CC BY
21
DOI: 10.23868/202004017
свободная ДНК И IL-8 В ФОЛЛИКУЛяРНОй жИДКОСтИ У жЕНщИН
в цикле экстракорпорального оплодотворения
Е.А. Андреева1, Н.А. Хонина1, 2, Е.Н. Демченко1, Е.Д. Гаврилова1, А.А. Останин1,
Н.М. Пасман2, Е.Р. Черных1
1 Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии, Новосибирск, Россия
2 Новосибирский национальный исследовательский государственный университет, Новосибирск, Россия
Поступила: 12.12.2019 Принята к печати: 10032020 Опубликована on-line: 20.06.2020
СЕнсЕЕ DNA AND IL-8 IN FOLLICuLAR FLuID OF wOMEN wITHIN IN VITRO FERTILIZATION program
E.A. Andreeva1, N.A. Khonina1, 2, E.N. Demchenko1, E.D. Gavrilova1, A.A. Ostanin1, N.M. Pasman2, E.R. Chernykh
1 Institute of Fundamental and Clinical Immunology, Novosibirsk, Russian Federation
2 Novosibirsk State University, Novosibirsk, Russia
e-mail: evga_91@mail.ru, nkhonina@mail.ru
Результативность программы экстрокорпорального оплодотворения (ЭКО), не превышающая 40%, зависит, прежде всего, от качества получаемых ооцитов, на что влияет состав фолликулярной жидкости: содержание цитокинов, факторов роста, свободной ДНК и др. Показано, что повышенный уровень свободной ДНК в фолликулярной жидкости ассоциирован с показателями овариального резерва, а также c эффективностью стимуляции в программе ЭКО. Одной из возможной причин высокого уровня свободной ДНК может рассматриваться возрастание концентрации IL-8. Цель работы — изучение содержания свободной ДНК и IL-8 в фолликулярной жидкости женщин, а также взаимосвязи между ними в зависимости от параметров фол-ликулогенеза и оогенеза, раннего эмбриогенеза и исходов ЭКО.
В исследование были включены 62 женщины с бесплодием, проходившие лечение методом ЭКО. Сбор образцов фолликулярной жидкости из доминантных фолликулов проводили с помощью трансвагинальной ультразвуковой аспирации. Концентрацию IL-8 в фолликулярной жидкости оценивали методом проточной флуориметрии, уровень свободной ДНК — флуориметрическим методом. Была выявлена отрицательная корреляция между содержанием IL-8 в фолликулярной жидкости у женщин и количеством получаемых ооцитов, а также качеством эмбрионов. Более высокое содержание свободной ДНК было зарегистрировано у женщин с бластоцистами низкого качества и неразвивающейся беременностью. Корреляционный анализ показал отсутствие значимой прямой взаимосвязи между концентрациями IL-8 и свободной ДНК в целом по группе. Более того, при анализе в подгруппах, характеризующихся более высоким содержанием IL-8 (меньшее количество ооцитов, эмбрионы отличного качества) между концентрациями свободной ДНК и IL-8 была выявлена слабая отрицательная корреляция. Полученные результаты позволяют предположить, что повышенный уровень свободной ДНК в фолликулярной жидкости не связан с возрастанием концентрации IL-8; IL-8 и свободная ДНК являются двумя независимыми факторами, обладающими разнонаправленными эффектами и влияющими на различные этапы репродуктивного процесса.
Ключевые слова: свободная ДНК, IL-8, фолликулярная жидкость, экстрокорпоральное оплодотворение, бесплодие.
The effectiveness of the in vitro fertilization (IVF) program does not exceed 40% and mostly depends on the oocytes quality, that is affected by the composition of the follicular fluid: a content of cytokines, growth factors, cell-free DNA (cfDNA), et al. Increased level of cfDNA in the follicular fluid is associated with indicators of ovarian reserve, as well as the effectiveness of stimulation in the IVF program. One possible reason for the high level of cfDNA can be considered an increase of IL-8 concentration. However, the role of IL-8 in regulation of reproductive processes is ambiguous and is presented in a few studies. In this connection, the aim of the study was to investigate a content of cfDNA and IL-8 in the follicular fluid of women, as well as the relationship between them, depending on the parameters of folliculo- and oogenesis, early embryogenesis and IVF outcomes.
