CC BY
25УДК 577.21:616.71 - 007.234-07
О.В. Квитко, А.С. Сапун, Н.А. Балашенко, Я.И. Шейко, И.И. Конева, С.Е. Дромашко
ТЕЛОМЕРНАЯ КОНЦЕПЦИЯ СТАРЕНИЯ И ОНКОГЕНЕЗА
ДЛЯ МЕДИЦИНЫ (обзорная статья)
ГНУ «Институт генетики и цитологии НАН Беларуси» Республика Беларусь, 220072, г. Минск, ул. Академическая, 27
Сокращение теломер как механизм клеточного старения
Открытие теломер связано с именами лауреатов Нобелевской премии генетиков Германа Меллера и Барбары Мак-Клинток. В исследованиях, выполненных в тридцатые годы ХХ столетия, они показали, что на концевых хромосомных участках находятся структуры, предотвращающие слияние хромосом [1, 2]. Название «теломеры» предложил Меллер.
В 1972 г. Джеймс Уотсон сформулировал «проблему концевой недорепликации ДНК» (end-replication problem), в соответствии с которой ДНК-полимераза не может полностью синтезировать З'-конец линейной молекулы ДНК [3]. В этот же период Алексей Матвеевич Оловников (независимо от Уотсона) пошел в своих предположениях дальше и предсказал, что концевая недорепликация ведет к укорочению теломер (маргинотомии) в каждом раунде синтеза ДНК во время клеточного деления, и что этот процесс является причиной реплика-тивного старения, то есть утраты клетками способности к делению, обнаруженной Леонардом Хайфликом [4, 5]. Предсказания Оловникова оказались удивительно точными. Для инициации синтеза ДНК-полимеразой в направлении 5'-3' требуется РНК-праймер. ДНК-полимераза синтезирует лидирующую цепь до самого конца хромосомы, но в отстающей цепи (lagging strand) ДНК-полимераза синтезирует фрагменты, называемые фрагментами Оказаки, причем каждый фрагмент требует наличия РНК-праймера. В отсутствие ДНК, которая служила бы матрицей для нового праймера, репликация концевого участка невозможна, и поэтому происходит его утрата при каждом раунде синтеза ДНК.
Еще до открытия теломеразы было известно, что укорочение теломер происходит при старении фибробластов человека [6], и сокращение теломер стали называть молекулярными
часами, отсчитывающими клеточные деления. Теломераза - это обратная транскриптаза, которая удлиняет теломеры [7]. Она состоит из теломеразной РНК (TR или TERC - telomerase RNA component) и белковой каталитической субъединицы - TERT (telomerase reverse transcriptase) [8, 9]. Каталитическую единицу теломеразы человека обозначают как hTERT. В соответствии с предсказаниями Оловникова теломераза активно работает в иммортализи-рованных (нестареющих) клеточных линиях [10]. При трансгенном введении hTERT в нормальные (стареющие) фибробласты они иммор-тализировались, что проявлялось в отсутствии репликативного старения и окрашивания на бета-галактозидазу, которая является маркером клеточного старения [11]. Впрочем, работа те-ломеразы - не единственный механизм удлинения теломер, поскольку существуют имморта-лизированные клеточные линии с отсутствием теломеразной активности [12]. Появился термин «альтернативное удлинение теломер», механизм которого может быть основан на процессах рекомбинации [13]. У человека ДНК теломер представляют собой многократно повторяющуюся (от сотен до тысяч раз) гексану-клеотидную последовательность TTAGGG [14].
Критически короткие теломеры вызывают остановку клеточного цикла на стадии G1/S. При этом дисфункция теломер активизирует каскад сигнальных путей, связанных с повреждением ДНК, включая активацию белка p53 [15]. p53, в свою очередь, активирует p21, блокирующий действие циклин-зависимых киназ (CDKs), предотвращающих фосфорили-рование белка ретинобластомы pRb. Без фос-форилирования pRb не транскрибируются гены, работа которых важна для перехода G1/S, и клеточный цикл блокируется [15] .
