПО у больных АА колебался в очень широких пределах: от 5 до 700 и более млЕ/мл, однако ни у одного больного содержание данного фактора не было ниже нормативных показателей (3,3-16,6 млЕ/мл). Спонтанная продукция 1Ь- ф у больных АА была повышена в костном мозге в среднем в 1,7 раза и в периферической крови в 6,5 раз. Уровень спонтанной продукции 1Ь-6 у больных АА был также повышен в среднем в 2,8 и в 3,8 раз в периферической крови и костном мозге, соответственно. Таким образом, уровень и продукция положительных гемопоэтических факторов (ЕПО, 1Ь-1Р, 1Ь-6) у больных АА в среднем превышали показатели нормы. Спонтанная продукция №N7 в периферической крови больных хоть и превышала показатели нормы (42пкг/мл) в 1,36 раза, но эти изменения не были достоверными. Что касается другого негативного гемопоэтического фактора - ТЫРос, то установлено резкое повышение его уровня и в периферической крови и в костном мозге; так, спонтанная продукция данного цитокина превышала показатели нормы в костном мозге в 5, а в периферической крови - более чем в 10 раз.

Заключение. Таким образом, анализ уровня ЕПО и спонтанной продукции 1Ир, 1Ь-6, 1Шу и ТОТа у больных АА показывает, что “вклад” иммунной системы в развитие данного заболевания может быть обусловлен не столько недостатком синтеза положительных гемопоэтических факторов, сколько сверхпродукцией негативных регуляторов гемопоэза, а именно - ТЫБа.

РОЛЬ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ИНТЕРЛЕЙКИНОВ (1Ыа, И-8, Т№-а) И ОКСИДА АЗОТА В ПАТОГЕНЕЗЕ НЕОСЛОЖНЕННОЙ ГОНОРЕИ

СингурО.А.. Туркутюков В.Б., Сингур Л.Г., Маркелова Е.В., Журавлева Н.В.

Владивостокский государственный медицинский университет, ТИБ ОХ ДВО РАН, Владивосток, Россия

За последнее десятилетие отмечается не только подъем заболеваемости гонореей, но и увеличение числа хронических и осложненных форм, обусловленных длительной персистенцией возбудителя. Особенность гонореи состоит в том, что N\gonorrhoeae размножается

непосредственно в области входных ворот инфекции - в слизистой оболочке мочеполовых органов. Поэтому возникновение и исход этого заболевания зависит от механизмов местной устойчивости. Однако, при длительно текущих уретритах гонорейной этиологии фагоцитоз носит незавершенный характер. В связи с этим с целью изучения механизмов нарушения местной фагоцитарной защиты проводилась оценка состояния спектра про-воспалительных цитокинов (IL-la, IL-8, TNF-a), обеспечивающих полноценность макрофагальной функции и оксида азота, одного из факторов микробицидности макрофагов в уретральных смывах у 40 мужчин 18-45 лет (опытная группа) с длительно протекающим уретритом гонорейной этиологии до лечения и у 40 здоровых мужчин в возрасте 18-45 лет (контрольная группа). Оценка уровня цитокинового профиля проводилась с помощью твердофазового ИФА с использованием реактивов “R&D diagnostic, Inc” (USA). Концентрации оксида азота определялась спектрофотометрическим микрометодом с использованием реактива Griess. В ходе исследования зарегистрировано статистически достоверное снижение уровня IL-8 и IL-la в уретральных смывах опытной группы в 7 и 8 раз соответственно по сравнению с показателями здоровых в контрольной группе. Содержание TNF-a и оксида азота в уретральных смывах в опытной группе соответствовало показателям контрольной группы. Таким образом, недостаточность фагоцитарной защиты объясняется дисфункцией про-воспалительных интерлейкинов ( IL-la, IL-8), вследствие резкого снижения активности этих медиаторов воспаления, обеспечивающих один из механизмов фагоцитарной реакции.

ДИСБАЛАНС IL-1 ß ИIL-4 КАК ФАКТОР ПАТОГЕНЕЗА ДИАБЕТИЧЕСКОЙ РЕТИНОПАТИИ И ВОЗМОЖНОСТИ ЕГО ИММУНОКОРРЕКЦИИ

СлеповаО.С.. Новикова-Билак Т. А.

Московский НИИ глазных болезней имТельмгольца, 5-ая ГКБ, г.Су мы, Украина

Известно, что цитокиновый дисбаланс является важным патогенетическим звеном диабета 1 типа (ИЗСД). Исследования, проведенные нами ранее, показали, что развитие одного из наиболее тяжелых осложнений ИЗСД -диабетической ретинопатии (ДР) ассоциируется с многофакторными нарушениями в сети цитокинов, включая TNF-a, ТФР-pi, IL-6, IL-6rP, IL-8, IFN-y и IFN-a. Определены маркеры неблагоприятного прогноза: системная гиперсекреция TNF-a и ТФР-pi, местная TNF- a и IFN-y. Оставалось неясным, вносят ли вклад в развитие ДР IL-1 и его антагонист IL-4, хотя ключевая роль IL-1 в патогенезе собственно ИЗСД, по данным литературы, доказана клинически и экспериментально. Изучение этого вопроса и явилось основной задачей данной работы. IL-1P и IL-4 исследовали в ИФА в сыворотке крови (СК) 69 больных ИЗСД. При первичном обследовании у 13 из них клинически явных изменений на глазном дне не было; у 40 диагностирована непролиферативная ДР(ДР1),у9 - пре-пролиферативная (ДР2), у 7 - пролиферативная (ДРЗ). 25 человек (6- без ДР; 9 - с ДР1; 10 - с ДР2-ДРЗ) наблюдались в динамике (от 6 мес. до 2-х лет); манифестация ДР выявлена у 4 чел., усугубление изменений в сетчатке -у 6 чел. Контроль - 20 доноров;из них у 2 чел. обнаружен IL-4; IL-ip-отсутствовал.

