CC BY
82
фагоцитарной активности нейтрофилов на 15...20 %, фагоцитарного индекса - на 15.16 %, фагоцитарного числа - на 21.25 %, фагоцитарной емкости нейтрофилов - на 10.12 %, количества Т-лимфоцитов на 18. 35 %, В-лимфоцитов - на 30.50 %.
Один из наиболее эффективных методов детоксикации организма животных - энтеросорбция. Современные сорбенты имеют различную природу и структуру активной поверхности, что обусловливает широкий диапазон молекул, с которыми возможно взаимодействие. Однако в последние годы все большее применение находят средства естественного происхождения. Так, у кроликов, получавших на фоне сочетанной затравки бентонит, на 10, 20 и 30 сут. количество эритроцитов уменьшалось на 5,7; 10,2 и 9,6 %, гемоглобина - на 3,4; 5,2 и 5,5 %, а количество лейкоцитов увеличивалось на 12,9; 14 и 10,5 %, соответственно.
У животных, которым давали цеолит, на 10, 20 и 30 сут. количество эритроцитов и гемоглобина колеба-
лось на уровне фоновых показателей, а лейкоцитов
- увеличивалось на 10,3, 14 и 17,8 % соответственно.
У кроликов, получавших вместе с токсикантами бентонит, фагоцитарная активность нейтрофилов понижалась на 9.12 %, фагоцитарный индекс - на 18. 20 %, фагоцитарное число - на 20.34 %, фагоцитарная емкость нейтрофилов - на 9.14 %. В группе, которой одновременно с затравкой давали цеолит, величины этих показателей уменьшались соответственно на 10.13, 16.18, 19.34, 8.15 %.
Выводы. Применение минеральных сорбентов
- эффективное средство для нормализации иммуно-логичеких показателей при сочетанном отравлении животных ртути дихлоридом и Т-2 токсином. Введение в рацион сорбентов предотвращает изменения гематологических и биохимических показателей, оказывает положительное влияние на естественную резистентность и иммунобиологическую активность организма кроликов.
Литература.
1. Трахтенберг И.М., Коршун М.Н., Козлов К.П. Ртуть как глобальный химический загрязнитель // Токсикологический вестник. - 2006. - № 3. - С. 2-8.
2. Гайсин И.А. К проблеме агроэкологической безопасности в Республике Татарстан. // Агроэкологическая безопасность в условиях техногенеза: Сборник научных докладов международного симпозиума. - Казань: Меддок, 2007. - С. 75-77.
3. Стрельников В.В., Хмара И.В. Основные классы токсических элементов. // Ветеринария с/х животных. - 2006. - № 5. - С. 63-66.
4. Пономаренко А.М., Степанова Н.Ю., Латыпова В.З., Перевозников М.А. Особенности распределения ртути в тканях и органах рыб в модельном эксперименте. // Токсикологический вестник. - 2007. - № 1. - С. 22-25.
5. Иванов А.В., Тремасов М.Я., Папуниди К.Х. и др. Микотоксикозы животных (этиология, диагностика, лечение, профилактика). - М.: Колос, 2008. - 177с.
INDICATORS OF NATURAL RESISTANCE OF THE ORGANISM OF RABBITS AT THE POISONING OF HYDRARGYRUMS DICHLORIDE AND T-2 TOXIN AND USE OF SORBENTS D.R. Sharafutdinova, V. A. Novikov, E.K. Papunidi
Summary. The purpose of the present research was studying of natural resistance and immunobiological reactivities of an organism at an intoxication of Hydrargyrums dichloride and T-2 toxin, and also efficiency application of sorbents at combined poisoning. Combined influence on rabbits of Hydrargyrums dichloride and T-2 toxin reduced quantity of erythrocytes on 2,5-23 %; hemoglobin - on 13,220 %, phagocytic activity of neutrophils on 15-20 %, a phagocytic index - nal5-16 %, phagocytic number - on 21-25 %, phagocytic capacity of neutrophils - on 10-12 %, quantity T-lymphocyte decreased for 18-35 %, B-lymphocyte - on 30-50 %.
