CC BY
66
Лекарственные растения
© ЧХЕНКЕЛИ В,А, -
ТОКСИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРОДУЦЕНТА CORIOLUS PUBESCENS (SHUM.: FR.) QUEL. И ПРЕПАРАТА, ПОЛУЧЕННОГО НА ЕГО ОСНОВЕ
В. А. Чхеикели.
(Иркутский филиал Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН, директор - к.в.н, В,Л. Тихонов)
Резюме. Представлены результаты токсико-биологичеекого исследования прсп. _е*та Coriolus pubescens 0663 й антимикробного препарата, получаемого на его основе. Ус~=-зелено, что гриб не является патогенным для млекопитающих, а препарат - малотоксичн=> его лдво составляет 5000 мг/кг и близка к пороговой по общетоксическому и дисбиотиче:- . действию. Местно-раздражающее и аллергенное действие препарата является слабовы: а - е--1ым. Ключевые слова: базиомицеты, биотехнология, токсичность.
В последние годы базидиальные грибы стали объектом пристального внимания исследователей. Способность к активному росту в условиях глубинного культивирования, в отличие от грибов других экологических групп этого класса, привлекают к ним внимание как к объектам биотехнологических исследований. В настоящее время особый интерес представляет изучение возможности их использования в качестве продуцентов антимикробных веществ, а также веществ, обладающих иммуностимулирующей активностью. Ранее на основе штамма гриба Coriolus pubescens 0663 , был разработан технологический ингредиент. обладающий антимикробной активностью [14], который внедрён в производство на ОАО "Дрожжевой завод", а также прошёл лабораторные, полупромышленные и промышленные испытания на ОАО "Кедр". Оценку токсичности технологического ингредиента проводили экспресс-методом in vitro с использованием анализатора токсичности [5,6]. Однако разработка новых лекарственных средств требует более тщательного медико-биологического обоснования безопасности их применения но критериям общетоксического действия, отдалённых и специфических последствий [7-9].
В связи с этим изучение токсико-биологичес-ких свойств продуцента С. pubescens и получаемого на его основе антимикробного препарата представляет одну из важнейших задач исследования для дальнейшего внедрения в производство.
Материалы и методы
Работа проводилась в Иркутском государственном медицинском университете, Иркутском филиале ИЭВСиДВ СО РАСХН. Основными объектами исследования явился штамм гриба Coriolus pubescens (Shum.: Fr.) Quel. 0663 И антимикробный препарат, получаемый на его основе с использованием современных методов биотехнологии. Исследуемый продуцент является возбудителем белой гнили древесины и был отобран для проведения исследований из базидиомицетов кол-
лекции Института ботаники км В.Л Комарова РАН как штамм, обладаюши;: е-^окой антимикробной активностью [10]. Штамм [11]. рис. 1а, б, в) характеризующийся активным ростом в условиях глубинного культивирование
Проведение токсико-биол:гн—,ких свойств продуцента и антимикробного препарата осуществляли на основе общепринятых нринцинов [12, 13], что в дальнейшем позволит обеспечить объективность выводов при оценке э возможных негативных свойствах нрен .т -: :в получаемых с использованием культуры С. г- sens.
Возможность безона:к:г: использования
культур базидиальных грибов з качестве продуцентов предполагает предварительное проведение изучения их натогенности лл' силокровных животных, которая определяется рядом факторов -вирулентностью, токсич:-:остью токсигенностью, способностью к диссемннадии во внутренних органах. Токсикологические ;-к:нериментальные исследования проводили на лабораторных животных - беспородных белых мышах, белых крысах, кроликах и морских свинках [14]. При изучении натогенных свойств исследуемого штамма проводили натоморфо логические исследования органов, а также - состава крови. При оценке вирулентности штамма традиционно определяли ЛДюо (абсолютно летальная доза), ЛД5о (50%-ная летальная доза), являющиеся наиболее точными показателями. отражающими чувствительность большинства животных, взятых для опыта [15].
В экспериментах отслеживали за внешним видом животных, их поведением, изменением ряда интегральных и специфических показателей, в том числе, за изменением морфологического состава крови [17], изменением аутофлоры организма [18].
Состояние иммунологической реактивности организма определяли но комплексу тестов: определение показателей состава аутомикрофлоры, активности фагоцитоза но реакции специфического повреждения нейтрофильных гранулоцитов и
внутрикожной провокационной пробе с антигеном из изучаемого гриба . Для гистологического исследования препараты изготовляли но обычной методике и окрашивали гематоксилином и эозином [19].
^ШЯШПг , Т»Х 15*.. . . .. —т..—». - - -f ■
а) - микрофогоірафия мицелия в сканирующем электронном микроскопе
б) - росг С. pubesceas на сусло - агаре
в) - глубинный росг продуцента на глюкозо-иенгонной
среде
Рис. 1. Продуцент Corioluspubescens (S/тт.: Fr.) Quel.
