ТРАНСГЕНЕРАЦИОННЫЙ ЭФФЕКТ ПРЕНАТАЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ СИНЕСТРОЛА НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНУЮ ХАРАКТЕРИСТИКУ ЯИЧНИКОВ ПОТОМСТВА ЛАБОРАТОРНЫХ МЫШЕЙ

Сулайманова Римма Тагировна; Хайруллин Радик Магзинурович; Злобина Светлана Юрьевна; Выродов Антон Сергеевич; Сулайманова Луиза Изатуллаевна; Хасанова Светлана Рашитовна

ORIGINAL PAPERS

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

УДК 618.111+615-08+636.028+636.932-002.2-085+615.256.5+57.084.1

ТРАНСГЕНЕРАЦИОННЫЙ ЭФФЕКТ ПРЕНАТАЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ СИНЕСТРОЛА НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНУЮ ХАРАКТЕРИСТИКУ ЯИЧНИКОВ ПОТОМСТВА ЛАБОРАТОРНЫХ МЫШЕЙ

'Башкирский государственный медицинский университет. 450008, г. Уфа, ул. Ленина, д. 3 2Университет РЕАВИЗ. 198099, Санкт-Петербург, ул. Калинина, д. 8, корп. 2, лит. А 3Медицинский университет РЕАВИЗ. 443001, г. Самара, ул. Чапаевская, д. 227 4Поликлиника № 52. 117546, Москва, ул. Медынская, д. 7, к. 1

Контактная информация: Римма Тагировна Сулайманова — доцент кафедры гистологии. Е-шаП: [email protected]

РЕЗЮМЕ: Научные исследования пренатального влияния эстрогенов свидетельствуют о повышении гормонального фона и формировании морфофункциональных изменений репродуктивных органов у будущего потомства. Цель исследования — изучение трансгенерационного эффекта пренатального действия синестрола на морфофункциональную характеристику яичников потомства лабораторных мышей, с последующим изучением их морфометриче-ских, иммуногистохимических показателей. Экспериментальные животные были поделены на 4 группы. Контрольной группе животных однократно вводили оливковое масло в дозе 0,2 мкг/кг внутримышечно, первой экспериментальной группе С25 однократно внутримышечно вводили синестрол в дозе 25 мкг/кг в виде 2% масляного раствора, второй экспериментальной группе С40 однократно внутримышечно вводили синестрол в дозе 40 мкг/кг в виде 2% масляного раствора, третьей экспериментальной группе С50 однократно внутримышечно вводили синестрол в дозе 50 мкг/кг в виде 2% масляного раствора, в стадии развития гестации Е 11.5. При гистологическом исследовании препаратов яичников потомства первой экспериментальной группы С25 мышей отмечается изменение соотношения коркового вещества по отношению к мозговому, уменьшение числа фолликулов по сравнению с контрольной группой. В результате внутримышечного однократного введения синестрола второй экспериментальной группе С40 в яичнике потомства наблюдалось увеличение площадей мозгового и коркового веществ по сравнению с группой контроля. Морфометрический подсчет числа фолликулов яичника демонстрирует уменьшение их количества в отличие от показателей контрольной группы. В третьей экспериментальной группе С50 в яичнике потомства наблюдаются стойкие морфологические изменения в виде увеличения показателей площади коркового и мозгового вещества, значительного увеличения площади желтого тела, снижения количества всех видов фолликулов. Влияние воздействия различных доз синестрола в пренатальный период следует рассматривать как возможные морфофункциональные предикторы нарушений функции репродуктивной системы потомства в целом.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: синестрол, яичники, лабораторные мыши, пренатальное введение, потомство.

