Научная статья на тему 'Тонкослойная гель-хроматография в анализе некоторых низкомолекулярных растительных белков'

Тонкослойная гель-хроматография в анализе некоторых низкомолекулярных растительных белков Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

CC BY
307
46
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Журнал
Пиво и напитки
ВАК
Ключевые слова
ЛЕЙКОЗИН ЯЧМЕННОГО ЗЕРНА / ЛЕЙКОЗИН ЯЧМЕННОГО СОЛОДА / ТОНКОСЛОЙНАЯ ГЕЛЬ-ХРОМАТОГРАФИЯ / ЭДЕСТИН / LEIKOSIN BARLEY-CORN / LEIKOSIN BARLEY-MOLT / EDESTIN / THING-LAYER CHROMATOGRAPHY

Аннотация научной статьи по промышленным биотехнологиям, автор научной работы — Гурковская Е. В., Грузинов Е. В.

Рассмотрены вопросы определения качественного и количественного состава растительных низкомолекулярных белков методом тонкослойной гель-хроматографии.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Thin-Layer Gel Chromatography in the Analysis of Some Low Molecular Weight Proteins of Plant

The article deals with the definition of qualitative and quantitative composition of plant low molecular weight proteins by thin layer gel chromatography.

Текст научной работы на тему «Тонкослойная гель-хроматография в анализе некоторых низкомолекулярных растительных белков»

контроль

УдК 663.432

Тонкослойная

гель-хроматография в анализе некоторых низкомолекулярных растительных белков

Е. В. Гурковская, канд. хим. наук, профессор; Е. В. Грузинов, д-р хим. наук, профессор Московский государственный университет технологий и управления им. К Г. Разумовского

Ключевые слова: лейкозин ячменного зерна; лейкозин ячменного

солода; тонкослойная гель-хроматография; эдестин.

Keywords: leikosin barley-corn; leikosin barley-molt; edestin; thing-layer chromatography.

Качественный и количественный состав белков ячменя сложен и непостоянен. Изменения его в процессе солодоращения и сушки приводят к обогащению солода азотистыми веществами с различной молекулярной массой, роль которых неоднозначна в пищевых технологиях.

Несмотря на то что белковые вещества образуют только незначительную часть экстракта сусла (от 3,1 до 5,6%), в ходе технологических процессов пивоварения они оказывают чрезвычайно большое влияние на экстрактивные вещества ячменя и солода, которые можно рассматривать как важнейшие составные части ячменя, влияющие на производственные процессы и качество конечного продукта.

Следовательно, пивоварение предъявляет особые требования как к общему содержанию белковых веществ, так и к соотношению отдельных азотсодержащих соединений. Ячмени с содержанием менее 9% белка дают пиво с низкой пенистостью, а более 12% согреваются при солодораще-нии. Поэтому в пивоваренных ячменях содержание белка должно быть от 9 до 12%. В последнее время требования к качеству пивоваренных ячменей указывают на прямую связь между фракционным содержанием белков в сырье и качеством готового продукта.

Степень белкового растворения, оцениваемая числом Кольбаха, также ухудшается с повышением содержания в ячмене белковых веществ. При неудовлетворительном белковом растворении ухудшается пенообразова-ние. Перерастворенный солод резко ухудшает пеностойкость пива и обе-

дняет его вкус. Содержание белков в солоде ниже 7,5% может привести к недостаточному сбраживанию сусла, плохой пенистости и стабильности пива, а также получению пива с пустым вкусом. Белковые фракции с молекулярной массой (ММ) в интервале 12 000-60 ООО коррелируют с пенным числом пива (г +0,93 или г +0,95), белковые фракции, имеющие молекулярную массу выше 60 000, коррелируют со стабильностью пены (-0,92) [1].

В настоящее время добиться точного разделения белковых веществ очень сложно, поскольку их внутренние химические структуры изучены недостаточно.

Молекулярная масса как физико-химическая константа белка

Предложенный метод тонкослойной гель-хроматографии (ТСГХ) позволяет изучить факторы, влияющие на молекулярно-массовое распределение (ММР) белков, выявить зависимость молекулярно-массовых соотношений и установить возможность прогностической оценки качества ячменного зерна, муки и солода по составу образующих их белков с позиций современных требований промышленных технологий и условий производства.