In group of the rabbits receiving together with Hydrargyrums dichloride and T-2 by toxin bentonite, phagocytic activity of neutrophils went down on 9-12 %, a phagocytic index - on 18-20 %, phagocytic number - on 20-34 %, phagocytic capacity of neutrophils - on 9-14 %.
In group which it is simultaneous with a priming set zeolite, phagocytic activity of neutrophils went down on 10-13 %, a phagocytic index - on 16-18 %, phagocytic number - on 19-34 %, phagocytic capacity of neutrophils - on 8-15 %.
Application of mineral sorbents is an effective remedy for normalization immune indicators at combined poisoning of Hydrargyrums dichloride and T-2 toxin.
Key word: heavy metals, mercury, mycotoxins, T-2 toxin, sorbents, bentonite, zeolite.
УДК: 619:632.95.02:574
ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СОЧЕТАННОГО
ВОЗДЕЙСТВИЯ дециса и т-ЖИВОТНЫХ
В.И. ЕГОРОВ, кандидат биологических наук, зав. лабораторией
Г.Г. ГАЛЯУТДИНОВА, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник И.М. ЕРЕМЕЕВ, аспирант
А.В. ИВАНОВ, член-корреспондент РАСХН, директор ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности»
E-mail: [email protected]
ТОКСИНА НА ОРГАНИЗМ
Резюме. Цель наших исследований - токсикологическая оценка сочетанного воздействия дециса и Т-2 токсина на организм животных. Среднесмертельная их доза для белых крыс при раздельном воздействии составляет 45,8 и 3,0 мг/кгсоответственно, при сочетанном - 38,3 и 1,8 мг/кг; для кроликов при раздельном - 356,7и 0,54 мг/кг, при сочетанном - 290,0 и 0,46 мг/кг, что свидетельствует о взаимоуси-ливающем действии токсикантов. Коэффициент их кумуляции равен 4,8, что характерно для веществ с умеренной кумуляцией. Сочетанное воздействие дециса и Т-2 токсина на уровне
существующих ПДК для каждого из соединений оказывает эмбриотоксическое и тератогенное действие на организм белых крыс: предимплантационная гибель плодов увеличивается относительно контроля на 40,5 %, постимплантационная гибель - на 47,1 %, общая эмбриональная смертность - на
40.6 %. Доля мертворождений в группе, подвергшейся сочетанному воздействию дециса и Т-2 токсина, была выше, чем в контроле, в 2,2 раза, в группах, получавших раздельно децис и Т-2 токсин, - в 1,7 и 2,1 раза соответственно. По таким показателям, как время отлипания ушей, срок опушения, прозрения и прорезывания резцов значительных различий между опытными группами и контрольной не отмечалось. Сочетанное воздействие дециса и Т-2 токсина при однократном и многократном введении характеризуется более тяжёлыми клиническими, гематологическими, биохимическими и патоморфологическими изменениями, чем раздельное действие токсикантов. Оно сопровождается уменьшением количества лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина на 26,3, 27,8 и
33.6 % соответственно, общего белка - на 19,2 %. Ключевые слова: синтетические пиретроиды, микотоксины, децис, Т-2 токсин
Возрастающая потребность человека в полноценных продуктах питания ставит перед производителями новые задачи, среди которых в первую очередь нужно отметить экологическую безопасность пищи [1]. Ухудшение экологической обстановки, несоблюдение агротехнических мероприятий, правил уборки, транспортировки и хранения кормов приводит к загрязнению их микроскопическими грибами, многие из которых вырабатывают микотоксины. Попав в организм, последние вызывают биохимические, иммунологические и функциональные нарушения, ингибируют синтез белков, угнетают активность многих ферментов, тем самым, вызывая острые и хронические отравления животных [2]. Один из факторов, увеличивающих опасность загрязненных кормов микотоксинами, - возможное их сочетание с пестицидами, среди которых широкое распространение получили синтетические пиретроиды. Проблема снижения негативного влияния ксенобиотиков на организм животных - сегодня актуальна для животноводства многих стран [3].
В связи с этим назрела необходимость разработки усовершенствованной системы токсикологического контроля безопасности кормов при сочетанном их загрязнении микотоксинами и пиретроидами.