Результаты и обсуждение Необходимо отметить, что в соответствии с международной базой по систематике грибов GAB1 Bioscience and CBS Database of Fungal names . исследуемый продуцент в настоящее время
- http: II. www.itidex.futi.gum.org/
отнесён к роду Тгагл^ев Рг. (РоИрогасеае), т.е. в современной трактовке его видовое название будет следующим: Т. риЬевсеш (8с1штас11.) РПа1 [20].
Для определения вирулентности гриба исследовали его биомассу, выращенную в течение 18 суток при температуре 28-30°С на среде сусло-агар (СА). Суспензию нативной биомассы гриба вводили белым мышам и крысам в объёме: мышам - 1мл в желудок, 0,5 мл - внутрибрюшинно и 0.1 мл - интраназально, крысам - 5 мл в желудок и 1 мл - внутрибрюшинно. При этом мыши (самки) получали грибы в количестве - 10!’ спор/животное при введении в желудок. 2x10 спор/животное - при внутрибрюшинном введении. Крысы (самки) получали грибы в количестве 5x109 спор/ животное при поступлении в желудок и 108 спор/ животное - при внутрибрюшинном введении. В каждой серии опытов использовали по 10 животных. О вирулентности судили по ЛД?о при различных путях введения.
Наблюдения за животными проводили в течение 30 дней. Полученные результаты свидетельствуют о том, что гриб С. риЬеясет не вирулентен для теплокровных животных. При определении токсичности гриба С. риЪеясет суспензию биомассы в физрастворе прогревали на кипящей водяной бане в течение 1 ч,, после остывания вводили животным. Учёт гибели животных проводили в течение 30 дней. Установлено, что продуцент С. риЪеясет не токсичен. ЛД50 не удалось определить. поскольку введение максимально возможных количеств гриба не вызывает гибели животных ни в одном случае.
Для определения токсичности продуцента стерильную культуральную жидкость 18-суточной культуры гриба, выращенной на глюкозо-иеитон-ной среде, вводили мышам через рот в объёме
1 мл и внутрибрюшинно - 0,5 мл/животное. В каждой серии опытов использовали но 10 животных. Наблюдение за животными проводили в течение 30 суток. Показано, что продуцент С. риЬехсепх не является токсичным для белых мышей. ДД50 составляет выше 0,0 мл при введении перорально и больше 0,5 мл - внутрибрюшинно. Итак, установлено, что продуцент С. риЪеясет не является токсичным для теплокровных животных.
Обязательным условием развития инфекционного процесса в восприимчивом макроорганизме является размножение микроорганизма - возбудителя до количеств, способных вызывать патологический процесс. Для выявления возможности продуцента С. риЪеясет сохранять жизнеспособность и размножаться в организме теплотворных животных, белым мышам вводили перорально нативную 30-суточную культуру гриба, выращенного на С А. На 1-е, 7-е, 15-е, 20-е и 30-е сутки после введения гриба животных забивали (но 3 животных из каждой серии опыта) и проводили микологическое исследование крови и внутренних органов - почек, селезенки, печени, сердца, легких. Посевы проводили методом мазков - отпечатков
Таблица 1.
Результаты исследования состава нормальной микрофлоры через 30 суток после однократного введения в желудок спор гриба Согіоїш риЬехсепх в дозе 109 клеток/животное
Исследованная іруппа микроорганизмов Группа животных
Контрольная Опытная
п М ш и М ш 1 Р
Микрофлора слизистой оболочки ротовой полости
Колиформные бактерии, кое/см2 6 50.11 17,93 5 17,69 13,70 1,68 >0,1
Кокковые формы, кое/см2 6 64,20 35,27 5 84,90 42,38 0,36 >0,5
Гемолитические формы, 10“ кое/см 6 47,02 19,02 5 52,60 24,24 0,18 >0,5
Микрофлора содержимого кишечника
Колиформные бактерии, ферментирующие лактозу, 108 кое/г 6 6,19 2,17 5 1Д9 0,73 2.18 >0,05
Колиформные бактерии, не ферментирующие лактозу, 108 кое/г 6 1,34 0,77 5 3,18 2,45 0.72 >0,25
Стафилококки, 105 кое/г 6 10,17 4,49 5 53,20 47,71 0,90 >0,25
Энтерококки, 10^ кое/см2 6 5.50 3,13 5 9,40 4,87 0,67 >0,5
Грибы, 10' кое/см2 6 6,17 2Д4 5 12,80 4,34 1,37 >0,1
Примечание: * и - количество животных в 1рунне; М -среднее арифметическое результатов на ~ людений в группе; т - среднеквадратическое отклонение средней; I - критерий Стьюдента: Р - доверительная вероятность.
