CC BY
11Проблемы медицинской микологии. 2020, Т.22. №3
питательных средах. Физиологическую микроэкосистему влагалища представляют несколько видов лактобацилл, различающихся по своему протективному потенциалу. У большинства женщин нормальный микробиоценоз влагалища состоит из четырех видов лактобацилл - Lactobacillus crlspatus, L. ¡ners, L. gasserl, L. jen-senll. По данным наших исследований, в Санкт-Петербурге у женщин репродуктивного возраста наиболее часто выявляются L. jensenii - 46,3% и L. crispatus -31,6%. Сдвиг от лактобациллярной микробиоты в сторону бактериального разнообразия приводит к снижению антимикробных свойств слизистых оболочек, разрушению защитной цервиковагинальной слизи под воздействием бактериальных муциназ, воспалительному процессу во влагалище, восходящей инфекции. На основе анализа геномного состава и метаболических профилей микробиоты отделяемого влагалища разработаны маркеры бактериального вагиноза - самого распространенного дисбиоза влагалища. Данные исследований последних лет свидетельствуют о нестерильности полости матки. В ряде случаев микробиота эндометрия существенно отличается от вагинальной микробиоты. Полученные результаты позволяют предположить наличие функциональной системы «микро-биота-эндометрий», нарушение которой под воздействием факторов риска может приводить к нарушению морфофункционального состояния эндометрия, повреждению трофобласта, нарушению процессов имплантации и неэффективным протоколам экстракорпорального оплодотворения. В настоящее время активно исследуют роль микробного фактора в генезе невынашивания беременности. В первом триместре прерывается до 20% всех беременностей, влияние микробного фактора оценивается в 15%. Во 2-3 триместрах прерывается от 1 до 2% всех беременностей, роль микробного фактора оценивается в 60-70%. Инфекция матери (бактериальной или вирусной этиологии) может привести к развитию изолированных дефектов плаценты или к передаче возбудителя плоду и новорожденному. Изменения в микробной экосистеме нижних отделов урогенитально-го тракта (бактериальный вагиноз) - фактор риска преждевременных родов и неблагоприятных перинатальных исходов.
Заключение. Физиологическая (нормальная) микробиота органов репродукции играет важнейшую роль в реализации репродуктивной функции человека, формируя защитный барьер слизистых оболочек, подавляя рост патогенной микробиоты, оказывая иммуномодулирующее действие, участвуя в продукции разнообразных биологически активных соединений. Нарушение микробиоты органов репродукции ассоциировано с неэффективностью вспомогательных репродуктивных технологий, неблагоприятными исходами беременности, заболеваниями плода и новорожденного ребенка. Глубокое понимание структуры и функционирования микробиоты репродуктивного тракта необходимо для разработки эффективных мер диагностики, профилактики и лечения репродуктивных нарушений, следствием чего является улучшение демографической ситуации в стране.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТИ У КЛИНИЧЕСКИ ЗНАЧИМЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ МЕТОДОМ ПЦР-РВ В ПРАКТИКЕ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ
Сафронова Е.В., Мигита О.А., Астахова М.В., Сухова Л.П., Малашук Т.М.
Областной кожно-венерологический диспансер, Липецк, Россия
DETECTION OF ANTIBIOTIC RESISTANCE IN CLINICALLY SIGNIFICANT MICROORGANISMS BY PCR-RT IN PRACTICE OF THE BACTERIOLOGICAL LABORATORY
Safronova E.V., Migita O.A., Astakhova M.V., Sukhova L.P., Malashuk T.M.
Regional Dermatovenerologic Dispensary, Lipetsk, Russia
Цель - сравнение результатов определения устойчивости микроорганизмов к различным классам антимикробных препаратов (АМП) методом ПЦР с данными, полученными фенотипическими бактериологическими методами.
Материалы и методы. Исследованы клинически значимые микроорганизмы: Staphylococcus aureus (n=13), Enterococcus faecalls /faeclum (n=2), Aclnetobacter baumannll (n=5), Pseudomonas aeruginosa (n=15), представители семейства энте-робактерий (n=4), Klebslella pneumonlae (n=2), выделенные из различных видов клинического материала (мокрота, БАЛ, раневое отделяемое, моча). Штаммы тестировали на чувствительность к основным группам АМП (пенициллинам, це-фалоспоринам, гликопептидам, карбапенемам) диско-диффузионным методом (КР-2018.03). При необходимости проводили ряд фенотипических тестов для определения возможных механизмов антибиотикорезистентности (CIM-метод инактивации карбапенемов, метод «двойных дисков» с ЭДТА, метод «двойных дисков» на продукцию БЛРС у энтеробактерий). В сомнительных случаях определяли МПК антибиотика с помощью MIC Test Strip (Liofilchem, Италия) или M.I.C.Evaluators Test (Oxoid, Великобритания). Затем эти же штаммы исследовали методом ПЦР-РВ с помощью наборов «БакРезиста GLA» («ДНК-Технология», РФ; амплификатор ДТ-96, РФ) и наборов «АмплиСенс® MDR MBL-FL» и «Амплисенс ®MDR KPCЮXA-48-FL»(«Интерлабсервис», РФ; амплификатор RotorGene-Q, Германия).