TRANSGENERATIONAL EFFECT OF PRENATAL ACTION OF SYNESTROL ON MORPHOFUNCTIONAL CHARACTERISTICS OF OVARIES OF OFFSPRING OF LABORATORY MICE

'Bashkir State Medical University. 450008, Russia, Ufa, Lenina str., 3

2Medical University REAVIZ. 198099, Russia, St. Petersburg, Kalinina str., 8 case 2, letter A

3Medical University REAVIZ. 443001, Russia, Samara, Chapaevskaya str., 227

452nd Moscow City Polyclinic. 117546, Russia, Moscow, Medynskaya str., 7/1

Contact information: Rimma T. Sulaymanova — associate professor of the Department of histology. E-mail: [email protected]

ABSTRACT: Scientific studies of the prenatal effect of estrogens indicate an increase in the hormonal background and the formation of morphofunctional changes in the reproductive organs of future offspring. The aim of the study was to study the transgenerational effect of prenatal action of synestrol on the morphofunctional characteristics of ovaries of laboratory mice offspring, with subsequent study of their morphometric and immunohistochemical parameters. Experimental animals were divided into 4 groups. Control group animals were injected once of olive oil at a dose of 0.2 mg/kg intramuscularly, the first experimental group C25 intramuscularly injected sinestrol in the dose of 25 ^g/kg, in 2% oil solution of sinistrol, the second experimental group C40 intramuscularly injected sinistrol at a dose of 40 mg/kg in 2% oil solution of sinistrol, the third experimental group C50 — a single intramuscular sinistrol at a dose of 50 ^g/kg, in 2% oil solution of sinistrol, in the stage of gestation E 11.5. Histological study of ovarian preparations of the offspring of the first experimental group of C25 mice showed a change in the ratio of cortical matter to brain matter, a decrease in the number of follicles compared to the control group. As a result of intramuscular single administration of synestrol to the second experimental group C40, an increase in the areas of the brain and cortical substances in the ovary of the offspring was observed in comparison with the control group. Morphometric calculation of the number of ovarian follicles shows a decrease in their number, in contrast to the indicators of the control group. In the third experimental group C50 in the ovary of the offspring, there is a persistent morphological changes in the increase of the area of cortex and medulla, a significant increase in the area of yellow body, decrease of the number of all types of follicles. The effect of exposure to different doses of synestrol in the prenatal period should be considered as possible morphofunctional predictors of disorders of the reproductive system of offspring as a whole.

KEY WORDS: sinestrol, ovaries, laboratory mouse, prenatal introduction, offspring.

ВВЕДЕНИЕ

Экспериментальные и клинические исследования репродуктивного здоровья являются актуальной проблемой репродуктивной биологии [12]. Среди множества факторов, оказывающих влияние на формирование и дальнейший рост развивающегося организма в пренатальный период, все более очевидной становится роль эндокринной системы. Ней-роэндокринная регуляция материнского организма в гравидарный период действительно определяет оптимальные или критические условия для будущего поколения. Речь идет об

онтогенетическом пути реализации прена-тальной заложенной программы, модулируемой уровнем стероидных гормонов [4, 7, 10]. Известно, что морфогенез различных органов модулируется химическими и физическими факторами [2]. Очевидность этого прослеживается в многочисленных работах, посвященных данной проблеме, получившей все больший размах в исследованиях как за рубежом, так и в нашей стране [1, 3, 8]. Несмотря на большое количество работ, посвященных изучению интимных механизмов развития и функционирования овариальной железы, все детали этого сложного процесса до конца не

выяснены. Различными авторами подчеркивается тот факт, что развивающиеся высокие адаптивные свойства способны скомпенсировать неадекватные условия внутриутробного развития [6, 11]. Однако же искаженное гормональное состояние матери с большей долей вероятности провоцирует закладку патологической структуры или функции органа плода без нарушения жизненно важных систем [5, 13]. Актуальным остается вопрос о развитии яичников потомства лабораторных мышей, которые были подвержены гормональному стрессу при пренатальном введении различных доз эстрогенов, в частности синестрола, в период формирования органов.

ЦЕЛЬ ' ИССЛЕДОВАНИЯ.....