на СА, Полученные данные свидетельствуют об отсутствии у продуцента С. риЪеясет способности размножаться и диссеминировать в организме теплокровных животных. Изучение морфологического состава периферической крови животных проводили через 30 суток от момента заражения, У мышей опытной группы отмечали умеренную эозинофилию и тенденцию к понижению содержания в крови моноцитов и нейтрофильных гра-нулоцитов, что является, по-видимому, проявлением повышенной фагоцитарной активности лейкоцитов, иммунологической перестройки организма животных, обусловленной вызванным воздействием.
Установлено, что гриб С. риЪеясепя в указанной дозировке не оказывает существенного влияния на аутофлору организма подопытных белых мышей. Однако отмечена тенденция к снижению на слизистой оболочке ротовой полости количества колиформных бактерий на 64,7%, а также повышение количества гемолитических и кокковых форм микроорганизмов - на 11,1 и 30,9%, соответственно (табл.1).
В клинике у животных изменялось соотношение основных групп микроорганизмов ещё более резко: в 5,2 раза повышалось содержание лакто-иоложительных палочек и в 2-5 - снижалось количество колиформенных бактерий, неферментирующих лактозу, стафилококков, энтерококков, микромицетов. Испытанная на белых мышах 109 клеток/животное доза, является пороговой в
остром опыте по общетоксическому действию и иодиороговой но влиянию на аутомикрофлору организма теплокровных животных. Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что продуцент С, риЪеясет не размножается и не диссеминирует в организме теплокровных, не вызывает инфекционный процесс и, следовательн" может быть использован без особых ограничений при производстве из них препаратов, иреднл:-каченных для различных целей.
Эксперименты г.: определению острой токсичности иреиарзтэ ~г-?водили на беспородных белых мышах с масссй тела 20-24 г, белых крысах с массой 200-24 : Препарат вводили внутри-
брюшинно и иерср_:; -: но 1 мл и но 0,5 мл внут-рибрюшинно мышам и крысам, соответственно, но 5 мл и но 8 мл - в желудок, В каждой группе использовали по 6 животных О токсическом действии судили 110 ОСЕеМу состоянию и поведению животных, а также летальности в течение срока наблюдений - 14 с утек табл. 2).
После введения препарата в желудок животные вели себя пелнижно, были несколько возбуждены, нормальн: реагировали на звуковые раздражители. пишу. воду. Летальных случаев не наблюдали. При введении препарата внутрибрю-шинно животные были малоподвижны, заторможенные. слабо реагировали на звуковые раздражители. Летальные случаи происходили в течение 1,5 ч. в группах животных, получивших внутри-
Таблица 2.
Результаты определения острой токсичности препарата на белых мышах и крысах
Животные Способ введения препарата Испытанные дозы препарата, мг/кг ЛД50, мг/кг
Белые мыши Внутрибрюшинно 5-5000 2250
Перорально 50-50000 >50 000
Крысы Внутрибрюшинно 10-10000 4500
Перорально 16-16000 >16 000
Динамика изменения массы (г) белых мышей после затравки препаратом
Срок после затравки Группы животных
Контрольная Опытная
п М т п М т 1 Р
До затравки 10 24,60 1,16 10 23,80 1,35 0.45 >0,5
Через 1 неделю 10 25,30 1.12 10 25,00 1,13 0,19 >0,5
2 недели 10 27,40 0,79 10 26,40 0,98 0,79 >0,25
4 недели 10 32,50 0,60 10 30,80 0,96 1,33 >0,1
брюшинио максимальную дозу препарата. При этом погибли все животные. Таким образом, ЛДюо для мышей составила 5000 мг/кг, для крыс -10000 мг/кг. Все остальные животные остались живы. Полученные результаты свидетельствуют о том. что токсичность препарата выражена слабо, следовательно, внедрение его в производство является перспективным.
Исследования по действию антибактериального препарата в хроническом эксперименте основывались на полученной ранее токсикологической информации (ЛДюо и ЛД50) и проводились на белых мышах, как болсс чувствительных животных. Препарат вводили в корм с расчетом на количество животных в группе. Для хронического эксперимента было выбрано 3 дозы исследуемого прс-
Таблица 4.
