CC BY
10УДК: 613.24-002.5:616.155.3:616-076.5:616-092
В.Н. Чернышов, М.Н. Гришин, Ю.А. Зайцев, А.И. Хрипунов, Е.О. Корчагина, Н.Н. Аухадиев,
О.А. Шапирко
ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И СОСТОЯНИЕ ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ ДЕСТРУКТИВНЫМ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ
ГУ "Крымский государственный медицинский университет им. С.И. Георгиевского", г. Симферополь
РЕЗЮМЕ
У хворих деструктивным туберкульозом легень iмунодефiцит, що проявляеться в зниженш юлькосп CD3 +, CD4 + i CD8 + ль мфоципв i штенсивносп РБТЛ на ФГА i PPD, виявляеться в 100% випадюв тшьки у пащенпв з вираженими цитоморфолопч-ними i функщональними порушеннями лiмфоцитiв периферично!' кровi.
SUMMARY
In patients with destructive pulmonary tuberculosis immunodeficiency manifested in reduction of CD3 +, CD4 + and CD8 + lymphocytes and the intensity RBTL to PHA and PPD, is detected in 100% of cases only in patients with severe cyto-morphological and functional disorders of peripheral blood lymphocytes.
Особенности клинического течения и исходов специфического процесса, распространенность экссудативного компонента, скорость формирования деструкции легочной ткани у больных туберкулезом легких зависят от многочисленных и взаимосвязанных факторов. Это определяется нарушениями иммунологического гомеостаза, состоянием реактивности в общебиологическом плане, нарушениями обмена веществ [1, 2,3].
Немногочисленные литературные данные по цитохимическому изучению окислительно-восстановительных ферментов лимфоцитов свидетельствуют о депрессии их активности при инфицировании детей и прогрессировании туберкулеза легких у взрослых [4].
До настоящего времени остается открытым вопрос о значении цитоморфологических и функциональных нарушениях периферической крови в формировании иммунопатологических состояний при различных типах течения деструктивного туберкулеза легких.
Материалы и методы
Изучены цитохимические нарушения лейкоцитов периферической крови (ЛПК) и состояние иммунитета у 236 больных различными формами деструктивного туберкулеза, находившихся на лечении в КРУ "ПТД №1" АР Крым.
В ЛПК исследовалась активность ферментов, участвующих в биохимических циклах и имеющих различную внутриклеточную локализацию (3). Были изучены: сукцинат дегидрогеназы (СДГ) - центральный фермент цикла Кребса; глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г-6-ФГД) - ключевой фермент пентозофосфатного шунта прямого окисления глюкозы; альфа-глицерофосфатдегидрогеназа (а-ГФДГ) - компонент глицерофосфатного шунта; никотинамид-динуклеатиддегидрагеназы (НАДНДГ) и никотонамид-динуклеотидфосфатдегидрогеназы (НАДФНДГ) - комплексные показатели состояния активности митохондриальных и внемитохондри-альных дегидрогеназ; кислая фосфатаза (КФ) - основной фермент лизосом. Активность дегидрогеназ оценивали средним числом гранул формазана в клетке, КФ - процентом клеток с положительной реакцией на фермент. Иммунологические исследования включали в себя изучение следующих показателей: определение содержания в крови СШ+, СБ4+ и СБ8+ клеток, а также состояние их функциональной активности в реакциях бласттрансформации с фитогемаглютинином и туберкулином (РБТ с ФГА и РРД).
Полученные данные обрабатывались методами вариационной статистики. Достоверность различий определяли критерием Стьюдента. Для сопоставления изменений различных показателей использовали нормированное отклонение, при этом проводили анализ частоты встречаемости изменений показателей, выходящих за пределы ± 1, 5 (2 5 ).
На основании исходных данных и изучения активности ферментов ЛПК, было выделено 3 группы больных.
