CC BY
83
Фармакология, токсикология
УДК 619:615.9
СУБХРОНИЧЕСКАЯ ТОКСИЧНОСТЬ ПРЕПАРАТА БМК ПЛЮС
М.Ю. МЕЛЬНИКОВА аспирант
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина, г. Москва, Б. Черемушкинская, 28, e-mail: vigis@ncport. ru
Оценена субхроническая токсичность препарата БМК плюс при пероральном введении крысам в разных дозах в течение 7 суток. Дозы препарата 480 и 240 мг/кг являются токсическими, доза 120 мг/кг - пороговой и доза 48 мг/кг - недействующей.
Ключевые слова: БМК плюс, субхроническая токсичность, крысы.
БМК плюс представляет собой комбинированное лекарственное средство, содержащее в качестве активных веществ БМК и аверсектин С1 (производное авермектинов; ООО НБЦ «Фармбиомед»). Преимущественным свойством данного лекарственного средства является отсутствие эмбриотоксиче-ского и тератогенного действия. Установлены параметры острого токсического действия препарата [1]. В качестве общей характеристики препарата также необходимо было оценить токсические свойства БМК плюс при повторных введениях.
Целью настоящей работы была оценка токсичности препарата БМК плюс в условиях субхронического опыта.
Материалы и методы
Опыт проводили в июле-августе 2011 г. в виварии ВИГИС в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005) и Правилами лабораторной практики в Российской Федерации (Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации № 798н от 23.08.2010). Эксперименты на животных проводили в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (European Convention for Protection of Vertebrate Animais Used for Experimental and other Scientific Purposes (ETS 123)/ Strasburg, 1986) и Приказом МЗ СССР №755 от 12.08.1977.
Опытными животными служили белые беспородные крысы исходной массой тела 205-210 г. Животных содержали в виварии согласно санитарным правилам и на стандартном рационе [2, 3, 5].
Животных подбирали в группы произвольно методом «случайных чисел», используя в качестве критерия массу тела. Индивидуальные значения массы тела не отклонялись от среднего значения в группе более чем на 10 %. Животных взвешивали на весах ВР-05-МС-3/0.5-БР.
Были сформированы 4 подопытных и 1 контрольная группы по 7 животных в каждой.
Ранее нами установлена среднесмертельная доза при внутрижелудочном введении крысам, составляющая 2400 мг/кг [1]. В настоящем опыте использованы дозы, кратные ЛД50.
Препарат БМК плюс вводили подопытным крысам перорально в дозах: группа 1 - 480 мг/кг (1/5 ЛД50); группа 2 - 240 (1/10 от ЛД50); группа 3 - 120 (1/20 от ЛД50); группа 4 - 48 мг/кг (1/50 от ЛД50). Препарат разводили водой с добавлением твина 80. Крысы пятой группы получали дистиллированную воду и служили контролем.
Во всех случаях обработку проводили в течение 7 сут. В течение всего периода введения препарата крысам наблюдали за общим состоянием и поведением животных, возможной гибелью, приемом корма и воды, видимыми физиологическими функциями и т. п. Ежедневно у крыс регистрировали массу тела.
В конце опыта через 1 сут после последнего введения препарата животных убивали декапитацией и отбирали пробы крови (с и без антикоагулянта) для определения гематологических и биохимических показателей.
Основные показатели периферической крови крыс определяли на гематологическом анализаторе «Abacus JuniorVet» (Австрия), лейкограмму - общепринятым методом, биохимические показатели крови - на анализаторе А-15/25 (Испания). Определяли массу основных органов и рассчитывали массовые коэффициенты. Функциональное состояние ЦНС оценивали по визуальным наблюдениям за двигательной активностью и реакциями на внешние раздражители.
Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики с помощью простого сравнения средних значений по двухстороннему t-критерию Стьюдента. Различия определяли при уровне значимости 0,05.
Результаты и обсуждение
В группе крыс, которым БМК плюс вводили в самой высокой дозе, т. е. 480 мг/кг, примерно после двух введений появились признаки интоксикации (угнетение, отказ от корма). При дальнейшем введении препарата интоксикация нарастала (тремор, прострация). На 5-е сутки в данной подопытной группе пало 5 из 7 крыс.