Следует отметить, что длина теломер - не единственная характеристика, от которой зависит способность клеток к делению. Об этом свидетельствует то, что в иммортализирован-ных клетках теломеры короче, чем в контролях с остановленным ростом [16]. Кроме того, у дрожжей штаммы с отсутствием теломеразной активности стареют с более длинными теломе-рами, чем иммортализированные штаммы, позитивные по теломеразе [17]. С использованием электронной микроскопии было показано, что теломеры формируют дуплексы, называемые Т-петлями (t-loops), в состав которых входят связывающиеся с теломерными повторами белковые факторы TRF1 [18] и TRF2 [19]. По-видимому, Т-петли (теломерные кэпы), а не только длина теломер, важны для предотвращения теломерной дисфункции и клеточного старения.
Несмотря на очевидную связь старения с теломерами важно помнить, что имеются свидетельства в пользу того, что сокращение теломер является не единственным механизмом старения клеток: культуральный стресс активирует р16 и индуцирует старение клеток независимо от теломер [20]. Кроме того, представляют интерес данные о межвидовых различиях (например, при сравнении клеток человека и мыши) взаимосвязи репликативно-го старения и теломерной дисфункции [21, 22]
У человека соматические ткани большей частью (но не все) не имеют заметной тело-меразной активности [23]. При этом особо интересно, что в ряде тканей человека наблю-
дается временная (транзиентная) активизация теломеразы, что резко контрастирует с ее конститутивной активацией в большей части раковых опухолей [23]. В этой связи, на наш взгляд, существует возможность, что даже в тех тканях, в которых не была зарегистрирована теломеразная активность (или синтез матричной РНК гена hTERT), при определенных условиях возможно транзиентное стимулирование теломеразы. Это определяет целесообразность поиска методов регуляции теломе-разы в соматических клетках человека. При этом репрессия теломеразы для подавления роста опухолей должна быть сбалансирована с активизацией теломеразы для противодействия старению и возобновления способности тканей к восстановлению. В связи с этим интересно отметить, что стволовые клетки крови и кожи демонстрируют лишь слабую теломераз-ную активность, которая по крайней мере на порядок меньше, чем у раковых клеток in vitro; вместе с тем, некоторые митотически гиперактивные потомки этих стволовых клеток проявляют высокую теломеразную активность, позволяющую остановить или даже обратить вспять сокращение теломер [23].
Имеются данные о связи происходящего с возрастом укорочения теломер в некоторых тканях человека со смертностью. Так, в клетках крови найдена обратная корреляция между смертностью и длиной теломер после 60 лет [24]. Стрессовые условия жизни способствовали ускоренному укорочению теломер клеток крови [25].
Определение активности теломеразы в онкодиагностике
Выявление активности теломеразы в тканях является одним из способов выявления злокачественных новообразований. Метод TRAP (telomeric repeat amplification protocol) позволяет выявлять даже самую слабую те-ломеразную активность. Данный метод может быть основан на авторадиографическом детектировании продуктов теломеразной активности. Однако высокая чувствительность этого метода может приводить к ложнополо-жительным результатам. С целью увеличения диагностической ценности метода TRAP Kim и соавторы разработали модифицированный метод, обладающий меньшей чувствительностью и позволяющий выявлять теломеразную
активность, характерную для раковых клеток [26]. Кроме того, данный метод не требует специального оборудования для работы с радиоактивными метками, что делает его более доступным. Данная методика основана на РСЯ-амплификации продуктов теломеразной реакции, полученных при удлинении ферментом специфического праймера.