Результаты. Оба цитокина обнаруживались во всех исследованных группах больных и были тесно взаимосвязаны (высокая степень корреляции: г=0,638; р=0,005). На начальных стадиях заболевания частота выявления

Н.-1Р и 1Ь-4 была примерно одинаковой: у пациентов без ДР - 54% и 57%, при ДР1 - 60% и 68% соответственно. Максимальные уровни обоих цитокинов отмечалась в период, предшествовавший манифестации ДР (850± 100 пкг/мл - 1Ь1р и 380±170 пкг/мл - 1Ь-4). При ДР1, ДР2, ДРЗ уровни 1Ь-1Р несколько снижались, но оставались довольно высокими и в целом сопоставимыми (средн. 500±200 пкг/мл); частота его обнаружения по мере прогрессирования ДР возрастала, достигая на стадии ДРЗ 85% (р<0,05). Продукция 1Ь-4, напротив, значительно ослабевала, что проявилось снижением как частоты обнаружения, так и уровня цитокина, особенно на препроли-феративной стадии (30%,10-15 пкг/мл при ДР2; 57% и 150+70 пкг/мл при ДРЗ). Таким образом, ключевые стадии заболевания характеризовались разным характером сдвигов в балансе 1Ь-1Р - 1Ь-4. Период, предшествовавший манифестации ДР, ассоциировался с системной гиперпродукцией как 1Ь-1р, так и 1Ь-4, а переходу в пролиферативную стадию предшествовало выраженное ослабление продукции 1Ъ-4 при сохранении высоких уровней 1Ь-1р. В целом это указывало на патогенетическую роль И-1Р, участие которого в развитии ДР, по-видимому, обусловлено способностью цитокина проникать через ге-маторетинальный барьер и индуцировать запуск местных иммунопатологических реакций. Это подтверждалось и результатами мониторинга: при выявлении 1Ь-1Р в СК манифестация или прогрессирование ДР наблюдались в 15 из 15 случаев, а при его отсутствии у 1 из 5 чел. Роль 1Ь-4 представляется неоднозначной, что, вероятно, обусловлено его взаимодействием с 1Ь-1Р (известно, что 1Ь-4 ослабляет секрецию 1Ь-1, а 1Ь-1 способен стимулировать выработку 1Ь-4). Явно неблагоприятным фактором явился дефицит 1Ь-4 (<20 пкг/мл), способствовавший, надо полагать, гиперсекреции 1Ь-1 р. Как показали наблюдения в динамике, в таких случаях усугубление патологического процесса в сетчатке отмечалось у 12 из 15 больных. Однако, и гиперпродукция 1Ь-4 (более 700 пкг/ мл), как правило, сочетавшаяся с гиперсекрецией 1Ь-1Р (3 случая), также не позволяла предотвратить развитие ДР. Характерно, что при умеренном содержании И-4 в СК (50-250 пкг/мл) прогрессирование ДР наблюдалось заметно реже (3 из 7 случаев).

Показано, что раннее лечение с применением на фоне базисной терапии препаратов Имунофан и/или Флогэн-зим способствует подавлению продукции 1Ь-1Р (а также его синергиста ТЫР-а) и профилактике прогрессирования ДР (90% положительных результатов при сроке наблюдения 6-12 мес.). При использовании только традиционной терапии, даже при компенсации углеводного обмена, значительно ослабить продукцию 1Ь-1Р (и ТКР-а) не удавалось; стабилизация процесса на глазном дне достигалась значительно реже (55%; р<0,05).

Вывод. Полученные данные свидетельствуют о том, ЧТО 1Ь-1Р является одним из ключевых цитокинов, участвующих в патогенезе ДР. Неблагоприятное действие 1Ь-1Р снижается под влиянием его антагониста 1Ь-4; однако в ряде случаев может наблюдаться синергичное усиление продукции обоих цитокинов, что также является патогенетически неблагоприятным фактором. Устранению гиперпродукции 1Ь-1Р способствует применение иммунокорригирующих средств.

ПОЛИМОРФИЗМ ПРОМОТОРНЫХ РЕГИОНОВ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ IL2И /МУ ПАЦИЕНТОВ С ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С

Смольникова М.В.. Гармс А.И., Коненков В.И.

