CC BY
152
УДК 668.411:674.032.14:678.029
СТРУКТУРНЫЕ ПРЕВРАЩЕНИЯ АРАБИНОГАЛАКТАНА ИЗ ЛИСТВЕННИЦЫ СИБИРСКОЙ ПРИ МЕХАНОХИМИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРОДУКТОВ
© Е.Н. Медведев^ , Н.А. Неверова1, Т.Е. Федорова1, В.А. Бабкин1, Е.С. Метелева2, А.В. Душкин2,
Т.Г. Толстикова3, М.В. Хвостов3, М.П. Долгих3
1 Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского СО РАН, ул. Фаворского, 1, Иркутск, 664033 (Россия) E-mail: [email protected] 2Институт химии твердого тела и механохимии СО РАН, ул. Кутателадзе,18, Новосибирск, 630128 (Россия)
3Новосибирский институт органической химии СО РАН, пр. Академика Лаврентьева, 9, Новосибирск (630090) Россия
Методами гельпроникающей хроматографии и количественной спектроскопии ЯМР 13С установлено, что механохими-ческая обработка арабиногалактана, выделенного из древесины лиственницы сибирской, приводит к изменению молекулярно-массового распределения, моносахаридного состава и степени разветвленности его макромолекул. Это обусловлено процессами частичной деструкции макромолекул полисахарида и последующей рекомбинации образовавшихся фрагментов. Глубина протекания этих процессов зависит от условий механохимического воздействия. На основе данных ИК и ЯМР 13С спектров сделан вывод об отсутствии функционализации макромолекул АГ в изученных условиях. Изучены токсико-фармакологические свойства механообработанного АГ. Острая токсичность его составляет >5000 мг/кг.
Ключевые слова: арабиногалактан из лиственницы сибирской, механохимическая обработка, гельпроникающая хроматография, молекулярно-массовое распределение, моносахаридный состав, количественная спектроскопия ЯМР 13С, токсико-фармакологические исследования
Работа выполнена при финансовой поддержке СО РАН (Комплексный интеграционный проект №4.18
и Междисциплинарный интеграционный проект №54).
Введение
В последние годы растительные полисахариды находят все более широкое применение в качестве лечебных и лечебно-профилактических средств [1]. Одним из наиболее перспективных является водорастворимый полисахарид арабиногалактан (АГ) из древесины лиственницы, обладающий высокой биологической активностью (иммуномодулирующая, пребиотическая, гиполипидемическая, митогенная, антимутагенная, гепатопротекторная, гастропротекторная мембранотропность и др.). Он характеризуется также комплексом других чрезвычайно ценных свойств (низкая токсичность, хорошая растворимость в холодной воде, уникально низкая вязкость концентрированных водных растворов, способность связывать жир и удерживать влагу, диспергирующие свойства и др.). Совокупность этих свойств открывает широкие перспективы использования АГ в медицине, ветеринарии, пищевой и косметической промышленности [2, 3]. Значительный интерес для различных отраслей народного хозяйства, и в первую очередь для медицины, представляют продукты модифицирования АГ [2]. Известно, что арабиногалактан и его окисленные формы способны к образованию межмолекулярных комплексов [4-6], а также к химическому взаимодействию с лекарственными веществами [7-12]. Разработан новый подход к синтезу гибридных наноразмерных металлосодержащих
* Автор, с которым следует вести переписку.
биокомпозитов на основе полимерной матрицы АГ [13]. Имеются сведения о том, что продукты окислительной деструкции АГ под действием пероксида водорода [14] проявляют более высокую биологическую активность по сравнению с исходным полисахаридом [15, 16]. Использование АГ в качестве матрицы-носителя фармаконов позволит снизить токсичность, обеспечить биодоступность и пролонгированность действия последних. При этом может наблюдаться усиление терапевтического действия фармакона [16, 17].
