CC BY
7
и у интактных самок. оплодотворенных подопытными самцами (табл. 2). При воздействии эдила в дозе 0,15 мг/кг не выявлено отрицательного влияния на половые железы экспериментальных животных.
На основании полученных результатов можно предположить, что нарушение двигательной активности спермиев является следствием утраты ими функциональной зрелости. Нарушения, возникающие в половых клетках, реализуются снижением их способности к оплодотворению. В оплодотворенных яйцеклетках в процессе развития не обнаружено изменений показателей, характеризующих репродуктивную функцию животных.
Таким образом, эдил в дозе 1,5 мг/кг вызывает нарушения репродуктивной функции крыс, сопровождающиеся изменением функционального состояния сперматозоидов и снижением плодовитости животных.
По воздействию на гонады в хроническом эксперименте дозу 1,5 мг/кг можно считать близкой к пороговой. Полученные данные учтены при гигиенической регламентации)^ эдила.
Литература
1. Беленький М. Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. Л., 1965.
2. Методические указания по гигиенической оценке новых пестицидов. Киев, 1969.
3. Саноцкий И. В., Авхименко М. М., Фоменко В. П. — В кн.: Методы определения токсичности и опасности химических веществ. М., 1970, с. 245—264.
Поступила 20.12.84
УДК 614.7:547.538.1411-07:616.453-099-09!+ 615.917:547.538.141].015.44:616.453-099-091
В. В. Попучиев, Л. Ш. Сафинова
СТРУКТУРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ СТИРОЛА НА КОРУ НАДПОЧЕЧНИКОВ
Институт гигиены и профзаболеваний, Уфа
При воздействии факторов внешней среды на организм важное место в реализации адаптационных реакций принадлежит коре надпочечников. Известно, что она проявляет высокую чувствительность к действию стирола, изменяя при этом свою функциональную активность [3, 7].
В задачу данной работы входило выявление функционально-морфологического субстрата действия стирола на кору надпочечников методом количественной гистохимии.
Работа проведека на беспородных крысах-самках массой 160—180 г. Животных опытной группы подвергали ежедневной 4-часовой ингаляционной затравке стиролом в концентрации на уровне порога хронического действия (100 мг/м3) в течение 3 сут, 1 и 4 мес. Контрольных животных ежедневно на 4 ч помещали в камеры, аналогичные затравочным, в которые подавали чистый воздух. Для стандартизации эксперимента животных забивали декапитацией в фазе диэструс в утренние часы. Надпочечник извлекали и замораживали в изооктане, охлажденном жидким азотом. Одновременно брали кровь для выявления 11-оксикортикостероидов (11-ОКС) [5]. Гистохимические реакции проводили на 10 микронных крио-статных срезах надпочечников. Инкубацию всего материала осуществляли одновременно в одних и тех же инкубационных средах согласно необходимым требованиям [4].
Функционально-морфологическое состояние коры надпочечников в процессе эксперимента оценивали по энергообеспечению клетки, маркером которого является активность НАД • Н-дегидрогеназы (НАД-Н-ДГ), метаболизму стероидной функции кортикоцнтов по активности фермента специфического синтеза 11-ОКС 1 lfS-гидроксилазы, содержанию предшественников стероидных гормонов (липи-дов), состоянию мембранно-транспортных процессов эндотелия микрососудов по активности 5-нуклеотидазы. Активность НАД-Н-ДГ определяли по М. Берстону [2], активность 11 p-гндроксилазы по методу М. Baillie [8]. уровень липидов — Суданом черным, активность 5-нуклеотидазы — по методу Вахштейн — Л^айзеля [2].
Количественный гистохимический анализ проводили двумя цитоспектрофотометрнческими методами: активность НАД-Н-ДГ, 11-гидрокснлазы и содержание липидов измеряли фотографическим методом (фотосъемка препаратов на микроскопе МУФ-6 с последующей фотометрией негативов на микроспектрофотометре МФ-2), активность 5-нуклеотидазы— плаг-методом [1]. Фотометр сконструирован на основе микроскопа ЛЮМА.М-Р с фотометрической насадкой ФМЭЛ-1.