Цель наших исследований - изучить влияние дециса и Т-2 токсина на организм животных при совместном их поступлении.
Условия, материалы и методы. Для экспериментальных исследований использовали кристаллический децис, содержащий 98,2 % активного действующего вещества - дельтаметрина, и кристаллический Т-2 токсин, полученный в лаборатории микотоксинов. В качестве продуцентов микотоксина использовали гриб Fusarium врогоТг1сЬ1е11а, штамм 2м 15.
Расчёт токсических доз проводили по методу Кер-бера (1931). Кумулятивные свойства определяли по методу Лима и др. (1961) с выявлением коэффициента кумуляции по формуле Кагана Ю.С., Станкевича В.В. (1964), острую и хроническую токсичность - общепринятыми методами.
В эксперименте по определению кумулятивных свойств дециса и Т-2 токсина при их сочетанном воздействии использовали белых крыс, которым в течение 19 сут. перорально вводили изучаемые вещества в дозах 1/10 ЛД50, увеличивая её через каждые 4 сут. в 1,5 раза.
Эмбриотоксическое действие дециса и Т-2 токсина определяли в соответствии «Методическим
указаниям по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияние их на репродуктивную функцию».
Изучение эмбриотоксичности и тератогенности токсинов при их раздельном и сочетанном воздействии проводили на 48 самках белых крыс, разделённых на 4 группы по 12 гол. в каждой. Первая группа служила биологическим контролем, вторая получала децис, третья - Т-2 токсин, четвертая -одновременно оба токсиканта. Токсины задавали с 1 по 17 сут. беременности, в дозах на уровне ПДК каждого из них.
Токсичность дециса и Т-2 токсина при многократном воздействии определяли на белых крысах с массой тела 170.180 г. Для этого были сформированы 4 группы животных по 12 гол. в каждой. Крысам первой группы внутрижелудочно задавали растворители в аналогичном объёме, второй - децис, третьей - Т-2 токсин, животные четвёртой группы получали одновременно оба токсиканта. Во всех случаях их доза составляла 1/10 ЛД50.
В ходе экспериментов изучали клиническое состояние животных, потребление корма и воды, изменение массы тела, температуры, частоты пульса и дыхания, регистрировали продолжительность жизни, патологоанатомическую картину. После проведения необходимых процедур, обусловленных целью и задачами эксперимента, путём декапитации брали кровь для исследований.
Количество эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина в периферической крови определяли по общепринятым методикам, глюкозу - ортотолуидино-вым методом, общий белок - рефрактометрически [4, 5], активность холинэстеразы - по методу Хестрина в модификации Панюкова П.Н. (1996), биохимические показатели сыворотки крови - на анализаторе EXPRESS PLUS.
Индикацию дециса проводили методом ГЖХ на хроматографе «Dimension-1», а Т-2 токсина - методом ТСХ и биоавтографии.
Результаты и обсуждение. В ходе экспериментов установлено, что среднесмертельная доза дециса для крыс при раздельном поступлении составляет 45,8 мг/ кг, Т-2 токсина - 3,0 мг/кг, при сочетанном воздействии
- 38,3 и 1,8 мг/кг соответственно.
Среднесмертельная доза дециса для кроликов составила 356,7 мг/кг, Т-2 токсина - 0,54 мг/кг, а при сочетанном воздействии 290,0 и 0,46 мг/кг соответственно.
Гибель крыс в опыте по определению кумулятивых свойств токсинов началась на 15 сут. с начала их введения, а на 19 сут. погибли 50 % животных.
При многократном введении дециса и Т-2 токсина дозы, вызывающие гибель 50 % животных, составили 219,3 и 14,3 мг/кг соответственно, что значительно ниже, чем при раздельном поступлении каждого из них.
Коэффициент кумуляции изучаемых токсинов при сочетанном воздействии для крыс составил 4,8, что согласно принятой классификации (Медведь Л.И., 1964) соответствует умеренной кумуляцией.
В опыте по изучению эмбриотоксичности и тератогенности предимплантационная гибель плодов (см. табл.) в группах, получавших децис и Т-2 токсин раздельно, увеличилась, по сравнению с контрольной, на 7,9 и 34,8 % (р<0,01) соответственно, а при сочетанном воздействии - на 40,5 % (р<0,001).