Изучение трансгенерационного эффекта пренатального действия синестрола на мор-фофункциональную характеристику яичников потомства лабораторных мышей, с последующим изучением их морфометрических, имму-ногистохимических показателей.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве экспериментальных животных использовали самок белых лабораторных мышей массой 19-21 г (п = 9) и самцов (п=3), которые были получены в питомнике ГУП ДП ПСХ «Питомник лабораторных животных», (Республика Башкортостан, Чишминский район, с. Горный). Условия вивария и содержания животных соответствуют РД-АПК 3.10.07.0209 «Методические рекомендации по содержанию лабораторных животных в вивариях научно-исследовательских институтов и учебных заведений» и другим санитарным нормам и требованиям ветеринарного контроля и надзора работ с лабораторными и экспериментальными животными, лицензия № 99-04000097 от 25.01.2005 г. Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. Беременных самок лабораторных мышей разделили на 4 группы (контрольная группа, экспериментальные группы № 1, № 2, № 3), которым на стадии развития гестации Е 11.5 выполнено внутримышечное однократное введение доз масляного раствора синтетического препарата эстрогена синестрола. Расчеты эффективности доз препарата производили в соответствии с коэффициентами для перерасчета доз веществ в мкг/кг для мышей [9]. Контрольная группа (п = 5) полу-

чала оливковое масло в дозе 0,2 мкг/кг однократно, внутримышечно. Первая экспериментальная группа С25 (n = 5) получала синестрол однократно в виде 2% масляного раствора в дозе 25 мкг/кг внутримышечно. Вторая экспериментальная группа С40 (n = 5) получала синестрол однократно в виде 2% масляного раствора в субтоксической дозе 40 мкг/кг массы внутримышечно. Третья экспериментальная группа С50 (n=5) получала синестрол однократно в виде 2% масляного раствора в токсической дозе 50 мкг/кг массы внутримышечно. Рожденное потомство животных было разделено на 2 группы: самок и самцов, после чего животных выводили из опыта по окончании сроков (на 90-е сутки, в соответствии с Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского Союза от 22.09.2010 о защите животных в научных целях и рекомендациями других международных, российских и институциональных правил в области биоэтики). Для исследования извлекали яичник потомства лабораторной мыши. Органы фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине в течение 24 часов, подвергали стандартной гистологической обработке. Готовили срезы 5-6 мкм, после соответствующей гистологической проводки следующим этапом проводилось окрашивание срезов гематоксилином-эозином и иммуногистохимическим (ИГХ) методом. Парафиновые срезы толщиной 4 мкм окрашивали с помощью иммуно-гистостейнера Leica Microsystems Bond™ (Германия). В работе были использованы в качестве первых антител поликлональные антитела для мыши Santa Cruz Biotechnology (США): к рецептору p53 (клон fl-393-G) использовали антитела в разведении 1:300. Для демаскировки использовали непрямую стрептавидин-биотиновую систему детекции Leica BOND (Novocastra™, Германия). Докраску проводили раствором гематоксилина. Оценку специфичности реакции проводили при окрашивании срезов без первых антител. Исследование, визуализацию и морфометрию гистологических препаратов проводили с использованием инвертированного биологического микроскопа AxioobserverD1, компания-производитель Carl Zeiss Microscopy GmbH (Германия) со специализированным программным обеспечением управления настройками и захвата изображения. Проводились следующие замеры морфо-метрических показателей яичников: площадь поперечного среза, площадь коркового вещества, площадь мозгового вещества, площадь желтого тела. Также были исследованы фолли-

кулы на разных стадиях развития: при-мордиальные, первичные (униламинарные), вторичные (мультиламинарные), третичные с дальнейшим сравнением полученных результатов с контрольной группой. Всего приготовлен 91 микропрепарат. Полученные переменные величины имели непараметрическое распределение. Для статистической обработки и сравнения показателей двух независимых групп использовался критерий Манна-Уитни.

РЕЗУЛЬТАТЫ ' ИССЛЕДОВАНИЙ.....