62 women with infertility and undergoing IVF treatment have been enrolled in the study. We collected follicular fluid samples from dominant follicles using transvaginal ultrasound aspiration. The concentration of IL-8 in the follicular fluid was evaluated by flow fluorimetry. Measurement of cfDNA in the follicular fluid was performed by fluorimetric method. A negative correlation between IL-8 level in the follicular fluid and the number of received oocytes, as well as the quality of embryos was revealed. At the same time, a higher level of cfDNA was recorded in women with low blastocyst quality and non-developing pregnancy. Correlation analysis showed the absence of a significant direct relationship between IL-8 and cfDNA in the whole group. Moreover, in subgroups characterized by a higher IL-8 level, we found a weak negative correlation between cfDNA and IL-8 concentrations. The results suggest that enlarged level of cfDNA in the follicular fluid is not a consequence of IL-8 increase; the levels of IL-8 and cfDNA in the follicular fluid are two independent factors with multidirectional effects involved in various stages of reproductive process.
Keywords: cell free DNA, IL-8, follicular fluid, in vitro fertilization, infertility.
1
Введение
Ранее нами было показано, что в фолликулярной жидкости женщин содержится не связанная с клетками свободная ДНК (свДНК), уровень которой существенно превышает концентрацию свДНК в сыворотке крови, а у женщин со стимулированной овуляцией (в циклах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО)) уровень свДНК в фолликулярной жидкости существенно выше, чем у женщин в естественном цикле. Была выявлена корреляция между уровнем свДНК и показателями овариального резерва, а также эффективностью стимуляции овуляции в программе ЭКО [1]. Наличие свДНК
в фолликулярной жидкости женщин со стимулированной овуляцией и взаимосвязь данного биомаркера с параметрами эмбриогенеза были описаны и другими авторами [2-4]. По данным литературы, содержание свДНК может повышаться при ряде иммунноассоциированных заболеваний: онкологических [5-8], аутоиммунной патологии [9], посттравматическом синдроме [10], а также при акушерско-гинекологических заболеваниях [11], что свидетельствует о клинической важности данного показателя. Однако вопрос о происхождении свДНК и значимости данного параметра как биомаркера эмбриогенеза остается не в полной мере ясным.
Известно, что процесс овуляции происходит с вовлечением провоспалительных цитокинов и рекрутированием нейтрофилов. Активация 11_-8 в большинстве типов клеток связана с повышением активности транскрипционного фактора 1\1Р-кВ [12]. За последние годы было показано, что активация ядерного ЫР-кВ возможна через опосредованное влияние участков свДНК [13, 14], находящейся в составе так называемых «ней-трофильных внеклеточных ловушек», образующихся в процессе нетоза [15, 16]. В то же время, в качестве цитокина, стимулирующего образование нейтрофиль-ных внеклеточных ловушек, рассматривается 1_-8 [17, 18], который хорошо детектируется в фолликулярной жидкости [19] и, согласно данным литературы, индуцирует в клетках-мишенях перестройку цитоскелета, увеличивает концентрацию внутриклеточного Са2+, стимулирует респираторный взрыв и нетоз [20]. Исходя из этого, можно предположить, что одна из причин высокого содержания свДНК в фолликулярной жидкости может быть связана с возрастанием концентрации 1_-8. Однако роль 1_-8 в регуляции репродуктивных процессов неоднозначна и представлена в немногочисленных исследованиях. В одних работах было обнаружено, что высокий уровень 1_-8 в фолликулярной жидкости коррелирует с большими размерами фолликуллов [21], лучшим качеством эмбрионов и наступлением беременности [22], но в других работах данная взаимосвязь между содержанием 1_-8 и эмбриогенезом не была подтверждена [23].