ГУ НИ Институт клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

Эффективность противовирусного иммунитета определяется в первую очередь активностью клеточного звена иммунитета, которое регулируется клетками Thl через продукцию таких цитокинов, как IL-2 и INF-y. В то же время, роль противовирусных антител, синтез которых контролируется Th2 клетками через уровень продукции IL-4, IL-10 и других, также несомненно важна. Динамика течения вирусного гепатита С характеризуется фазными изменениями интенсивности продукции цитокинов, продуцируемых клетками как Thl, так и Th2 типов. Наряду с этим известно, что аллельный полиморфизм в промотор-ных регионах генов цитокинов оказывает существенное влияние на базовый уровень продукции соответствующего интерлейкина посредством изменения уровня транскрипции и экспрессии белкового продукта.

Целью данного исследования явилось изучение характера распределения аллельных вариантов генов IL2 и IL4, в участках G-330T и С-590Т соответственно, у больных острым гепатитом С. Больные и относительно здоровые лица, исследовавшиеся в качестве контроля, были европеоидного происхождения. В работе был использован метод рестриктного анализа продуктов амплификации (PCR-RLFP). ПЦР проводилась на ДНК, выделенной из периферической крови методом высаливания с применением протеиназы К. Структуры праймеров, температурные режимы и эндонуклеазы рестрикции опубликованы в наших предыдущих работах.

Полученные нами результаты указывают на определенные различия в распределении частот аллельных вариантов генов IL2 и IL4 между больными HCV и здоровыми лицами. Наблюдается некоторое увеличение частоты встречаемости гомозиготного варианта Т/Т гена IL2 в участке -330 у больных HCV (54,8%) по сравнению со здоровыми лицами (38,7%), а также частоты аллельного варианта Т-590 у инфицированных лиц. Кроме этого, HCV-инфицированные лица характеризуются некоторым повышением частоты аллельного варианта Т полиморфизма -590 гена IL4 по сравнению с его частотой среди представителей контрольной группы. Из предшествующих данных известно, что аллельный вариант Т-590 гена IL4 ассоциирован с повышенной продукцией этого цитокина.

В настоящее время проведено большое количество работ по изучению уровня продукции про- и противовоспалительных цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови инфицированных вирусным гепатитом С лиц, а также их уровня в сыворотке крови. Указывается на повышение способности мононуклеаров больных хроническим гепатитом С продуцировать цитокины Th2 типа, в то время как в острую фазу вирусного гепатита отмечается повышенная продукция цитокинов Thl типа.

Вместе с тем становится очевидным, что характер течения инфекционного процесса при попадании HCV в организм человека во многом определяется исходным базовым уровнем продукции ряда цитокинов, играющих ключевую роль в противовирусном иммунитете. Индивидуальный геном человека определяет конституционально низкий/ высокий уровень спонтанной и индуцированной вирус-

ными антигенами продукции различных цитокинов, что и определяет в конечном итоге характер и исход течения вирусной инфекции. Разнообразие этих исходов колеблется в широком диапазоне от многолетнего латентного вирусо-носительства до быстрого развития летальных исходов на фоне прогрессирующих поражений печени.

Эти и другие результаты позволяют включить гены интерлейкинов в уже достаточно широкий перечень генов, контролирующих иммунный ответ на антигеннеспецифи-ческом уровне.

ЦИТОКИНЫ КАК ПРОГНОСТИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ РАЗВИТИЯ ИНФЕКЦИОННО-ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССАУ НОВОРОЖДЕННЫХ

Степаненко С. Ф.. Маянская И. В., Толкачева Н.ИАшкинази В. И.

Нижегородский НИИ детской гастроэнтерологии Минздрава России, Нижний Новгород

Внутриутробные инфекции занимают ведущее место в перинатологии и педиатриии, являются одной из наиболее частых причин заболеваемости и смертности новорожденных. Одновременно с этим, данная патология относится к числу дискуссионных проблем вследствие неспеци-фичности проявлений клинической картины и своеобразия течения.

Известно, что цитокины Т-хелперов 2 типа способствуют нормальному течению беременности. В то же время, цитокины Т-хелперов 1 типа могут оказывать прямое эмб-риотоксическое действие или повреждать плацентарный трофобласт (1Ь-1р, ТЫР-а, 1РМ-у). Повышение их уровня может служить прогностическим критерием исхода гестации и свидетельствовать о развитии инфекционно-воспа-лительного процесса.

Цель исследования - разработать прогностические критерии состояния новорожденного ребенка по уровню цитокинов матери.

Проведено клинико-иммунологическое обследование группы «мать-новорожденный» с отягощенным акушерским анамнезом (инфекционно-воспалительные заболевания мочеполовой системы) - 28 пар (1 группа ). Контрольную группу (2) составляли 10 пар, в которых беременность женщин протекала без патологии. Проанализирован гинекологический и соматический анамнез матери в плане прогнозирования развития инфекционной патологии у ребенка.

Изучено содержание 1Ь-1Р, "ШР-сх, 1Ь-4, №N-7 в сыворотке и слюне методом ИФА с помощью тест-систем «Протеиновый контур», г. Санкт-Петербург. Обработку результатов проводили с помощью общепринятых методов статистики.

