CC BY
125
МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 1 (118) 2013
8. Руководство по кардиологии / под ред. В. Н. Коваленко. — Киев : Морион, 2008. — С. 234 — 236.
9. Impact of glucose intolerance and insulin resistance on cardiac structure and function: sex-related differences in the Framingham Heart Study / M. K. Rutter [et al.] // Circulation. — 2003. - Vol. 107. - Р. 448-454.
10. Fibrosis in left atrial tissue of patients with atrial fibrillation with and without underlying mitral valve disease / A. Boldt [et al.] // Heart. - 2004. - Vol. 90. - P. 400-405.
11. What are arrhythmogenic substrates in diabetic rat atria? / T. Kato [et al.] // J. Cardiovasc. Electrophysiol. - 2006. -Vol. 17. - P. 890-894.
12. Diabetes-specific cardiomyopathy in type 1 diabetes mellitus: no evidence for its occurrence in the era of intensive insulin therapy / E. Konduracka [et al.] // Eur. Heart J. - 2007. -Vol. 28. - P. 2465-2471.
13. Кратнов, А. Е. Показатели вариабельности ритма сердца и интервала QT у больных ишемической болезнью сердца и сахарным диабетом 2-го типа / А. Е. Кратнов, Н. О. Лысенкова // Кардиология. - 2010. - № 11. - С. 27-31.
14. Показатели вариабельности ритма сердца и интервала QT у больных ишемической болезнью сердца и сопутствующим сахарным диабетом 2-го типа : материалы Всерос. науч.-образоват. форума «Профилактическая кардиология - 2010». Москва, 24-26 февраля, 2010 г. / Н. О. Лысенкова [и др.] // Профилактическая медицина. - 2011. - Т. 14, № 1. - С. 43.
15. Atrial fibrillation and its association with type 2 diabetes and hypertension in Swedish community / C. J. Ostgren [et al.] // Diabetes Obes. Metab. - 2004. - Vol. 6. - P. 367-374.
16. Movahed, M. R. Diabetes mellitus is a strong, independent risk for atrial fibrillation and flutter in addition to over cardiovascular disease / M. R. Movahed, M. Hashemzadeh, M. M. Jamal // Int. J. Cardiol. - 2005. - Vol. 105. - P. 315-321.
17. Boudina, S. Diabetic cardiomyopathy revisited / S. Boudina, E. D. Abel // Circulation. - 2007. - Vol. 115. - P. 3213-3223.
18. Vinik, A. I. Diabetic cardiovascular autonomic neuropathy /
A. I. Vinik, D. Ziegler // Circulation. - 2007. - Vol. 115. -P. 387-397.
19. Autonomic trigger patterns and anti-arrhythmic treatment of paroxysmal atrial fibrillation: data from the Euro Heart Survey / C. B. de Vos [et al.] // Eur. Heart J. 2008. - Vol. 29. - P. 632-639.
КОЛБИНА Марина Владимировна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры факультетской терапии с курсом профессиональных болезней Омской государственной медицинской академии (ОмГМА).
ЛИВЗАН Мария Анатольевна, доктор медицинских наук, заведующая кафедрой факультетской терапии с курсом профессиональных болезней, проректор по научной работе ОмГМА.
ЧЕСНОКОВ Владимир Иванович, кандидат медицинских наук, доцент кафедры патологической физиологии с курсом клинической патофизиологии ОмГМА.
НИКОЛАЕВ Николай Анатольевич, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры факультетской терапии с курсом профессиональных болезней ОмГМА.
СУДАКОВА Алла Николаевна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры факультетской терапии с курсом профессиональных болезней ОмГМА. ШУСТОВ Александр Валентинович, заведующий кардиологическим отделением Городской клинической больницы № 4.
ЖЕРЕБИЛОВ Валерий Валерьевич, врач-интерн кафедры факультетской терапии с курсом профессиональных болезней ОмГМА.
Адрес для переписки: 644043, г. Омск, ул. Ленина, 12.
Статья поступила в редакцию 11.04.2013 г.