В 1-ю группу вошли 78 (33,1%) больных, у которых активность ферментов ЛПК находилась в пределах колебаний показателей лиц контрольной группы. Активность в среднем по группе для СДГ составляла -23,9 ± 0,19 гранул формазана на 1 клетку; НАДНДГ -37,4 ± 0.45; а-ГФДГ - 14,2 ± 0,22; Г-6-ФДГ - 16,1 ± 0,38 и для НАДФНДГ - 15,3 ± 0,30. При такой активности окислительно-восстановительных и гликолитических ферментов в периферической крови циркулировало 44,1 ± 5,02% клеток, давших положительную реакцию на КФ.
2-ю группу составили 87 (36,9%) больных с умеренными цито-морфологическими и функциональными нарушениями ЛПК, у которых при этом отмечалась низкая активность ферментов, связанных с циклом Кребса и окислительным фосфорилированием (СДГ -16,1 ± 0,66 гранул формазана на 1 клетку; НАДНДГ - 17,2 ± 0,85 и а-ГФДГ - 10,9 ± 0,99), но повышенная активность ферментов, участвующих в анаэробном гликолизе (активность Г-6-ФДГ составляла 26,4 + 0,67 гранул формазана на 1 клетку и НАДФНДГ - 28,6 ± 0,49). При таком состоянии энергетического обмена в крови уже циркулировало 70,2 ± 5,32% фосфатазоположительных клеток, характеризующих активность КФ. Данные цито-морфологических изменений ЛПК свидетельствуют об определенных нарушениях внутриклеточного обмена, т.к. при этом уже имеется тенденция к снижению активности а-ГФДГ - фермента, осуществляющего преемственность аэробного и анаэробного путей образования энергии в клетке, а также определяющего стабильность клеточных мембран, что определенным образом снижает функциональную активность клетки [ 5, 6 ].
В 3-ю группу были включены 71 (30,0%) больных со значительными цито-морфологическими и функциональными нарушениями ЛПК. При этом определялась стойкая депрессия активности всех энергетических ферментов (СДГ - 7,9 ± 0,23 гранул формазана на 1 клетку; НАДНДГ - 12,4 ± 0,77; а-ГФДГ - 5,4 ± 0,11; Г-6-ФДГ - 12,8 ± 0,54 и НАДФНДГ - 11,1 ± 0,41) при высоком количестве (89,8±6,49%) циркулирующих в периферической крови фосфатазоположительных клеток и с высокой активностью КФ, что определяет уже значительные цито-морфологические и функциональные нарушения внутриклеточного метаболизма и дестабилизацию биологических мембран [ 7 ].
Иммунологическое исследование было проведено у 98 больных деструктивным туберкулезом легких в возрасте от 20 до 60 лет. Мужчин было 64 (63,6%), женщин - 34 (34,6)%. Иммунологическое исследование включало количественное определение СБ3+, СБ4+ и СБ8+ лимфоцитов и соотношение СБ4+:СБ8+. Функциональную активность Т-лимфоцитов определяли в реакции бласттрансформации с ФГА и РРБ.
Результаты и обсуждение
Иммунологические показатели изучали и сопоставляли с цитоморфологическими и функциональными нарушениями ЛПК в ранее выделенных нами группах. 1-ую группу, с нормальными показателями ферментативной активности ЛПК, составили 28, 2-ую - 36, и 3-ью - 34 пациента.
Распределение больных по клиническим формам деструктивного туберкулеза легких в наблюдаемых группах представлено в табл. 1. У больных 1-й группы изменения локализовались в пределах 12 сегментов и размеры деструктивных изменений в легких не превышали 1 см в диаметре. Все пациенты имели скудное бактериовыделение. У 13 пациентов 2-й группы специфическое воспаление было в 1-2 сегментах, а у 23-х - в 1-2 долях, соответственно размеры каверн колебались в пределах от 1 до 4 см в диаметре и сопровождалось обильным бактериовыделением. У 19 больных 3-й группы распространенность воспалительных изменений занимала 3 и более долей, при этом у 12 - каверны были более 4 см в диаметре. При этом имело место обильное бактериовыделения, определяемое как микроскопией мазка мокроты, так и методом посева.