Установлено значительное повышение уровней цитокинов 1Ь-1р, ТКР-а, 1Ь-4 в сыворотке и слюне как у матери, так и у новорожденного ( в пуповинной крови ) 1 группы по сравнению с показателями цитокинов во 2 группе (р<0,01 ). Выявлена высокая степень корреляции содержания цитокинов в сыворотке и слюне у женщин 1 группы (г=+0,9). Значительное повышение 1Ь-1Р ( более, чем в 10 раз) отмечалось в сыворотке и слюне у детей 1- группы, что может служить прогностическим критерием развития инфекционно-воспалительного процесса у новорожденных. Высокий уровень цитокинов у детей 1 группы сохранялся в слюне и на 5-е сутки, в то время, как дети 2-й группы имели «нормальные» значения (р<0,0,1). Степень

тяжести клинических проявлений инфекционно-воспалительного процесса у детей ( ринит, бленнорея, омфалит ) соответствовала высокому уровню значений цитокинов в сыворотке и слюне у новорожденных и их матерей.

Таким образом, показатели цитокинов в слюне матерей можно использовать в качестве прогностического критерия развития инфекционно-воспалительного процесса у новорожденных.

ОСОБЕННОСТИ ГАММА-ФУНКЦИИ СИСТЕМЫ ИНТЕРФЕРОНА ПРИ СМЕШАННОЙ УРОГЕНИТАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ У БЕРЕМЕННЫХ

ТарееваТ.Г.. Малиновская В.В. Никольская И.Г., Паршина О.В.

Московский областной НИИ акушерства и гинекологии, Москва, Россия;

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи, Москва, Россия

Исследования в области иммунологии гестационного периода позволяют выявить новые закономерности развития акушерских и перинатальных осложнений и сформулировать патогенетически обоснованные схемы терапии.

Смешанная урогенитальная инфекция (УГИ) сопряжена с рядом нарушений иммунного гомеостаза, в том числе с нарушениями интерфероногенеза, выраженность которых четко коррелирует с частотой и тяжестью осложнений беременности.

Цель исследования: повышение эффективности терапии при смешанной УГИ.

Задачи:

- изучение интерферонового статуса (ИФС) с определением продукции аутоантител (аАТ) к у-интерферону (1ЕМ) и его рецепторам;

- определение сопряженности уровня аАТ к у-интерферону и его рецепторам и активности инфекционного процесса;

- уточнение схем иммунокоррекции с учетом выявленной патологии интерфероногенеза.

Материалы и методы: под нашим наблюдением находились 84 беременных со смешанной УГИ (генитальный герпес, хламидиоз, микоплазмоз, бактериальный вагиноз, влагалищный кандидоз, воспалительные заболевания мочевыводящих путей), к которым наряду с клиническими и микробиологическими методами исследования определяли характеристики ИФС: сывороточный интерферон в цельной крови, спонтанную, вирус- или митоген-инду-цированную продукцию ос- и у-1ПЧ лейкоцитами, уровень этих 1РЫ в сыворотке крови, а также продукцию аАТ к у-и его рецепторам иммуноферментным методом.

Результаты: длительная персистенция УГИ без выраженных клинических проявлений (28,9%) сопровождалась удовлетворительной или незначительно сниженной а-фун-кцией системы ПТЧ (а-1Ш=64 МЕ/мл, медиана), умеренным снижением у-функции (у-1Ш=16МЕ/мл) при единичных наблюдениях с повышением его содержания в сыворотке крови; аАТ к у-1Ш и его рецепторам не выявлялись. Активация инфекционного процесса за счет вирусного компонента УГИ (48,9%) сопровождалась угнетением интерфероногенеза с преимущественным угнетением у-функции (митоген-индуцированная реакция лейкоцитов 4 Ме/мл) и одновременным повышением концентрации у-1Ш в сыворотке (26,2 пкг/мл). Параллельно отмечено нарастание уровня аутоантител к у-интерферону и его рецепторам (38 усл.ед

и 32 усл.ед. соответственно). Длительная персистенция указанных антител (4-6 недель и более) наблюдалась у беременных с аутоиммунными процессами (33,3%) и не была четко связана с активностью У ГИ. При бактериальной инфекции (гестационный пиелонефрит, обострение хронического пиелонефрита -21,4%), у-интерферон в сыворотке не определялся, а продукция аутоантител к y-IFN и его рецепторам не превышала 19 усл.ед. Указанные изменения явились основанием для назначения дополнительного курса виферона-2 в режиме противомикробной терапии (30 свечей на курс), а длительная персистенция аутоантител к у-IFN и его рецепторам, определяющим интерферонорезис-тентность, явилась показанием к проведению плазмафере-за с последующей виферонотерапией.

Заключение: определение параметров ИФС в сочетании с оценкой продукции аАТ к y-IFN позволяет оптимизировать иммунокорригирующую терапию и повысить ее эффективность.