© М. В. Колбина, М. А. Ливзан, В. И. Чесноков,
Н. А. Николаев, А. Н. Судакова, А. В. Шустов,
В. В. Жеребилов
УДК 612.117:616-008.9:535 379) Л. В. КРИВОХИЖИНА
Е. Н. ЕРМОЛАЕВА С. А. КАНТЮКОВ Е. В. ДАВЫДОВА
Челябинская государственная медицинская академия
СВЯЗЬ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ СО СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫМ ОКИСЛЕНИЕМ
Основные метаболические пути активации тромбоцитов связаны с системами, генерирующими активные метаболиты кислорода. Активация тромбоцитов физиологическим агрегантом АДФ сопровождается возрастанием хемилюминесценции. Ингибиция свободнорадикального окисления в тромбоцитах снижает хемилюми-несценцию и агрегацию тромбоцитов.
Ключевые слова: хемилюминесценция, свободнорадикальное окисление, тромбоциты.
Активация и агрегация тромбоцитов вызываются различными факторами и представлены при различных патологических состояниях [1, 2]. Первичная обратимая агрегация — результат действия на плаз-
матическую мембрану экзогенных физиологических стимулов, появляющихся в зоне повреждения. Вторичная необратимая агрегация опосредована активацией простагландин-тромбоксановой системы,
Рис. 1. Хемилюминесценция тромбоцитов, выделенных из крови доноров.
1 — базисное свечение интактных тромбоцитов;
2 — свечение интактных тромбоцитов в присутствии люминола;
3 — АДФ-индуцированная хемилюминесценция тромбоцитов
а также секрецией с последующим действием на мембрану высвободившихся клеточных индукторов агрегации [2]. Физиологический индуктор агрегации АДФ может взаимодействовать с различными видами рецепторов, тем самым запуская разные пути внутримембранной и внутриклеточной передачи сигнала активации [3-5]. Рецепторы представляют собой ионные каналы, по которым кальций (Са+) быстро поступает в тромбоциты, инициируя изменение их формы и агрегацию. Опосредованная ионами Са+стимуляция фосфолипазы А и передача сигнала активации через простагландин-тромбоксановую систему могут быть одним из путей, обеспечивающих развитие секреции и вторичной необратимой агрегации. В литературе указывается, что, если индуктора агрегации недостаточно для стимуляции метаболизма арахидоновой кислоты и тромбоцитар-ной секреции, через некоторое время происходит частичная диссоциация связанного с пластинками фибриногена и развивается процесс дезагрегации [1, 2, 6]. Таким образом, функциональная способность тромбоцитов к агрегации, ее интенсивность и необратимость определяются активацией в тромбоците метаболических путей, деятельность которых связана с генерацией свободных радикалов.
Цель исследования — определение связи АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов с их способностью к генерации свободных радикалов.
Материал и методы исследования. Исследование выполнено на крови здоровых доноров (мужчин) станции переливания крови (эксперименты in vitro), а также на крысах-самцах (in vitro и in vivo). Забор крови осуществляли согласно правилам гемостази-ологических исследований [7]. Обогащенную тромбоцитами плазму (ОТП) получали из цельной крови путем центрифугирования с конечной концентрацией тромбоцитов в ОТП — 3х108 кл/мл. Способность тромбоцитов к агрегации определяли по методу Борна. В качестве индуктора агрегации использовали АДФ в конечной концентрации 7 х 10-7 М. Агрега-ционную способность тромбоцитов оценивали по лаг-периоду; времени, скорости, максимальной амплитуде. При анализе агрегатограмм учитывали максимальную амплитуду, скорость и время агрегации. Фактор Р3 определяли по разнице показателей активированного времени рекальцификации плазмы до и после удаления тромбоцитов из нее [7]. Фактор Р4 плазмы определяли по действию прогретой бедной тромбоцитами плазмы на тромбин-гепариновое вре-
Таблица 1
Генерация активных форм кислорода в интактных и АДФ-активированных тромбоцитах (М±т)
Показатель Хемилюминесценция
интактных тромбоцитов ДДФ- индуцированных тромбоцитов
Светосумма, усл. едУмин B4,6±2l,l 267,7±47,7 р<0,01
Mаксимальная светимость, усл. ед. 3,97±l,3 9,B±l,96 р<0,05
Примечание, здесь и в таблицах 2 и 3. Число наблюдений в каждой группе 10; тромбоциты получены из крови здоровых доноров.