Перспективным способом химической модификации АГ является механическая обработка ударно-истирающими воздействиями, осуществляемая в специальных мельницах - механохимических активаторах. Механохимический путь позволяет получать целевые продукты модификации без участия растворителей, в одну технологическую стадию. Установлено снижение токсичности и повышение биодоступности известных лекарственных средств при совместной механохимической обработке их с АГ, что позволило на порядок уменьшить лечебную дозу этих препаратов [18]. Однако в условиях механохимического воздействия возможны многочисленные физико-химические превращения макромолекул арабиногалактана, связанные, во-первых, с разрывом и образованием валентных связей, а во-вторых, с разрушением и возникновением более слабых межмолекулярных взаимодействий (разупорядочение, конформационные превращения и т.д.) [19]. Все это, в свою очередь, может привести к изменению биологической активности и токсико-фармакологических свойств полисахарида.
Цель настоящей работы - исследование изменений строения и молекулярной массы АГ, выделенного из древесины лиственницы сибирской, в результате механохимической обработки в различных условиях и изучение влияние такого воздействия на его токсико-фармакологические свойства.
Экспериментальная часть
Для исследований использовали два образца арабиногалактана: АГ-1 и АГ-2, полученные из различных партий древесины лиственницы по разработанному нами способу [20, 21]. Образец АГ-1 использовали без очистки, АГ -2 дополнительно очищали переосаждением. Препараты АГ переосаждали из 10%-ных водных растворов в пятикратный объем этанола.
Для проведения механохимической обработки использовали планетарную мельницу АГО-2 с объемом барабана 40 мл. Режим обработки: ускорение мелющих тел 60 g, мелющие тела - стальные шары диаметром 6 мм, загрузка 75 г, масса обрабатываемой смеси 3 г. Максимальное время обработки составляло 15 мин.
Использовали также мягкий режим механической обработки, для этого применялась валковая мельница ВМ-1 с барабаном, имеющим фторопластовую футеровку. В качестве мелющих тел использовались стальные шары (марка стали ШХ-15) диаметром 15 мм, загрузка 675 г. Ускорение мелющих тел - 1 g (свободное падение). Объем барабана - 300 мл. Общая загрузка компонентов обрабатываемой смеси составляла 20 г, продолжительность механической обработки - от 2 до 12 ч.
Молекулярно-массовое распределение (ММР) образцов исследовали методом гельпроникающей хроматографии (ГПХ) на колонке (1,0 х 65 см) с сефадексом G 100, откалиброванной по декстранам с молекулярными массами 10500, 20000, 41272, 70000 и D-галактозе. В качестве растворителя и элюента использовали 1 М раствора NaCl. Отбирали фракции по 1 мл со скоростью элюирования 15-17 мл/ч. Содержание АГ во фракциях определяли фенол-сернокислотным методом [22]. ИК-спектры образцов сняты в таблетках с KBr на спектрофотометре «Specord 75 IR» в интервале 500-4000 см-1.
Спектры ЯМР 13С образцов АГ регистрировали на спектрометре Bruker DPX 400 с рабочей частотой 100 МГц, растворитель - D20. Внутренним стандартом служил дейтероацетон. В качестве релаксанта использовался трис-ацетилацетонат хрома Cr(AcAc)3 в концентрации 0,02 М.
При измерении интенсивностей резонансных сигналов на спектрометре ЯМР устанавливался следующий режим работы: ширина развертки - 30000 Гц; длительность импульса - 90о; релаксационная задержка - 8 с; соотношение сигнал/шум - не менее 200; стабилизация резонансных условий осуществлялась по сигналу дейтерорастворителя; температура в датчике была постоянной и составляла 298±0,1 К.
Соотношение звеньев галактозы и арабинозы в составе макромолекул АГ рассчитывали по соотношению интегральных интенсивностей сигналов аномерных атомов углерода галактозы и арабинозы (Gal/Ara).
Токсико-фармакологические тесты. Изучение фармакологической активности и определение острой токсичности механически обработанного арабиногалактана АГ-1 проводили на белых беспородных мышах
массой 18-20 г и крысах массой 150-200 г, предоставленных лабораторией экспериментальных животных ИЦиГ СО РАН. Животные содержались в стандартных условиях, со свободным доступом к пище и воде.