Более низкая доза 240 мг/кг также вызывала у крыс аналогичные симптомы интоксикации, которые появились несколько позже - на 4-е сутки. К концу опыта в данной группе пало одно животное.
Следует отметить, что описанные симптомы характерны при отравлении аверсектином С1.
В таблице 1 приведены результаты учета прироста массы тела у опытных крыс в сравнении с контролем.
1. Динамика прироста массы тела у крыс при пероральном введении препара-_ та БМК плюс в разных дозах в течение 7 суток (п = 7) _
Доза, мг/кг Масса (г) после введения через... (сутки) % к исходной массе тела
0 1 3 5 7
480 206,86** 204,14** 197,57** 176,75** 168,67** 82,60**
240 207,29±2,5 208,29±2,5* 208,5±7,7* 194,17±8,8* 180,50±6,4* 89,62±4,0 t = 3,22*
120 205,0±3,0 213,14±2,3 228,57±4,1 231,57±4,3 228,14±5,9 112,47±3,3* t = 1,04
48 206,0±3,6 216,29±3,7 225,71±4,5 239,43±5,2 251,43±4,4 133,11±4,1 t = 1,16
Контроль 210,57±1,9 218,43±2,6 230,0±3,1 240,43±4,3 241,57±4,3 121,97±7,8
* Р < 0,05 при критическом = 2,36,
** среднее по двум значениям.
При введении препарата в дозах 480 и 240 мг/кг относительный прирост массы тела был достоверно ниже по сравнению с контролем. Дозы 120 и 48 мг/кг не оказали существенного влияния на динамику прироста массы тела.
В таблице 2 приведены значения относительной массы органов крыс подопытных групп в сравнении с контролем.
2. Значения массовых коэффициентов органов у крыс после введения препа-_рата БМК плюс в разных дозах в течение 7 сут (п = 7; Р > 0,05)_
Доза, Орган
мг/кг сердце легкие печень почки селезенка
480 3,46** 7,60** 33,10** 8,52** 0,97**
240 3,51±0,19 10,06±0,80 34,88±0,56 7,70±0,29 2,26±0,33
1 = 1,08 1 = 2,30 1 = 0,95 1 = 3,59* 1 = 2,11
120 34,13±0,14 6,15±0,48 34,38±4,69 6,83±0,29 3,06±0,34
1 = 0,45 1 = 2,20 1 = 0,37 1 = 0,81 1 = 0,33
48 3,48±0,14 8,94±0,49 37,20±0,77 6,32±0,16 3,39±0,31
1 = 1,16 1 = 1,55 1 = 0,57 1 = 1,22 1 = 0,86
Контроль 3,23±0,15 7,78±0,49 36,33±1,21 6,57±0,10 3,21±0,26
* Р<0,05 при t критическом = 2,36, ** среднее по двум значениям.
Как следует из приведенных данных, введение препарата в дозах 480 и 240 мг/кг привело к повышению массового коэффициента почек. Две другие дозы (120 и 40 мг/кг) не оказали статистически значимого влияния на относительную массу органов.
В таблице 3 приведены результаты определения наиболее информативных гематологических показателей.
Проведем краткий анализ полученных данных при введении БМК плюс в различных дозах. Так, доза 480 мг/кг оказала заметное влияние на гематок-рит. Этот показатель составил 50,85 в сравнении с контрольным значением 44,69±0,61 %; уровень гемоглобина равнялся 161,50 против контрольного значения 138,29±2,13 г/л. Обращает на себя внимание снижение уровня лейкоцитов до 2,65 по сравнению с контрольным значением 14,19±1,08 (*109/л) и снижение относительного числа лимфоцитов до 23,50 против 58,43±5,18 % в контроле. Уровень сегментоядерных нейтрофилов (69,50) значительно превышает контрольное значение 33,86±4,36 %.