И ОБСУЖДЕНИЕ

Одной из важнейших задач нашего исследования была разработка эффективной экспериментальной модели пренатальных доз синестрола, воздействующих на морфологию яичников потомства. Наши исследования показали, что в результате внутримышечного однократного введения синестрола в дозе 25 мкг/кг беременной мыши было получено потомство количеством 5, у которого отмечалось изменение морфометрических показателей коркового и мозгового вещества яичников. Изменение площади поперечного среза яичника экспериментальной группы С25 увеличилось в 2,6 раза по сравнению с группой контроля. Площадь коркового вещества также подверглась изменениям, которые заметны в виде увеличения ее на 12,5%. Однако пло-

Рис. 1. Микрофотография препарата яичника потомства мыши с введением во время беременности синестрола в дозе 25 мкг/кг (группа С25): 1 — герминативный эпителий; 2 — примордиальный фолликул; 3 — первичный (униламинарный) фолликул; 4 — вторичный (мультиламинарный) фолликул; 5 — третичный фолликул. Окраска гематоксилином-эозином; ув. х100

щадь мозгового вещества и желтого тела не претерпела закономерного увеличения, а показала снижение показателей на 33,3 и 40,0% соответственно. В корковом веществе яичника фолликулы находятся на разных стадиях развития (рис. 1). Изменения также коснулись и всех видов фолликулов яичника. Исследование выявило их уменьшение в сравнении с контрольной группой: число примордиальных фолликулов снизилось в 7,6 раза по сравнению с контрольной группой, первичные (уни-ламинарные) фолликулы показали убыль на 12,5%, а вторичные (мультиламинарные) и третичные фолликулы снизились на 42,8 и 28,5% соответственно. В иммуногистохими-ческих показателях в фолликулах определяются единичные очаги яркой экспрессии маркера р53 до 9-10%. В строме — яркая экспрессия р53 до 5% (рис. 2).

В результате внутримышечного однократного введения синестрола беременной мыши в субтоксической дозе 40 мкг/кг отмечается значительное увеличение морфометрических показателей коркового и мозгового вещества яичников у потомства, которое было получено в экспериментальной группе С40. Морфологические изменения наблюдаются в увеличении площади поперечного среза яичника по сравнению с контролем в 2,3 раза. Площадь коркового вещества также подверглась изменениям, которые заметны в виде увеличения ее в 2,5 раза. Изменения коснулись и всех видов фолликулов яичника контрольной группы по сравнению с экспериментальной группой С40. Исследование выявило уменьшение числа примордиальных фолликулов, оно снизилось в 7,4 раза по сравнению с контрольной

Рис. 2. Микрофотография препарата яичника потомства мыши группы С25. Иммуногистохимическая реакция на маркер р53. Докраска ядер гематоксилином. Ув. х100

группой, а первичные (униламинарные) фолликулы показали убыль в 6,2 раза. Количество вторичных (мультиламинарных) и третичных фолликулов увеличилось на 71,4 и 57,1% соответственно, в исследуемых гистологических препаратах наблюдается гипертрофия и гиперплазии гранулезных клеток, а также teca interna. В строме коркового вещества наблюдается очаговая лютеинизация, что свидетельствует о реальном гормональном воздействии на орган. Площадь мозгового вещества и желтого тела показали значительный рост: в 1,64 раза и 2,76 соответственно (рис. 3). Яркая экспрессия р53 до 14-15% определяется в созревающих фолликулах, в строме яичника умеренная очаговая экспрессия до 7%, в желтом теле яркий позитив маркера в единичных клетках (рис. 4).