Определение острой токсичности проводили на мышах по методу Кербера при однократном внутриже-лудочном введении.
Влияние арабиногалактана на центральную нервную систему оценивали с использованием стандартного теста «открытое поле». Эффект оценивался по изменению количества различных видов движений и общего эмоционального состояния животных. Регистрация двигательных актов производилась автоматически в установке «TRUSCAN» («Coulbourn instruments», США). Арабиногалактан вводили мышам однократно внут-рижелудочно в дозе 20 мг/кг за час до воспроизведения теста. В качестве эталона сравнения служил анксио-литик сибазон, вводимый в терапевтической дозе 2,5 мг/кг по аналогичной схеме.
Оценку воздействия АГ на артериальное давление (АД) и параметры электрокардиограммы (ЭКГ) животных изучали на крысах путем внутривенного введения в дозах 3,5 и 0,35 мг/кг. ЭКГ регистрировалась во втором стандартном отведении, артериальное давление контролировалось путем введении канюли в сонную артерию животного. Все параметры фиксировались при помощи прибора фирмы «Coulbourn instruments» (США). Анализ ЭКГ и АД проводился с помощью программы National Instruments LabVIEW 5.1. Обработку данных вели с помощью программы «Statistica 6.0» посредством усреднения основных показателей систолического АД. В качестве отклонения от среднего значения использовалась средняя статистическая ошибка, в качестве критерия достоверности был взят t-критерий Стьюдента.
Обсуждение результатов
Механохимическая обработка является перспективным методом повышения реакционной способности органического сырья природного происхождения. Имеются данные о влиянии механодеструкции бурых углей на состав и свойства выделяемых из них гуминовых кислот - высокомолекулярных природных полимеров нерегулярного строения [23].
Ранее нами было показано, что молекулярно-массовые характеристики и моносахаридный состав макромолекул АГ зависят от способа выделения и очистки препаратов [24]. Следовало ожидать, что интенсивное механическое воздействие также вызовет изменение этих важнейших свойств полисахарида.
По данным ГПХ, исходный образец АГ-1 имеет среднюю молекулярную массу 13490 Да и характеризуется довольно узким ММР (табл. 1). После переосаждения его средняя молекулярная масса увеличивается, вероятно, за счет удаления низкомолекулярных фракций, которые растворяются в осадителе - этиловом спирте [14, 24]. Их содержание в АГ-1 составляет 15% (табл. 1). Данные ИК-спектров исходного и очищенного переосаж-дением образцов идентичны и совпадают с представленными в работе [25]. В результате механохимической обработки в интенсивном режиме (в планетарной мельнице АГО-2) уже через 3 мин. происходит деструкция макромолекул полисахарида, что подтверждается существенным снижением выхода не растворимых в этаноле высокомолекулярных фракций и значительным увеличением ММР. Эти процессы углубляются с увеличением продолжительности обработки (табл. 1, рис. 1). Кроме того, на гель-хроматограммах появляются пики, соответствующие более высоким, чем у исходных образцов, молекулярным массам. Вероятно, в процессе обработки, наряду с деструкцией макромолекул полисахарида с образованием олигомеров, происходит рекомбинация образующихся фрагментов. Подтверждением этого может также служить несколько более высокий выход высокомолекулярных фракций после переосаждения образцов, обработанных в АГО-2 в течение 6-15 мин (табл. 1, образцы 3а, 4а, 5а) по сравнению с образцом, обработанным 3 мин.
После обработки образца АГ-1 в «мягких» условиях (ВМ-1) более ярко выражены процессы рекомбинации, и, как следствие, средняя ММ макромолекул полисахарида снижается в меньшей степени (рис. 2), при этом ММР увеличивается значительно больше (табл. 1, опыт 6).