В дозе 240 мг/кг препарат вызывал снижение уровня лейкоцитов до 10,12±1,13 в сравнении с контролем - 14,19±1,08 (*109/л), лимфоцитов до 29,50±6,79 % против 58,43±5,18 % в контроле. Повысился уровень сегментоядерных нейтрофилов до 62,67±7,23 % против 33,86±4,3б % в контроле. Таким образом, установлены аналогичные изменения гематологических показателей при введении БМК плюс в дозах 480 и 240 мг/кг.
Введение БМК плюс в дозах 120 и 48 мг/кг не отразилось статистически значимым образом на гематологических показателях крыс.
В таблице 4 приведены результаты биохимических исследований.
В дозе 480 мг/кг наблюдали снижение коэффициента Ритиса до 2,50 в сравнении с контрольным значением 3,96±0,24, активности альфа-амилазы до 272,50 против контрольного значения 457,86±23,07 Е/л и уровня глюкозы до 2,57 в сравнении с контролем 6,31±0,18 ммоль/л.
В дозе 240 мг/кг установлены аналогичные изменения: коэффициент Ритиса составил 2,58±0,3б против контрольного значения 3,96±0,24; активность альфа-амилазы - 343,50±17,74 по сравнению с контролем 457,86±23,07 Е/л и уровень глюкозы снизился до 3,92±0,40 в сравнении с контрольным значением 6,31±0,18 ммоль/л.
Дозы испытуемого препарата 120 и 48 мг/кг не оказали влияния на биохимические показатели крови.
3. Гематологические показатели у крыс после перорального введения препа-
рата БМК плюс в разных дозах в течение 7 сут (n = 7)
Показатель Доза, мг/кг
480 240 120 48 контроль
Гематокрит, % 50,85** 45,18±0,90 t = 0,43 43,49±0,41 t = 1,52 45,20±0,50 t = 0,61 44,69±0,61
Гемоглобин, г/л 161,50** 143,83±2,95 t = 1,43 136,57±1,27 t = 0,64 143,14±1,97 t = 1,55 138,29±2,13
Эритроциты, 1012/л 9,76** 8,34±0,22 t = 0,85 7,80±0,15 t = 1,32 8,05±0,17 t = 0,24 8,10±0,14
Среднее содержание гемоглобина в эритроците, Пг 16,60** 17,27±0,11 t = 1,21 17,54±0,25 t = 1,64 17,37±0,26 t = 1,11 17,07±0,10
Средняя концентрация гемоглобина в эритроците, % 31,75** 31,85±0,34 t = 2,17 31,41±0,06 t = 2,01 31,66±0,21 t = 2,25 30,96±0,20
Средний объем эритроцита, мкм3 52,25** 54,23±0,81 t = 0,99 55,83±0,83 t = 0,63 56,30±0,95 t = 0,98 55,19±0,44
Показатель анизо-цитоза эритроцитов, % 15,35** 14,77±0,21 t = 1,00 14,36±0,22 t = 0,58 14,56±0,09 t = 0,27 14,51±0,11
Лейкоциты, 109/л 2,65** 10,12±1,13 t = 2,39* 11,67±0,83 t = 1,72 13,36±1,05 t = 0,51 14,19±1,08
Тромбоциты, 109/л 825,50** 845,83±78,75 t = 0,23 748,57±3,93 t = 1,77 641,43±84,87 t = 1,94 826,57±25,35
Лейкограмма
Палочкоядер-ные нейтрофи-лы, % 1,00** 2,50±0,89 t = 0,05 1,29±0,42 t = 1,0 2,00±0,76 t = 0,32 2,43±0,97
Сегментоядер-ные нейтрофи-лы, % 69,50** 62,67±7,23 t = 3,24* 32,57±3,56 t = 0,21 28,29±1,84 t = 1,09 33,86±4,36
Эозинофилы, % 0** 0,50±0,34 t = 0,93 0,29±0,18 t = 0,57 0,57±0,30 t = 1,20 0,14±0,14
Моноциты, % 6,0** 4,83±1,11 t = 0,22 6,14±0,83 t = 0,83 5,71±0,47 t = 0,60 5,14±0,74
Лимфоциты, % 23,50** 29,50±6,79 t = 3,16* 59,71±4,51 t = 0,17 63,43±6,15 t = 0,58 58,43±5,18
* Р<0,05 при t критическом = 2,36, ** среднее по двум значениям.