Таблица. Эмбриотоксические свойства дециса и Т-2 токсина при их раз-
дельном и сочетанном воздействии на крыс (n=6)
Показатель Группа животных
Ii II III IV
Число:
желтых тел 12,5±0,35 12,35±0,4 12,06±0,15 11,95±0,1
мест имплантаций 11,31±0,2 11,08±0,25 10,52±0,4 10,35±0,36*
живых плодов 10,35±0,6 10,06±0,24 9,46±0,18 9,06±0,39
мертвых плодов 0,96±0,5 1,02±0,41 1,06±0,61 1,29±0,35
Гибель, %:
доимплантационная 9,5±0,56 10,25±0,68 12,81 ±0,51 ** 13,35±0,5***
постимплантационная 8,5±0,61 9,2±0,7 10,1 ±0,4 12,5±0,25***
Общая эмбриональная смертность, % 17,2±0,8 18,54±0,91 21,56±0,75** 24,18±0,78***
Выживаемость, % 82,8±0,9 81,5±1,0 78,4±0,9* 75,8±1,0***
Краниокаудальный размер плода, см 3,05±0,06 2,98±0,05 2,91±0,07 2,85±0,04*
Масса плода, г 2,95±0,08 2,89±0,07 2,82±0,07 2,76±0,08
* р <0,05, **р < 0,01, ***р < 0,001
Постимплантационная гибель плодов во второй группе оказалась больше, чем в первой, на 8,2 %, в третьей - на 18,8 %, в четвёртой - на 47,1 % (р<0,001).
Наименьший рост эмбриональной смертности, по сравнению с контролем, отмечен у животных, получавших только децис - 7,8 %, при поступлении Т-2 токсина она увеличилась на 25,4 % (р<0,01), а при введении их совместно - на 40,6 % (р<0,01).
Краниокаудальный размер плода крыс, которым давали децис и Т-2 токсин раздельно, был ниже, чем в контроле, на 2,3 и 4,6 % соответственно, а при их совместном введении - на 6,6 % (р<0,05).
Кроме того, в опытных группах наблюдалось уменьшение массы плодов, по сравнению с контрольной.
Топография костных и хрящевых закладок в скелете не нарушалась. У плодов крыс, получавших токсины, отмечали задержку окостенения осевого скелета, закономерное отставание в формировании хвостовых позвонков, пястных и плюсневых костей. У большинства плодов, при сочетанном воздействии дециса и Т-2 токсина, оставались неокрашенными последние крестцовые позвонки, кости плюсны и пясти, последние кости грудины. У плодов крыс, получавших раздельно децис и Т-2 токсин, эти процессы были менее выражены.
При изучении постнатального развития потомства самок заметных изменений в продолжительности беременности у крыс опытных групп, по сравнению с контрольной, не наблюдалось.
Самый высокий процент мертворождений относительно контроля отмечен в четвёртой группе - в 2,2 раза (р<0,001), в группах, получавших раздельно децис и Т-2 токсин, он был больше в 1,7 (р<0,001) и 2,1 (р<0,001) раза соответственно. В четвёртой группе наблюдался и самый высокий процент постнатальной смертности крысят к 28-му дню жизни, где он был больше, чем в контроле, в 2,2 раза (р<0,001), тогда как во второй и третьей группах - в 1,1 и 1,9 (р<0,01) раза соответственно. По таким показателям, как время отлипания ушей, срок опушения, прозрения и прорезывания резцов значительных различий между группами не наблюдалось.
При многократном воздействии клинические признаки отравления в более ранние сроки начали проявляться в группе крыс, получавших совместно оба токсиканта. Они характеризовались взъерошенностью шёрстного покрова, шаткостью походки, диареей, также отмечались эрозии и некрозы кожи губ и слизистых оболочек ротовой полости.
У крыс, затравленных только децисом, количество эритроцитов, по сравнению с контролем, на 20 сут. снизилось на 23,7 % (р<0,05), у животных, получавших Т-2 токсин, - на 26,6 % (р<0,01), при сочетанном введении токсикантов - на
27.8 % (р<0,01).