Представлялось интересным исследовать продукты механохимической обработки арабиногалактана, дополнительно очищенного переосаждением (АГ-2). Переосажденные образцы АГ-1 и АГ-2 имеют практически одинаковые молекулярно-массовые характеристики, (табл. 1, образцы 1а и 7 соответственно), что подтверждает вывод о влиянии способа очистки на ММР макромолекул АГ. Данные, представленные в таблице 1, свидетельствуют о том, что предварительное удаление низкомолекулярных фракций несколько снижает степень деструкции макромолекул полисахарида после механохимического воздействия, что выражается в снижении значений ММР.
Таблица 1. Молекулярно-массовые характеристики образцов АГ после механохимической обработки
Образец Условия обработки Выход после переосаждения, % Mw M„ ММР (MwMn)
АГ-1
1 - - 14560 11800 1,23
1а Переосажденнный образец 1 85 18140 13400 1,35
2 АГО-2, 3 мин - 9920 4980 1,99
2а Переосажденный образец 2 58 14000 8060 1,74
3 АГО-2, 6 мин - 10230 3630 2,81
3а Переосажденный образец 3 69 12130 4200 2,88
4 АГО-2, 10 мин - 7190 2390 3,00
4а Переосажденный образец 4 72 10890 4580 2,38
5 АГО-2, 15 мин - 7250 2320 3,13
5а Переосажденный образец 5 64 11790 6210 1,90
6 ВМ-1, 4 ч - 14680 3780 3,88
6а Переосажденный образец 6 67 15880 7150 2,22
АГ-2
7 - - 17870 13770 1,30
7а Переосажденный образец 7 90 - - -
8 АГО-2, 3 мин - 9770 4420 2,21
8а Переосажденный образец 8 82 - - -
9 АГО-2, 6 мин - 10430 4310 2,42
9а Переосажденный образец 9 90 - - -
10 АГО-2, 10 мин - 7120 2990 2,38
10а Переосажденный образец 10 88 - - -
11 АГО-2, 15 мин - 7320 3310 2,21
11а Переосажденный образец 11 86 - - -
12 ВМ-1, 2 ч - 17670 6920 2,55
12а Переосажденный образец 12 72 - - -
13 ВМ-1, 6 ч - 18180 6940 2,62
13а Переосажденный образец 13 81
14 ВМ-1, 12 ч - 20860 7580 2,75
14 а Переосажденный образец 14 86 - - -
Повышение степени полидисперсности полисахарида после обработки образца АГ -2 в «мягких» условиях (табл. 1) в значительной степени обусловлено образованием высокомолекулярных продуктов. Об этом свидетельствует значительное (на 20-30% по сравнению с АГ-1) снижение содержания низкомолекулярных фракций, удаляемых при переосаждении механообработанных образцов, а также тот факт, что с увеличением продолжительности обработки образцов на их гель-хроматограммах растет интенсивность пиков, соответствующих средним молекулярным массам от 47000 до 280000 Да.
Полученные результаты согласуются с данными спектроскопии ЯМР 13С. Анализ спектров ЯМР 13С исходных и механоактивированных образцов АГ свидетельствует о том, что обработка приводит к изменению соотношения ва1/Ага в макромолекуле полисахарида (табл. 2). Обработка АГ-1 в мельницах АГО-2 и ВМ-1 приводит к получению продукта с более высоким соотношением ва1/Ага. Для АГ-2 наблюдается уменьшение этого соотношения с увеличением продолжительности механоактивации полисахарида.