Таблица 2
Влияние церулоплазмина на АДФ-зависимую агрегацию тромбоцитов (М±т)
Показатель ДДФ- зависимая агрегация Церулоплазмин + АДФ-зависимая агрегация
Лаг-период, мин 0,7l±0,l2 0,8±0,07
Время агрегации, мин l7,9l±l,03 18,64±1,06
Максимальная амплитуда, мм 66,56±5,63 54,73±5,33 р<0,01
Скорость агрегации, мм/мин 3,62±0,2 2,91±0,22 р<0,01
мя свертывания субстратной плазмы. Степень укорочения — мера активности фактора Р4 [7].
Образование свободных радикалов в ОТП оценивали методом хемилюминесценции в присутствии люминола. Регистрацию осуществляли на приборе «Хемилюминомер-003» с компьютерным обеспечением. Учитывали светосумму свечения (усл. ед./мин) и максимальную светимость (усл. ед.) в единицах по отношению к эталону свечения, суммарный световой поток которого составлял 5,2 х 105 квант/с [1]. Определяли хемилюминесценцию интактных и АДФ-активированных тромбоцитов; доза АДФ была аналогична применяемой для агрегации тромбоцитов.
В качестве антиоксиданта использовали церулоплазмин (НПО «Иммунопрепарат», Уфа), который добавляли в ОТП из расчета 50 % от его физиологического уровня в сыворотке крови. Данная концентрация церулоплазмина соответствует уровню повышения белка в крови при различных патологических процессах. ОТП с церулоплазмином инкубировали при 37 °С в течение 30 минут.
Статистическую обработку данных проводили на персональном компьютере с помощью пакета программ Statistica 6.0, использовали методы параметрической статистики с расчетом ^критерия Стьюдента, корреляционного анализа и однофакторного дисперсионного анализа.
Результаты исследования. Интактные тромбоциты, выделенные из крови здоровых доноров, обладают очень слабой хемилюминесценцией, которую можно расценивать как базисное свечение тромбоцитов. Для усиления интенсивности сигнала был применен люминол (рис. 1). Хемилюминесценция тромбоцитов значительно усиливается при активации тромбоцитов АДФ, который является физиологическим индуктором агрегации (рис. 1, табл. 1). Светосумма свечения возросла в 3,16 раза, а макси-
ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 1 (118) 2013 МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ
МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 1 (118) 2013
Таблица 3
Влияние церулоплазмина на хемилюминесценцию тромбоцитов (М±т)
Показатель Интактные тромбоциты Активированные тромбоциты
Orn OTH + церулоплазмин МФ церулоплазмин + МФ
Светосумма, усл. ед./мин 12,9B±1,6 6,54±1,10 р<0,05 40,6±5,33 24,4±2,25 р<0,01
Mаксимальная светимость, усл.ед. 3,23±0,35 0,43±0,07 р<0,01 9,40±1,17 5,B3±0,93 р<0,05
Таблица 4
Влияние однократного введения церулоплазмина на АДФ-зависимую агрегацию тромбоцитов крыс (М±т)
Показатель Лаг-период, мин Время агрегации, мин Mаксимальная амплитуда агрегации, мм Скорость агрегации, мм/ мин
Контроль 0,B5±0,04 15,74±0,20 39,75±0,96 2,50±0,05
12 часов 1,14±0,0B р<0,05 15,37±0,20 р>0,05 24,70±2,25 р<0,001 1,60±0,15 р<0,01
Примечание. Число наблюдений в каждой группе 9.
мальная светимость — в 2,5 раза. Для подтверждения связи агрегационной способности тромбоцитов с их способностью к генерации свободных радикалов использовали церулоплазмин - препарат антиоксидантного действия. Инкубация ОТП с церулоплазмином (30 минут при 37 °С) приводила к снижению АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов (табл. 2).