В данном случае молекулярная масса служит для идентификации белка, проявления его функциональной активности и суждения о его чистоте. Возможности определения молекулярных характеристик белков существенно расширяются при наличии линейной зависимости удерживаемого объема V. от логарифма ММ

биополимера ^ М.. В отличие от нелинейной такая связь позволяет рассматривать хроматограмму как зеркальное отображение молекулярно-массового распределения анализируемого образца в логарифмическом масштабе. В результате упрощается и ускоряется обработка хромато-графических данных и появляется возможность калибровки хромато-графической системы, что улучшает интерпретацию хроматограммы в ММР. В варианте ТСГХ вместо объема выхода V. длину пробега исследуемого вещества относят к пути, пройденному стандартным веществом, а точность определения ММ (по сравнению с анализом на колонках) компенсируют статистической обработкой повторных результатов ряда параллельных опытов [2, 3].

Предложена и разработана методика анализа низкомолекулярных белков лейкозина и эдестина ячменного зерна, муки и солода, определяющая качество исходного сырья и конечного продукта. Для ячменей получены рекомендации моделирования технологического процесса производства пива соответственно белковому составу, что позволяет повышать экономичность процесса пивоварения и улучшает ор-ганолептические показатели качества готовой продукции.

Вопросы пробоподготовки и идентификации исследуемых веществ

Выбранная система пробоподготовки обеспечивает хорошую воспроизводимость и селективность результатов (%). Обсуждение большого материала по аналитическому исследованию белков основывается на том выводе, что все исследованные образцы одинаковы по фракционному составу в качественном отношении. Различия заключаются в количественном соотношении фракций.

Фракционные белки ячменя и муки экстрагировали по модифицированной схеме Осборна: дистиллированной водой (6 мл); 10%-ным раствором хлорида натрия или 5%-ным раствором сульфата калия (3,5 мл); 70%-ным раствором этанола с предшествующей обработкой 40%-ным раствором этанола (по методу Полло-ка) с целью удаления антоцианогенов (3,0 мл) и 0,2%-ным раствором едкого натра (2 мл).

Фракционные белки солода экстрагировали: дистиллированной водой

40 ПИВО и НАПИТКИ 5 • 2012

Чонтроль КАЧЕСТВА

(5 мл); 10%-ным раствором хлорида натрия (3,5 мл); 70%-ным раствором этанола (3,5 мл); 0,2%-ным раствором едкого натра (3 мл) или 4 мл концентрированной аскорбиновой кислоты (10%-ный раствор).

Время экстракции на каждом этапе — 30-40 мин при температуре 22...50 °С (при получении фракций эдестина температуру повышали до 70 °С).

Суммарные белки экстрагировали 0,2%-ным раствором едкого натра в 50%-ном этаноле.

Для калибровки исследуемых белков по значению логарифма их ММ применяли белки-маркеры: инсулин цепи Б (6000), рибонуклеаза (13 700), химотрипсин (25 000), альбумин яичный (43 000), сывороточный бычий альбумин (68 000). Белки-маркеры растворяли в дистиллированной воде (0,2 мг белка в 0,05 мл воды) с добавлением 0,1н. НС1. Применяемые сорбенты — Сефадекс G-50, G-75, G-100, G-150, G-200 «суперфайн». В качестве элюирующих систем использовали дистиллированную воду (рН 7,0), слабые солевые растворы (8% №С1); фосфатно-буферные растворы (рН 9,1; рН 8,5; рН 8,0; рН 6,8; рН 5,8; рН 4,5) [4]. Результаты разделения переснимали на хроматографическую бумагу Filtrak FN PN 7, Filtrak FN PN 3 (Германия), Watman 3 ММ с последующим детектированием белков 0,02%-ным раствором «Амидочерный 10Б в смеси этанол : уксусная кисло-

та : вода (5 : 4 : 1). Бумажные реплики высушивали в сушильном шкафу при температуре 120 °С в течение 5-10 мин, а затем отмывали в той же смеси без красителя.

Количественную оценку осуществляли на денситометре «Ден-Скан 1», сканнерах «Shimadzy CS-920», «Са-та^2» [1, 2].