4. Биохимические показатели сыворотки крови у крыс после введения препа-
рата БМК плюс в разных дозах в течение 7 сут (n = 7)
Показа- Доза, мг/кг
тель 480 240 120 48 Контроль
1 2 3 4 5 6
Билирубин общий, 27,8** 13,97±1,46 12,83±0,49 11,99±1,170,49 13,96±0,92
мкмоль/л t = 0,01 t = 1,0 = ,7 4
Билирубин прямой, 7,90** 4,13±0,69 2,86±0,52 2,21±0,26 2,91±0,39
мкмоль/л t = 1,46 t = 0,08 t = 1,39
АСТ, Е/л 251,50** 199,83±13,95 254,71±33,47 214,29±16,11
t = 1,94 t = 0,36 t = 1,17 240,57±13,27
АЛТ, Е/л 105,0** 82,33±7,94 69,71±6,37 61,57±3,39
t = 2,18 t = 0,93 t = 0,10 62,14±3,97
1 2 3 4 5 6
Коэффициент Ритиса 2,50** 2,58±0,36 t = 2,98* 3,53±0,14 t = 1,14 3,56±0,36 t = 0,85 3,96±0,24
Мочевина, ммоль/л 45,25** 8,95±2,48 t = 0,16 9,57±0,52 t = 0,33 8,43±0,26 t = 1,84 9,34±0,38
Креатинин, мкмоль/л 115,50** 38,17±2,69 t = 1,51 44,57±2,43 t = 0,04 40,71±0,94 t = 1,22 44,43±2,66
Общий белок, г/л 66,00** 68,67±2,49 t = 1,03 72,57±1,95 t = 0,27 60,00±1,40 t = 1,27 71,86±1,53
Щелочная фосфатаза, Е/л 277,50** 138,17±14,08 t = 2,23 218,0±29,08 t = 0,23 243,43±31,02 t = 0,59 217±27,61
Альфа-амилаза общая, Е/л 272,50** 343,50±17,74 t = 3,53* 536,0±35,56 t = 1,71 534,0±19,29 t = 2,34 457,86±23,07
Глюкоза, ммоль/л 2,57** 3,92±0,40 t = 5,30* 5,37±0,42 t = 1,91 5,94±0,08 t = 1,78 6,31±0,18
ЛДГ, Е/л 1572,0** 1707,7±129,96 t = 0,98 2154,71±272,95 t = 0,27 2239,86±173,52 t = 0,56 2044±270,26
* Р<0,05 при t критическом = 2,36, ** среднее по двум значениям.
С учетом данных по гибели крыс, динамике прироста массы тела, результатов определения массовых коэффициентов органов, гематологических и биохимических показателей дозы БМК плюс 480 и 240 мг/кг являются токсическими, доза 120 мг/кг - пороговой и доза 48 мг/кг - недействующей.
Литература
1. Мельникова М.Ю.Изучение острой токсичности комбинированного препарата на основе БМК и аверсектина Ci // Матер. докл. науч. конф. Все-рос. о-ва гельминтол. РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - М., 2011. - Вып. 12. - С. 197-201.
2. Правила лабораторной практики. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации № 708н от 23.08.2010.
3. Приказ МЗ СССР № 1045-73 от 06.04.73 «Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментальных биологических клиник (вивариев)».
4. Приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.77 «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных».
5. Приказ МЗ СССР № 1179 от 10.10.83 «Об утверждении нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения».
6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2005.
7. European Convention for Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental and other Scientific Purposes (ETS 123). Strasbourg, 1986.
Subchronic toxicity of BMC plus M. Ju. Melnikova
One investigated toxicity of BMC plus in subchronic trial at peroral administration to rats at four doses for 7 days. The dose levels of 480 and 240 mg/kg of body weight were the toxic ones, the dose level of 120 mg/kg could be assessed as the threshold dose as while the dose level of 48 mg/kg was the no-effect dose.
Keywords: BMC plus, subchronic toxicity, rats.