Результаты исследования показателей клеточного состава периферической крови белых мышей,
после затравки препаратом в дозе 50 000 мг/кг
Показатель Срок после Контрольная Опытная
затравки п М т п М т 1 р
1 сутки 6 8,20 0,44 6 9,99 0,57 2,47 >0,05
Гемоглобин, ммоль/л 1 неделя 6 10,75 0,58 6 8,97 0,61 2,12 >0,05
2 неделя 6 8,20 0,79 6 8,58 0,57 0,51 >0,5
4 неделя 5 9,48 0,09 6 9,94 0,45 1,01 >0,25
1 елтки 6 1 7.83 0 41 6 8,35 0,48 0,84 >0,5
Эритроциты. Т/л 1 неделя 6 7,76 0,45 6 7,64 0,76 0,14 >0,5
2 неделя 7,81 0,43 6 7,42 0,37 0,68 >0,25
4 неделя 5 8,83 0,54 6 9,22 0,30 0,63 >0,1
1 СУТКИ 6 13,22 2,53 6 10,32 1,09 1,05 >0,5
Лейкоциты, /л 1 неделя 6 8,67 1,15 6 10,73 1,69 1,01 >0,5
2 неделя 6 14,31 3,96 6 12,42 1,06 1,06 >0,25
4 неделя 5 10.98 2,21 6 0,00 1,00 0,59 >0,1
1 сутки 6 0,17 90,17 6 0,00 0,00 1,00 >0,5
Г ранулоциты. 1 неделя 6 0,17 0,17 6 0,00 0,00 1,00 >0,5
нейтральные, п/я, % 2 неделя 6 0,00 0,00 6 0,00 0,00 0,00 >0,25
4 неделя 5 0,00 0,00 6 20,83 0,00 0,00 >0,1
1 сутки 6 29,00 4,37 6 30,00 2,57 1,61 >0,5
Гранулоциты с/я, % 1 неделя 6 32,00 3,62 6 24,67 3,33 0,41 >0,5
2 неделя 6 26,00 3,77 6 17,67 4,00 0,24 >0,25
4 неделя 5 16,00 1,64 6 4,33 3,73 0,41 >0,1
1 сутки 6 2,50 0,50 6 2,17 0,56 2,45 >0,5
Г ранулоциты 1 неделя 6 1,67 0,56 6 1,33 0,48 0,68 >0,5
ацидофильные, % 2 неделя 6 3,50 0,72 6 5,00 0,42 2,60 >0,25
4 неделя 5 7,80 0,66 6 0,00 1,13 2,14 >0,1
1 сутки 6 0,00 0,00 6 0,00 0,00 0,00 >0,5
Г ранулоциты 1 неделя 6 0,00 0,00 6 0,00 0,00 0,00 >0,5
базофильные, % 2 неделя 6 0,00 0,00 в' 0,00 0,00 0,00 >0,25
4 неделя 5 0,00 0,00 6 74,83 0,00 0,00 • >0,1
1 сутки 6 68,00 3,98 6 67,17 2,22 1,50 >0,5
Лимфоциты, % 1 неделя 6 65,67 3,31 6 73,50 3,82 0,30 >0,5
2 неделя 6 70,50 4,02 6 77,33 4,20 0,52 >0,25
4 неделя 5 76,00 1,79 6 0,00 3,89 0,31 >0,1
1 сутки 6 0,17 0,17 6 0,67 0,00 1,00 >0,5
Моноциты, % 1 неделя 6 0,50 0,22 6 0,50 0,21 0,54 >0,5
2 неделя 6 0,00 0,00 6 0,00 0,22 2,23 >0,25
4 неделя 5 0,20 0,20 6 0,00 0,00 1.00 >0,1
Таблица 1.
Результаты исследования показателей клеточного состава нормальной микрофлоры на слизистой оболочке ротовой полости мышей
Группа микроорганизмов Срок после затравки Группа животных
Контрольная Опытная
її м ш и м т 1 Р
Колиформные бактерии, 10“ кое/см: 1 сут. 1 нед. 10 10 10,06 0,04 2,98 0,04 10 10 6,31 0,58 2,46 0,49 0,97 1Д2 >0,25 >0,25
2 нед. 10 0,07 0,05 10 0,51 0,51 0,86 >0,25
4 нед. 10 0,69 0,63 10 0,48 0,33 0,30 >0,5
Кокковые формы. 10" кое/см: 1 суг. 10 59,36 9,93 10 38,96 15,58 1,10 >0,25
1 нед. 10 36,31 5,72 10 38.43 6.05 0,25 >0,5
2 нед. 10 3,13 0,95 10 9,06 4,69 1,24 >0,5
4 нед. 10 2,19 0,52 10 5,70 2,50 1,37 >0,1
1 суг. 10 13,54 1,80 10 16,98 2,27 1Д9 >0,25
Г емолитические 1 нед. 10 14,40 2,53 10 12,10 1,95 1,72 >0,25
формы, 103 кое/см2 2 нед. 10 9,18 1,83 10 14,34 1,64 2,10 <0,05
4 нед. 10 8,67 1,18 10 7,87 1,28 0,46 >0,5
парата. Сразу после затравки состояние животных было без особенностей, они не отличались от животных контрольной 1руш1ы. В последующем проводили комплексное обследование животных (табл. 3).
При однократной затравке препаратом в высокой концентрации (50000 мг/кг) не было выявлено выраженного токсического действия на мышей, не было отмечено статистически значимого изменения динамики прироста массы тела подопытных животных (табл.З). В течение месяца масса тела
увеличилась на 2,9-3,2%. Изменения показателей клеточного состава крови были незначительными и не выходили за пределы колебаний средних величин контрольной группы животных, а также границ физиологических нормативов (табл.З). У подопытных животных отмечена тенденция к повышению в крови эритроцитов и гемоглобина, а также колебания численности моноцитов, эози-нофилов и других гранулоцитов. Установлено кратковременное (на первой неделе опыта) повышение содержания эозинофилов в крови и стати-
Таблица 6.