Подробный анализ агрегатограммы показал, что достоверно уменьшились и максимальная амплитуда, и скорость первых двух волн. Более значимо снизилась максимальная амплитуда второй волны (на 26,69 %), чем аналогичный показатель первой (на 12,8 %); скорость агрегации обеих волн уменьшилась на 22 %. Таким образом, церулоплазмин снижает общую агрегационную способность тромбоцитов, причем преимущественно за счет процесса секреции.
В экспериментах на крысах in vitro было установлено, что добавление церулоплазмина в ОТП (инкубация 30 минут), содержащую интактные тромбоциты, приводит к снижению показателей хемилю-минесценции тромбоцитов: светосуммы и максимальной светимости. Воздействие церулоплазмина на процесс АДФ-индуцированной хемилюминес-ценции тромбоцитов аналогично его действию на интактные тромбоциты (табл. 3).
Однофакторный дисперсионный анализ показал, что влияние церулоплазмина на интактные и АДФ-активированные тромбоциты достоверно. Эффект действия церулоплазмина сохранялся и при его однократном внутримышечном введении крысам в дозе 50 % от физиологического уровня препарата в крови. Через 12-24 часа АДФ-индуцированная хе-милюминесценция тромбоцитов достоверно снижалась: светосумма свечения — на 53 %, максимальная светимость — на 58 %. Одновременно снижалась и АДФ-зависимая агрегация тромбоцитов (табл. 4). Наряду с увеличением латентного времени, уменьшением максимальной амплитуды и скорости агрегации нарушалась и реакция высвобождения: достоверно снижалась активность Р3 (на 40 %) и Р4 (на 70 %) тромбоцитарных факторов.
Обсуждение результатов. Активация тромбоцитов является следствием развития каскада сложных взаимосвязанных реакций, приводящих к изменению метаболизма кровяных пластинок и их ультраструктурной реорганизации. Основные мета-
болические пути активации тромбоцитов зависят от систем, генерирующих активные метаболиты кислорода. Наличие в тромбоцитах пероксисом указывает на большую активность процессов свободнорадикального окисления как основу их функционирования. Наиболее важными конечными продуктами, отвечающими за функциональное состояние тромбоцитов и включение других звеньев гемостаза, являются простаноиды и лейкотриены [2, 8]. Важные индукторы агрегации — липидные эндоперекиси: они способны вызывать в тромбоцитах изменения, аналогичные реакции высвобождения [1]. Было показано, что агрегация тромбоцитов сопровождается динамичными изменениями пероксидации липидов и активности антиокислительных ферментов [9, 10]. Отражением и прямым доказательством этих положений является установленный нами факт возрастания хемилюминесценция тромбоцитов при их функциональной активации физиологическим агрегантом АДФ. Ингибиция свободнорадикального окисления антиоксидантом церулоплазмином, снижая интенсивность агрегации в целом, в большей мере ограничивает реакцию секреции.
Выводы
1. Активация тромбоцитов физиологическим агрегантом АДФ сопровождается возрастанием хеми-люминесценции.
2. Ингибиция свободнорадикального окисления в тромбоцитах снижает их хемилюминесценцию и агрегацию.
Библиографический список
1. Самаль, А. Б. Агрегация тромбоцитов: методы изучения и механизмы / А. Б. Самаль, С. Н. Черенкевич, Н. Ф. Хмара. -Минск, 1990. - 104 с.
2. Шитикова, А. С. Тромбоцитарный гемостаз / А.С. Шити-кова. - СПб., 2000. - 222 с.
3. Cattaneo, M. ADP receptors and clinical bleeding disordes / M. Cattaneo, C. Gacher // Arterioscler Thromb. Vasc. Biol. -1999. - № 10. - P. 2281-2285.
4. Decreased platelet aggregation, increased bleeding time and resistance to thromboembolism in P2Y1-deficient mice / J.-E. Fabre [et al.] // Nature Med. - 1999. - Vol. 5, № 10. - P. 1199- 1202.