Таким образом, по выраженности тяжести течения деструктивного туберкулеза выделенные группы соответствовали степени цитоморфологи-ческих и функциональных нарушений ЛПК, что
Примечание - * - Р - < 0,05.
Как следует из табл. 2, у больных 1-й и 2-й группы относительное и абсолютное количество CD3+, CD4+ и CD8+ лимфоцитов находилось в пределах колебаний аналогичных показателей здоровых доноров. Существенные нарушения количественных показателей Т-лимфоцитов и их регуляторных субпопуляций установлены только у больных 3-й группы. При этом наиболее значительные количественные нарушения отмечены у CD4+ клеток, где в абсолютных величинах их содержание в крови было в 4 раза меньше, чем у пациентов 1 -и и 2-й группы и в 3,2 раза меньше чем у доноров (р < 0,05). Это существенно сказалось на соотношении абсолютного количества CD4+:CD8+ лимфоцитов. Так у больных 1-й и 2-й группы это соотношение равнялось 1,6 а у здоровых доноров - 1,5. В то время как у пациентов 3-й группы оно составляло только 0,3 (р <. 0,05).
Следовательно, полученные данные свидетельствуют о том, что у больных с выраженными ци-томорфологическими и функциональными нарушениям ЛПК имеется количественный дефицит всей популяции и Т- лимфоцитов, но особенно дефицит выражен в субпопуляции Т-хелперов, основных регуляторных клеток противотуберкулезного клеточного иммунитета [8]. Приведенные выше данные о количественных нарушениях Т-лимфоцитов у больных деструктивным туберкулезом легких были нами сопоставлены с интенсивностью РБТЛ с ФГА и PPD (таблица 3).
позволило объективно оценить характер иммунологических показателей в каждой группе отдельно.
Таблица 1.
Распределение больных по клиническим формам туберкулеза органов дыхания в наблюдаемых группах
Группа больных Число больных Клинические формы туберкулеза
Очаговая Инфи-льтра-тивная Казеозная пневмония Фиброзно-кавернозная
1-я 28 1711 --
2-я 36 4 29 - 3
3-я 34 - 19 11 4
Всего: 98 21 59 117
Количественные показатели относительного (в %) и абсолютного (количество клеток в 1 мкл) содержания CD3+, CD4+ и CD8+ лимфоцитов в крови и интенсивность РБТЛ с ФГА и PPD (по индексу восстановления синтеза ДНК) в наблюдаемых группах в сравнении с аналогичными показателями 20 здоровых доноров представлено в табл. 2 и 3.
Таблица 2
Таблица 3
Показатели интенсивности РБТЛ с ФГА и PPD по индексу восстановления синтеза ДНК в наблюдаемых группах (М ±m)
Группа больных Показатель интенсивности РБТ
с ФГА с PPD
1-я 62,4±6,4 4,4±0,54
2-я 65,1±7,2 3,8±0,79
3-я 47,5±5,9* 1,4±0,42*
Доноры 66,2±4,8 4,7±0,51
Примечание - * Р < 0,05.
Как видно из таблицы 3, интенсивности РБТЛ с ФГА и PPD установил существенное снижение данных иммунологических тестов только у больных 3-й группы по сравнению с данными показателей больных 1-й и 2-й группы. Так, интенсивность РТБЛ с ФГА у больных 3-й группы была в 1,3 раза ниже, чем у пациентов 1-й и в 1,4 раза, чем у пациентов 2-й (р < 0,05). Более значительное уменьшение интенсивности РТБЛ отмечена на PPD, при этом интенсивность бласттрансформа-ции у пациентов 3-й группы была в 3,1 и 2,7 раза ниже, чем, соответственно, у больных 1-й и 2-й группы (Р< 0,05).