Результаты. Из 13 штаммов S. aureus у 7 был обнаружен ген mecА (54%), у всех энтеробактерий - самая распространенная бета-лактамаза расширенного
спектра СТХ-М1, у всех штаммов A. baumannll - карбапенемазы ОХА-23 и ОХА-40-like, из 15 штаммов P. aeruginosa у 9 выявлена металло-бета-лактамаза (blaVIM), у E. faeclum - ген VanA. У 6 «отрицательных» штаммов P. aeruginosa на продукцию МБЛ МПК меропенема была выше 32 мг/л, видимо, имел место какой-либо другой механизм резистентности к карбапенемам. Интересно, что у одного из штаммов K pneumoniae была обнаружена NDM-1, которая характеризуется экстремальной резистентностью к антибиотикам.
Выводы. Методы ПЦР-РВ существенно ускоряют сроки выдачи результата и помогают выявить резистентность к АМП в «сомнительных» случаях. Они вполне могут быть использованы в рутинной практике бактериологических лабораторий для определения резистентности микроорганизмов к антибиотикам
ТРАНСДЕРМАЛЬНАЯ ДОСТАВКА АНТИМИКОТИКОВ КАК ПЕРСПЕКТИВНЫЙ ПОДХОД В ЛЕЧЕНИИ ПОВЕРХНОСТНЫХ МИКОЗОВ
Свенская Ю.И., Ленгерт Е.В., Савельева М.С., Верховский Р.А., Бучарская А.Б., Терентюк Г.С., Генина Э.А., Тучин В.В.
Саратовский Государственный Университет им. Н.Г. Чернышевского, Саратов, Россия
TRANSDERMAL DELIVERY OF ANTIFUNGAL DRUGS IN THE TREATMENT OF SUPERFICIAL MYCOSES
Svenskaya Yu.I., Lengert E.V., Saveleva M.S., Verkhovskii R.A., Bucharskaya A.B., Terentyuk G.S., Genina E.A., Tuchin V.V.
Saratov State University, Saratov, Russia
Цель исследования - повышение терапевтической эффективности поверхностных антимикотиков, как следствие увеличения их аккумуляции в коже и ее придатках. Такой подход обеспечивает повышение локальной концентрации антимикотика в зоне поражения одновременно со снижением токсических эффектов, связанных с его приемом, и является целесообразным, поскольку при поверхностных микозах, как правило, поражаются поверхностные слои кожи и ее придатки, без вовлечения в патологический процесс других органов и тканей.
Материалы и методы. Микрочастицы карбоната кальция в поликристаллической модификации ватерита обладают рядом таких достоинств, как биосовместимость, мягкие условия разрушения, простота приготовления и низкая себестоимость. Пористость определяет эффективность включения лекарственных форм в их объем [Svenskaya Yu. I. Colloid Surf. B. 2016; Svenskaya Y.I. et al. Adv. Powder Technol. 2016; Svenskaya Y. et al. Biophys. Chem. 2013]. Трансдермальную доставку частиц осуществляли путем нанесения их суспензии на поверхность кожи белой лабораторной крысы in vivo с последующим внедрением в придатки кожи при помощи терапевтического ультразвука Dinatron 125 (Dinatronics) [Svenskaya Yu. et al. ACS Appl.Mater.Interfaces 2019; Zaytsev S.M. et al. J. Biophotonics, 2020]. In vivo мониторинг заполнения волосяных фолликулов частицами ватерита проводили методом оптической когерентной томографии (ОКТ) с помощью прибора OCP930SR 022 (Thorlabs). Исследование кинетики интрафолликулярной деградации частиц выполняли с применением сканирующей электронной микроскопии на приборе MIRA II LMU (Tescan). Иммобилизацию антимикотика в частицы ватерита осуществляли методом копреципитации в процессе синтеза [Lengert E. et al. Mater.Lett 2019; Gusliakova O. I. et al. Optics and Spectroscopy 2019]. Оценку загрузки носителей проводили методами высокоэффективной жидкостной хроматографии на установке Stayer HPLC-UV (Аквилон) и спектрофлуориметрии с помощью фотометра Synergy H1 (BioTek). Подтверждение факта аккумуляции ватеритных носителей и иммобилизованного антимикотика в волосяных фолликулах крысы произведено методами ОКТ, а также конфокальной лазерной сканирующей микроскопии с помощью прибора Leica TCS SP8. Изучена кожная токсичность и обратимость кожных реакций при применении разработанной методики транс-дермальной доставки антимикотика на кроликах in vivo.
Результаты. Поверхностное применение ватеритных частиц на белых лабораторных крысах в сочетании с сонофорезом in vivo привело к обильному и глубокому заполнению волосяных фолликулов, что показало эффективность транс-дермальной доставки и аккумуляции. Продемонстрировано, что частицы полностью резорбируются в фолликулах в течение 12 дней. Выявлена успешность иммобилизации антимикотиков в их объем, а также интафолликулярной доставки и аккумуляции иммобилизованных антимикотиков in vivo. Установлено, что применение разработанной методики трансдермальной доставки антимикотиков не вызывало видимого повреждения всех слоев кожи кроликов, неспецифическая воспалительная реакция в дерме в ответ на введение контейнеров, развитие которой было выявлено при гистологическом исследовании, спадала через месяц, строение кожи приближалось к норме, что служит показателем обратимости всех изменений.
Заключение. Предлагаемый способ доставки антимикотиков через придатки кожи к местам непосредственной локализации патологических процессов при помощи пористых микрочастиц ватерита можно рассматривать как перспективный, поскольку он обеспечивает адресность, эффективность и неинвазивность.
Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (проект № 17-73-20172).