Статистическую обработку результатов фотометрии проводили на ЭВМ ЕС-1022 с использованием методов пара-
метрической и непараметрической статистики по программе, разработанной для функционально-морфологического исследования эндокринной системы [6].
Изучение активности 5-нуклеотидазы — фермента, маркирующего состояние мембранно-транспортных процессов, показало, что уже на 3-й сутки затравки стиролом про-
35 15' Ю 5 О -5 -Ю -15 -20 -25
20 15 10 5 О -5 -Ю -15
Ж
ПО 3
гго з
>20
ж
330
120
зоко
30120
ж
20 15
ю
5
о
-5
-ю
-15
з т П_п Г
Щ1 330120 330
120
20 10 О -10 -20 -30 -40
Ж
гот 3 30J2Q 330т-1
"Q
А А
А
г
А-1
Результаты исследования активности 5-нуклеотидазы (Л), содержания липидов (Б), активности НАД-Н-ДГ (В) ИР-ОН-СГ (Г).
По оси абсцисс — сроки эксперимента (в сут); по оси ординат — единицы оптической плотности (» % от контроля); / — клубочко-вая зона, // — пучковая зона, /// — сетчатая зона; / — достоверная разница относительно контроля.
%
исходит активация фермента, наиболее выраженная в пуч--> новой и сетчатой зонах коры надпочечников (рисунок, А).
^ От 3-х суток к месячному сроку эксперимента активность 5-нуклеотидазы угнетается во всех зонах, особенно в сетчатой зоне коры надпочечников, где активность фермента к этому времени ниже контроля. К концу затравки активность 5-нуклеотидазы во всех зонах колеблется в пределах контроля.
Полученные результаты позволяют констатировать, с одной стороны, раннюю чувствительность микрососудов внутренних зон коры надпочечников к действию стирола, с другой — угнетение активности мембранно-транспортных процессов к 1-му месяцу опыта, особенно в сетчатой зоне, что подтверждается четким накоплением в ней ли-пидов (рисунок, Б).
При исследовании неспецифнческого метаболического показателя, отражающего состояние энергообеспечения клетки (активность НАД-Н-ДГ), на 3-й сутки опыта выявлено угнетение активности фермента в клубочковой и сетчатой зонах коры надпочечников, однако в ранний срок эксперимента оно было незначительно по амплитуде и отсутствовало в пучковой зоне. Через месяц от начала опыта активность НАД-Н-ДГ во внутренних отделах коры надпочечников повышалась, а в клубочковой зоне сохранялась на уровне предыдущего срока. К концу экспери-—X мента во всех зонах органа активность НАД-Н-ДГ ока-^Е" залась выше, чем в контроле.
При исследовании активности фермента специфического синтеза 11-ОКС 11 {5-гидроксилазы четкие изменения этого показателя обнаруживались лишь спустя месяц от начала затравки стиролом и характеризовались угнетением активности фермента во всех зонах коры надпочечников. К концу опыта в клубочковой и пучковой зонах активность 11Р-гидроксилазы оставалась ниже контрольного уровня и только в сетчатой зоне приближалась к нему.
Таким образом, количественный гистохимический анализ коры надпочечников при хроническом воздействии стиролом позволил получить конкретные данные о динамике метаболических показателей кортикоцитов, которые могут оказаться полезными при выяснении механизмов действия стирола на кору надпочечников. В условиях хронического действия стирола на первый план выступают ранние из-
менения проницаемости мембран микрососудов внутренних отделов коры надпочечников, которые, сопровождаясь параллельными изменениями неспецифических метаболических процессов клетки, приводят в дальнейшем к угнетению активности 110-гидроксилазы. Это в свою очередь, по-видимому, и является непосредственным морфологическим субстратом снижения функции органа к концу опыта в виде уменьшения содержания 11-ОКС в крови экспериментальных животных.
На основании проведенных исследований можно сделать следующие выводы. Микрососуды внутренних отделов коры надпочечников проявляют высокую и раннюю чувствительность к действию стирола. Изменения состояния мембранно-транспортных процессов сопровождаются изменениями неспецифнческих метаболических процессов в клетке, что приводит к угнетению активности фермента специфического синтеза 11-ОКС 1 ip-гидроксилазы в коре надпочечников и объясняет снижение функции органа к концу хронической затравки.