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что выраженные нарушения интенсивности бласттрансформации ЛПК установ-
Количественные показатели CD3+, CD4+ и CD8+ в наблюдаемых группах (М±m)
Группа больных Количественный показатель
CD3+ % абс.кол. CD4+ % абс.кол. CD8+% абс.кол.
1-я 2-я 3-я 71±2,2 1588±124 68±1,5 1530±214 55+2,4 1044±147* 45±1,8 1001±107 44±1,9 987±111 30±1,3 245±34* 28±1,7 682±74 33±3,3 608±77 49±1,9* 849±199*
Доноры 72±1,4 1405±202 41±1,0 794±89 27±1,1 648±89
лены у больных с выраженными цитоморфологи-ческими и функциональными нарушениями. Нарушения в обмене веществ ЛПК ведут к падению функциональной активности данных клеток - как на внутриклеточном, так и на клеточном уровне, что, в конечном итоге формирует иммунодефицит у больных деструктивным туберкулезом легких.
Следует отметить, что нарушение функциональной активности ЛПК у больных 3-й группы, как правило, сочеталось с количественными изменениями и дисбалансом CD3+, CD4+ и CD8+ лимфоцитов. Иммунодефицит, сопутствующий деструктивному туберкулезу легких у больных с цито-морфологическими и функциональными нарушением ЛПК, проявлялся не только количественными, но и функциональными нарушениями Т-клеточного звена иммунитета.
Материалы исследования позволили установить, что при цито-морфологических нарушениях лейкоцитов периферической крови снижены количе -ственные (содержание CD3+, CD4+ и CD8+ кле-
ток) и функциональные (интенсивность РББЛ с ФГА и PPD) показатели Т-клеточного звена иммунитета.
Выводы
У больных деструктивным туберкулезом легких иммунодефицит, проявляющийся в снижении количества CD3+, CD4+ и CD8+ лимфоцитов и интенсивности РБТЛ на ФГА и PPD, выявляется в 100% случаев только у пациентов с выраженными цито-морфологическими и функциональными нарушениями лимфоцитов периферической крови. Следовательно, у этой группы пациентов развивается выраженный иммунодефицит, который осложняет течение заболевания и снижает эффективность химиотерапии. Таким образом, состояние иммунитета, изученное с учетом цитоморфологи-ческих и функциональных нарушений лимфоцитов периферической крови, позволило получить новые дополнительные данные о патогенезе деструктивного туберкулеза органов дыхания.
Литература
1. Фещенко Ю.1., Мельник В.М. Сучасна стратепя боротьби з ту-беркульозом в Укра1ш.- К.: Здоров я, 2007. -664 с.
2. Фещенко Ю.1., Мельник В.М.,Турченко Л.В., Лiрник С.В. Тубер-кульоз: оргашзащя дiагностики, лжування, профшактики та контролю за смертшстю. -К.:Здоров я, 2010. - 448 с.
3. Авербах М.М., Литвинов В.И. Иммунология и иммуногенетика туберкулеза: состояние и перспективы развития// Пробл.туб., 1989. - № 2.208-С.65-68.
4. Каминская Г.О., Абдуллаев Р.Ю. Взаимосвязь оксидативных процессов в лейкоцитах крови и защитных метаболических ре-
акций в организме больных туберкулезом легких. // Материалы, YII Российского съезда фтизиатров 2003, - С.32-33.
5. Струков А.И.Б, Хмельницкий О.К., Петленко В.П. Морфологический эквивалент функции. - М., 1982. - 206 с.
6. Ерохин В.В. Функциональная морфология респираторного отдела легких. - М., 1987.-272 с.
7. De Duve С., De Barsyth A., Poole B. et al. Lysosomo-tropic agents // Biochem. Pharmacol. - 1974.-v.23.-N 18. - P. 2495-2531.
8. Bloom D.C. Tuberculosis: Pathogenesis, protection and control. /Washington, 1998. - ATS Press.
в КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013
Поступила 19.12.2012