В результате внутримышечного однократного введения синестрола в токсической дозе 50 мкг/кг отмечаются значительные изменения морфометрических показателей яичников потомства экспериментальной группы С50 (рис. 5). Морфологические изменения наблюдались в увеличении площади поперечного среза яичника в 5,5 раз в экспериментальной группе по сравнению с контролем. Площадь коркового вещества, площадь мозгового вещества и желтого тела также подверглись изменениям, которые заметны в виде их увеличения в 6,7 раза, 1,5 раза и 8,8 раза соответ-

Рис. 3. Микрофотография препарата яичника потомства мыши с введением во время беременности синестрола в дозе 40 мкг/кг (группа С40): 1 — герминативный эпителий; 2 — примордиальный фолликул; 3 — первичный (униламинарный) фолликул; 4 — вторичный (мультиламинарный) фолликул; 5 — третичный фолликул; 6 — атрети-ческое тело; 7 — желтое тело. Окраска гематоксилином-эозином; ув. х100

ственно. Изменения коснулись всех видов фолликулов яичника экспериментальной группы по сравнению с контрольной. Исследование выявило уменьшение числа примор-диальных фолликулов в 9,5 раз, первичных фолликулов в 5 раз по сравнению с контрольной группой. Количество вторичных и третичных фолликулов снизилось на 28,6 и 42,9% соответственно. В желтых телах наблюдался позитив в единичных клетках, в строме яркая экспрессия р53 до 8%, в отдельных

Рис. 4. Микрофотография препарата яичника потомства мыши группы С40. Иммуногистохимическая реакция на маркер р53. Докраска ядер гематоксилином. Ув. х100

Рис. 5. Микрофотография препарата яичника потомства мыши с введением во время беременности синестрола в дозе 50 мкг/кг (группа С50): 1 — герминативный эпителий; 3 — первичный (униламинарный) фолликул; 4 — вторичный (мультиламинарный) фолликул; 5 — третичный фолликул; 7 — желтое тело; 8 — очаги кровоизлияния. Окраска гематоксилином-эозином; ув. х100

фолликулах яркая экспрессия р53 составляет до 15-20%, причем отмечается увеличение количества окрашенных элементов соответственно созреванию фолликулов (рис. 6).

вЫВОДЫ

Исследования показали, что отмечаются существенные структурно-функциональные изменения в яичниках потомства при нарушении гормонального фона в период беременности матерей под воздействием синтетического аналога эстрогена, препарата синестрола. Прена-тальный эффект синестрола в дозе 25 мкг/кг на морфологию яичников потомства лабораторных мышей выявил структурно-функциональные изменения показателей коркового и мозгового веществ яичников, уменьшение числа фолликулов, а также снижение показателей желтого тела. Установлено, что введение препарата в субтоксической дозе 40 мкг/кг оказывает, с точки зрения морфологических и иммуноги-стохимических изменений, эффект на репродуктивную систему потомства лабораторных мышей. Также наблюдались увеличение площади коркового и мозгового веществ яичников, количества желтых тел, расположенных по всему периметру яичника, уменьшение первичных, вторичных и третичных фолликул, отсутствие которых может привести к бесплодию и является его патоморфологическими критериями. Токсическая доза синестрола 50 мкг/кг вызвала необратимые морфологические иммуно-гистохимические изменения в яичниках потомства. Наблюдалось накопление значительного числа желтых тел, нарушение соотношения первичных, вторичных, третичных фолликулов, свидетельствующих о проканцерогенных изменениях на молекулярно-генетическом уровне, наиболее отчетливо проявляющихся в выраженном повышении активности белка он-косупрессора р53.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Трансгенерационный эффект препарата синестрола — синтетического аналога эстрогенов — в течение критического периода закладки яичников приводит к стойким морфологическим изменениям у потомства в постнатальной жизни. Эти изменения следует рассматривать как морфологические предикторы нарушений функций яичников, снижения фертильности, а также (косвенно) как предикторы проканцерогенных эффектов нефизиологической гиперэстрогении матерей во

Рис. 6. Микрофотография препарата яичника потомства мыши группы С50. Иммуногистохимическая реакция на маркер р53. Докраска ядер гематоксилином. Ув. х100

время беременности на яичники потомства. Таким образом, результаты исследования свидетельствуют об актуальности проблемы лимитирования генно-токсического и субтоксического действия эстрогенов в период прена-тального развития органов плода.

