CC BY
4
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
159
ВЛИЯНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ЭРИТРОПОЭТИНА ЧЕЛОВЕКА НА ПРОЛИФЕРАЦИЮ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
Н.А. Надеждина, Д.В. Маклаков, Д.А. Мовчан, М.В. Покровский, Ю.Е. Бурда
ОФГАОУ ВО Белгородский государственный национальный исследовательский университет», Белгород, Россия
e-mail: nadezhdina.narayandex.ru
Ключевые слова: рекомбинантный эритропоэ-тин, мезенхимные стволовые клетки, пролиферация, дифференцировка.
Рекомбинантный эритропоэтин (рЭПО) широко используется в клинической практике. Однако лечение рЭПО инициирует дополнительные нежелательные эффекты, которые включают снижение костной массы, что повышает риск переломов у людей с высокими уровнями эритропоэтина [1]. Сегодня уже установлено, что мезенхимные стволовые клетки (МСК) обеспечивают регенерацию костной ткани являясь источником остеобластов, которые создают костный матрикс [2]. Целью настоящего исследования явилась оценка воздействия различных концентраций рЭПО на пролиферацию и дифференци-ровку мезенхимных стволовых клеток человека.
В работе использовали МСК человека из жировой ткани (ООО «БиолоТ», РФ), которые культивировали в питательной среде DMEM/F12 (ООО «БиолоТ», РФ) с 10% эмбриональной телячьей сывороткой в СО2 инкубаторе при 37оС, 5% СО2, 100% влажности. МСК вносили в лунки 96 луночных планшетов, в которые добавляли рЭПО в разведении 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000. В качестве исходного раствора использовали 1 мл рЭПО (Эпокрин® 2000МЕ/1мл, ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА, РФ). Оценку пролиферации МСК оценивали на 3 день с использованием реагента MTT (Sigma-Aldrich, США), на 7 день оценивали способность спонтанной дифференцировки МСК в остеоген-ном направлении по экспрессии щелочной фосфата-зы при помощи реагента BCIP®/NBT (Sigma-Aldrich, США) с помощью фотометра (Multiskan FC, Thermo Scientific, США). Полученные результаты обрабатывали с помощью ПО Statistica 10.0 с использованием T-критерия Вилкоксона.
Результаты исследования показали, что угнетение пролиферации МСК отмечается в разведении 1:10, различия по сравнению с контролем достоверны при p < 0,01. Необходимо отметить, что тенденция увеличение пролиферативной активности отмечается с разведения 1:100 хотя достоверных различий с контролем не установлено. Активация дифференцировки МСК в остеогенном направлении выявлена в разведении 1:1000, по сравнению с контролем при p < 0,01, однако в разведении 1 :1 0000 отмечается снижение экспрессии щелочной фосфатазы МСК. Таким образом, рЭПО в повышенных концентрациях угнетает пролиферацию и дифференцировку МСК в остеогенном направлении, а разведение 1 :1 000 является оптимальным для обеспечения остеоиндукции МСК.
Литература:
1. Kristjansdottir HL, Lewerin C, Lerner UH, et al. J Bone Miner Res. 2020. V. 35(2). P. 298-305.
2. Florencio-Silva R, Rodrigues da Silva Sasso G, Sasso-Cerri E, et al. Biomed Res Int. 2015. V. 2015. P. 1-17.
ТРАНСКРИПЦИОННЫЙ ФАКТОР FREUD-1 В РЕГУЛЯЦИИ АУТИСТИЧЕСКИ-ПОДОБНОГО ПОВЕДЕНИЯ: РОЛЬ 5-НТ1А И D2 РЕЦЕПТОРОВ, А ТАКЖЕ CREB- И NF-KB-ЗАВИСИМЫХ СИГНАЛЬНЫХ ПУТЕЙ
В.С. Науменко, Е.М. Кондаурова, Т.В. Ильчибаева, Н.К. Попова
ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, Россия
e-mail: naumenko2002@mail.ru
Ключевые слова: нокдаун Cc2d1a/Freud-1, 5-ИТ1Дсеро-тониновый рецептор, D2 дофаминовый рецептор, CREB, NF-kB, мыши BTBR, аутистически-подобное поведение.
Несмотря на высокую распространенность аутизма в человеческой популяции, механизмы его возникновения в настоящее время не выяснены. В этой связи особое внимание привлекает транскрипционный фактор Freud-1 (кодируется геном Cc2d1a), который регулирует множество внутриклеточных сигнальных путей и, в том числе, является сайленсером 5-HT1A серото-ниновых и D2 дофаминовых рецепторов. Известно, что нарушение функции Freud-1 приводит к развитию различных психопатологий.
В данной работе мы обнаружили высокий уровень экспрессии гена Cc2d1a/Freud-1 в гиппокампе мышей линии BTBR, являющихся моделью аутизма, по сравнению с мышами линии C57BI/6J и исследовали как влияет нормализация экспрессии этого гена в гиппо-кампе мышей BTBR на поведение, 5-HT1A и D2 рецепторы, а также на внутриклеточные сигнальные пути Creb и NF-kB. Через 5 недель после введения мышам BTBR аденоассоцированного вирусного вектора (AAV), несущего плазмиду pAAV_H1 -2_shRNA-Freud- 1_Syn_ EGFP, кодирующую малую образующую шпильку РНК, подавляющую экспрессию гена Cc2d1a/Freud-1 как на уровне мРНК, так и на уровне белка, было обнаружено усиление тревожности и увеличение времени нахождения платформы и преодоленного расстояния до платформы в водном лабиринте Морриса, что, вероятно, связано с усилением стратегии активного избегания стресса. Нокдаун Cc2d1a/Freud-1 не повлиял на пространственную память и фосфорилирование транскрипционного фактора CREB.
Принимая во внимание полученные ранее данные о влиянии нокдауна Cc2d1a/Freud-1 на пространственную память и транскрипционный фактор CREB у «нормальных» мышей линии C57BI/6J, можно предположить нарушение CREB-зависимого эффекторного пути у мышей BTBR, что может играть важную роль в формировании аутистически-подобного фенотипа. При этом нокдаун Cc2d1a/Freud-1 в гиппокампе мышей BTBR не повлиял ни на экспрессию 5-HT1A и D2 рецепторов, ни на экспрессию ключевых генов NF-kB сигнального пути (Nfkb1 и Rela).
Полученные данные позволяют заключить, что транскрипционный фактор Freud-1 играет существенную роль в патогенезе тревожности и регуляции активного избегания стресса при аутизме. Кроме того, результаты данного исследования позволяют предположить нарушение CREB-зависимого сигнального пути в гиппокампе мышей линии BTBR. Содержание животных было поддержано фундаментальным исследовательским проектом #FWNR-2022-0023. Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда, проект № 22-15-00028.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