Таблица 2. Структурные параметры образцов АГ-2, рассчитанные из спектров ЯМР 13С
Условия обработки Gal/Ara C-3 / C-3 -’зам' -’незам C-6зaм/ C-6незaм c s t
АГ-1
- 8,3 0,70 2,70 8 6,1 5,3
АГО-2, 3 мин 13,7 0,55 2,05 8 7,2 7,4
АГО-2, 15 мин 13,6 0,59 2,32 8 7,1 6,5
ВМ-1, 4 ч 12,2 0,77 2,33 8 5,5 4,9
АГ-2
- 18,0 0,92 2,79 8 4,3 4,4
АГО-2, 3 мин 12,8 0,76 1,68 8 3,6 6,9
АГО-2, 15 мин 17,5 0,68 1,82 8 4,7 7,0
ВМ-1, 2 ч 18,9 0,67 2,90 8 6,8 5,1
ВМ-1, 6 ч 14,8 0,79 2,72 8 5,2 4,9
ВМ-1, 12 ч 10,3 0,78 2,96 8 5,6 4,6
Рис. 1. Гель-хроматограммы образцов после обработки в АГО-2
Объем удерживания, мл
рис. 2. Гель-хроматограммы образцов после обработки в ВМ-1 в течение 4 ч
Объем удерживания, мл
Использование количественной спектроскопии ЯМР С позволяет оценить соотношение основных структурных галактозных фрагментов макромолекул АГ:
^■3)-р-Б-Оф-(1^
6
т
1
Р-Б-ваІ/»
6
т
1
Р-Б-ваІ/»
С 8 І
Звенья галактанового кора Звенья боковых цепей Концевые звенья
Относительные соотношения фрагментов с, 8 и І можно определить из количественных спектров ЯМР 13С образцов АГ сравнением интегральных интенсивностей сигналов незамещенных атомов С-6 (5 61,3 м. д.) и С-3 (5 73,9 м.д.) галактозных звеньев и атомов С-6 (5 68,9 м.д.) и С-3 (5 81,7 м.д.) галактозы, участвующих в образовании гликозидных связей [26]. Структурные параметры образцов АГ, приведенные в таблице 2, показывают, что механоактивация образцов в мельницах обоих типов затрагивает основной галактановый кор макромолекул. Уменьшение соотношения замещенных и незамещенных атомов С-3 галактозных звеньев может свидетельствовать о фрагментации (олигомеризации) макромолекул АГ, что хорошо согласуется с одновременным увеличением относительного содержания концевых звеньев (І) и звеньев галактозных боковых цепей (8). На снижение средней молекулярной массы образцов АГ после механоактивации указывают более узкие и разрешенные сигналы атомов углерода галактозных звеньев полисахарида в спектрах ЯМР 13С по сравнению с исходным АГ (рис. 3). Необходимо также отметить значительное увеличение интегральной интенсивности сигнала аномерных атомов углерода концевых галактозных звеньев при 103,9 м.д., что подтверждает предположение о фрагментации макромолекул АГ.
Идентичность ИК-спектров всех исследованных образцов свидетельствует о том, что деструкция макромолекул АГ при механохимической активации не сопровождается окислительными процессами. Это подтверждается также отсутствием в спектрах ЯМР 13С образцов АГ сигналов в области 160-220 м. д.
Для образца АГ-1, обработанного в мельнице АГО-2, подвергшегося значительной механодеструкции (табл. 1, образец 3), были проведены токсико-фармакологические исследования. Установлено, что определенная для данного образца ЛД50, составившая более 5000 мг/кг, фактически не отличается от среднесмертельной дозы исходного арабиногалактана.
В тесте «открытое поле» при изучении воздействия на центральную нервную систему вышеуказанного препарата в дозе 20 мг/кг впервые показана аналогичная сибазону противотревожная активность (табл. 3), проявляющаяся в увеличении времени и количества исследованных отверстий и количества вертикальных стоек у животных.
Кроме того, установлено, что механически обработанный образец при однократном внутривенном введении в дозе 3,5 мг/кг незначительно (на 6%), но достоверно понижает артериальное давление у нормотен-зивных крыс и не оказывает воздействия на параметры ЭКГ и частоту сердечных сокращений.