Результаты исследования показателей клеточного состава нормальной микрофлоры содержимого кишечника мышей после затравки препаратом в дозе 50000 мг/кг
Срок после затравки Группа животных
Группа микроорганизмов Контрольная Опытная
и м т и м т 1 Р
Колиформные бакгерии, ферментирующие лактозу, 108 кое/г 1 суг. 1 нед. 2 нед. 10 10 10 11,06 6,48 3,16 1,11 1,44 1,04 10 10 10 10.88 7,95 5.08 1.39 1.40 1.43 0,10 0,73 1,08 >0,5 >0,25 >0,25
4 нед. 10 3,56 1,07 10 4.26 1.56 0,37 >0,5
Колиформные бактерии, неферментирующие лакгозу, 10 кое/г 1 суг. 1 нед. 2 нед. 4 нед. 10 10 10 10 9,60 21,40 7,50 0.40 3,76 15,96 5,57 0,40 10 10 10 10 4.30 6.50 4.50 37.80 2,44 4,60 2,93 23,07 1.18 0,90 0,48 1,62 >0,25 >0,25 >0,5 >0,1
1 суг. 10 12,55 12,90 10 12,90 1,63 0,18 >0,5
Стафилококки, 107 кое/г 1 нед. 2 нед. 10 10 11,61 5,14 16,06 1,75 10 10 15,06 1,75 2,48 0,29 1,07 2,10 <0,25 <0,05
4 нед. 10 6,76 4,23 10 4,23 0,90 1,50 >0,1
1 суг. 10 43.73 11,86 10 27,81 5,05 1,21 >0,1
Лакгобациллы, 109 кое/г 1 нед. 2 нед. 10 10 40,14 32,02 12,33 4,20 10 10 19,09 20,06 6,74 4,01 1,55 2,06 >0,1 >0,05
4 нед. 10 12,99 2.70 10 10.98 1,70 0,63 >0,5
1 суг. 10 42.86 7,22 10 26,65 3,71 2,00 >0,05
Грибы, 10' кое/г 1 нед. 10 82,56 7,51 10 56,72 10,04 2,06 >0,05
2 нед. 10 38,58 11,58 10 45,81 6,39 0,97 >0,25
4 нед. 10 37,82 6,87 10 17,58 5,99 2,38 <0,05
1 суг. 10 13,51 1,70 10 9,82 2,28 1,30 >0,1
Энтерококки, 10 кое/г 1 нед. . 2 нед. 10 10 11,07 1,33 2,66 0,61 10 10 12,10 1,76 1.55 0,37 0,34 0,10 >0,5 >0,5
4 нед. 10 7,89 1,37 10 3,95 0,74 2,58 <0,05
Результаты исследования местно-раздражающего действия гриба СогкЛш риЬехсепх и препарата
Вид животных Кролики Морские свинки
Кол-во животных 3 3 5 5 5 5
Исследованный материал Суспензия спор, 10/мл Препарат Суспензия спор. 107 /мл Суспензия спор, 108 /мл Суспензия спор, 109/мл Препарат
Место аппликации Конъюктива Коньюкгива Кожа снины Кожа снины Кожа спины Кожа спины
Кратность воздействия 23 23 23 23 23 23
Проявления местной реакции организма животных Слабо выраженный киньюктнвит (гиперемия слизистой верхнего века, слезотечение) у двух животных, возникший на 13 и 25 дни опыта Слабовыра-женный конъюкти-вит, наблюдаемый на 2, 8 и 15 сутки опыта Слабовыра-женный дерматит (бледно-розовая эритема, припухлость, шелушение, облысение), развившийся на второй неделе опыта Отсутствие дерматита Отсутствие дерматита Отсутствие дерматита
стически значимое снижение их количества в последние сроки исследования. Содержание моноцитов увеличивалось через 1-2 недели после воздействия препарата (табл.4), В результате однократной затравки препаратом в дозе 50000 мг/кг у подопытных животных не происходило выраженного изменения состава аутомикрофлоры организма (табл. 5. 6).
При исследовании в динамике численности основных 1рунн микроорганизмов на слизистой оболочке ротовой полости не установлено достоверных изменений количества бактерий группы кишечной палочки и кокковых форм бактерий, за исключением резких колебаний показателей у животных опытной и контрольной групп, связанных с приёмом нищи, воды и некоторых других неучтенных факторов. Содержание гемолитических форм микроорганизмов в ротовой полости у подопытных животных на второй неделе опыта достоверно отличалось от контроля, разница показателей составляла 56,2%. У животных опытной группы при исследовании микрофлоры кишечника отмечено снижение численности стафилококков на второй и энтерококков на четвертой неделе опыта, а также тенденция к снижению количества лактобацилл (на 16-52%) и грибов (на 22-53%). Результаты исследований позволяют считать испытанную концентрацию, близкой к пороговой в остром опыте но общетоксическому и дисбиоти-ческому эффектам действия.