Целью настоящей работы было исследование содержания свДНК и 1_-8 в фолликулярной жидкости женщин, а также взаимосвязи между ними, в зависимости от параметров фолликулогенеза и оогенеза, раннего эмбриогенеза и исходов ЭКО.
Материал и методы
В исследование, утвержденное этическим комитетом НИИ фундаментальной и клинической иммунологии (НИИФКИ, Новосибирск, протокол № 122 от 27.02.2019), были включены 62 женщины с бесплодием, проходившие лечение методом ЭКО. Все женщины перед включением в исследование подписывали форму добровольного информированного согласия.
Забор фолликулярной жидкости осуществляли на базе ООО «Клиника профессора Пасман», оценку уровня 1_-8 и свДНК в фолликулярной жидкости проводили на базе НИИФКИ. Возраст женщин с бесплодием варьировал от 20 до 45 лет (медиана 34,0), длительность бесплодия — от 1 года до 18 лет (медиана 5,0). Первичное бесплодие было диагностировано у 52% женщин, вторичное — у 48%; процедура ЭКО (инсеминации ¡п у^го] была проведена у 47% (п=29) женщин, интра-цитоплазматическая инъекция сперматозоида — у 53% (п=33); стимуляцию яичников проводили гонадотроп-ными препаратами с агонистами или антагонистами. Ответ яичников на стимуляцию контролировали методом ультразвуковой оценки роста фолликулов и эндометрия. При достижении диаметра 18 мм у трех и более фолликулов выполняли индукцию овуляции инъекцией 250 мкг хорионического гонадотропина (Мерк Серано, Италия) в 89% случаев или 0,2 мг агониста гонадо-тропин-релизинг гормона (Н.В. Органон, Нидерланды) в 11% случаев. Через 36-38 ч. после введения триггера ооциты извлекали с помощью трансвагинальной ультразвуковой аспирации и отбирали образцы фолликулярной жидкости из доминантных фолликулов. При видимой контаминации образцов фолликулярной жидкости кровью
их отбраковывали. Образцы фолликулярной жидкости центрифугировали при 2000 об/мин. в течение 10 мин. Надосадочную жидкость собирали, замораживали и хранили при температуре -80°С.
Уровень свДНК в фолликулярной жидкости оценивали флуориметрическим методом с использованием коммерческих наборов Blood DNA Isolation Kit (BioSilica Ltd., Новосибирск] в соответствии с инструкцией фирмы-производителя на приборе QuantiFluor™ Handheld Fluorometer (Promega, США]: свДНК выявляли с помощью флуоресцентного красителя PicoGreen (Invitrogen, США] и рассчитывали ее концентрацию по калибровочной кривой, построенной для известных концентраций стандартной двухцепочечной X ДНК. Концентрацию IL-8 в фолликулярной жидкости оценивали методом проточной флуориметрии на 2-лучевом лазерном автоматизированном анализаторе (Bio-Plex Protein Assay System, Bio-Rad, США] с применением коммерческих тест-систем в соответствии с инструкцией фирмы-производителя.
Качество бластоцист оценивали морфологически по принятой классификации D. Gardner (1999] [24], 3-сут. эмбрионов — по классификации T. Ebner, (2001] [25]. Индекс оплодотворения (ИО] рассчитывали по формуле:
ИО = количество оплодотворенных ооцитов/количе-ство полученных ооцитов
В соответствии с качеством эмбрионов проводили перенос или витрификацию. Биохимическую беременность регистрировали при значениях хорионического гонадотропина более 5 Ед/мл на 14 сут. после эмбрио-трансфера; клиническую — при визуализации плодного яйца в полости матки методом УЗИ на 5 нед. гестации.
Статистическую обработку данных осуществляли при помощи пакета прикладных программ Statistica 6.0 для Windows. Для выявления значимых различий сравниваемых показателей использовали U-критерий Манна-Уитни. Корреляционный анализ проводили методом ранговой корреляции Спирмана (rS].