110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55
(ррт)
110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55
(ррт)
АГ-1, обработанный в ВМ-1 (4 ч)
Рис. 3. Спектры ЯМР 13С образцов
110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55
(ррт)
арабиногалактана
Таблица 3. Показатели двигательной активности мышей после введения механоактивированного образца арабиногалактана
Группа А Б В Г Д Е Ж З
Контроль 13,0±1,0 102,1±1,4 17,8±1,4 311,9±26,6 2,6±0,2 3,9±0,4 5,0±0,4 2,4±0,4
Сибазон, 2,5 мг/кг 10,3±0,7 107,0±2,1 13,0±2,1 385,5±38,1* 3,2±0,3* 7,0±1,2* 8,0±1,1* 0,0±0,0
АГ, 20 мг/кг 9,4±0,8 107,2±1,9 12,8±1,9 308,0±15,9 2,5±0,1 7,0±1,3* 8,0±1,7* 0,0±0,0
Р < 0,05 достоверность по сравнению с контрольной группой; А - общая двигательная активность (количество актов); Б - двигательная активность (с); В - неподвижный момент (иммобильность, с); Г - дистанция движения (см);
Д - скорость движения (см/с); Е - количество исследованных отверстий; Ж - время исследовательских реакций (с);
З - количество вертикальных вставаний.
Выводы
Все вышесказанное позволяет сделать вывод об отсутствии токсического действия АГ, подвергшегося довольно глубокой механодеструкции.
Совокупность полученных результатов свидетельствует о перспективности применения механохимиче-ской модификации арабиногалактана для его использования в качестве матрицы-носителя лекарственных веществ.
Список литературы
1. Криштанова Н.А., Сафонова М.Ю., Болотова В.Ц. Перспективы использования растительных полисахаридов в качестве лечебных и лечебно-профилактических средств // Вестник ВГУ. Серия химия. Биология. Фармация.
2005. №1. С. 212-221.
2. Медведева Е.Н., Бабкин В.А., Остроухова Л.А. Арабиногалактан лиственницы - свойства и перспективы использования (обзор) // Химия растительного сырья. 2003. №1. С. 27-37.
3. Медведева С.А., Александрова Г.П. Стратегия модификации и биопотенциал природного полисахарида арабиногалактана // Панорама современной химии России. Синтез и модификация полимеров. М., 2003. С. 328-356.
4. Бадыкова Л.А. Взаимодействие арабиногалактана сибирской лиственницы с 5-аминосалициловой кислотой, 4-аминосалициловой кислотой и гидразидом изоникотиновой кислоты: автореф. дисс. ... канд. хим. наук. Уфа, 2007. 27 с.
5. Бадыкова Л.А., Мударисова Р.Х., Борисов И.М., Монаков Ю.Б. Модификация природного полисахарида арабиногалактана ампициллином // Химия и технология растительных веществ: тез. докл. IV Всеросс. научн. конф. Сыктывкар, 2006. С. 29.
6. Контяева Е.И., Мударисова Р.Х. Синтез комплексов арабиногалактана сибирской лиственницы и его окисленных фракций с йодом // Химия и медицина: тез. докл. VI Всеросс. научн. семинара. Уфа, 2007. С. 171.
7. Patent №6011008 (USA) Drug conjugates with oxidized arabinogalactan or dextran / A.J. Domb, S. Benita, I. Polachek, G. Linden / 2000. CA 2000. V. 132, P. 69331.
8. Nogawa M., Akaike T., Maruyama A. Polyethylenimine/arabinogalactan conjugate as a hepatocyte specific gene carrier // S.T.P. Pharma Sciences. 2001. V. 11. №1. P. 91-102.
9. Assam T., Eliyahu H., Shapira L., Linial M., Barenholz Y., Domb A.J. Polysaccharide-oligoamine based conjugates for gene delivery // Journal Med. Chem. 2002. V. 45. №9. P. 1817-1824.
10. Ehrenfreund-Kleinman T., Azzam T., Falk R., Golenser J., Domb A.J. Synthesis and characterization of novel water soluble amphotericin B - arabinogalactan conjugates // Biomaterials. 2002. V. 23. №5. P. 1327-1335.