Количество лейкоцитов во второй группе крыс (де-цис) в этот же срок увеличилось на 16,1 %, в третьей (Т-2 токсин), наоборот, уменьшилось на 30,5 % (р>0,05), в четвёртой группе снижение составило 26,3 %.
Содержание гемоглобина во второй группе на 20 сут. оказалось меньше, чем в контроле, на 27,3 % (р<0,001), в третьей - на 29,0 % (р<0,001), в четвёртой
- на 33,6 % (р<0,001).
СОЭ во второй группе увеличилась на 20 сут. на 92,3 % (р<0,001), в третьей - на 43,8 % (р<0,001), в четвёртой - на 53,8 % (р<0,001). Уменьшение содержания глюкозы в крови животных второй группы, по сравнению с контрольной, в этот же срок составило
28.8 % (р<0,001), в третьей - 21,2 % (р<0,001), в четвёртой - 29,0 % (р<0,001).
Содержания общего белка в сыворотке крови крыс, получавших децис, к 20 сут. исследования снизилось на 11,6 %, Т-2 токсин - на 18,4 % (р<0,05), при сочетанном введении токсикантов - на 19,2 % (р<0,05).
Выводы. Результаты проведённых исследований свидетельствуют о том, что децис и Т-2 токсин при сочетанном воздействии на животных вызывают смертельный исход в меньших дозах, чем при раздельном введении.
Согласно принятой классификации при сочетанном воздействии изучаемые токсины обладают умеренной кумуляцией.
Совместное введение дециса и Т-2 токсина вызывает более выраженное эмбриотоксическое и тератогенное действие на организм самок белых крыс, чем раздельное.
Величины большинства гематологических и биохимических показателей крови животных указывают на то, что при многократном сочетанном воздействии дециса и Т-2 токсина, происходят более значительные изменения, чем при раздельном.
Литература.
1. Куликов С.П., Гулюшин С.Ю. Рациональные пути использования комплексного препарата для профилактики микотоксикозов //Материалы III Съезда фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации». - СПб, Издательство СПбГАВМ, 2011 г. - С. 286-288.
2. Тремасова А.М. Фармако-токсикологическое обоснование применения средств профилактики и лечения патулиноток-сикоза животных// Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2008. - №8. - с.60-63.
3. Майорова Т. Ветеринарно-гигиеническое обоснование применения природных минералов в качестве энтеросорбентов для животных и птицы // Корма и кормовые добавки. - 2008. - №9. - с.63-65.
4. Антонов Б.И., Яковлева Т.Ф., Дерябина В.И. и др. Лабораторные исследования в ветеринарии. - Биохимические и микологические: Справочник. - М.: Агропромиздат, 1991. - 288с.
5. Кондрахин И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник/ Под ред. И.П. Кондра-хина - М.: Колос., 2004. - 520 с.
TOXICOLOGICAL EVALUATION OF COMBINED EFFECTS OF DECIS AND T-2 TOXIN
IN THE ANIMAL ORGANISM V.I. Egorov, G.G. Galjautdinova, I.M. Eremeev, A.V. Ivanov
Summary. Conducted a toxicological assessment of combined effects of Decis and T-2 toxin on the body of animals. The studies yielded the following results. Average lethal dose of Decis and T-2 toxin to albino rats for the separate effects of: 45.8 and 3.0 mg / kg, respectively, when combined - 38.3 and 1.8 mg / kg for rabbits in the division: 356.7 and 0.54 mg / kg, combined - 290.0 and 0.46 mg / kg, indicating a synergistic action of toxicants, the coefficient of accumulation is 4.8, which is typical for substances with moderate cumulation. The combined effects of Decis and T-2 toxin at the level of current MACs for each toxin exerts embryotoxic and teratogenic effects on the body of white rats: pre-implantation loss of fetuses increases relative to controls by 40.5% postimplantation death - by 47.1%, the overall fetal mortality rate - by 40.6%. The highest percentage of stillbirths was observed with respect to the control group, subjected to combined effects of Decis and T-2 toxin - 2.2 times, in groups treated separately decis and T-2 toxin, - 1.7 and 2.1 times, respectively . On such indicators as the time of detachment of ears, the term of pubescence, insights, and the eruption of the incisors significant differences in the experimental groups relative to controls were observed. The combined effects of Decis and T-2 toxin after a single and repeated administration is characterized by more severe clinical, hematological, biochemical and pathological changes than when the effects of toxicants. Accompanied by a decrease in the number of leukocytes, erythrocytes and hemoglobin of 26.3,
27.8 and 33.6%, respectively, decrease in total protein by 19.2%.