Эксперименты но определению местно-раздражающего действия гриба и препарата проводились на морских свинках и кроликах. Животным вводили суснензию спор гриба в концентрациях 107, 108 и 109 /мл, а препарата - в нативном состоянии. Аппликации исследуемых материалов но
0,1 мл осуществляли в течение одного месяца в рабочие дни морским свинкам путём нанесения на освобождённые от волос участки (размером 2х
2 см2) кожи снины и кролика - на коньюктиву (табл.7).
Данные, представленные в таблице 7, свидетельствуют о том. что и продуцент, и препарат, нолуденный на его основе, не оказывают выраженного местно-раздражающего действия.
Предполагая, что повторные аппликации на кожу изучаемых материалов способствовали сенсибилизации морских свинок нами выполнено иммунологическое обследование животных, включая провокационные пробы. Использовали те ірушіьі животных, у которых не было отмечено развития дерматита.
Исследовали гомеостаз морских свинок через 16 суток после завершения аппликаций биомассы гриба и препарата. Данные, представленные в таблице 8 показывают, что у подопытных животных происходило изменение неснецифической резистентности организма: снижалось содержание в периферической крови лейкоцитов, преимущественно, за счёт лимфоцитов и эозинофилов, повышалась защитная функция фагоцитов. Специфическая иммунологическая реактивность не изменялась, о чём свидетельствует отсутствие различий результатов определения у подопытных и контрольных животных показателя повреждения ней-трофилов при контакте с гомологичным антигеном. Следует отметить, что гриб оказывал такое же слабовыраженное влияние на иммунологический гомеостаз подопытных животных, как и препарат. На второй день после завершения исследования иммунологического гомеостаза на морских свинках были выполнены провокационные пробы - внутрикожно ввели но 0,2 мл 1%-ного раствора комплексного антигена из биомассы изучаемого гриба. У животных в местах инъекции антигена развилась воспалительная реакция -припухлость, повышение температуры кожи (табл.9).
Таблица 1.
Результаты исследования иммунологического гомеостаза морских свинок через две недели после аппликаций на кожу гриба Согіоіих риЬехсепх и препарата
Показатель, единица измерения Статистич. величина Сенсибилизиоуюший агент
Контроль Суснензия спор іриба, 107 /мл Суснензия спор гриба, 10" /мл Препарат
1 2 3 4 5 6
Содержание лейкоцитов в крови, г/л М м Р 23,47 2,24 14,23 0,34 3 4,08 <0,02 17,61 1,68 4 2,09 >0,05 12,52 0,38 3 4,82 <0,002
Содержание лимфоцитов в М 15,12 11,14 13,15 10,10
крови, г/л м 2,15 0,80 1,79 0,34
її 6 3 4 3
1,73 0,70 2,30
Р >0,1 >0,5 >0,05
Содержание эозинофилов в М 0,56 0.44 0,44 0,12
крови, г/л м 0,15 0,38 0,34 0,07
и 6 3 4 3
0,28 0,30 2,68
Р >0,5 >0,5 <0,05
Фагоцитарная акгивность М 14,60 16,67 20,00 15,33
лейкоцитов, % м 1Д7 0,67 0,82 1,20
и 5 3 4 3
1,54 3,79 0,44
Р >0,1 <0,02 >0,5
Фагоцитарный индекс М 6,44 7,96 6,79 5,63
м 0,23 1,05 0,34 0,62
и 5 3 4 3
1,41 0,83 1,22
Р >0,1 >0,25 >0,25
И нтрал ей коцитарн ый М 0,91 0,83 0,93 1,00
лизоцим, ед.акт. м 0,10 0,06 0,06 0,13
и 4 3 4 3
0,68 0,10 0,54
Р >0,5 >0,5 >0,5
Показатель повреждения нейтрофилов (ППН) М м Р 0,04 0,01 6 0,04 0,01 3 0,37 >0,5 0,04 0,02 3 0,32 >0,5 0,04 0,02 3 0,32 >0,5
Данные, представленные в таблице 9 свидетельствуют о том, что у животных, подвергавшихся повторным аппликациям на кожу биомассы изучаемого гриба и препарата, развилась сенсибилизация организма. У животных контрольной группы положительные провокационные пробы с антигеном зарегистрированы в одном случае. Такой же низкий уровень положительных проб был и у животных после аппликаций суспензии спор гриба в концентрации 10 /мл, у которых ранее был выявлен дерматит. В остальных трёх группах наличие сенсибилизации отмечено у большинства подопытных животных. Максимальная реакция наблюдалась через 24 часа после внутрикожного введения антигена, что указывает на развитие у подопытных животных гинерчувствителоности замедленного тина. Следовательно, препарату и его продуценту свойственна незначительная ал-
лергенная активность. Исследованные материалы вызывают слабовыраженное угнетение иммунобиологической реактивности организма.