РОЛЬ ЦИТОКИНОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Чердыниева Н.В.. Стахеева М.Н., Бабышкина H.H., Юдин Н.С.*,Белявская В.А.**, Слонимская Е.М., ИсаеваТ.М., СевостьяноваН.В., Уразова Л.Н., Ромащенко А.Г.*, Воевода М.И.***

НИИ онкологии Томского научного центра СО РАМН, Томск;

* Институт цитологии и генетики СО РАМН,

* *ГНЦ ВБ “Вектор”,

* * * Институт терапии СО РАМН, Новосибирск

Введение. В последние годы получены убедительные данные, свидетельствующие об участии различных цито-кинов в регуляции прогрессии рака молочной железы (РМЖ). Механизмы регуляторной активности цитокинов включают в себя: прямое влияние на опухолевые клетки (пролиферация, транскрипция р53); регуляцию неоангио-генеза в опухоли; регуляцию миграции иммунокомпетен-тных клеток в опухолевый очаг; модулирующее действие на иммунокомпетентные клетки с обеспечением их проти-во- или проопухолевой активности. (J.Liu et al, 1999, G.Luboshits et al, 1999, T.Ueno et al, 2000, E.Azenshtein et al, 2002 и др.). Показано двойственное влияние провоспа-лительных интерлейкинов и хемокинов на рост опухоли. С одной стороны, они регулируют активность противоопухолевых эффекторов (макрофаги, Thl типа), с другой

- стимулируют пролиферацию опухолевых клеток и нео-ангиогенез, способствуя опухолевой прогрессии. В частности, показано, что СС хемокин RANTES продуцируется клетками рака молочной железы и что на них экспрессируется его специфический рецептор CCR5; выявлена прямая корреляция высокого уровня RANTES в крови с плохим прогнозом у больных РМЖ. Известно также, что экспрессия CCR5 на опухоль-инфильтрирующих лимфоцитах свидетельствует о возможности их дифференцировки в Thl и развития специфического противоопухолевого ответа (E.Azenshtein et al, 2000, S.Qinetal,1998,J.Siveke, 1998).

Цель. В работе проведено исследование продукции иммунорегуляторных цитокинов и полиморфизма гена CCR5 у больных раком молочной железы и проанализирована взаимосвязь этих показателей с характером течения заболевания и прогнозом.

Материалы и методы. Обследовано 140 больных раком молочной железы, получавших лечение в клинике НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН. Оценивали субпопу-ляционный состав лимфоцитов, их пролиферативную и мембранотоксическую активность, способность моно-нуклеаров крови к продукции IL-1, IL-2, IL-4, TNF-a. Также определяли частоту мутантного аллеля (CCR5del32) гена хемокинового рецептора CCR5 (Юдин и др., 1998). Анализ полученных результатов проводили с учетом стандартных критериев прогноза для больных РМЖ (стадия заболевания, регионарное и отдаленное метастазирование, рецидивы, возраст, состояние менструальной функции и др.).

Результаты. Согласно полученным данным, отмечается существенная гетерогенность продукции IL-1 и TNF-a мононуклеарами крови больных РМЖ, при этом более, чем у 50% обследованных выявлен высокий уровень спонтанной секреции этих цитокинов. Уровень продукции TNF-a и IL-4 достоверно отличался в группах больных с наличием регионарного метастазирова-ния и без него (р<0,05). У больных с местнораспространенным процессом, находящихся в менопаузе, обнаружено снижение пролиферативной активности мононук-леаров в ответ на митоген ФГА (р=0,08). Не найдено различий в продукции IL-1 и TNF-a у больных со стабилизацией либо с прогрессированием (отдаленные метастазы, рецидивы) злокачественного процесса. Однако у больных с неблагоприятным прогнозом выявлена более высокая спонтанная продукция IL-2. Оценка частоты встречаемости мутантного аллеля CCR5del32 показала существенно более высокий его уровень у больных РМЖ по сравнению с популяционной нормой (-г2 =4,93; р=0,0263). Проведен анализ взаимосвязи факторов прогноза, исхода заболевания и показателей иммунного статуса (включая продукцию цитокинов) у больных в зависимости от наличия редкого аллеля гена CCR5.

Заключение. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности дальнейших исследований с учетом взаимоотношений опухолевых и иммунокомпетентных клеток и регуляторного влияния цитокинов на уровне опухолевого микроокружения, что позволит оценить возможность использования изучаемых показателей в качестве критериев прогноза заболевания.

Работа поддержана грантом Благотворительного Фонда содействия отечественной медицине, 2002 г.

ДЕЙСТВИЕ БЕГАЛ ЕЙКИНА НА ИММУННЫЙ СТАТУС БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЖЕНСКИХ ГЕНИТАЛИЙ

НТалыгинК.В.. Заболотных Н.В., Симбирцев A.C.

ГУ Санкт-Петербургский НИИ фтизиопульмонологии М3 РФ

Туберкулез женских гениталий занимает одно из ведущих мест среди внелегочных локализаций инфекции, так как поражает женщин репродуктивного возраста и приводит к стойкому бесплодию. Разработка новых способов лечения, способствующих восстановлению функции женских половых органов, имеет большую актуальность, поскольку существующие методы не способны предотвратить развитие спаечного процесса в органах малого таза. Длительное торпидное течение туберкулеза женских половых органов, обусловленное снижением функциональной активности иммунной системы, требует включения в

комплексное лечение иммунокорригирующих средств, нормализующих иммунный ответ и процессы избыточного фиброзирования.

Цель исследования: Оценить эффективность применения беталейкина (рекомбинантный IL-1) в комплексной терапии туберкулеза женских гениталий.

Материалы и методы: Обследовано 7 больных активным туберкулезом женских половых органов, в комплексную терапию которых был включен беталейкин в дозе 5 нг/кг внутривенно капельно 5 дней. Иммунный статус оценивался определением уровней продукции IL-1и IL-8 мононуклеарами крови иммуноферментным методом; продукции IL-2 - биологическим методом с использованием IL-2 зависимой линии CTLL-2; хеми-люминесценции - на приборе VIKTOR 2 до и после иммунокоррекции.

