CC BY
17
10. Olliver J., Hardie L., Deocter S. et al. DNA levels are raised in Barrett s esophageal mucosa relative to the squamous epithelium of the esophagus // Biomfrkers. - 2003. - Vol. 8. № 6. - P. 509-521.
11. Pearse A. Histochemistry. Teoretical and applied. - London, 1968. - 561 p.
12. Riddel R. The genesis of Barrett s esophagus: has histologic transition from gastroesophageal reflux desease - damaged epithelium
to columnar metaplasia ever been seen in humans // Arch. Pathol. Lab. Med. - 2005. - Vol. 125 (2). - P. 164-169.
13. Vallbohmer D., Peters J., Oh D. et al. Survivin, a potential biomarkes in the development of Barrett s adenocarcinoma. Surgery. -2005. - Vol. 138. № 4. - P. 701-706.
Поступила 19.05.2009
Г. М. МОГИЛЬНАЯ1, В. А. ПОРХАНОВ23, Н. А. ШКОЛЯР13
ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НЕИТРОФИЛЬНЫХ ЛЕИКОЦИТОВ КРОВИ В УСЛОВИЯХ ИСКУССТВЕННОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СЕВОРАНА
1Кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии Кубанского государственного медицинского университета, Россия, 350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4;
2кафедра онкологии с курсом торакальной хирургии ФПК и ППС Кубанского государственного медицинского университета, Россия, 350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4;
3краевая клиническая больница № 1 им. профессора С. В. Очаповского, Россия, 350086, г. Краснодар, ул. 1 Мая, 167. E-mail: nwe200477@mail.ru
Цитохимическое изучение динамики активности МП и содержания КБ у кардиохирургических больных в условиях искусственного кровообращения с применением ингаляционного препарата севорана показало, что в условиях его использования наблюдается прогрессивное снижение активности МП и содержания КБ в нейтрофильных гранулоцитах крови, при этом данное снижение достигает своего максимума через 15-30 минут после начала ИК.
Ключевые слова: миелопероксидаза, нейтрофильные гранулоциты, катионный белок, искусственное кровообращение.
G. M. MOGILNAYA1, V. A. PORKHANOV2, N. A. SHKOLYAR3
CYTOCHEMICAL CHARACTERISTICS OF NEUTROPHILIC LEUCOCYTES IN CONDITIONS OF CARDIOPULMONARY BYPASS USING SERANOVAN
Chair of Histology,Ccytology and Embryology of Kuban State Medical University, 4 Sedina Sir., Krasnodar, 350063, Russia;
2Chair of Oncology Thoracic Surgery of the Advanced Specialists Training and Retraining, Department of Kuban State Medical University, 4 Sedina Str., Krasnodar, 350063, Russia;
3Regional clinical hospital № 1 named after Professor S. V. Ochapovskiy, 1 Maya Str., Krasnodar, 350086, Russia
Cytochemical study of dynamics of myeloperoxidase potency and presence of cationic protein in the blood of cardiac surgery patients in conditions of cardiopulmonary bypass, using an inhalant medication seranovan, showed that the progressive depletion of myeloperoxidase potency and cationic protein presence of neutrophilic granular leukocytes is observed in condition of its use. In this case this depletion reachs its peak in 15-30 minutes after starting the cardiopulmonary bypass.
Key words: myeloperoxidase, neutrophilic granular leukocytes, cationic protein, cardiopulmonary bypass (CB).
Одним из достижений современной кардиохирургии ет каскад реакций, приводящих к дисфункции многих
является развитие экстракорпорального кровообраще- систем [9, 10]. У большинства пациентов функциональ-
ния. В литературе имеется достаточно большое коли- ные резервы достаточны для развития компенсатор-
чество работ, посвященных вопросу взаимодействия ных реакций после ИК, но у тяжело больных пациентов
крови с контуром ИК [8, 11, 13, 14]. При этом известно, может развиться воспалительный ответ, инициируе-
что наиболее уязвимым звеном после ИК являются мый активируемыми нейтрофилами. Выделяемые ими
форменные элементы крови, их повреждение запуска- протеолитические ферменты обладают огромным
повреждающим эффектом. Поскольку упомянутые ферменты находятся в составе первичных и вторичных гранул нейтрофильных гранулоцитов (НГ), можно предположить, что степень повреждающего действия этих клеток крови определяется степенью их дегрануляции. Несмотря на то что проблеме функционирования организма человека в условиях ИК посвящено значительное количество работ, вопрос о функциональном статусе нейтрофильных гранулоцитов периферической крови остаётся открытым [3, 4, 9, 12, 13]. В этом аспекте изучение цитохимических показателей нейтрофильных гранулоцитов, являющихся важнейшим компонентом неспецифической антимикробной системы организма, представляется весьма актуальным.
