CC BY
21
Against the background of application of biological preparations activization of growth and development of bull-calves during the periods of cultivation, growing and sagination is established that has caused higher lethal and meat qualities of hulks and, as a result, an exit of valuable junctures: spinnermodel - on 6,1 and 4,0 kg (Р<0,01-0,001), lumbar - on 2,6 and 1,7 kg (Р<0,05-0,01) and coxofemoral - on 8,6 and 7,1 kg (Р<0,001), than control. The largest content of pulp of the premium characterized carcasses of bull- calves of the 1st (27,8±0,72 kg) and the 2nd (26,7±0,58 kg) skilled groups respectively on 3,5 and 2,4 kg in comparison with control (24,3±0,73 kg) and also their juncture: spinnermodel- on 0,9 and 0,7 kg, lumbar - on 0,5 and 0,3 kg, coxofemoral - on 2,3 and 1,5 kg (Р<0,05-0,001). On the basis of veterinary and sanitary assessment it is revealed that meat of the bull-calves who are grown up against the background of an intramuscular injection of biological preparations didn't differ from those in control on organoleptic, biochemical and spectrometer indicators. It is established what realization of bioresource potential of an organism of bull-calves has been caused by activization of a hematopoiesis, cellular and humoral factors of nonspecific stability biological preparations, at more expressed corresponding effect Prevention-N-A.
УДК 611.018:[616.36-06:616.995.122]-092.9
СТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ГЕПАТОЦИТОВ И КЛЕТОК КУПФЕРА, ПРОВОЦИРУЕМЫЕ ОСТРОЙ ФАЗОЙ ОПИСТОРХОЗА
Сидельникова А.А. - к.м.н., доцент
ФГБОУ ВО «Кемеровский государственный медицинский университет»
Ключевые слова: кошачья двуустка, описторхоз, острая фаза, печень, гепатоциты, макрофаги, клетки Купфера.
Key words: Opisthorchis felineus, opisthorchiasis, acute phase, liver, hepatocytes, macrophages, Kupffer cells.
При моделировании описторхоза на стандартной модели - золотистых хомяках в ранние сроки происходят выраженные изменения печени, с расширением желчных протоков, а через 10 недель - мелкоочаговая баллонная и гид-ропическая дистрофия гепатоцитов [2]. При описторхозе, как известно, происходит фиброзирование паренхимы печени, с преимущественным поражением системы желчных протоков [8, 15]. Клетки Купфера имеют по отношению к клеткам печени разнообразные регуляторные воздействия, особенно при воспалительных процессах в печени, вызывая повреждение и гибель наиболее поврежденных ге-патоцитов, или стимулируют пролиферацию неповрежденных [10, 14]. При эндогенной интоксикации происходит достоверное увеличение среднего размера ядер
клеток Купфера [1]. Клетки Купфера являются специфическими макрофагами, но и гепатоциты способны к фагоцитозу, как неспецифические клетки [3, 9]. Следовательно, как функции клеток могут быть смежными в условиях общего фактора повреждения, сопровождающегося массовой гибелью собственных структур из-за приспособления паразита, например, Opisthorchis felineus, так и структурные нарушения самих клеток.
Цель исследования: выявить и изучить структурные особенности гепа-тоцитов и клеток Купфера при остром индуцированном описторхозе.