В работе [27] проведено определение длины теломер, уровня теломеразной активности, характера экспрессии белковой субъединицы hTERT и РНК-компонента hTR теломеразы у детей с острым лимфобластным лейкозом. Установлено, что уровень теломеразной активности значительно выше при острых лим-
фобластных лейкозах в первый острый период и рецидивах по сравнению с пациентами в ремиссии и здоровыми людьми. Отмеченная обратная корреляция может регулироваться как на уровне экспрессии каталитической субъединицы hTERT, так и на уровне альтернативного сплайсинга транскриптов этого гена. Выявлены различия в соотношении вари-
антов транскриптов мРНК hTERT у больных в первый острый период и в стадии ремиссии. Сделано заключение о том, что определение длины теломер, уровня теломеразной активности и экспрессии hTERT и вариантов его транскриптов может служить характеристикой опухолевого клона у детей с острым лимфо-бластным лейкозом [27].
Антираковые ингибиторы теломеразы
Идея использования ингибиторов теломеразы для лечения онкозаболеваний основана на подавлении пролиферации раковых клеток посредством сокращения теломер. При этом следует учитывать, что антителомеразные препараты по механизму действия должны отличаться от существующих лекарств тем, что они не уничтожают раковые клетки немедленно, и что заметные антипролиферативные эффекты ингибиторов теломеразы могут проявиться через недели или месяцы регулярного приема [28]. Это также свидетельствует о целесообразности их использования скорее для профилактики и терапии вторичных, а не первичных сильно развившихся опухолей, причем желательно их применение для адьювантной терапии совместно со средствами, действующими посредством иных механизмов [29].
Олигонуклеотиды, комплементарные к РНК-компоненту теломеразы, могут ингибировать ее активность [29]. Два антителомеразных олигонуклеотида одобрены, и еще несколько проходят клинические испытания [30]. Компания Geron Corporation разрабатывает
ингибирующие теломеразу олигомеры, содержащие фосфорамидный каркас [31]. Исследователи полагают, что терапевтические олигонуклеотиды не могут эффективно проникать в культивируемые клетки в отсутствие трансфецирующих агентов. Однако, фосфора-мидные олигомеры являются сильными ингибиторами теломеразы без трансфекции [31]. 2'-метоксиэтиловые олигонуклеотиды также хорошо поглощались клетками [32]. Добавление липидной группы еще более улучшило эффективность тиофосфорамидных олигоме-ров [33]. Липид-содержащие олигонуклеотиды GRN163L уменьшали рост опухоли у животных [34]. GRN163L также находился в клинических испытаниях при ряде онкологических заболеваний у людей [35].
Дисульфид-содержащие (биоредуцируемые) катионные полимеры, в частности, дисульфид-содержащий полиэтиленимин, использовали для доставки малых интерферирующих РНК с целью подавления hTERT. При этом происходило значительное подавление роста разных раковых линий in vitro и опухолей in vivo [36].
Нарушения теломерного гомеостаза при атеросклерозе
Атеросклероз является лидирующей причиной смертности, даже опережая онкологические заболевания. Экспериментальные и клинические данные свидетельствуют о том, что этиология этой группы ассоциированных с возрастом заболеваний связана с нарушениями теломерного гомеостаза [37]. Длина теломер определяется не только числом клеточных репликаций, но и подвержена наследственным и средовым факторам риска. Так, у потомства родителей с коронарной болезнью теломеры короче, чем у здоровых людей [38]. Курение, ожирение, резистентность к инсулину и диабет 2 типа связаны с ускоренным укорочением теломер [39-41].
Вместе с тем, установлено, что активизация теломеразы может быть достигнута изменением образа жизни, включая здоровую диету, снятие стресса посредством медитации, регулярные высокоинтенсивные аэробные физические упражнения и некоторые фармакологическими препараты (см. ниже).
Таким образом, длина теломер и активности теломеразы являются уникальными молекулярно-генетическими маркерами, позволяющими оценивать комбинированное влияние наследственных и средовых факторов в развитии коронарных заболеваний, а также при разработке средств их профилактики и терапии.