Материалы и методы
Материалом для исследования послужили мазки венозной крови, полученные у 116 кардиохирургических больных (возраст 54 ± 4 года) Центра грудной хирургии краевой клинической больницы № 1, оперированных по поводу маммарокоронарного и аутовенозного аор-токоронарного шунтирования в условиях искусственного кровообращения. Пациенты были разделены на две группы. В первой группе для вводного наркоза и поддержания общей анестезии через ИВЛ использовали препарат «севоран», этот препарат был включен и для поддержания общей анестезии во время искусственного кровообращения. Во второй группе пациентов для вводного наркоза и поддержания общей анестезии использовали фентанил и пропофол с обычной нормо-вентиляцией ИВЛ. Контрольная группа - условно здоровые люди, возраст 54±4 года.
Забор мазков крови проводился: за одни сутки до операции, через десять минут после премедикации, через десять минут после интубации, через пять минут
после введения гепарина, через 5, 15, 30 и 60 минут после начала ИК, на момент «стоп» ИК, через 5 минут после введения протамина, через 2-3 часа, а также на 1-е и на 5-е сутки послеоперационного периода.
Методика Я. Г. Эренпрейса, предложенная для выявления ядерных катионных белков - гистонов, была взята нами за основу [1, 2, 5]. Из методики был исключен пункт экстракции ДНК с помощью трихлоруксусной кислоты. Мазки крови фиксировали в растворе «ацетон - спирт» 15 минут. Окрашивали 0,1%-ным раствором амидочерного 10Б в боратном буфере при рН-8:2 в течение 45-50 мин. Промывали в дистиллированной воде в трех сменных водах по 1-3 мин. Высушивали и докрашивали ядра 0,5%-ным раствором нейтральным красным в течение 20-30 с. Промывали проточной водопроводной водой и высушивали. Катионный белок выявлялся в цитоплазме клеток в виде черно-синих гранул, ядра - красного цвета.
На миелопероксидазу мазки крови окрашивались по методу Ван-Дейну, цитируемому Pearse (1962) [1, 5, 6]. Оценку результатов проводили полуколичественным методом Astaldi и Verga (1957). Полученные результаты обрабатывали на ЭВМ с помощью программы Micro Stat фирмы «Borland Corparations» [7].
Результаты и их обсуждение
Анализ активности миелопероксидазы (МП) нейтро-фильных лейкоцитов крови у лиц контрольной группы показал, что ее значения колеблются от 1,16 до 1,99, составляя в среднем 1,6±0,04 усл. ед. Уровень содержания катионного белка у этих же лиц составил в среднем 1,89±0,09 усл. ед. (рис. 2).
У больных кардиологическими заболеваниями за сутки до операции активность МП лишь незначительно (на 3,5%) превышала уровень активности МП
МП
_в_БСл- С
Рис. 1. Динамика активности миелопероксидазы нейтрофильных гранулоцитов
кардиохирургических больных
Примечание: БС - группа без севорана,
С - 2-я группа пациентов в условиях применения севорана.
КБ
1,8 * 1,6
§ 1,4
8 1,2
ге
ё 1 с
га 0,8
Ег 0,6
I 0,4
©
СО 0,2 0
* ^ ^ > # # # # ч# # ч# #
^ д^ ^ ^ > /
Л^ к* ^
Сроки исследования
БС -о-С
Рис. 2. Динамика содержания катионного белка нейтрофильных гранулоцитов
кардиохирургических больных
Примечание: БС - группа без севорана;
С - 2-я группа пациентов в условиях применения севорана.
у лиц контрольной группы, но данное различие не было статистически значимо (Р>0,05). В то же время содержание катионного белка в среднем составило 1,56±0,08 усл. ед. и было на 18% меньше уровня значений, характерных для контрольной группы, и статистически значимым (Р<0,05) (рис. 2).
После премедикации показатель активности МП НГ составил 1,61±0,09 усл. ед. (Р>0,05), а содержание КБ НГ - 1,42±0,13 усл. ед. Это значение оказалось на 25% меньше уровня, характерного для здоровых людей, и данное различие статистически значимо (Р<0,001).
После интубации группа больных была разделена на две подгруппы. В первой группе активность МП составила 1,43±0,06 усл. ед., что на 10,5% ниже контрольного уровня. Во второй группе активность МП составила 1,64±0,1 усл. ед. и незначительно превышала уровень контрольной группы. Статистически значимым различием эти уровни не обладали. Для лиц первой группы содержание КБ составило 1,46±0,06 усл. ед., что на 22,75%, а во второй группе на 27% ниже уровня значений, характерных для лиц контрольной группы. Выявленные различия являются статистически значимы (Р<0,001 и Р<0,01 соответственно).