Результаты
Во всех образцах фолликулярной жидкости женщин со стимулированной овуляцией был детектирован IL-8, медианный уровень которого составлял 895,6 пг/ мл (IQR 630,5-1189,4 пг/мл]. Индивидуальные значения IL-8 варьировали в широком диапазоне от 49,6 до 1986,9 пг/мл (рис. 1А]; концентрация свДНК в фолликулярной жидкости — в пределах 9,6-102,6 нг/ мл, медиана — 40,3 нг/мл (IQR 19,8-65,9] (рис. 1Б].
В общей группе женщин между уровнем IL-8 и свДНК значимой корреляции обнаружено не было (rs=-0,5; p>0,05]. s
Анализ зависимости содержания свДНК и IL-8 от возраста женщины, формы и причины бесплодия не выявил статистически значимых отличий. Для установления корреляции между содержанием IL-8, свДНК и количеством ооцитов, пациентки были разделены на 3 группы: группа 1 (n=13] — пациентки с количеством ооцитов меньше 4; группа 2 (n=30] — от 4 до 8 и группа 3 (n=25] — больше 8 (табл. 1]. Содержание IL-8 в группе 3 было в 1,2 раза ниже, чем в группе 2 (р=0,05] и в 1 ,5 раза ниже, чем в группе 1 (р=0,02]. По уровню свДНК в исследуемых группах значимых различий обнаружено не было. В группе женщин с наименьшим количеством ооцитов была выявлена отрицательная корреляция между содержанием IL-8 и свДНК, (rs=-0,57; p=0,18] (рис. 2А].
При анализе влияния метода оплодотворения и индекса оплодотворения на содержание свДНК и IL-8 значимых отличий также обнаружено не было,
2500 -|
2000
1500 -
1000 -
500
А
!Ь8
120 100' 80'
I 60'
4020 0
•••
V..
I**
••
• 1
свДНК
Рис. 1. Уровни 1_-8 (А) и свДНК (Б) в фолликулярной жидкости женщин в цикле ЭКО. Данные представлены в виде медианы и межквартильного диапазона индивидуальных значений
А
Б
2500 2000
г8=-0,10; р=0,44
500 0
2500 2000
:>
\ 1500 □
СО 1000
г=-0,20; р=0,03
500 0
50 100 150 200 свДНК, нг/мл
2500 _ 2000 ; 1500 1000
J
■ 500
100 200 300 свДНК, нг/мл
г=-0,26; р=0,06
3000 | 2500
Ъ 2000
с
СО 1500 — 1000 500 0
0 100 200
Г свДНК, нг/мл
♦
г=-0,27; р=0,21
300
250 0 50 100 150 200
свДНК, нг/мл
250
Рис. 2. Корреляционные взаимосвязи между уровнем 1_-8, свДНК в фолликулярной жидкости женщин в цикле ЭКО и: А — количеством получаемых ооцитов менее 4; Б — лучшим качеством эмбрионов на 3 сут. развития; В — лучшим качеством бластоцист; Г — клинической беременностью
Б
0
0
0
В
0
поэтому изучение взаимосвязи между уровнем свДНК, 1_-8 и параметрами, характеризующими ранний эмбриогенез, проводили в общей группе.
Для определения взаимосвязи между содержанием 1_-8 и уровнем свДНК с эмбриологическим показателем — качеством раннего развития эмбрионов на 3 сут. — пациентки были разделены на 2 группы: группа 1 (п=46) — пациентки с эмбрионами отличного качества (классы А+В) и группа 2 (п=13)—пациентки с эмбрионами низкого качества (класс С). Уровень 1_-8 в группе 1 был в 1,6 раз выше, чем в группе 2 (р=0,03). Значимых различий в содержании свДНК в зависимости от качества эмбрионов на 3 сут. отмечено не было. В группе женщин с эмбрионами отличного качества между концентрацией 1_-8 и уровнем свДНК была выявлена слабая обратная корреляция (г=-0,26; р=0,06) (рис. 2Б, табл. 1).