Средства сохранения и восстановления теломер
Сохранению длины теломер способствовали интенсивные и регулярные аэробные физические упражнения, выполняемые 5 дней в неделю по 45 минут ежедневно в течение 5 лет [42]. Молекулярные механизмы защитного влияния упражнений на сердце посредством активизации теломеразы были исследованы на экспериментальных животных. Показано, что упражнения способствуют выживанию клеток и повышают активность теломеразы и экспрессию белкового фактора TRF2, стабилизирующего структуру Т-петли на концах теломер. Повышение теломеразной активности было опосредовано инсулиноподобным фактором 2 (IGF2) и эндотелиальной синтазой оксида азота. Кроме того, при упражнениях снижались уровни маркеров остановки роста и апоптоза, такие как р16, р53 и киназа клеточного цикла 2 [37].
Вещества, повышающие активность тело-меразы, могут быть использованы для предотвращения утраты теломерной ДНК. Компоненты, экстрагируемые из растений Astragalus и Ginkgo biloba, а также ресвератрол активизируют теломеразу, причем действие ресвера-трола опосредовано сигнальным путем PI3k/ Akt. N-ацетилцистеин и альфа-токоферол также повышают активность теломеразы [43, 44]. У пациентов с коронарной болезнью при пятилетнем наблюдении обнаружена обратная зависимость между содержанием в крови жирных кислот омега-3 (получаемых при употреблении морепродуктов) и скоростью сокращения теломер [45]. Аспирин, ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента и, в частности, статиновая терапия благоприятно влияют на сосудистый эпителий посредством противодействия клеточному старению. Помимо антитромботических и антивоспалительных эффектов аспирин понижает образование диметиларгинина, который является эндогенным ингибитором синтазы оксида азота и посредством этого уменьшает окислительный стресс и замедляет старение клеток эндотелия [46]. Содержащие сульфгидрильные группы
ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента также замедляют эндотелиальное старение посредством стимуляции фосфо-рилирования протеин-киназой Akt, ведущей к повышению экспрессии синтазы оксида азота и активизации теломеразы [47]. Стати-ны повышали миграционную способность клеток-предшественников эндотелия путем ап-регуляции связывающегося с теломерами белка TRF2 [48]. Интенсивная статиновая терапия в течение 12 месяцев предотвращала эрозию хромосом у пациентов с коронарной болезнью [49], а также положительно коррелировала с длиной теломер у больных инфарктом миокарда в возрасте до 64 лет [50].
Доступность количественной полимераз-ной цепной реакции, которая проще, дешевле и требует меньшего труда по сравнению со стандартным саузерн-блоттингом, определяет удобство ее использования для анализа длины теломер [51-52]. Оценка теломерной динамики может служить нескольким целям [37]. Во-первых, измерение длин теломер в первые годы жизни может выявлять индивидуумов с генетической предрасположенностью к некоторым заболеваниям для индивидуальной профилактики. Во-вторых, длина теломер является мерой кумуляции повреждений ДНК под воздействием средовых факторов риска в течение индивидуальной жизни и, по-видимому, позволяет оценивать вероятность наступления заболеваний. В-третьих, хотя развитие и прогрессирование некоторых болезней (например, атеросклероза) происходит в течение десятилетий, результат этого процесса становится клинически значимым только при полном проявлении заболеваний. Поскольку скорость сокращения теломер до начала болезни ускоряется, лонгитудинальные измерения длины теломер могут использоваться для определения риска. Наконец, количественное определение состояния теломер и теломераз-ной активности требуется для оценки эффективности новых методов профилактики и терапии заболеваний.