После введения гепарина (5 минут) в первой группе пациентов уровень МП еще более снизился и составил 1,37±0,06 усл. ед. Во второй группе активность МП (1,5±0,09 усл. ед.) оказалась на 10% меньше исходного. Содержание КБ снизилось на 25,4% в первой и на 23,3% во второй группах (Р<0,05) по отношению к контрольной группе (рис. 2).
Начало ИК (5 минут) сопровождается снижением активности МП, и для пациентов первой группы показатель ее активности составил 1,02±0,04 усл. ед., что на 36% ниже значений, характерных для контрольной группы. Во второй группе снижение активности МП НГ было менее выражено (1,23±0,07 усл. ед.), и по отно-
шению к контрольной группе это снижение составило 23%. При этом у пациентов, оперированных в отсутствие препарата «севоран», активность МП НГ в этот период была на 20,5% выше, чем у лиц, оперированных в условиях его использования (Р<0,05) (рис. 1). Уровень содержания КБ у лиц первой группы также снизился на 37%, и несколько меньшее (до 31%) снижение зарегистрировано у пациентов второй группы. Выявленные значения активности КБ двух групп были статистически значимы (Р<0,001 и Р<0,01). При этом у пациентов, оперированных в отсутствие препарата «севоран», содержание КБ НГ было на 9,5% выше, чем у лиц первой группы (Р>0,05) (рис. 2).
Пролонгирование времени ИК с 15 до 60 минут привело к снижению активности МП до 50%, и этот уровень активности сохранялся на протяжении всего периода ИК. Во второй группе это снижение составило 30% (Р<0,001) (рис. 1). Уровень содержания КБ также снизился на 50% в первой группе и на 32% - во второй, ниже контрольных значений (Р<0,001).
На момент «стоп» ИК уровень активности МП в первой группе пациентов начал постепенно нарастать и составил 0,94±0,02 усл. ед., но остался на 41% ниже уровня контроля. Во второй группе пациентов также был зарегистрирован рост активности МП НГ до уровня 1,31 ±0,11 усл. ед., но по отношению к группе сравнения остался на 18% ниже. Различия в активности МП двух сравниваемых групп статистически значимы (Р<0,001 и Р<0,01 соответственно). Уровень содержания КБ в этот же срок проявляет тенденцию к нарастанию (1,03±0,06 усл. ед.), но остается в первой группе ниже уровня контроля на 45,5%, а вместе с тем различия уровня содержания КБ двух этих групп статистически значимы (Р<0,001 и Р<0,05 соответственно). Вместе с тем уровень содержания КБ НГ у пациентов, оперированных
с использованием препарата «севоран», по-прежнему остается ниже аналогичных значений у лиц, оперированных без его использования, на 50,4% (Р<0,001) (рис. 2).
Через 15 минут после введения протамина активность МП в первой группе постепенно увеличивается, но остается на 33,7% ниже уровня контроля. Во второй группе - 1,35±0,1 усл. ед., и это меньше на 15,6%, различия статистически значимы (Р<0,001 и Р<0,01). Содержание КБ в первой группе на 44%, а во второй -на 24% ниже уровня контрольной группы. Следует отметить, что уровень содержания КБ в НГ у пациентов, оперированных с использованием препарата «севоран», по-прежнему ниже на 37,7% ( Р<0,001), чем у лиц, оперированных без его использования.
Через 2-3 часа, а также на 1-е и 5-е сутки после ИК динамика активности МП для лиц первой группы была связана с некоторым повышением ее активности, но даже на 5-е сутки она на 19% осталась ниже уровня контроля. У лиц второй группы изменений ее активности не наблюдалось, установившись ко 2-3-му часу на 18% ниже нормы эти показатели сохранились до 5-х суток наблюдения. Катионный белок по уровню его содержания у лиц первой группы в послеоперационный период практически не менялся, оставался ниже контроля на 30-35%. Для пациентов второй группы это снижение было несколько меньшим (рис. 2).
Таким образом, проведенное исследование показало, что в условиях проведения ИК наблюдается прогрессивное снижение активности МП и уровня содержания КБ в нейтрофильных гранулоцитах крови, и эта динамика достигает своего максимума через 15-30 минут от начала ИК. При этом проведение ИК в условиях использования препарата «севоран» вызывает более выраженное снижение активности МП и содержания КБ, чем в его отсутствие, и этот эффект регистрируется на всех сроках наблюдения у лиц первой группы. В период с 60-й минуты ИК происходит постепенное увеличение активности МП, тогда как содержание КБ НГ остается сниженным. Во все сроки наблюдений ИК активность МП и уровень содержания КБ для пациентов второй группы были выше.