Известно, что через 72 ч. после оплодотворения при образовании морулы происходит активация собственного генома эмбриона [26]. Данный этап является критической точкой в раннем эмбриогенезе, так как на этой стадии до 50% эмбрионов останавливаются в развитии.
Формирование бластоцисты свидетельствует об успешном его прохождении.
По качеству бластоцист женщины были разделены на 2 группы: группа 1 (п=31) — женщины с бласто-цистами высокого качества (классы А+В) и группа 2 (п=8) — с бластоцистами низкого качества (класс С). Было обнаружено, что в фолликулярной жидкости женщин группы 2 концентрация 1_-8 была в 1,6 раза выше, чем в группе 1 , но различия проявлялись на уровне статистической тенденции (табл. 1). Уровень свДНК в фолликулярной жидкости женщин группы 1, наоборот, был достоверно ниже, чем в фолликулярной жидкости женщин группы 2 (р=0,04). Анализ взаимосвязи между уровнем 1_-8 и свДНК у женщин с бластоцистами лучшего качества выявил слабую обратную корреляцию (г8=-0,2; р=0,03) (рис. 2В, табл. 1).
На заключительном этапе был проведен ретроспективный анализ взаимосвязи между содержанием 1_-8 и свДНК в фолликулярной жидкости и исходами ЭКО в группах женщин с наступившей и прогрессирующей беременностью (клиническая беременность); наступившей,
Таблица 1. Содержание 11_-8 и свДНК в фолликулярной жидкости женщин с различными эмбриологическими показателями
Параметры ^-8 (пг/мл) свДНК (нг/мл)
П Mе P п Mе P
Количество ооцитов:
4-8 30 949,4 (639-1298) 2-3=0,05 29 40,0 (31,1-53,4) 2-3=0,6
>8 25 799,6 (553-887) 1-3=0,02 28 39,8 (22,8-53,2) 1-3=0,9
Качество эмбрионов:
Высокое (А+В) 46 844,0 (647-1035) 38 40,0 (29,3-47,6) 0,2
Низкое (С) 13 515,4 (449-784) 0,03 10 45,4 (36,7-53,4)
Качество бластоцист:
Высокое (А+В) Низкое (С) 31 844,0 (647-949) 0,11 8 552,9 (394-897) 21 6 39,3 (30,6-52,7) 49,5 (40,0-59,5) 1-2=0,04
Примечание: данные представлены в виде медианы (Ме), межквартильного диапазона (_01-и01).
Таблица 2. Содержание 1_-8 и свДНК в фолликулярной жидкости женщин с различными исходами ЭКО
Параметры Клиническая Биохимическая беременность беременность Отрицательный исход Значение p
п 18 17 13 ^-2=0,01
свДНК (нг/мл) 35,2±9,9 46,7±3,1 37,7±2,5 р1-3=0,5
33,3 (26-43) 52,2 (40-53) 36,6 (31-41) pг-з=0,04
п 22 21 16
820,4±61,5 804,0±67,7 803,9±73,6 р1-2=0,8
1_-8 774,5 822,0 821,0 р1-3=0,8
(пг/мл) 639-976) (595-1126) (577-1040) Рэ-3=0,9
Примечание: данные представлены в виде М±Э.Е., медианы, межквартильного диапазона (_О-1Ю).
но замершей беременностью (биохимическая беременность) и отрицательными исходами ЭКО (табл. 2).
Концентрация 11_-8 в фолликулярной жидкости женщин, с различными исходами программы ЭКО достоверно не различалась, но содержание свДНК в фолликулярной жидкости женщин с клинической беременностью было значимо ниже, чем у женщин с «биохимической беременностью» (р=0,01). Более низкое содержание свДНК было отмечено в фолликулярной жидкости женщин с отрицательным исходом ЭКО по сравнению с женщинами с биохимической беременностью (р=0,04). В группе женщин с клинической беременностью была обнаружена тенденция к обратной корреляции между уровнем 1_-8 и свДНК (п8=-0,27; р=0,2) (рис. 2Г).
Обсуждение
Проведенные исследования показали, что в фолликулярной жидкости женщин со стимулированной овуляцией уровень 1_-8 был ассоциирован с показателями, характеризующими более ранние параметры оогенеза (количество ооцитов) и эмбриогенеза (лучшее качество 3-сут. эмбрионов), в то время как концентрация свДНК была сопряжена с показателями, характеризующими более поздние этапы эмбриогенеза — формирование бластоцист и исходы цикла ЭКО.
Полученные данные выявили наиболее высокий уровень 1_-8 при меньшем количестве ооцитов и лучшем качестве
3-сут. эмбрионов, что согласуется с результатами работы А. ЭапарИк с соавт. (2012), в которой было обнаружено позитивное влияние 1_-8 на созревание эмбрионов [22]. Авторы также отмечали взаимосвязь повышенного содержания 1_-8 с наступлением беременности, однако в нашей работе мы не выявили аналогичной связи.
Ранее нами было показано, что более высокое содержание свДНК в фолликулярной жидкости коррелирует с большим количеством антральных и овуляторных фолликулов и высоким уровнем АМГ [1]. В других работах был зарегистрирован высокий уровень свДНК у женщин с низким качеством ооцитов [27, 28]. В настоящем исследовании мы не обнаружили значимых различий по уровню свДНК в зависимости от количества ооцитов, но выявили сопряженность высокого уровня свДНК с низким качеством бластоцист. Аналогичные данные были получены в исследовании Е. Бса!1с1 с соавт. (2014). Повышенное содержание свДНК в ФЖ может оказывать негативное влияние не только на формирование бластоцист, но и на развитие эмбриона при наступлении беременности [3, 27]. Об этом свидетельствует ретроспективный анализ о достоверно более высоком уровне свДНК у женщин с неразвивающейся беременностью. В работах I. Д!-8а!еИ с соавт. (2010) и У. Эыап с соавт. (2017) также был выявлен повышенный уровень свДНК в ФЖ у женщин с негативным исходом цикла ЭКО [3, 27].
Высокая концентрация свДНК в фолликулярной жидкости может быть обусловлена повышенным апоптозом
и нетозом иммунокомпетентных клеток в процессе созревания фолликулов. Циркулирующая свДНК способна взаимодействовать с паттерн-распознающими рецепторами: Toll-like 9 (TLR) и RIG-I (RLR) [29, 30], присутствующими на моноцитах (макрофагах), дендритных клетках, нейтрофилах, и активировать клетки иммунной системы, усиливая продукцию провоспалительных цитокинов (хемокинов), в том числе IL-8 [31, 32]. В свою очередь, IL-8 может стимулировать нетоз и образование нейтрофильных внеклеточных ловушек, которые выбрасывают свДНК. Однако при ретроспективном анализе взаимосвязи между свДНК и уровнем IL-8, в том числе в группах, различающихся по количеству ооцитов, качеству эмбрионов и бластоцист, и исходам беременности прямой зависимости между концентрацией свДНК и IL-8 выявлено не было. Более того, в группах женщин с эмбрионами отличного качества и бластоцистами
ЛИТЕРАТУРА [REFERENCES]:
1. Андреева Е.А., Хонина Н.А., Демченко Е.Н. и др. Свободная ДНК в фолликулярной жидкости женщин с различными показателями овари-альной функции и исходами ЭКО. Бюллетень сибирской медицины 2019; 18(2): 16-23. [Andreeva E.A., Khonina N.A., Demchenko E.N. et al. Cell-free DNA in follicular fluid of women with different parameters of ovarian function. Bulletin of Siberian medicine 2019; 18(2): 16-23].
2. Traver S., Scalici E., Mullet T. et al. Cell-free DNA in Human Follicular Microenvironment: New Prognostic Biomarker to Predict in vitro Fertilization Outcomes. PLoS One 2015; 10(8): e0136172.
3. Al-Saleh I., El-Doush I., Arif J. et al. Levels of DNA adducts in the blood and follicular fluid of women undergoing in vitro fertilization treatment and its correlation with the pregnancy outcome. Bull. Environ. Contam. Toxicol. 2010; 84(1): 23-8.
4. Scalici E., Traver S., Molinari N. et al. Cell-free DNA in human follicular fluid as a biomarker of embryo quality. Hum. Reprod. 2014; 29(1): 2661-9.
5. Ralla B., Stephan C., Meller S. et al. Nucleic acid-based biomarkers in body fluids of patients with urologic malignancies. Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 2014; 51(4): 200-31.
6. Furi I., Kalmar A., Wichmann B. et al. Cell free DNA of tumor origin induces a 'metastatic' expression profile in HT-29 cancer cell line. PLoS One 2015; 10(7): e0131699.
7. Thierry A.R., Messaoudi S., Gahan P.B. et al. Origins, structures, and functions of circulating DNA in oncology. Cancer Metastasis Rev. 2016; 35(3): 347-76.
8. Wang W., Kong P., Ma G. et al. Characterization of the release and biological significance of cell-free DNA from breast cancer cell lines. Oncotar-get 2017; 8(26): 43180-91.
9. Duvvuri B., Lood C. Cell-Free DNA as a Biomarker in Autoimmune Rheumatic Diseases. Front. Immunol. 2019; 10: 502.
10. Lam N.Y., Rainer T.H., Chan L.Y. et al. Time course or early and late changes in plasma DNA in trauma patients. Clin. Chem. 2003; 49: 1286-91.
11. Traver S., Assou S., Scalici E. et al. Cell-free nucleic acids as non-invasive biomarkers of gynecological cancers, ovarian, endometrial and obstetric disorders and fetal aneuploidy. Hum. Reprod. Update 2014; 20(6): 905-23.
12. Меняйло М.Е., Малащенко В.В., Шмаров В.А. и др. Интерлей-кин-8 способен поддерживать провоспалительную активность моноцитов (макрофагов) человека. Гены и Клетки 2018; 13(1): 65-9. [Meniailo M.E., Malashchenko V.V., Shmarov V.A. et al. Interleukin-8 is able to promote proinflammatory activity of human monocytes (macrophages). Genes & Cells 2018; 13(1): 65-9].
13. Miyamoto S. Nuclear initiated NF-kB signaling: NEMO and ATM take center stage. Cell Res. 2011; 21: 116-30.
14. Mozzini C., Garbin U., Stranieri C. et al. Nuclear factor kappa B in patients with a history of unstable angina: case re-opened. Intern. Emerg. Med. 2018; 3(5): 699-707.
15. Коротина О.Л., Генералов И.И. Нейтрофильные внеклеточные ловушки: механизмы образования, функции. Иммунопатология, Аллергология, Инфектология 2012; 4: 23-32. [Korotina O.L., Generalov I.I. Neutrophil Extracellular Traps: mechanisms of formation, function. Immunology, Allergology, Infectology 2012; 4: 23-32].
16. Konecna B., Laukova L., Vlkova B. Immune activation by nucleic acids: A role in pregnancy complications. Scand. J. Immunol. 2018; 87(4): e12651.
высокого качества, которые характеризовались более высоким содержанием 1_-8 в ФЖ, между концентрацией свДНК и уровнем 1_-8 была выявлена слабая отрицательная корреляция.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что более высокий уровень 1_-8 в фолликулярной жидкости ассоциирован с меньшим количеством ооцитов и более высоким качеством 3-сут. эмбрионов, в то время как более высокое содержание свДНК сопряжено с низким качеством бластоцист и неразвивающейся беременностью. Учитывая также отсутствие прямой корреляции между 1_-8 и свДНК, можно предположить, что эти факторы являются независимыми, имеют различную направленность эффектов (позитивную для 1_-8 и негативную для свДНК) и влияют на различные этапы репродуктивного процесса (1_-8 на более ранние, а свДНК на более поздние этапы).