11. Josephson L., Rutkowski J.V., Paul K., Frugo T., Groman E.V. Antiviral activity of a adenine-9-P-D-arabinofuranoside-5'-monophosphate and a 9 kDa fragment of arabinogalactan // Antiviral Therapy. 1996. V. 1. №3. P. 147-156.
12. Сухов Б.Г., Александрова Г.П., Ганенко Т.В., Грищенко Л.А. и др. Полисахарид арабиногалактан как перспективная матрица для иммобилизации лекарственных средств // Химия и медицина: тез. докл. VI Всеросс. научн. семинара. Уфа, 2007. С. 95-96.
13. Грищенко Л.А. Металлосодержащие нанокомпозиты на основе арабиногалактана: дисс. ... канд. хим. наук. Иркутск, 2007. 158 c.
14. Широкова Е. Н. Окисление арабиногалактана под действием пероксида водорода и персульфата калия в водной среде: автореф. дисс. ... канд. хим. наук. Уфа, 2003. 22 с.
15. Мударисова Р.Х., Широкова Е.Н., Бадыкова Л.А., Борисов И.М. и др. Синтез и фармакологическая активность окисленных фракций арабиногалактана лиственницы сибирской (Larix sibirica L.) // Химико-фармацевтический журнал. 2005. Т. 39. №8. С. 23-26.
16. Бадыкова Л.А., Мударисова Р.Х., Толстикова Т.Г., Борисов И.М., Монаков Ю.Б. Модификация ноли- и олигосахаридов на основе арабиногалактана 5-аминосалициловой кислотой // Химия природных соединений. 2005. №3. С. 219-222.
17. Мударисова Р.Х., Бадыкова Л.А., Толстикова Т.Г., Александрова Г.П. и др. Модификация арабиногалактана и его окисленных фракций 5-аминосалициловой кислотой // Журнал прикладной химии. 2005. Т. 78. №10. С. 1721-1724.
18. Метелева Е.С., Душкин А.В., Толстикова Т.Г., Толстиков Г.А. и др. Механохимическое получение и фармакологическая активность водорастворимых комплексов арабиногалактана и лекарственных веществ // Химия и медицина: тез. докл. VI Всеросс. научн. семинара. Уфа, 2007. С. 189-190.
19. Дубинская Л.М. Превращения органических веществ нод действием механических напряжений // Успехи химии. 1999. №68. С. 708-724.
20. Медведева Е.Н., Бабкин В.Л., Макаренко О.Л., Николаев С.М. и др. Получение высокочистого арабиногалактана лиственницы и исследование его иммуномодулирующих свойств // Химия растительного сырья. 2004. №4. С. 17-23.
21. Патент РФ №2256668. Способ получения арабиногалактана / В.Л. Бабкин, Л.Г. Колзунова, Е.Н. Медведева, Ю.А. Малков, Л.А. Остроухова / 2005. БИ. №20.
22. Dubois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Rebers P.A., Smith F. Colorimetric method for determination of sugars and related substances // Analytical Chemistry. 1956. V. 28. №.3. P. 350-356.
23. Федорова Т.Е. Количественная спектроскопия ЯМР 13C, 17О и физиологическая активность гуминовых кислот: автореф. дисс. ... канд. хим. наук. Иркутск, 2000. 24 с.
24. Медведева Е.Н., Федорова Т.Е., Ванина Л.С., Рохин Л.В. и др. Влияние способа выделения и очистки арабино-галактана из древесины лиственницы сибирской на его строение и свойства // Химия растительного сырья.
2006. №1. С. 25-32.
25. Антонова Г.Ф., Тюкавкина Н.Л. Получение высокочистого арабиногалактана из древесины лиственницы // Химия древесины. 1976. №4. С. 60-62.
26. Karacsonyi S., Kovacik V., Alfoldi J., Kubackova M. Chemical and 13C studies of arabinogalactan from Larix sibirica L. // Carbohydrate Research. 1984. V. 134. P. 265-274.
Поступило в редакцию 11 июля 2008 г.