Неканонические функции теломеразы
Теломераза выполняет критическую роль в поддержании свойств стволовых клеток и в тканевом гомеостазе [53]. Представляет осо-
бый интерес то, что эта роль определяется не только восстановлением длины теломер-ных повторов посредством обратной транс-
крипции, но и еще слабо изученными неканоническими функциями [54]. Эти функции можно разделить на 2 группы [54]. К первой относятся функции, требующие наличия активной теломеразы, но не связанные с удлинением теломер (неканоническая функция 1 -NC I). Для осуществления NC II не требуются ни теломеразная активность, ни удлинение теломер, хотя требуется наличие белковой субъединицы фермента hTERT. Функции NC I связаны с корректной реакцией на повреждения ДНК и нечувствительностью к трансформирующему фактору роста beta, а также с индукцией неоплазий эпидермиса и молочной железы [54]. Интересно, что осуществление функций NC II, напротив, не приводит к развитию неоплазий. Функции NC II связаны с активацией сигнальных путей WNT и MYC (это показано, в частности, на кератиноци-тах), а также с возрастанием резистентности к индукции апоптоза (клеточной гибели), запускаемого разнообразными стимулами. По-видимому, сверхэкспрессия как TERT, так и TERC обеспечивает NC I, но NC II не требуют ни TERC, ни целостности каталитического сайта TERT. Молекулярные механизмы NC I и NC II в основном неизвестны, но имеются данные об изменениях профилей транскрипции. Представляется важным изучение этих механизмов в связи с их значением для функционирования нормальных и малигни-зированных клеток.
Эктопическая сверхэкспрессия hTERT приводила к уменьшению спонтанной диффе-ренцировки и усилению стволовоклеточных свойств в линиях мезенхимальных стволовых клеток человека [55]. При этом понижался уровень метилирования ДНК, что было показано анализом профиля метилирования CpG-островков, причем деметилированные
CpG-островки были в высокой степени ассоциированы с генами развития и дифферен-цировки. Компонентный анализ показал, что профиль экспрессии генома в высокой степени сходен с таковым у эмбриональных стволовых клеток. Следовательно, важнейшей функцией теломеразы, наряду с поддержанием длины те-ломер, является глобальная перестройка эпигенетического статуса клеточного генома. Из этих данных следует важный вывод о том, что изменение экспрессии единственного гена (в данном случае гена hTERT) может запускать процесс глобального эпигенетического репро-граммирования в сторону плюрипотентности и, возможно, более молодого состояния клеток.
С точки зрения задач разработки технологий сингенной клеточной трансплантации для регенеративной медицины представляется важным направление исследований, связанное с модификацией функционирования теломеразы в культурах клеток из тканей взрослого организма. В частности, регулируемая экспрессия трансгенной TERT в клетках из волосяных фолликулов вызывала быстрый переход из телогена (стадия покоя цикла волосяного фолликула) в анаген (активная фаза), тем самым способствуя интенсивному росту волос [56]. Сверхэкспрессия TERT способствует этому развитийному переходу путем индуцирования пролиферации покоящихся мультипотентных стволовых клеток в районе "bulge". Эта новая функция TERT не требует РНК-ового компо-нета теломеразы и, следовательно, работает посредством механизма, не зависящего от синтеза теломерных повторов. Эти данные также указывают на то, что наряду с известной ролью в удлинении теломер TERT может способствовать пролиферации покоящихся стволовых клеток посредством неканонического сигнального пути.
Заключение
Теломеры - концевые участки хромосом, формирующие дуплексы - Т-петли, препятствующие слиянию с другими хромосомами. В состав теломер входят многократно повторяющиеся повторы олигонуклеотида (у человека - гексануклеотида TTAGGG) и белковые факторы ТЯЛ и TRF2. Укорочение теломерной ДНК (маргинотомия) в результате концевой недорепликации и
накопления повреждений является одним из механизмов клеточного старения и связанных с возрастом заболеваний. Процессу сокращения теломер противодействуют фермент теломераза и мало изученные альтернативные механизмы восстановления длины теломерной ДНК. Теломераза состоит из каталитической белковой субъединицы (ТЕЯТ) и РНК-матрицы, с помощью которой
TERT достраивает теломерные повторы и удлиняет теломеры. Теломераза выполняет также некоторые неканонические функции, включая глобальное эпигенетическое репро-граммирование в сторону плюрипотентно-сти и, возможно, более молодого состояния клеток. Конститутивная активизация теломе-разы характерна для большей части раковых
опухолей. Поэтому ингибирование теломе-разы используется в онкотерапии. В то же время регулируемое временное повышение теломеразной активности перспективно для замедления старения и омоложения клеток, что может найти применение в лечении связанных с возрастом заболеваний и способствовать продлению жизни людей.