Итак, ИК в условиях использования препарата «севоран» усиливает эффект его дезорганизующего действия на кислородзависимую и кислороднезависимую микробицидную системы НГ, и это действие сохраняется до 5-х суток послеоперационного периода.
ЛИТЕРАТУРА
1. Пигаревский В. Е., Мазинг Ю. А. // Лаб. дело. - 1981. -№ 10. - С. 579-582.
2. Эренпрейса Е. А. Организация хроматина в ядре интерфазной клетки. - Рига, 1990. - C. 1-114.
3. Нагоев Б. С., Абидов М. Т., Нагоева М. Х. Состояние ли-зосомального катионного белка и активности миелопероксидазы у больных ангинами различной этиологии // Успехи современного ествествознания. - 2005. - № 7. - С. 40-41.
4. Нагоев Б. С., Самцов А. В., Гулиев М. О. Состояние внутриклеточной микробицидной системы нейтрофилов у больных гонококковой инфекцией // Журнал дерматовенерологии и косметологии. - 2001. - № 2. - С. 63-65.
5. Pearse A. G. E. Histochemistry, theoretical and applied, Ed. II-a, Ed. Little. - Brown, Boston, 1962. - 962 p.
6. Pearse A. G. E. Histochemistry, theoretical and applied, Ed. II-a, Ed. Little. - Brown, Boston, 1962. - P. 837.
7. Astaldi G., Verga L. // Acta haematol. (Basel). - 1957. - Vol. 173. - P. 129.
8. Kozik D. J., Tweddell J. S. Characterizing the inflammatory response to cardiopulmonary bypass in children // The Annals of Thoracic Surgery. - 2006. - Vol. 81. - P. 2347-2354.
9. Mojcik C. F., Levy J. H. Aprotinin and the systemic inflammatory response after cardiopulmonary bypass // The Annals of Thoracic Surgery. - 2001. - Vol. 71. - P. 745-754.
10. Levy J. H., Tanaka K. A. Inflammatory response to cardiopulmonary bypass // The Annals of Thoracic Surgery. - 2003 Feb. - Vol. 75 (2). - P. 715-720.
11. Novitsky V. V., Chumakova S. P., Shypulin V. M., Urazova O. I., Yevtushenko O. M., Perevozchikova T. V., Suslova T. Ye., Yemelyanova T. V. The interconnection between cytokines and the factors of bactericidal action of neutrophiles in patients operated on under the conditions of cardiopulmonary bypass // Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. - 2006. - № 6. - P. 13.
12. Aderka A, Le J., Vilcek J. Specific targeting of IL-6 signalling pathway: a new way to treat IBD? // PubMed Central, Gut. - 2000 October. - Vol. 47 (4). - P. 465-466.
13. Teague T. K., Marrack P., Kappler J. W., Vella A. T. IL-6 rescues resting mouse T cells from apoptosis // J. Immunol. - 1997 Jun. - Vol. 15. № 158 (12). - P. 5791-5796.
14. Aderka D., Le J., Vilcek J. Characterization of T-Cell Clones Derived From Peripheral Blood Lymphocytes of a Patient With Transfusion-Associated Graft-Versus-Host Disease: Fas-Mediated Killing by CD4+ and CD8+ Cytotoxic T-Cell Clones and Tumor Necrosis Factor Production by CD4+ T-Cell Clones // Blood. - 1997. - Vol. 89. № 4 (February 15). - P. 1440-1445.
Поступила 15.05.2009
О. В. МУСАТОВ1, С. А. ЗУРНАДЖАН1, О. Е. БОГАТЫРЁВА2
МОРФОМЕТРИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ДИСТРОФИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ РАН ПЕЧЕНИ, СЕЛЕЗЁНКИ И ПОЧКИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ИХ УШИВАНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
1Кафедра оперативной хирургии и топографической анатомии Астраханской государственной медицинской академии, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121. E-mail: olegmusatv@rambler.ru, тел. 8 (8512) 44-34-42; 2кафедра патологической анатомии Российской медицинской академии последипломного образования, Россия, 109995, г. Москва, ул. Баррикадная, 2. Тел. 8 (495) 321-46-14
В эксперименте на 78 кроликах проведена морфометрическая оценка дистрофических процессов ран печени, селезенки и почки после их аутопластики серозно-мышечным лоскутом желудка на сосудистой ножке, а также после гепаторафии,