Лейкозины и эдестины ячменя

До настоящего времени исследование ячменя методом ТСГХ не проводили, хотя отмечена необходимость изучения фракционного белкового состава зерна в процессе пивоварения, так как ТСГХ имеет ряд преимуществ по сравнению с другими методами анализа и достигает большой чувствительности при оптимизации условий разделения, что исключительно важно в контроле за технологическим процессом [1, 4].

Следует отметить, что при разделении эдестинов (глобулинов) с помощью электрофореза на четыре компонента наблюдаются большие различия по ММ: а-глобулин 26 000, Р-глобулин 100 000, у-глобулин 166 000, 5-глобулин 300 000. Особое значение в технологии изготовления пива придают р-глобулину, непосредственно влияющему на биологическую стабильность пива (холодное помутнение). То, что глобулины имеют очень низкую изоэлектрическую точку (рН 4,9), которая при варке сусла обычно не достигается, а также высокое со-

_р_ш.

в 1Г& ЦШг ж-

^ г I ^

*

Щ

- § *

'Ж--

III

л ■'й-'.'

Рис. 1. Хроматограммы:

а — эдестинов ячменного зерна сортов

Р — Рудик, Ю — Юбилант, Б — Биос-1, К — Крона; б — суммарных белков пива сортов

П — Пльзень, Ж — Живец, М — Московское; в — лейкозинов (муки, солода, зерна)

держание серы, может явиться причиной появления мути в разлитом в бутылки пиве. С помощью ТСГХ на G-50 в лейкозине зерна обнаружили 7 низкомолекулярных фракций с ММ от 3500 до 36 000, а в лейкозине муки — 5 фракций с ММ от 6000 до 30 000. В лейкозине солода — 8 фракций (в зависимости от рН элюента) с ММ соответственно от 2600 до 27 000, в эдестине — 7 фракций с ММ от 3300 до 31 000. На G-75 получено 10 фракций лейкозина зерна с ММ от 4600 до 6800; 9 фракций лейкозина ячменной муки с ММ от 5600 до 7500 и 7 фракций лейкозина солода с ММ от 3600 до 24 000 [1, 4].

На рис. 1 представлены хромато-граммы низкомолекулярных белков — эдестинов сортовых ячменей, суммарных белков пива и лейкозинов зерна, муки и солода.

Данные хроматографического анализа эдестинов позволили выявить сортовые особенности зерна ячменя. Сорт Юбилант показал присутствие всего одной белковой фракции с ММ 18 000, тогда как для других сортов оказалось характерным наличие как минимум двух фракций белка с ММ > 10 000. Все сорта показали не менее двух фракций в диапазоне ММ 26 000-28 000, а это отвечает определенному методом центрифугирования а-компоненту эдестина с ММ 26 000 [5].

Результаты разделения ^-200, элюент — фосфатный буфер, рН 8,5, р = 20°, t = 180 мин) показали: шесть-восемь фракций эдестина с ММ от 7000 до 17 000 для сорта Биос-1; шесть фракций с ММ от 6800 до 12 400 для сорта Рудик; семь фракций с ММ от 6400 до 18 000 для сорта Юбилант и восемь фракций с ММ от 6600 до 16 600 для сорта Крона. Фракции эдестинов с ММ > 20 000 для этих сортов обнаружены не были (рис. 2).

Анализируя полученные результаты, можно сказать, что присутствие низкомолекулярных фракций белков и пептидов характерно для солода. С целью изучения высокомолекулярных фракций солерастворимых белков зерна ячменя — глобулинов, носящих видовое название эдестинов, известных в литературе как р-, у-, и 5-компоненты (ММ > 10000) [4, 6], непосредственно влияющих на биологическую стабильность пива, проводили разделение исследуемых сортов в оптимальных условиях элюирования ^-200, элю-

б

а

в

5 • 2012 ПИВО и НАПИТКИ 41

контроль КАЧЕСТВА"

ент — фосфатный буфер, рН 8,0, Р = 20°, t = 180 мин) по величине молекулярных масс (рис. 3).

Результаты показали: наличие восьми фракций эдестина с ММ от 7000 до 17 000 для сорта Биос-1; шести фракций с ММ от 6800 до 12 400 для сорта Рудик; семи фракций с ММ от 6400 до 18 000 для сорта Юбилант и восьми фракций с ММ от 6600 до 166 000 для сорта Крона. Фракции эдестинов с ММ > 20 000 для этих сортов обнаружены не были.

