CC BY
16
116
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
Factor (BDNF), используемых для такой дифференци-ровки индуцированных плюрипотентных стволовых клеток [4,5].
Цель работы. Получить CD133+ и CD133- культуры клеток глиобластомы и оценить устойчивость полученных культур к воздействию антипролиферативного G-квадруплекса и его комбинаций с малыми молекулами.
Методы. Оценка экспрессии таргетного гена проводилась методом RT-qPCR. Получение CDl33-обогащенной и обедненной культур проводилось с помощью иммуномагнитной сепарации. Для оценки пролиферативной активности клеток после воздействия исследуемыми комбинациями факторов использовался МТТ тест. Исследование пролиферативной активности проводилось на 10й и 20й день эксперимента. В качестве антипролиферативного фактора использовались два G-квадруплекса biHDI и bi-(AlD-l-T), показавших значимое ингибирование пролиферации культур глиобластомы [3]. Добавление нейроиндуктор-ных малых молекул проводилось по следующей схеме: на 1й день эксперимента добавлялся GQ в концентрации 37,5 мкМ, на 3й день добавлялись малые молекулы SB (10 jM) и LDN (1 |jM). На 5й день добавлялся purmorphamine (2 jM). На 7й день добавлялся последний фактор BDNF (20 ng/mL).
Результаты. Из панели культур IV Grade наибольшей экспрессией маркера CD133 обладала культура G01, которая использовалась в дальнейшем для выделения CD133+ и CD133- популяций клеток. МТТ тест для культуры G01 CD133+ показал, что данная культура устойчива к воздействию исследованных комбинаций biHD1, biHD1+BDNF, biHD1+PRM, biHD1+SB, bi-(AID-1-T), bi-(AID-1 -T)+BDNF, bi-(AID-1-T)+PRM, bi-(AID-1-T)+SB. Культура G01 CD133- оказалась более чувствительной к воздействствию, полное ингибирование пролиферации наблюдалось при добавлении bi-(AID-1-T) и bi-(AID-1 -T)+BDNF. На 20й день эксперимента картина значительно изменилась. Все исследованные комбинации значимо ингибировали пролиферацию клеток культуры G01 CD133+. В культуре G01 CD133- также значимо снижался пролиферативный потенциал при использовании всех исследуемых комбинаций за исключением bi-(AID-1-T), при воздействии которого произошло повышение пролиферации по сравнению с 10м днем эксперимента.
Выводы. Полученные культуры клеток глиобласто-мы человека, обогащенные и обедненные по CD133, обладают различной чувствительностью к воздействию антипролиферативных и нейроиндукторных факторов. Тем не менее, удалось подобрать комбинации факторов, значимо снижающие пролиферативный потенциал исследуемых культур. Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства науки и высшего образования РФ, Соглашение № 075-15-2020-809 (13.1902.21.0030).
Литература:
1. Batash R., Asna N., Schaffer P. et al. Curr. Med. Chem. 2017. V.
24. I. 27. PP. 3002-3009.
2. Brescia P., Ortensi B., Fornasari L. et al. Stem Cells. 2013. V.
31. I. 5. PP. 857-869.
3. Legatova, V., Samoylenkova, N., Arutyunyan et al. Int. J. Mol. Sci.
2021. V. 22. I. 7. P. 3372.
4. Shutova, M. V., Chestkov, I. V., Bogomazova et al. Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells. Springer Protocols
Handbooks. Humana Press. 2011. PP. 133-149.
5. De D., Halder D., Shin I. et al. Chem.Soc.Rev. 2017. V. 46. I. 20.
PP. 6241-6254.
СЕРОТОНИНОВЫЙ 5-HT1A РЕЦЕПТОР В АУТИСТИЧЕСКИ-ПОДОБНОМ ПОВЕДЕНИИ: РОЛЬ СЕРОТОНИНОВОЙ И BDNF СИСТЕМ
Е.М. Кондаурова, А.С. Цыбко, Т.В. Ильчибаева, В.С. Науменко
ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, Россия
e-mail: kond_em@bionet.nsc.ru
Ключевые слова: серотониновая система; рецептор 5-НТ1Д; AAV-опосредованная сверхэкспрессия; поведение, аутизм; мыши BTBR.
Расстройства аутистического спектра (РАС) являются одной из главных эпидемиологических проблем человечества. Механизмы, лежащие в основе РАС, до сих пор плохо изучены. Серотонин (5-HT) и нейротро-фический фактор мозга (BDNF) известны своей ролью в пластичности мозга и поведения. Взаимодействие этих двух систем хорошо описано в литературе. Среди множества серотониновых рецепторов особое внимание привлекает 5-НТ1А-рецептор, поскольку является основным регулятором функциональной активности 5-НТ-системы головного мозга, участвующей в регуляции различных типов нормального и патологического поведения. В данной работе мы исследовали влияние сверхэкспрессии 5-HT1д-рецептора (вызванной введением аденоассоциированного вирусного конструкта AAV-Syn-HTR1A-EGFP) в гиппокампе мышей линии BTBR T Itpr3/J на аутистически-подобное поведение, экспрессию 5-HT7 рецептора, BDNF и рецепторов BDNF. Линия мышей BTBR является одной из наиболее широко используемых животных моделей аутизма. Они демонстрируют основные поведенческие характеристики, определяющие РАС, включая нарушение социальных взаимодействий и повторяющееся стереотипное поведение [1]. Сверхэкспрессия 5-HT1A рецептора в гиппокампе мышей линии BTBR привела к значительному снижению выраженности стереотипного поведения в тесте закапывания шариков и к увеличению времени пребывания в центре в тесте «открытое поле». В то же время сверэкспрессия 5-HT1A рецептора не повлияла на социальное поведение в трехкамерном тесте, время неподвижности в тесте «подвешивание за хвост», двигательную активность в тесте «открытое поле» и ассоциативное обучение в парадигме «опе-рантная стенка». Усиление экспрессии 5-HT1A рецептора в гиппокампе сопровождалось значительным повышением уровня мРНК и белка 5-HT7 рецептора в гиппокампе. Также сверхэкспрессия 5-HT1A рецептора привела к значительному снижению уровня мРНК и белка TrkB рецептора, но не оказала влияние на экспрессию рецептора p75NTR у мышей BTBR и самого нейротрофического фактора мозга.
Таким образом, полученные результаты позволяют предположить участие взаимодействия 5-HT и BDNF систем, опосредуемого через рецепторы 5-HT1A и TrkB, в механизмах аутистически-подобного поведения у мышей BTBR. Содержание животных было поддержано фундаментальным исследовательским проектом #FWNR-2022-0023. Исследование было поддержано Российским научным фондом, грант № 22-15-00028.
Литература:
1. Stephenson D.T., O'Neill S.M., Narayan S., et al. Molecular autism. 2011, 2: 7.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