лиТеРАтУра

1. Dolle M.E., Esterik J.C., Leeuwen S.P. et al. Programming of metabolic effects in C57BL/6JxFVB mice by exposure to bisphenol A during gestation and lactation. Toxicology. 2014; 321(5): 40-52.

2. Дрождина Е.П., Сыч В.Ф., Хайруллин Р.М., Слеса-рев С.М. О влиянии длительного потребления диспергированной пищи на морфогенез мышечной оболочки ободочной кишки белых крыс. Морфологические ведомости. 2006; 1-2: 21-3.

3. Komada М., Itoh S., Kawachietall K. Newborn mice exposed prenatally to bisphenol A show hyperactivity and defective neocortical development. Tjxicology. 2014; 323(3): 51-60.

4. Mandrup K.R., Jacobsen P.R., Isling L.K. et al. Effects of perinatal ethinyl estradiol exposure in male and female Wistar rats. Report Toxicol. 2013; 42(2): 180-91.

5. Palaza P., Gioiosa L., Saal F.S. et al. Effects of developmental exposure to bisphenol. A on brain and behavior in mice. Environ Res. 2008; 108-2(7): 150-7.

6. Richter C.A., Birnbaum L.S., Farabollini F. et al. In Vivo Effects of Bisphenol A in Laboratory Rodent Studies. Richter. Reprod Toxicol. 2007; 24(8): 199-224.

7. Рыжавский Б.Я. Состояние важнейших систем в эмбриогенезе: отдаленные последствия. Хабаровск. 1999; 9.

8. Сулайманова Р. Т. Экспериментальные модели трансгенерационных эффектов влияния эстрогенов на морфологию репродуктивных органов потомства в постнатальном онтогенезе. Морфологические ведомости. Morphological Newsletter. 2019; 27; 1(10): 37.

9. Сулайманова Р.Т., Хайруллин Р.Д., Имаева А.К., Гниятуллина Г.А., Свирская М.В. Способ моделирования проканцерегенного действия синестрола на яичник потомства женского пола у лабораторных мышей. Патент РФ № RU 2676437 от 09.01.2018.

10. Khayrullin R.M., Sylaymanova R.T., Bakhtiyarov R.I., Yusupova L.R., Fomina A.V. Comparative prenatal effects of sex steroids on anogenital distance of the offspring of laboratory mice. The 7th International Symposium of Clinical and Applied Anatomy Book of absracts ISCAA 2015. 2015: 140.

11. Khayrullin R.M., Sulaymanova R.T., Yusupova L.R. Effect of prenatal exposure of various does of synestrol on ovarian morphology in adult life of offspring. 112th Annual Meeting Deutsche AnatomischeGesellschaft, September 20-22, 2017. Wurzburg, Germany. Wurzburg; 2017: 34.

12. Хайруллин P.M., Тихонов Д.А., Мирин А.А., Сви-тайло М.П. Анатомо-антропологические показатели физического развития и репродуктивного здоровья юношей. Морфология. 2009; 136(4): 146a.

13. Юсупова Л.Р., Сулайманова Р.Т., Магадеев Т.Р., Гафурова А.Ф., Зарипова Р.И., Хазиев А.Р., Сулайманова Л.И., Кометова В.В., Хайруллин Р.М. О факторе риска развития рака молочной железы, связанном с пренатальным обменом эстрогенов. Фундаментальные исследования. 2013; 10-1: 130-5.

REFERENCES.....

1. Dolle M.E., Esterik J.C., Leeuwen S.P. et al. Programming of metabolic effects in C57BL/6JxFVB mice by exposure to bisphenol A during gestation and lactation. Toxicology. 2014; 321(5): 40-52.