Список использованных источников
1. Muller, H. The remaking of chromosomes // Collecting Net. - 1938. - Vol. 13, № 8. -P. 182-198.
2. McClintock, B. The stability of broken ends of chromosomes in Zea mays // Genetics. -1941. - Vol. 26. - P. 234-282.
3. Watson, J. Origin of concatemeric T7 DNA // Nat. New Biol. - 1972. - Vol. 239, № 94. - P. 197-201.
4. Olovnikov, A. Principle of marginotomy in template synthesis of polynucleotides // Dokl. Akad. Nauk SSSR. - 1971. - Vol. 201, № 6. -P. 1496-1499.
5. Olovnikov, A. A theory of marginotomy. The incomplete copying of template margin in enzymic synthesis of polynucleotides and biological significance of the phenomenon // J. The-or. Biol. - 1973. - Vol. 41, № 1. - P. 181-190.
6. Telomeres shorten during ageing of human fibroblasts / C. Harley [et al.] // Nature. - 1990. -Vol. 345, № 6274. - P. 458-460.
7. Greider, C. Identification of a specific telomere terminal transferase activity in Tetra-hymena extracts / C. Greider, E.H. Blackburn // Cell. - 1985. - Vol. 43, № 2. - P. 405-413.
8. The RNA component of human telomer-ase / J. Feng [et al.] // Science. - 1995. - Vol. 269, № 5228. - P. 1236-1241.
9. Telomerase catalytic subunit homologs from fission yeast and human / T. Nakamura [et al.] // Science. - 1997. - Vol. 277, № 5328. -P. 955-959.
10. Telomere shortening associated with chromosome instability is arrested in immortal cells which express telomerase activity / C. Counter [et al.] // Embo J. - 1992. - Vol. 11, № 5. -P. 1921-1929.
11. Extension of life-span by introduction of telomerase into normal human cells / A. Bodnar [et al.] // Science. - 1998. - Vol. 279, № 5349. -P. 349-352.
12. Telomere elongation in immortal human cells without detectable telomerase activity / T. Bryan [et al.] // Embo J. - 1995. - Vol. 14, № 17. - P. 4240-4248.
13. Telomere maintenance by recombination in human cells / M. Dunham [et al.] // Nat. Genet. - 2000. - P. 26, № 4. - P. 447-450.
14. A highly conserved repetitive DNA sequence, (TTAGGG)n, present at the telomeres of human chromosomes / R. Moyzis [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1988. - Vol. 85. -P. 6622-6626.
15. De Magalhaes, J. From cells to ageing: a review of models and mechanisms of cellular senescence and their impact on human ageing // Exp. Cell Res. - 2004. - Vol. 300, № 1. - P. 1-10.
16. Telomere dynamics, end-to-end fusions and telomerase activation during the human fi-broblast immortalization process / C. Ducray [et al.] // Oncogene 1999. - Vol. 18, № 29. -P. 4211-4223.
17. Specific telomerase RNA residues distant from the template are essential for telomerase function / J. Roy [et al.] // Genes Dev. - 1998. -Vol. 12, №. 20. - P. 3286-3300.
18. Van Steensel, B. Control of telomere length by the human telomeric protein TRF1 / B. Van Steensel, T. de Lange // Nature. - 1997. -Vol. 385, № 6618. - P. 740-743.