Результаты: После проведения курса иммунокоррекции беталейкином у больных через 2 недели после курса препарата отмечено повышение индуцированной продукции IL-2 в 1,8 раза с 3,2±0,8ед/мл до 6,1±2,3ед/мл, усиление спонтанной и индуцированной продукции IL-8. Под влиянием беталейкина наблюдалась также тенденция к нормализации секреции IL-1 ,что проявилось снижением в 1,5 раза с 25,8±9,75 пкг/мл до 17,8±11,3 пкг/мл спонтанной продукции IL-1. Спонтанная хемилюминесценция мо-нонуклеаров крови, значимо повышенная до иммунокоррекции (7,5±0,67 ед. экст. при норме 4,77+0,21 ед. экст., Р<0,001), под влиянием беталейкина достоверно (Р <0,005) снизилась до 5,5±0,16 ед. экст.

Клинически эффект беталейкина проявлялся уменьшением симптомов интоксикации, снижением болей, нормализацией менструального цикла. У одной пациентки на фоне иммунокоррекции отмечена эпителизация длительно существовавшей эрозии шейки матки, а через месяц после терапии с беталейкином - восстановление проходимости маточных труб.

Заключение: Таким образом, беталейкин при включении в комплексную терапию туберкулеза женских гениталий повышает ее эффективность. Выявление под влиянием препарата стимуляции активности Th-1 лимфоцитов, нормализации продукции IL-1 и спонтанной хемилюми-несценции мононуклеарами крови позволяет предположить, что в основе лечебного эффекта беталейкина лежит его иммунокорригирующее действие.

ЦИТОКИНОВЫЙ СТАТУС У БОЛЬНЫХ ПСОРИАТИЧЕСКИМ АРТРИТОМ И ВОЗМОЖНЫЕ ПУТИ ЕГО КОРРЕКЦИИ

ШебашоваН.В.. Никулин Н.К., Комарова В.Д.

Нижегородский научно-исследовательский кожно-венерологический институт, Нижний Новгород, Россия

В настоящее время определяющее значение в регуляции острого и хронического воспаления при ревматических заболеваниях, а также в ремоделировании костной тка-ни отводится ряду провоспалительных (IL-1, IL-6, TNF-a) и антивоспалительных (IL-4 и др.) цитокинов. Высказывается мнение, что в основе хронизации воспаления и прогрессирования остеопоретических процессов в костной ткани лежит дисбаланс между продукцией данных групп цитокинов.

Целью настоящего исследования явилось изучение некоторых цитокинов в сыворотке крови и динамики их

показателей в процессе терапии остеопротекторами у больных псориатическим артритом (ПА).

Материалы и методы исследования. Для определения взаимосвязи иммунных нарушений и костной деструкции у больных (ПА) изучено содержание основных про- и антивоспалительных цитокинов у 72 пациентов. Верификация диагноза ПА осуществлялась по критериям J.M.H.Moll et V.Wright (1973). Степень воспалительной активности суставного процесса у больных ПА оценивалась по Р.Ф. Федоровской (1967) и М.Г. Астапенко (1979). Концентрацию интерлейкинов (IL-ip, IL-6 и IL-4) и фактора некроза опухоли (TNF-a) определяли с помощью тест- систем (РгоСоп IL-ip, РгоСоп TNF-°c, РгоСоп IL-6, РгоСоп IL-4) на основе твердофазного иммуноферментного метода (производство «Протеиновый контур» г. Санкт-Петербург).

Результаты. Выявлена гиперпродукция всех исследованных цитокинов. Наблюдалось наибольшее увеличение содержания в сыворотке крови у больных ПА IL-6 (16,5±1,9 нг/мл) и TNF-a (92,1±6,8 нг/мл - соответственно в 2,2 и в 2 раза), менее значительное - IL-4 (76,4±6,1 нг/мл - в 1,6 раза) и IL-ip (84,6±6,4 нг/мл -в

1,4 раза) по сравнению с показателями группы здоровых лиц (соответственно: IL-6 -7,6±1,5 пкг/мл; TNF-a -47,0±5,3 пкг/мл; IL-4 -47,0±10,4 пкг/мл; IL-ip -60,0±5,8 пкг/мл). Показатели цитокинового статуса достоверно коррелировали со степенью активности ПА: максимально высокое содержание IL-6 и TNF-a выявлено при выраженной и умеренной воспалительной активности суставного процесса (соответственно 19,6+2,8 нг/мл и 104,8+11,6 нг/мл; р<0,001), обнаружена гиперпродукция IL-ip у всех больных ПА, причем самое высокое содержание цитокина наблюдалось при минимальной степени активности процесса (99,6± 10,8 нг/мл). Нами выявлено увеличение содержания IL-4 при умеренной и высокой степенях воспалительной активности ПА, при минимальной активности содержание цитокина не отличалось от нормальных значений.