Литература
1. Агроскин JI. С., Папаян Г. В. Цитофотометрня (Аппаратура и методы анализа клеток по светопоглощению). М., 1977.
2. Берстон М. Гистохимия ферментов. М., 1965.
3. Бурлака-Вовк 3. И., Г внес В. С., Марченко О. А. — В кн.: Эндокринная система организма и токсические факторы внешней среды. Л., 1980, с. 19—24.
4. Журавлева Т. Б., Прочуханов Р. А. Введение в количественную гистохимию ферментов. М„ 1978.
5. Павлихина JI. В., Усватова И.Я-, Бунятян А. Ф. — В кн.: Методы исследования некоторых систем гуморальной регуляции. М., 1967, с. 50—59.
6. Равкин И. А.—Труды Ленинград, науч. о-ва патологоанатомов, 1976, вып. 17, с. 283—285.
7. Фаустов С. А., Панковец О. А. — В кн.: Эндокринная система организма и токсические факторы внешней среды. Л., 1980, с. 371—375.
8. Baillie А. Н„ Ferguson М. М„ Calman К. С. et al.— J. Endocr., 1965, vol. 33, p. 119—125.
Поступила 24.12.81
УДК 615.282.099:616.36-091 «5»
Т. В. Пастушенко, К. С. Волков, JI. Б. Маруший. Ю. А. Полипенко
ИЗМЕНЕНИЕ ГЕПАТОЦИТОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ МЕТИЛ-1\1-2-(БЕНЗИМИДОЗОЛИЛ) КАРБАМАТА
Тернопольский медицинский институт
Целью настоящей работы являлось изучение ультраструктурной организации гепатоцнтов при воздействии отечественного фунгицида метил-Ы-2-(бензимидозолил) кар-бамата (БМК).
Опыты выполнены на половозрелых беспородных белых крысах-самцах массой 200—220 г, которым в течение 2, 4, 8 и 15 дней внутрижелудочно вводили БМК в дозе 510 мг/кг (1/20 Ь05с)- Животных забивали с соблюдением правила «одного часа». Ультраструктуру гепатоцитов исследовали у 15 крыс: 3 были контрольными, каждая подопытная группа состояла также из 3 животных. Исследования проводили на 2, 4, 8 и 15-е сутки от начала интоксикации БМК. Для электронно-микроскопических исследований маленькие кусочки печени сразу после дека-пнтацнн животных фиксировали в 2,5 % растворе глута-ральдегида, постфнксировали в 1 % растворе четырехоки-си осмия, дегидратировали в спиртах и ацетоне, окрашивали уранилацетатом и заливали в эпоксидные смолы. Ультратонкие срезы контрастировали цитратом свинца по Рейнольдсу и изучали в электронном микроскопе ЭВМ-100ЛМ при ускоряющем напряжении 75 кВ.
При электронно-микроскопическом исследовании гепа-
$
тоцитов на 2-е сутки воздействия БМК наблюдалось значительное расширение цистерн эндоплазматическон сети, канальцев и пузырьков комплекса Гольджи. В ядрах заметно увеличены перинуклеарные пространства, ядрышки небольшие, компактные. Митохондрии уменьшены в размерах, деформированы, их наружная мембрана становится извитой. Умеренно плотный матрикс митохондрий содержит небольшое число крист. В различных участках цитоплазмы и особенно в области спавшихся желчных капилляров повышено число первичных и вторичных лизо-сом. Гранулы гликогена почти не выявляются (рис. 1).
На 4-е сутки воздействия БМК степень выраженности деструктивных изменений в гепатоцитах нарастает. Цистерны эндоплазматичсской сети резко расширены, элементы комплекса Гольджи образуют большие полости неправильной формы. Отдельные митохондрии значительно сморщены и подвергаются разрушению. Цитолемма гепатоцитов на многих участках выглядит нечеткой, размытой (рис. 2).
Для 8-х суток воздействия БМК характерно повышение осмиофильности цитоплазмы большинства гепатоцитов. Эндоплазматическая сеть и комплекс Гольджи под-