19. Control of human telomere length by TRF1 and TRF2 / A. Smogorzewska [et al.] // Mol. Cell Biol. - 2000. - Vol. 20, № 5. - P. 1659-1668.
20. A two-stage, p16(INK4A)- and p53-de-pendent keratinocyte senescence mechanism that limits replicative potential independent of telomere status / J.G. Rheinwald [et al.] // Mol Cell Biol. - № 22 (14). - 2002. - P. 5157-5172.
21. Distinct requirements for Ras oncogen-esis in human versus mouse cells / N. Hamad [et al.] // Genes Dev. - 2002. - Vol. 16, № 16. -P. 2045-2057.
22. Expression profiles of p53-, p16(INK4a)-, and telomere-regulating genes in replicative senescent primary human, mouse, and chicken fibroblast cells / H. Kim [et al.] // Exp. Cell Res. -2002. - Vol. 272, №. 2. - P. 199-208.
23. Collins, K. Telomerase in the human organism / K. Collins, J. Mitchell // Oncogene. -
2002. - Vol. 21, №. 4. - P. 564-579.
24. Association between telomere length in blood and mortality in people aged 60 years or older / R. Cawthon [et al.] // Lancet. - 2003. -Vol. 361, № 9355. - P. 393-395.
25. Accelerated telomere shortening in response to life stress / E. Epel [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2004. - Vol. 101, №. 49. -P. 17 312-17 315.
26. Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer / N. Kim [et al.] // Science. - 1994 - Vol. 266. -P. 2011-2015.
27. Telomerase activity and telomere length in malignant cells of children with acute limpho-blastic leukemia / A. Kustanovich [et al.] // Experimental Oncology 2003. - Vol. 25. - P. 69-73.
28. Telomeres shorten during aging of human fibroblasts / C. Harley [et al.] // Nature. - 1990. -Vol. 345. - P. 458-460.
29. Telomerase inhibitors for the treatment of cancer: the current perspective / P. Perry [et al.] // Expert Opin. Investig. Drugs. - 2001 - Vol. 10, № 12. - P. 2141-2156.
30. Corey, D. Chemical Modification: The Key to the Clinical Application of RNA Interference? // J. Clin. Invest. 2007. - Vol. 117. -P. 3615-3622.
31. Oligonucleotide N3'-P5' phosphorami-dates as efficient telomerase inhibitors / B-S. Herbert [et al.] // Oncogene. - 2002. - Vol. 21. -P. 638-642.
32. Effect of Telomerase Inhibition and Combination Treatments on Cancer Cell Proliferation / Z. Chen [et al.] // Cancer Research. -
2003. - Vol. 63. - P. 5917-5925.
33. Lipid modification of GRN163, an N3'-P5' thio-phosphoramidate oligonucleotide, enhances the potency of telomerase inhibition / B-S. Herbert [et al.] // Oncogene - 2005. - Vol. 24. -P. 5262-5268.
34. In vivo inhibition of lung cancer by GRN153L: A novel human telomerase inhibitor / Z. Dikmen [et al.] // Cancer Res. - 2005. -Vol. 65. - P. 7866-7873.
35. Harley, C. Telomerase and cancer therapeutics // Nature Reviews Cancer. - 2008. -Vol. 8. - P. 167-179.
36. Xia, W. Bioreducible polymer-delivered siRNA targeting human telomerase reverse transcriptase for human cancer gene therapy / W. Xia, C. Lin // Ther. Deliv. - 2012. - Vol. 3, №. 4. - P. 439-442.
37. Telomeres and atherosclerosis / S. Khan [et al.] // Cardiovasc. J. Afr. - 2012. - Vol. 23, № 10. - P. 563-571.
38. Telomere length is shorter in healthy offspring of subjects with coronary artery disease: support for the telomere hypothesis / S. Broui-lette [et al.] // Heart. - 2008. - Vol. 94. -P. 422-425.