В комплексной терапии ПА были использованы два остеопротекторных препарата: остеогенон - оссеин-гид-роксиапатитный комплекс (45 пациентов) и миакаль-цик - синтетический кальцитонин лосося (17 больных). Методика назначения остеогенона заключалась в приеме препарата по 800 мг 2 раза в день после еды. Курс терапии составлял 1-3 месяца. Миакальцик использовался в виде интраназального спрея в дозе 200 ЕД ежедневно в течение месяца или по 100 ЕД внутримышечно через день, 15-20 инъекций на курс. Для предотвращения гипокальциемического эффекта дополнительно к миакальцику больные получали 4 г глюконата кальция и 400 ЕД витамина Д ежедневно или комбинированный препарат Кальций-ДЗ. Соблюдалась диета, обогащенная кальцием.

В результате терапии миакальциком произошла нормализация содержания IL-ip у всех больных ПА, IL-6- у 76,5%, а TNF-a- у 52,9% пациентов. Использование остеогенона привело к нормализации содержания IL-ip у 76,7% больных, TNF-a - у 60%.

Выводы. Обнаруженные изменения в системе цитокинов и выявленная их связь с активностью суставного процесса, может свидетельствовать об их патогенетической роли в развитии ПА. Нормализация уровня и устранение дисбаланса в содержании изученных цитокинов косвенным образом подтверждают выраженный противовоспалительный и антиостеопоретический эффекты примененных остеопротекторов у больных ПА.

СРАВНИТЕЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ СОДЕРЖАНИЯ IL-4,

INFy И TNFay ДЕТЕЙ С АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ И ОСТРОЙ ПНЕВМОНИЕЙ НА ФОНЕ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ

ШелудькоЯ.С.. Маркелова Е.В., ЧикаловецИ.В.*, Касснер JI.H., СуровенкоТ.Н.

ВГМУ, *ТИБОХДВОРАН, Владивосток, Россия

Известно, что IL-4 - ключевой цитокин атопического процесса, а INFy и TNFa - два наиболее известных про-воспалительных цитокина, активирующих макроцитарно-макрофагальное звено клеточного иммунитета.

Целью данного исследования являлась сравнительная характеристика содержания цитокинов: IL-4, INFy и TNFa в сыворотке крови у детей с атопической бронхиальной астмой (БА), где триггерами обострений являлись вирусные и бактериальные инфекции и острой внебольничной пневмонией на фоне бронхиальной астмы.

Обследована группа детей в количестве 22 человек в возрасте от 4 до 14 лет. Из них 16 детей с легкой и средней степенью выраженности воспалительного процесса дыхательного тракта на фоне атопии, подтвержденной позитивными кожными тестами и 6 детей с острой внебольничной пневмонией в сочетании с атопической бронхиальной астмой. Уровень содержания IL-4, INFy и TNFa в сыворотке крови пациентов определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с применением реактивов фирмы « R & D diagnostics Inc.» (США).

В результате исследований установлено, что содержание IL-4 в сыворотке крови при БА 41,04+0,56 pg/ml значительно превышает его содержание при присоединении пневмонии 11,12±0,19 pg/ml. Уровень INFy у детей с БА и сопутствующей пневмонией составляет 2,64±0,64 pg/ml, что в 2 раза ниже, чем у детей-астматиков (4,01 ±0,32 pg/ ml). Содержание TNFa в обоих случаях практически одинаково (16,83±0,27 pg/ml. на фоне пневмонии и 14,87+0,19 pg/ml. при Б А).

Таким образом, выявлено, что при присоединении к атопическому процессу острого воспалительного процесса инфекционной природы уменьшается гиперпродукция одного из ведущих цитокинов, индуцирующих атопическое воспаление - IL-4. Зарегистрировано усугубление дефицита INFy при пневмонии на фоне бронхиальной астмы.

СОСТОЯНИЕ КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА И УРОВЕНЬ ОППОЗИЦИОННЫХ ЦИТОКИНОВ У ПАЦИЕНТОВ С УРОГЕНИТАЛЬНЫМ УРЕАПЛАЗМОЗОМ

Юыковская Я.А.. Юцковская И. А., Курлеева Т.Ю., Маркелова Е.В.

Владивостокский государственный медицинский университет, г.Владивосток, Россия.

Целью нашего исследования было изучение состояния иммунитета и некоторых показателей местной и общей продукции цитокинов у пациентов с моноуреаплаз-менной урогенитальной инфекцией (40 человек). Были обследованы пациенты - мужчины в возрасте 25-35 лет с моноуреаплазменной инфекцией. Диагностика уреаплаз-менной инфекции проводилась культуральным методом, ИФА и ПЦР. Контролем служили 30 практически здоровых мужчин. Уровень лимфоцитов и их субпопуляций определяли иммунофлюоресцентным методом с использованием специфических моноклональных антител (Мед-БиоСпектр Лицензия ЦЛМД №64636459). Определение

TNFa, IL-la, IL-10 и IFNy проводили с использованием твердофазного иммуноферментного анализа, реактивы (R&D diagnostic inc, США).