Key words: synthetic pyrethroids, mycotoxins, decis, T-2 toxin.
УДК 619:615.3+619:615.9:636.4
ПРОБИОТИК - В КАЧЕСТВЕ ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО СРЕДСТВА ПРИ АФЛАТОКСИКОЗЕ ПОРОСЯТ
Т.А. ШАМИЛОВА, младший научный сотрудник Л.Е. МАТРОСОВА, кандидат биологических наук, зав. сектором
Э.И. СЕМЕНОВ, кандидат биологических наук, зав. лабораторией
А.В. ИВАНОВ, член-корреспондент Россельхоза-кадемии, директор
ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности»
E-mail: [email protected]
Резюме. Исследования проводили с целью изучения профилактической эффективности пробиотика Энтероспорин при афлатоксикозе. Опыт поставлен на поросятах-отъемышах крупной белой породы, в рационе которых присутствовал афлатоксин В1 в концентрации 80±5,0 мкг/кг. Первая группа служила контролем и получала обычный рацион. Поросятам второй группы дополнительно давали пробиотик Энтеро-спорин в дозе 3 мл. Использование пробиотика снижало негативное влияние афлатоксина на увеличение живой массы: среднесуточный прирост составил - 463 г/гол., против 420 г в контроле. Энтероспорин благоприятно влиял на содержание эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина в крови, которое было выше, чем в контроле, на 8,4, 17,3 и 8,2 % соответственно. Концентрация аЛт и АСТ в профилактируемой группе оставалась ниже относительно контроля на 20,2 и 31,9 % соответственно. Положительное действие пробиотика выражалось также в нормализации показателей белкового обмена, фагоцитарной активности нейтрофилов крови, содержания глюкозы.
Бактериологическое исследование содержимого толстого отдела кишечника показало увеличение численности условнопатогенных микроорганизмов и уменьшение популяционного уровня резидентной микрофлоры в контрольной группе. При использовании пробиотика количество бифидобактерий было выше, чем в контроле, на 53 %, лактобактерий - на 41,4 %. Популяционный уровень золотистого стафилококка, сальмонелл, дрожжей и плесени на 30 сут. исследования был ниже, чем в непрофилактированной группе, на 56, 48 и 25,4 %.
Ключевые слова: афлатоксикоз, пробиотик, поросята, микрофлора кишечника.
Исследования последних лет свидетельствуют о нарастающем поражении зерновых грибами рода Aspergillus, продуцирующими один из наиболее опасных микотоксинов, - афлатоксин В1. Потребление корма, содержащего афлатоксины, приводит к афла-токсикозу животных, который сопровождается снижением прироста массы тела, поражением желудочнокишечного тракта, уменьшением резистентности организма [1...3].
Поэтому вопросы его профилактики, включающие поиск эффективных и безопасных средств, остаются актуальными. Перспективное направление лечебнопрофилактических мероприятий при токсикозах животных - использование пробиотиков - стабилизированных культур симбионтных микроорганизмов или продуктов их ферментации [4...6].
Пробиотические препараты способствуют детоксикации микотоксинов, лучшему течению метаболических процессов в организме и усвоению питательных веществ, жизненно необходимых для хозяина, активизации иммунологического статуса и повышению его резистентности к неблагоприятным факторам окружающей среды [7, 8].
Цель нашей работы состояла в изучении профилактической эффективности пробиотика Энтероспорин на основе Bacillus subtilis-93 при афлатоксикозе поросят.
Условия, материалы и методы. Профилактическую эффективность пробиотика изучали на свинокомплексе ООО «Новая жизнь» Кукморского района республики Татарстан. При исследовании фуража,