При анализе эдестинов в нейтральной и слабощелочной средах была обнаружена хроматографическая зона в виде яркого пятна на стартовой линии для каждого из сортов ячменя, что позволяет предположить наличие высо-кополимеризованных эдестинов в исследуемых нами образцах, известных в литературе как нативные эдестины с ММ в пределах 15 000-20 000 [5].

Именно в процессе солодоращения белки расщепляются ферментными комплексами до низкомолекулярных

1,61,41,2-

сорт Биос-1 (восемь фракций) сорт Рудик (восемь фракций)

4,5 5,0 [og ММ

сорт Юбилант (девять фракций) сорт Крона (девять фракций)

R г;.™ 1,8

Рис. 2. Фракционный состав лейкозинов сортовых ячменей,

определенный по логарифму ММ зависимости от относительной длинны пробега R на G-200, рН 8,5, р = 20°, t=180 мин

■ сорт Биос-1 (шесть фракций) сорт Юбилант (четыре фракции) • сорт Рудик (пять фракций) • сорт Крона (шесть фракций)

Рис. 3. Фракционный состав лейкозинов эдестинов ячменей,

определенный по логарифму ММ зависимости от относительной длинны пробега R на G-200, рН 8,5, р = 20°, t=180 мин

компонентов и аминокислот, которые служат строительным материалом для развивающегося зародыша и отвечают за стабильность пива и полноту вкусовых качеств. Полученные результаты обладают надежностью, воспроизводимостью и качественной значимостью, позволяющей использовать их в исследованиях белков при оценке их ММ, отвечающих за качество продукции [4].

В табл. 1 представлены сравнительные данные разделения лейкозина и эдестина ячменя методом ТСГХ и физико-химического анализа. Анализ данных позволяет утверждать, что, применяя ТСГХ, можно достичь разрешения, сопоставимого с результатами совместного действия колоночной ГПХ и электрофореза по отношению к водорастворимым фракциям белка зерна ячменя (определено до 23 фракций). В дальнейших исследованиях было установлено, что ТСГХ позволяет определить ММ высокомолекулярных фракций эдестина, гордеина и глютелина, что вызывало затруднения в колоночной ГПХ и осуществлялось исключительно электрофоретическим методом (гордеин). Как показали эксперименты, удачная комбинация ТСГХ и материаловедческих тестов подчеркнула выгодную особенность предлагаемого метода [4].

Количество низкомолекулярных фракций в солоде (ММ < 15 000) увеличивается в 3-4 раза. Заметно снижается содержание высокомолекулярных гордеинов, которые в ячменном зерне определяли в диапазоне ММ 30000-100000, а в солоде с преобладающим значением ММ до 30 000 [4].

Количественная характеристика фракционных белков ячменя, ячменной муки и солода

Полученные результаты качественного и количественного анализа белковых комплексов ячменя, муки и солода показывают перспективные возможности метода тонкослойной гель-хроматографии для изучения, контроля и управления биохимическими и технологическими процессами пивоварения [6]. Сопоставление результатов анализа фракционного разделения позволяет утверждать, что при прорастании зерна качественное соотношение белковых фракций смещено в сторону низкомолекулярных фракций. В ячменном зерне установлено наличие фракций пептидов с ММ от 2500 до 3600 [5].

42 ПИВО и НАПИТКИ 5 • 2012

г

Таблица 1

Метод исследования Лейкозины Эдестины

Количество фракций Молекулярная масса Количество фракций Молекулярная масса

Осаждение сульфатом аммония; электрофорез и ультрацентрифугирование (Квенцель) — — 4 а-Глобулин 26 000 р-Глобулин 100 000 у-Глобулин 166 000 5-Глобулин 300 000

Изоэлектрофокусировка Радола, Драверт, Голикова 20 Определение вели в градиенте плотностей в области значений рН 3-10. ММ не указаны

Колоночная гель-фильтрация с последующим определением оптической плотности (Нарцисс) 5 2600 4600 12 000 30 000 60 000 — —

Ультрацентрифугирование (Лундин, Сведберг) 3 35 000 — 21 500

Гель-хроматография (колоночный вариант) (Колчин) 6* <20000 20 000-40 000 40000-80000 80000-160000 >160000 — —

Метод ТСГХ G-50 (наши данные) 10 < 6000 6000-15000 15000-30000 > 30 000 6 < 6000 6000-15000 15000-30000 >30000

G-75 (наши данные) 16 < 6000 6000-15 000 15000-30000 30 000-60 000 > 60000 6 6000-15000 15000-30000 30 000-60 000 >60000

G-100 (наши данные) 16 < 6000 6000-15 000 15000-30000 30000-60000 60 000-100 000 > 100 000 9 6000-15000 15000-30000 30000-60000 60 000-100 000 > 100 000

G-200 (наши данные) 14 < 6000 6000-15 000 15000-30000 30000-60000 60 000-100 000 > 100 000 Макс. ММ 180 000 10 6000-15000 15000-30000 30000-60000 60 000-100 000 > 100 000 Макс. ММ 290 000

"Дальнейшее разделение проводили по величине изоэлектрической точки.

Разделение фракционных белков зерна на сефадексе G-100 при оптимальных условиях разделения (рН 8,5; Р = 20°) позволило обнаружить девять фракций лейкозина с ММ в пределах от 6700 до 76 000; шесть фракций эде-стина с ММ от 6700 до 16 600; запасные белки зерна разделились: горде-ин — на семь фракций с ММ от 9500 до 170000, глютелин — на пять фракций с ММ от 8000 до 160 000.

В тех же условиях проводили разделение белков ячменной муки. Водо- и солерастворимые белки разделились на восемь и шесть фракций в диапазоне ММ 6800-7200 для лейкозина и 8000-13 500 для эдестина. Гордеин разделился на семь фракций с ММ от 10 000 до 14 000, глютелин — на пять фракций с ММ от 80000 до 120000.

Анализ белковых фракций солода на сефадексе G-75 в оптимуме усло-

вий разделения (р = 15°, время элюи-рования t = 120 мин, элюент — фосфатный буферный раствор, рН 5,8) представил 10 фракций лейкозина с ММ от 4800 до 17 000 и семь фракций эдестина с ММ от 6300 до 38 000. Спирто- и щелочерастворимые белки разделились: гордеин — на шесть фракций с ММ от 25 500 до 86 000; глютелин — на пять фракций с ММ от 46 600 до 78 000 [4, 6].

Процесс солодоращения характеризуется не только увеличением количества низкомолекулярных фракций белка и пептидов, но также распадом высокомолекулярных запасных белков (ММ >100 000), количество которых уменьшается с 14% в зерне до 4% в солоде. Заметно снижается содержание высокомолекулярных гордеинов, которые в ячменном зерне определяли в основном в диапазоне ММ 30 000-

100000, а в солоде определяли гордеи-ны с преобладающим значением ММ до 30000.

Количественные характеристики молекулярного состава фракционных белков ячменя, муки и солода представлены в табл. 2, 3 и 4. Как было сказано выше, при солодоращении полностью исчезают высокомолекулярные фракции эдестина ММ > 100 000, а количество низкомолекулярных фракций с ММ < 150 00 увеличивается в 3-4 раза.

Таким образом, по существу результатов анализа растительных низкомолекулярных белков методом ТСГХ установлена возможность прогностической оценки качества ячменного зерна, муки и солода по составу образующих ее белков, связанных с макромолекулярными компонентами злаков и получаемого из них сырья.

5 • 2012 ПИВО и НАПИТКИ 43

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

контроль КАЧЕСТВА

Таблица 2

Молекулярная Зерно

масса Лейкозин, % к общ. Эдестин, % к общ. Гордеин, % к общ. Глютелин, % к общ.

< 6000 9,6 — — —

6000-15000 18,2 14,4 5,7 4,7

15000-30000 32,3 38,7 17,4 21,1

30 000-60 000 23,6 14,8 31,6 18,2

60 000-100 000 16,3 23,8 25,7 33,2

> 100 000 — 8,3 19,6 12,8

Таблица 3

Молекулярная Мука

масса Лейкозин, % к общ. Эдестин, % к общ. Гордеин, % к общ. Глютелин, % к общ.

< 6000 6,2 — — —

6000-15000 11,3 12,1 3,1 2,0

15000-30000 37,8 30,2 15,2 20,3

30 000-60 000 28,7 19,1 34,3 19,6

60 000-100 000 16,0 27,9 27,3 36,7

> 100 000 — 10,7 20,1 11,4

Таблица 4

Молекулярная Солод

масса Лейкозин, % к общ. Эдестин, % к общ. Гордеин, % к общ. Глютелин, % к общ.

< 6000 29,6 30,4 — —

6000-15000 24,7 16,8 23,1 26,7

15000-30000 26,3 31,2 29,8 38,9

30 000-60 000 11,9 8,8 24,6 16,8

60 000-100 000 7,5 12,8 14,3 23,6

> 100 000 — — 8,2

Исследования белков в пивоваренных ячменях, муке и солоде выявили закономерности сортовых различий, что позволяет контролировать качество исходного растительного сырья и моделировать технологический процесс получения пива соответственно анализу белкового состава и управлять им в зависимости от полученных белковых характеристик. Присутствие белков со значением молекулярных масс в диапазоне от 2800 до 32 000 указывает на закономерность изменения технологического процесса, а выявленные высокомолекулярные белки оказывают существенное влияние на потери в технологическом процессе и в конечном итоге на качество готового продукта.

Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод, что ТСГХ можно эффективно применять на всех стадиях товароведения для экспертных оценок растительного сырья, промежуточной и готовой продукции, при хранении и переработке как в зерноперерабатывающей, пивобезал-когольной промышленности, так и в смежных отраслях.

ЛИТЕРАТУРА

1. Гурковская, Е. А. Исследование белков злаков в условиях тонкослойной эксклюзионной хроматографии (Обзор)/Е. А. Гурковская // Сорбционные и хроматографические процессы. — 2006. — Т. 6. — Вып. 4. — С. 503-545.

2. Гурковская, Е. А. Особенности тонкослойной хроматографии полимеров (Обзор)/Е.А. Гурковская // Прикладная химия. — 2008. — № 3. — Т. 81. — С. 374-383.

3. Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков // Пер. с англ. Ю. Б. Алахова, Ц. А. Егорова; под ред. Ю. А. Овчинникова. — М.: Мир, 1974.

4. Гурковская, Е. А. Исследование макромо-лекулярных компонентов злаков в тонкослойной эксклюзионной хроматогра-фии/Е. А. Гурковская // Сорбционные и хроматографические процессы. — 2006. — Т. 6. — Вып. 6. — Ч. 4. — С. 1381-1392.

5. Голикова, Н.В. Белки в пивоварении/Н. В. Голикова. — М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981.

6. Гурковская, Е. А. Исследование влияния сортовых особенностей на качественный и количественный состав белков ячменя, муки и солода в ТСЭХ/Е. А. Гурковская // Сорбци-онные и хроматографические процессы. — 2006. — Т. 6. — Вып. 4. — С. 606-611. &

ООО «Корона Поволжья»

Пивоваренная компания ООО «Корона Поволжья» была открыта в городе Волгограде в 2002 г. Завод оснащен современным оборудованием (производитель — фирма из Венгрии), позволяющим варить высококачественное пиво круглосуточно. Весь процесс пивоварения контролируется и управляется автоматическим центральным пультом.

Предоставленная классическая немецкая технология производства пива, высококачественный солод, лучшие сорта чешского, немецкого ароматного и горького хмеля придают пиву легкий насыщенный вкус с приятной легкой хмелевой горечью.

В отличие от других пивоваренных заводов наша компания не использует в приготовлении пива другое сырье, кроме солода, хмеля, дрожжей, что гарантирует высокое качество и чистый вкус выпускаемой нашей компанией продукции.

В 2007 г. на пивоваренном заводе была проведена модернизация оборудования для увеличения производительности и качества выпускаемой продукции.

На предприятии работают квалифицированные технологи, прошедшие обучение и стажировку на европейских пивоваренных заводах.

На заводе имеется оснащенная современным оборудованием лаборатория, которая ежедневно занимается контролем технологического процесса и выпускаемой продукции, следит за микробиологическими и санитарными нормами пива, что гарантирует чистоту и качество продукта, отпускаемого в реализацию.

44 ПИВО и НАПИТКИ 5 • 2012

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.