5. Turner, N. A. Blocade of adenosine diphosphate receptors P2Y12 and P2Y1 is required to inhibit platelet aggregation in whole bloodunder flow / N.A.Turner,J.L. Moake,L.V.McIntire //Blood. -2001. - Vol. 98, № 12. - P. 3340-3345.
6. Функциональное состояние кровяных пластинок и воздействие индукторов агрегации / Р. А. Маркосян [и др.] // Бюл. ВКНЦ АМН СССР. - 1981. - Т. 4, № 2. - С. 47-51.
7. Балуда, В. П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза / В. П. Балуда, З. С. Баркаган, Е. Д. Гольдберг. -Томск, 1980. - 310 с.
8. Бышевский, А. Ш. К механизму связи перекисного окисления липидов и гемостаза / А. Ш. Бышевский, С. Л. Галян,
B. А. Полякова // Научный вестник ТГМА. - 1999. - № 1. -
C. 10-14.
9. Механизм антиагрегационного действия церулоплазмина / Е. Н. Ермолаева [и др.] // Эфферентная терапия. - 2004. -Т. 10, № 4. - С. 39-42.
10. Динамика перекисного окисления липидов и активности антиокислительной системы в процессе агрегации тромбоцитов / Л. В. Кривохижина [и др.] // Казанский медицинский журнал. - 2002. - Т. 83, № 4. - С. 273-274.
КРИВОХИЖИНА Людмила Владимировна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой патофизиологии.
ЕРМОЛАЕВА Елена Николаевна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры патофизиологии. КАНТЮКОВ Салават Абдулхакович, кандидат медицинских наук, доцент кафедры биохимии. ДАВЫДОВА Евгения Валерьевна, кандидат медицинских наук, старший преподаватель кафедры патофизиологии.
Адрес для переписки: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.
Статья поступила в редакцию 11.04.2013 г.
© Л. В. Кривохижина, Е. Н. Ермолаева, С. А. Кантюков,
Е. В. Давыдова
УДК 616.12-008.331.1-06:616-008.9]-085.225.2 Д. В. НАУМОВ
В. А. АХМЕДОВ Л. А. КУЛАЕВА
Омская государственная медицинская академия
Областная клиническая больница на станции Омск-Пассажирский
ВЛИЯНИЕ ЦИТОПРОТЕКТИВНОЙ ТЕРАПИИ НА ЧАСТОТУ ПАРОКСИЗМОВ И ЭЛЕКТРОКАРДИОГРАФИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ У БОЛЬНЫХ МЕТАБОЛИЧЕСКИМ СИНДРОМОМ В СОЧЕТАНИИ С ФИБРИЛЛЯЦИЕЙ ПРЕДСЕРДИЙ_____________________________________________________
Назначение терапии с включением цитопротектора триметазидина в течение шести месяцев больным с метаболическим синдромом в сочетании с пароксизмальной формой фибрилляции предсердий приводит к достоверному уменьшению частоты пароксизмов, улучшению электрокардиографических показателей и качества жизни пациентов.
Ключевые слова: триметазидин, метаболический синдром, фибрилляция предсердий.
Сегодня в экономически развитых странах мира в среднем каждый третий житель имеет превосходящую максимально допустимую массу тела [1]. Основным компонентом метаболического синдрома является ожирение, которое и служит причиной формирования сердечно-сосудистой патологии [2]. Одна из проблем современной кардиологии — разработка рациональной профилактики пароксизмов фибрилляции предсердий (ФП) у больных с проявлениями метаболического синдрома. В проведенных ранее исследованиях была показана положительная роль цитопротектора триметазидина в отношении
уменьшения числа госпитализаций, улучшения самочувствия и одновременного улучшения ремоделирования левого желудочка у больных хронической сердечной недостаточностью на фоне ожирения [3]. Исходя из данных результатов возникло предположение о возможном положительном влиянии препарата на электрофизиологию миокарда у больных с метаболическим синдромом в сочетании с пароксизмальной формой ФП.
Цель работы — оценка влияния цитопротектив-ной терапии с применением триметазидина (предук-тала) на частоту пароксизмов, а также на состояние
ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 1 (118) 2013 МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ
