Сучасні біотехнологічні підходи у виробництві діагностичних препаратів Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

УДК: 619:57.08:616-076:636.5:

Рула О.М., кандидат ветеринарних наук © Нацюнальний науковий центр «1нститут експериментальног I клШчног ветеринарног медицини», м. Хартв

СУЧАСН1 Б1ОТЕХНОЛОГ1ЧН1 П1ДХОДИ У ВИРОБНИЦТВ1 Д1АГНОСТИЧНИХ ПРЕПАРАТ1В

У статт1 представленI результати розробки технолог1чного регламенту отримання позитивних та негативних контролгв, ят входять до складу тест-систем на замшу позитивних гтергмунних та негативних сироваток кровг для серолог1чних дослгджень в1русних хвороб птиц та тварин. В якост1 позитивних та негативних контрол1в у серолог1чних реакц1ях пропонуеться використовувати тдготоват препарати жовттв яець в1д гтер1мушзованих ВСП курей, ят м1стять специф1чт антитыа.

Ключовi слова: високопатогенний грип птищ, ¡нактивована вакцина, екстракти жовттв, тест-система.

Вступ. Складовою частиною контролю за розповсюдженням шфекцшних хвороб тварин вiрусноl етюлогп е своечасна, швидка, рання дiагностика захворювання, яка включае в себе серолопчш дослщження з використанням дiагностичних тест-систем.

Обов'язковим компонентом сучасних тест-систем е позитивш сироватки кровi тварин зi специфiчними антитшами до дослщжуваних збудниюв хвороб та негативш сироватки без антитш, але при отриманнi високоспецифiчних контролiв у процес виробництва виникають труднощi.

По-перше, позитивнi сироватки кровi тварин отримують шляхом riперiмунiзащl останнiх з подальшим тотальним знекровленням. При пiдборi донора враховують його вид, вiк, стать та вщсутшсть циркуляци в органiзмi специфiчних патогенних мiкроорганiзмiв (ВСП), а це, головним чином, тдвищуе собiвартiсть тест-систем.

По-друге, останнiм часом свггова спiльнота пiдiймае питання щодо обмеження використання тварин та птищ в наукових експериментах.

Так, наприклад, США до 2012 року планують повшстю вiдмовитись вiд використання тварин в експериментах - <^вкекщя», а будуть використовувати альтернативш методи, дотримуючись основних принцитв бiоетики (гуманне ставлення до тварин, свщоме 1х використання, високий рiвень утримання, регулятивний контроль, високе усвщомлення громадськостi, вiдкритi дискуси щодо питань етики у проведенш експерименив), якi забезпечують цiлiснiсть експерименту [1].

Метою нашо! роботи було вивчення можливост використання оброблених жовткiв вщ iмунних кур-несучок зi специфiчними антитшами на замшу позитивних сироваток кровi курей, виключивши тотальне знекровлення птищ.

© Рула О.М., 2009

257

Матер1али та методи. В дослщженнях використовували вакцину «АвiФлуВак-ШКВМ - вакцина проти високопатогенного грипу птищ iнактивована емульсована». Гiперiмунiзацiю умовно вшьно! вiд патогенно! мiкрофлори птищ проводили в Кримськш дослiднiй станци ННЦ «1ЕКВМ» на курях 200- та 220-добового вiку кросу «Домшант». Для проведення дослiдження було сформовано групу курчат у кшькост 12 голiв.

Гiперiмунiзацiю проводили шляхом внутршньом'язового введення вакцини в дозi 1,5 см3 з повторним введенням антигену через 3 тижш.

Пщготовку жовтюв для дослiджень здiйснювали згiдно з декларацшним патентом на винахiд «СпоЫб одержання екстракту жовткiв яець диких птахiв для використання в iмунобiологiчних реакцiях» № 70248 иА (автори Музика Д.В., Стегнш Б.Т.) [2].

Рiвень антитiл у сироватках кровi та жовтку яець визначали в реакци затримки гемаглютинаци (РЗГА) за методикою, рекомендованою МЕБ, використовуючи втизняну тест-систему «АвiФлуТест Н5N1», розроблену ННЦ «1ЕКВМ». Пiдготовку сироваток та жовтюв яець проводили згiдно з рекомендащями МЕБ.

Результати дослщжень. Вивчення шдукци антигемаглютинiнiв у сироватках кровi та жовтках яець курей проводили як перед проведенням гшерiмунiзащl, так i в рiзнi строки пiсля не! (на 15-ту добу та через кожш 30 до 300-о! дiби) за допомогою реакци затримки гемаглютинаци, використовуючи тест-систему «АвiФлуТест - Н5Ш».

За результатами дослiджень встановлено високий рiвень антитiл до вiрусу високопатогенного грипу птищ тсля гшерiмунiзацп як у сироватщ кровi, так i в жовтку яець та !х кореляци.

Так, на 15-ту добу пiсля повторного введення антигену титр антитш до високопатогенного грипу птищ у сироватках кровi становив у середньому 9,7 на 30-ту добу спостерiгали !х збiльшення до 10,35 з 60-о! доби вщбувалось поступове зниження, i до кшця дослiду (300 дiб) титр становив 7,5 ^2.

У жовтках яець першi антигемаглютинуючi антитiла були вiдмiченi на 30-ту добу та становили 9,2 з 60-о! добу до 270-о! доби вщбувалось поступове зниження титру 9,65-8,2 i на 300-ту добу вш становив 6,7 log2-.

Як видно з отриманих даних, титри антитш у сироватках кровi за весь перюд проведення (300 дiб) становили в середньому 8,84 (вщ 7,5 log2 до 10,35 ^2), а в жовтках яець - 7,42 (вiд 6,7 до 9,2 log2). У середньому рiзниця титрiв у сироватках кровi та жовтках яець становила 1,42

Рiзниця титрiв у сироватках кровi та жовтках яець гiперiмунiзованоl птицi з кожним мiсяцем змшювалась, коливання в середньому становили 1,33 (вщ 0,6 log2 до 2,6 ^2).

При тривалому збер^анш у замороженому та лiофiлiзовано висушеному станах титри екстрактiв жовткiв залишались активними та специфiчними.

Слiд зазначити, що при тотальному забо! гiперiмунiзованоl птицi можна отримати вiд 10 см3 до 20 см3 сироватки кров^ а при технолопчнш обробщ

258

одного жовтка яйця можна отримати вщ 10 см3 до 15 см3 екстракту жовтка 3i специфiчними антитшами (в середньому за мкяць вщ курки-несучки отримують вщ 20-ти до 25-ти яець).

Висновки.

Таким чином, використання тотального знекровлення гiперiмунiзованих курчат з метою отримання гiперiмунних сироваток не обов'язкове, а бшьш ращонально та економiчно вигiдно з дотриманням основних принцитв бiоетики отримувати вiд гiперiмунiзованих курей-несучок яйця з антигемаглютинуючими антитiлами з моменту яйцекладки та до И припинення (до 6-ти мюящв).

Л1тература

1. Резников А.Г. Проблемы этики при проведении экспериментальных медицинских и биологических исследований на животных в Украине [Текст] /под ред. Ю.И. Кундиева // Антология биоэтики. - Л.: БаК, 2003 - С. 395-399.

2. Декларацшний патент на винахщ № 70248 А. СпоЫб одержання екстракту жовтюв яець диких птахiв для використання в iмунобiологiчних реакщях / Стегнiй Б.Т., Музика Д.В.; 1ЕКВМ УААН. - №20031213291; Заявл. 31.12.2003; Опубл. 15.09.2004. - Бюл. № 9. - 2с.

Summary

The development of technological reglament for making of positive and negative controls which are compounds of test-systems instead of positive hiperimmune and negative blood serum for serological investigations of avian and animal viral diseases have been presented in the paper. It is proposed to use prepared egg yalk extracts with specific antibodies from hiperimmunized SPF hens as positive and negative controls for serological reactions.

Стаття надшшла до редакцИ 3.04.2009

259