17. Hoppenbrouwers T., Autar A.A., Sultan A.R. et al. In vitro induction of NETosis: Comprehensive live imaging comparison and systematic review. PLoS One 2017; 12(5): e0176472.
18. Nie M., Yang L., Bi X. et al. Neutrophil Extracellular Traps Induced by IL8 Promote Diffuse Large B-cell Lymphoma Progression via the TLR9 Signaling. Clin. Cancer Res. 2019; 25(6): 1867-79.
19. Андреева Е.А., Хонина Н.А., Останин А.А. и др. Цитокины в фолликулярной жидкости у женщин в программе ЭкО. Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицины, инновации в репродуктологии»; 23-24 августа 2018; Самара, Россия. Гены и клетки 2018; 13(S1): 40-1. [Andreeva E.A., Khonina N^., Ostanin A.A. et al. Cytokins in follicular fluid of women in IVF program. Proceedings of the All-Russian scientific-practical conference with international participation "Actual issues of medicine, innovation in reproductology"; 2018 Aug 23-24; Samara, Russia. Genes & Cells 2018; 13(S1): 40-1].
20. Palomino D.C., Marti L.C. Chemokines and immunity. Einstein (Sao Paulo) 2015; 13(3): 469-73.
21. Malizia B.A., Wook Y.S., Penzias A.S. et al. The human ovarian follicular fluid level of interleukin-8 is associated with follicular size and patient age. Fertil. Steril. 2010; 93(2): 537-43.
22. Sarapik A., Velthut A., Haller-Kikkatalo K. et al. Follicular proinflammatory cytokines and chemokines as marker of IVF success. Clinical and Developmental Immunology 2012; 2012: 10.
23. Gazvani M.R., Bates M., Vince G. et al. Follicular fluid concentrations of interleukin-12 and interleukin-8 in IVF cycles. Fertil. Steril. 2000; 74(5): 953-8.
24. Gardner D.K., Schoolcraft W.B. Culture and transfer of human blastocysts. Curr. Opin. Obstet. Gynecol. 1999; 11(3): 307-11.
25. Ebner T., Yaman C., Moser M. et al. Embryo fragmentation in vitro and its impact on treatment and pregnancy outcome. Fertil. Steril. 2001; 76(2): 281-5.
26. Martins W.P., Nastri C.O., Rienzi L. et al. Blastocyst vs cleavage-stage embryo transfer: systematic review and meta-analysis of reproductive outcomes. Ultrasound in Obstetrics and Gynecology 2017; 49(5): 583-91.
27. Dimopoulou M., Anifandis G., Messini C.I. et al. Follicular Fluid Oocyte/Cumulus-Free DNA Concentrations as a Potential Biomolecular Marker of Embryo Quality and IVF Outcome. BioMed Research International 2014; 2014: 289306.
28. Guan Y., Zhang W., Wang X. et al. Cell-free DNA induced apoptosis of granulosa cells by oxidative stress. Clin. Chim. Acta. 2017; 473: 213-7.
29. Phillippe M. Cell-free fetal DNA-a trigger for parturition. New Engl. J. Med. 2014; 370(26): 2534-6.
30. Cherepanova A.V., Bushuev A.V., Kharkova M.V. et.al. DNA inhibits dsRNA-induced secretion of pro-inflammatory cytokines by gingival fibroblasts. Immunobiology 2013; 218(2): 272-80.
31. Rossi D., Zliotnik A. The biology of chemokines and their receptors. Annu. Rev. Immunol. 2000; 18: 217-42.
32. Xie K. Interleukin-8 and human cancer biology. Cytokine Growth Factor Rev. 2001; 12: 375-91.