При гистологическом исследовании внутренних органов белых мышей, на которых изучали вирулентность гриба С. риЬевсеш патологических изменений в тканях миокарда, селезёнки и ночек выявлено не было. В лёгких у двух животных обнаружен незначительный интерстициональный отёк и у одного животного - очаговая лимфоидноклеточная инфильтрация. Дистрофические изменения в генатоцитах и единичные гранулемы отмечены в печени одного животного. Во внутренних органах животных контрольной группы каких-либо отклонений от нормальной гистоструктуры обнаружено не было. Таким образом, гриб С. риЬевсеш при испытанной дозе и способе введения не обладает вирулентными свойствами.
Степень местной реакции на провокационные пробы у морских свинок, подвергавшихся повторным аппликациям на кожу гриба СогиЛшриЬехсепх и препарата (мм" площади кожи)
Исследуемый Статистич. Время учёга местной реакции, час.
материал гриба величина 2 24 48
1 2 3 4 5
Контроль м 30,57 39,11 11,78
м 13,06 17,56 4,81
и 5 5 5
%* 0 20 0
Суспензия спор. м 31,22 93,07 20,32
109/мл м 4,55 29,43 4,52
и 4 4 4
t 0,05 1,57 1,29
р 0,05 0,1 0,1
>0,5 >25 0
Суспензия спор. М 37,70 210,01 31,68
108 /мл м 37,70 96,28 31,689
и 3 3 3
t 0,18 1,75 0,62
р >0,5 >0,1 >0,5
% 33 67 33
Суспензия спор, М 175,35 96,20 4,32
107 /мл м 32,43 12,77 1,71
и 4 4 4
t 4,14 2,63 1,46
р <0.02 <0,05 >01
% 100 50 0
Препарат м 33.57 144,62 28,79
м 5,30 54,92 5,45
и 3 3 3
t 0,22 1.83 4,34
р >0.5 >0,1 >0,05
% 0 67 0
Примечание: * - процент положительных проб (диаметр зоны покраснения и припухлости кожи нревышаег 10 мм, площадь - более 78,6 мм“)
Результаты комплексного морфологического Таким образом, в результате проведённых ис-
исследования внутренних органов белых мышей, следований изучены токсико-биологические свой-
нодвергавшихся однократному воздействию нре- ства как продуцента, так и препарата, иолучаемо-
иарата в дозе 50000мг/кг указывают в одном слу- го на его основе, а именно: определены вирулент-
чае на явления очаговой пневмонии, в другом - ность штамма С. pubescens 0663 для теилокров-
разрежение белой пульпы селезёнки, Следова- ных животных, его токсичность, токсигенность, и
тельно, однократное воздействие препарата в ис- инфективность, изучено местно - раздражающее
пытанной дозе не оказывает выраженного наголо- действие штамма его аллергенные свойства, оире-
гического влияния на организм эксиерименталь- делены параметры токсичности препарата,
ных животных,
TOXICO-BIOLOGICAL PROPERTIES OP THE PRODUCER CORIOLUS PUBESCENS (SHUM,: PR) QUEL, AND PREPARAPION RECEIVED ON IPS BASIS
V.A. Chhenkeli
(Irkutsk Branch of the Institute of Experimental Veterinary Science of Siberia and the Far East, Russian Academy of Agricultural Sciences)
Results of toxic - biological research of the Coriolus pubescens 0663 producer and the antimicrobic preparation received on its basis are presented. It is established, that the mushroom is not pathogenic for mammal, and the preparation is unessentially toxic, its LD50 is estimated as 5000 mg/kg and is close to threshold in regard to toxic and disbiotic effect. Local - irritating and allergenic effect of the preparation is less effective.
Литература Тез. доки, Научно-нракг, конф, "Итоги, проблемы,
1, Чхенкели В, А,, Чхенкели Г.Д., Денисов В Л. К во- иесиективы", - Иркутск, 1997, - С.104-105.
просу снижения бактериальной обсеменённости 2, Чхенкели В.А, Чхенкели Г.Д., Москвитина А.А., хлебопекарных дрожжей и продуктов брожения // Денисов В, Л, К вопросу снижения бактериальной
обсеменённости хлебопекарных дрожжей // Мат. ко 2-й межрег. конф. "Человек и окружающая среда". -Рязань, 1998. -С.245.
3. Чхенкелн В.А., Чхенкели Г.Д. Использование технологических ишредиентов на основе вторичных метаболитов высших базидиомицегов на бродильных производствах // Тез. докл. междунар. конф. "Химическое образование и развитие общества". -М., 2000. -С.234-235.
4. Чхенкели В.А., Чхенкели Г.Д., Московский В.Д., Комаров В.И. Экологически безопасные технологии на бродильных производствах // Доки. Междунар. эколог, кошр. "Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности". - СПб., 2000. - Т.1. -С.268-270.