В результате исследования установлено, что у пациентов с моноурогенитальной уреаплазменной инфекцией регистрируется дисбаланс показателей клеточного и ци-токинового статусов. На фоне снижения уровня Т-лимфо-цитов зарегистрировано существенное повышение уровня CD16 и увеличение числа клеток с рецепторами к IL-2 (CD25). Установлено резкое повышение IL-la в смывах со слизистой уретры (172,85±9,6 пг/мл) при нормальном содержании этого цитокина в сыворотке крови, что свидетельствует о выраженности местного воспаления. Кроме того, установлен дефицит IFNy в сыворотке крови (0,18+0,05 пг/мл) и повышение сывороточного уровня IL-10 (29,3±3,2 пг/мл), что привело к резкому нарушению соотношения оппозиционных цитокинов. Уровень TNFy в сыворотке крови также был ниже, чем у здоровых людей, тогда как в смывах его количество оказалось повышенным (8,9±1,6 пг/мл).

Таким образом, при моноуреаплазменной инфекции у мужчин регистрируется снижение CD3 и CD4 клеток, дисбаланс соотношения IFNy/IL-10 и преимущественная активация Th2 лимфоцитов. Тогда как повышение местного уровня IL-la и TNFa свидетельствует о выраженности воспалительного процесса.

АЛЛЕЛЬНЫЕ ВАРИАНТЫ ГЕНОВ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ TNF И LTA КАК ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ И БР0НХ0ЭКТА30В

Янбаева Д.Г.. Корытина Г.Ф., Байнак О.В., Викторова Т. В.

Институт биохимии и генетики Уфимского Научного Центра РАН

Введение. Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) - тяжелое заболевание дыхательной системы, которое является одним из лидирующих по причинам смертности и инвалидности. Для ХОБЛ характерно развитие хронического обструктивного бронхита и эмфиземы легких с необратимым ограничением воздушного потока. В России (по данным исследований института пульмонологии) количество людей с признаками ХОБЛ превышает 8 миллионов. ХОБЛ является болезнью, которая в общей популяции встречается чаще, чем бронхиальная астма. Бронхоэктатическая болень легких характеризуется хроническим нагноительным процессом и необратимой деформацией и расширением бронхов. Особая роль в патогенезе ХОБЛ принадлежит хроническому воспалению, которое является главной причиной всех функциональных и морфологических проявлений болезни. У больных ХОБЛ в мокроте и сыворотке отмечаются высокие концентрации TNF и IL-8. TNF (tumor necrosis factor ) и LTA (lymphotoxin) являются главными провоспалительными цитокинами, продуцируемый макрофагами и и лимфоцитами соответственно. Гены TNF и LTA сцеплены и располагаются на хромосоме 6р21.3 в области главного комплекса гистосовместимости III класса и относятся к суперсемейству TNF. Различные полиморфные варианты генов влияют на уровень экспрессии цитокинов in vitro.

Целью исследования явилось изучение распределения аллельных вариантов генов TNF и LTA у больных ХОБЛ

и БЭБ, а также анализ возможных ассоциаций определенных генотипов цитокинов с вариантами течения болезни.

Материалы и методы: Молекулярно-генетический анализ полиморфных вариантов генов ТОТ и LTA проведен у 177 больных ХОБЛ и 22 больных бронхоэктатической болезнью, находящихся на стационарном лечении в БСМП, ГКБ № 13 и № 21 г.Уфы и у 158 индивида из контрольной группы (доноры). ДНК выделяли из лейкоцитов периферической крови стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции. Изучение полиморфизма генов проводилось методом анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ).

Результаты. При анализе полиморфизма -308G—>А гена TNF различий между группой больных и контрольной не обнаружено независимо от стадии заболевания. Молекулярно-генетический анализ локуса +252A-»G гена LTA выявил, что в группе больных ХОБЛ с тяжелым течением (III стадия по классификации GOLD) достоверно повышена частота носителей мутантного генотипа GG по сравнению с контролем (х2=6,01, р=0,015) и по сравнению со всеми остальными группами. Интресно отметить, что в группе больных с более легким течением (стадии IIA и IIB) существенно повышена частота носителей гетерозиготного генотипа AG (52,2% против 41,4% в контроле), тогда как в группе больных III стадией она понижается до 32,7%.Возможно, такая корреляция тяжести течения с наличием мутантного аллеля в генотипе можно объяснить

проявлением эффекта «дозы гена» в ряду генотипов АА—> СА—> СС.

Кроме того, мы проанализировали различные комбинации генотипов в группе больных и в группе контроля, что позволило выделить комбинации, которая является маркером для ХОБЛ. Среди больных ХОБЛ всех стадий (1-Ш) достоверно выше доля индивидов с сочетанием нормального генотипа вС в гене ТОТ и гетерозиготного генотипа А в в гене ЬТА (18,4% в контроле и 28,2% у больных, х2=4,01, р=0,045). У лиц с данной комбинацией риск развития более тяжелой формы ХОБЛ при прочих равных условиях повышен почти вдвое (011=1,75, С1 1,01-3,04). У больных бронхоэктатической болезнью с тяжелым течением (п=9) наблюдается единственная комбинация генотипов в генах суперсемейства ТОТ: вС-АА (эта же комбинация чаще других встречается у здоровых), вероятно, свидетельствует о том, что в патогенезе этого заболевания задействованы механизмы, отличные от вышеописанных для ХОБЛ. Однако, в связи с малым объемом выборки, требуются дополнительные исследования.

Заключение. Результаты нашего исследования показывают перспективность генотипирования больных с тяжелыми прогрессирующими заболеваниями дыхательной системы для возможности прогнозирования тяжести течения и выбора адекватных методов противовоспалительной терапии.