39. Obesity, cigarette smoking, and telomere length in women / A. Valdes [et al.] // Lancet. -2005. - Vol. 366. - P. 662-664.
40. Insulin resistance, oxidative stress, hypertension, and leukocyte telomere length in men from the Framingham Heart Study / S. Demissie [et al.] // Aging Cell. - 2006. - Vol. 5. -P. 325-330.
41. Telomere shortening occurs in Asian Indian Type 2 diabetic patients / A. Adaika-lakoteswari [et al.] // Diabet. Med. - 2005. -Vol. 22. - P. 1151-1156.
42. Leukocyte telomere length is preserved with aging in endurance exercise-trained adults and related to maximal aerobic capacity / T. La Rocca [et al.] // Mechan. Ageing Develop. - 2010. - Vol. 131. - P. 165-167.
43. Tarkanyi, I. Pharmacological intervention strategies for affecting telomerase activity: Future prospects to treat cancer and degenerative disease / I. Tarkanyi, J. Aradi // Biochimie. -2008. - Vol. 90. - P. 156-172.
44. Resveratrol reduces endothelial progenitor cells senescence through augmentation of telom-erase activity by Akt-dependent mechanisms / L. Xia [et al.] // Br. J. Pharmacol. - 2008. -Vol. 155. - P. 387-394.
45. Association of marine omega-3 fatty acid levels with telomeric aging in patients with coronary heart disease / R. Farzaneh-Far [et al.] // J. Am. Med. Assoc. - 2010. - Vol. 303, № 3. - P. 250-257.
46. Aspirin reduces endothelial cell senescence / S. Bode-Boger [et al.] // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2005. - Vol. 334. -P. 1226-1232.
47. Sulfhydryl angiotensin-converting enzyme inhibitor promotes endothelial cell survival through nitric-oxide synthase, fibroblast growth factor-2, and telomerase cross-talk / S. Donnini [et al.] // J. Pharmacol. Exp. Ther. -2010. - Vol. 332, № 3. - P. 776-784.
48. Statins enhance migratory capacity by up-regulation of the telomere repeat-binding factor TRF2 in endothelial progenitor cells / I. Spyrido-poulos [et al.] // Circulation - 2004. - Vol. 110. -P. 3136-3142.
49. Effect of intensive lipid-lowering therapy on telomere erosion in endothelial progenitor cells obtained from patients with coronary artery disease / M. Satoh [et al.] // Clin. Sci. - 2009. -Vol. 116. - P. 827-835.
50. Circulating leucocyte telomere length and oxidative stress: A new target for statin therapy / S. Saliques // Atherosclerosis. - 2011. - Vol. 219, № 2. - P. 753-760.
51. Cawthon, R. Telomere measurement by
quantitative PCR // Nucleic Acids Res. - 2002. -Vol. 30. - e47.
52. Measurement of telomere length by the Southern blot analysis of terminal restriction fragment lengths / M. Kimura [et al.] // Nature Protocols. - 2010. - Vol. 5, № 9. - P. 1596-1607.
53. TERT promotes epithelial proliferation through transcriptional control of a Myc- and Wnt-related developmental program / J. Choi [et al.] // PLoS. Genet. - 2008 - Vol. 4. - e10.
54. Dissecting the non-canonical functions of telomerase / E. Parkinson [et al.] // Cytogenet. Genome Res. - 2008. - Vol. 122. - P. 273-280.
55. Overexpression of TERT increases stem-like properties and decreases spontaneous differentiation in human mesenchymal stem cell lines / C. Tsai [et al.] // J. Biomed. Sci. - Vol. 2010 - P. 17-64.
56. Conditional telomerase induction causes proliferation of hair follicle stem cells / K. Sarin [et al.] // Nature. - 2005 - Vol. 436 -P. 1048-1052.
Дата поступления статьи 5 декабря 2012 г.