2. Drozhdina Ye.P., Sych V.F., Khayrullin R.M., Slesarev S.M. O vliyanii dlitel'nogo potrebleniya dispergirovannoy pi-shchi na morfogenez myshechnoy obolochki obodochnoy kishki belykh krys. [On the influence of long-term consumption of dispersed food on the morphogenesis of the muscular membrane of the colon of white rats]. Morfolo-gicheskiye vedomosti. 2006; 1-2: 21-3. (in Russian).

3. Komada М., Itoh S., Kawachietall K. Newborn mice exposed prenatally to bisphenol A show hyperactivity and defective neocortical development. Тох^^у. 2014; 323(3): 51-60.

4. Mandrup K.R., Jacobsen P.R., Isling L.K. et al. Effects of perinatal ethinyl estradiol exposure in male and female Wistar rats. Report Toxicol. 2013; 42(2): 180-91.

5. Palaza P., Gioiosa L., Saal F.S. et all. Effects of developmental exposure to bisphenol. A on brain and behavior in mice. Environ Res. 2008; 108-2(7): 150-7.

6. Richter C.A., Birnbaum L.S., Farabollini F. et al. In Vivo Effects of Bisphenol A in Laboratory Rodent Studies. Richter. Reprod Toxicol. 2007; 24(8): 199-224.

7. Ryzhavskiy B.YA. Sostoyaniye vazhneyshikh sistem v embriogeneze: otdalennyye posledstviya. [The state of the most important systems in embryogenesis: long-term consequences]. Khabarovsk. 1999; 9. (in Russian).

8. Sulaymanova R.T. Eksperimental'nyye modeli trans-generatsionnykh effektov vliyaniya estrogenov na morfologiyu reproduktivnykh organov potomstva v postnatal'nom ontogeneze. [Experimental models of transgenerational effects of estrogen influence on the morphology of reproductive organs of offspring in postnatal ontogenesis]. Morfologicheskiye vedomosti. Morphological Newsletter. 2019; 27; 1(10): 37. (in Russian).

9. Sulaymanova R.T., Khayrullin R.D., Imayeva A.K., Gni-yatullina G.A., Svirskaya M.V. Sposob modelirovaniya prokantseregennogo deystviya sinestrola na yaichnik potomstva zhenskogo pola u laboratornykh myshey. [A method for simulating the pro-carcinogenic effect of synestrol on the ovary of female offspring in laboratory mice]. Patent RF № RU 2676437 ot 09.01.2018. (in Russian).

10. Khayrullin R.M., Sylaymanova R.T., Bakhtiyarov R.I., Yusupova L.R., Fomina A.V. Comparative prenatal effects of sex steroids on anogenital distance of the offspring of laboratory mice. The 7th International Symposium of Clinical and Applied Anatomy Book of absracts ISCAA 2015. 2015: 140.

11. Khayrullin R.M., Sulaymanova R.T., Yusupova L.R. Effect of prenatal exposure of various does of syne-strol on ovarian morphology in adult life of offspring. 112th Annual Meeting Deutsche AnatomischeGesellschaft, September 20-22, 2017. Wurzburg, Germany. Wurzburg; 2017: 34.

12. Khayrullin P.M., Tikhonov D.A., Mirin A.A., Svitay-lo M.P. Anatomo-antropologicheskiye pokazateli fizich-eskogo razvitiya i reproduktivnogo zdorov'ya yunoshey. [Anatomical and anthropological indicators of physical development and reproductive health of young men]. Morfologiya. 2009; 136(4): 146a. (in Russian).

13. Yusupova L.R., Sulaymanova R.T., Magadeyev T.R., Gafurova A.F., Zaripova R.I., Khaziyev A.R., Sulaymanova L.I., Kometova V.V., Khayrullin R.M. O faktore riska razvitiya raka molochnoy zhelezy, svy-azannom s prenatal'nym obmenom estrogenov. [On the risk factor for developing breast cancer associated with prenatal estrogen metabolism]. Fundamental'nyye issledovaniya. 2013; 10-1: 130-5. (in Russian).