5. МУ 1.1.037-95. Биотестирование продукции из полимерных и других материалов. - М., 1995: Госсанэпиднадзор России. - 12 с.
6. Чхенкели В.А. Токсикологическая оценка продуктов химической биотехнологии. // Тез. докл. 1-го съезда токсикологов России. - М., 1998. - С. 128.
7. Методические рекомендации по изучению общетоксического действия фармакологических средств // Вед. фарм. ком-та. - 1998. - №1. - С.27-33.
8. Методические рекомендации по доклиническому изучению реиродукгивной токсичности фармакологических средств // Вед. фарм. ком-та. - 1998. -№1. - С. 13-20.
9. Методические рекомендации по исследованию канцерогенных и фармакологических средств // Вед. фарм. ком-та, - 1998. - №1. - С.27-33.
10. Чхенкели В.А., Никифорова Т.И, Скворцова Р.Г. Антимикробное действие дереворазрушающего 1риба Coriolus pubescens (Shum,:Fr.) Quel. 11 Микол, и фитоиатол. - Т.32. - Выи, 1, - С.69-72,
И. Огчёт о научно-ироизодственной деятельности за 2002 год ГНУ ИНИВС СО РАСХН, - Иркугск, 2002, -С,75-93,
12. Ллойт А.О., Савченков М, Ф, Профилакгическая токсикология, - Иркутск: Изд-во ИГУ, 1996. -279 с.
13. Методы определения токсичности и опасности химических веществ (токсикометрия) / Под ред. проф. И.А. Саноцкого / - М.: Медицина, 1970. -343 с.
14. Заиаднюк И.П., Заиаднюк В.И, Захария Е.А. Лабораторные животные: Разведение, содержание, использование в эксперименте. - 3-е изд. - Киев: Вишд школа, 1983. - 383 с.
15. Костенко Т.С., Скаршевская Е.И., Гительсон С.С. Пракгикум по вегеринарной микробиологии и иммунологии. - М.: Агроиромнздат, 1989. - 272 с.
16. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Меньшиков В.В., Делегорская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др. - Мл Медицина, 1987. -368 с.
17. Ромаш А.В Морфофункциональные и цитохимические исследования периферической крови в ранней диагностике воздействия пестицидов на организм. - В сб.: Гигиена применения, токсикология пестицидов и полимерных материалов - Киев, 1987. - Выл, 17 - С, 184-186,
18. Микробиологическая диагностика дисбакгериоза: Методические рекомендации, - Киев, 1986, - 28 с,
19. Оноприенко Е.Н., Гулич М П., Яцковская Н.Я. Характер стт .кгурных изменений внутренних органов живогных год влиянием грибного порошка. // Воир, питания - 1991. - №5, - С.55-60,
20. Горшина Е С , Скворцова М.М., Бирюков В В. Технология получения биологичеси акгивной субстанции лекггс тзенного 1риба кориола опушённого // Биотехнол; гил - 2003. - №2, - С.45-53.
О НИКОЛАЕВ С.М., ИВАНОВ В,В„ МАНТАТОВ В.В, -
ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТАБЛЕТОК СУХОГО ЭКСТРАКТА ТОЛОКНЯНКИ ОБЫКНОВЕННОЙ В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ И ПРОФИЛАКТИКЕ РЕЦИДИВИРУЮЩИХ ИНФЕКЦИЙ НИЖНИХ МОЧЕВЫХ ПУТЕЙ У ЖЕНЩИН
С. М. Николаев, В.В. Иванов, В.В. Ма~~аЛ.ов.
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ. директор - ироф. В.М. Кор-сунов. Отдел биологически активных веществ, зав. - ироф. С.М. Николаев: городская клиническая больница скорой медицинской помощи им. В.В. Ангаиова, г. Улан-Удэ. гл. врач - В.П. Амагыров)
Резюме. Выявлена выраженная фармакотерапевтичеекая эффективность таблеток сухого экстракта толокнянки обыкновенной в комплексном лечении и профилактике рецидивирующих инфекций нижних мочевых путей у женщин. Лечебный эффект данных таблеток превышает лечебное воздействие препарата сравнения - отвара листьев толокнянки обыкновенной. Применение таблеток сокращает сроки купирования дизурических явлений и восстановления нормального акта мочеиспускания. Удобная для употребления лекарственная форма, в виде таблеток, имеет значительные преимущества перед традиционно применяемыми галеновыми препаратами, что является фактором популяризации указанного растительного лекарственного средства.
Ключевые слова: толокнянка, сухой экстракт, лечение, инфекция нижних мочевых путей, женщины.
Рецидивирующие инфекции нижних мочевых РИНМП диагностируются у 7 млн. женщин [8]. В
путей (РИНМП) у женщин являются широко рас- 20-25% случаев в возрасте от 20 до 40 лет отмеча-
иространенным заболеванием. Ежегодно в США ется, ио крайней мере, один эпизод инфекции в