Материалы и методы исследований: эксперимент проведен на самцах кроликов, достигших половозрелого возраста 6 месяцев (п=10). Контрольную группу составили условно здоровые жи-
вотные, которых не подвергали заражению (п=10). При работе автор руководствовалась «Правилами проведения работ и использованием экспериментальных животных». Работа одобрена этическим комитетом ФГБОУ ВО КемГМУ. Для моделирования описторхоза в эксперименте использовали рыбу (елец), выловленную из реки Томь, предоставленную кафедрой ихтиологии и гидробиологии ТГУ (г. Томск), из мышечной ткани которой с помощью компрессориума отбирали метацеркарии Ор18ШогсЫ8 ГеНпеш, с наличием движения в капсуле. Заражение проводили утром натощак путем перорального введения порций мяса рыб содержащих по 50 метацеркариев на каждое животное. Состоявшуюся инвазию констатировали трехкратным анализом кала обнаружением яиц трематод методом Като-Миура через 1 месяц и 1 неделю, после чего выводили из эксперимента. В контрольной группе был получен отрицательный результат. Всех животных выводили из эксперимента в горизонтальном положении, с применением миорелаксанта Роме-тар (премедикация) и наркоза Золетил (Ксилазин). После чего получали секционный материал печени, фиксировали в 10 % нейтральном формалине. Затем промывали в водопроводной воде, обезвоживали спиртами восходящей концентрации, подготавливали к парафинирова-нию смесью спирт-эфир (ксилол), далее порцией чистого ксилола, затем смесью ксилол-гистомикс (кашица) инкубировали при температуре 37°С, после чего парафинировали в трех порциях расплавленного при темературе 56 °С гисто-микса, потом заливали в блоки. С помощью санного микротома делали ультратонкие срезы толщиной 4 мкм, и монтировали на предметные стекла. Окрашивали гистологические срезы основным красителем гематоксилином и кислым красителем эозином. Заливали срезы в полистерол. Исследование микропрепаратов проводили световой микроскопией с помощью микроскопа Альтами, Авст-
рия. Фотографии с микропрепаратов снимали цифровой камерой Альтами, с корректировкой в программе Альтами Студио 3.3. Оценивали структурные особенности и тинкториальные свойства клеток печени на микропрепаратах. Морфометрию размеров клеток проводили с помощью программы AxioVision Rel. 4.8.1. в цифровых показателях камеры не менее 10 измерений. Кариомет-рию проводили по наибольшей длине при овальной форме ядер клеток. После калибровки цифровой системы микроскопа с помощью окуляр-микрометра и объект-микрометра, перевод в микрометры проводили с вычислением коэффициента преобразования цифровых показателей камеры. Статистическую обработку данных проводили с помощью приложения Microsoft Office Exel 2007, с вычислением среднего арифметического и стандартной ошибки среднего. Межгрупповое сравнение данных проводили методом непараметрической статистики для малых выборок с ненормальным распределением -критерием Манна-Уитни, с уровнем доверительной вероятности р < 0,05.
Результаты исследований. Часть гепатоцитов (первый тип) при остром описторхозе имели полигональную форму, аналогичную клеткам контрольной группы. Однако, из-за расширенных синусоидальных пространств форма других клеток была круглая или вытянутая. Окраска их цитоплазмы была оксифиль-ная. Структура цитоплазмы мелкозернистая. Гранулы в цитоплазме имели окси-фильную окраску. Единственное ядро гепатоцитов базофильной окраски, располагалось по центру. В других гепато-цитах окраска цитоплазмы и структура была идентична первому типу, но они имели два ядра (второй тип). Около ядер второго типа гепатоцитов отмечали наличие 1 -2 светлых вакуолей. При оценке морфометрических данных размер гепа-тоцитов первого типа составил 23,61±5,49 мкм, второго типа -25,04±6,19 мкм [5]. Размеры гепатоцитов контрольной группы составили
30,10±3,845 мкм. Соответственно, по сравнению с контролем различия статистически значимы для первого типа (и=16; р < 0,05), и для второго типа (и=22; р < 0,05).
Другая часть гепатоцитов, около портальных трактов, структурно отличалась (третий тип). Эти клетки замечали на периферии дольки, они располагались группами, были расценены нами ранее как клетки Краевского [6]. В группе находилось по 4-10 клеток. Причем, среди них были как одноядерные, так и дву-ядерные. Они отличались слабоокси-фильной бледной цитоплазмой, размытыми контурами кариолеммы ядра. Их размеры составили 53,21±11,88 мкм. Размеры этих гепатоцитов, по сравнению с нормой, больше в 1,76 раз. При сравнении с данными контрольной группы различия статистически значимы (и=0; р < 0,05).
Размер ядер гепатоцитов первого типа составлял 11,19±1,63 мкм, а средний размер ядер клеток второго типа составлял 9,39±1,69 мкм. Ядра располагались по центру клетки, различались структурно. Отмечали нечеткие границы ка-риолеммы ядер клеток у второго типа. Также можно было отметить, что одно ядро было резко базофильной окраски, а другое - слабо базофильной. Средний размер ядер клеток третьего типа составил 10,47±2,247 мкм. В контрольной группе размер ядер составил 13,93±1,701 мкм. Значит, размеры ядер первого типа по сравнению с контролем были меньше в 1,24 раз, второго - в 1,48 раз, а третьего
- 1,33 раза. По сравнению с контролем, различия уровня признака первого типа статистически значимы (и=8; р < 0,05), второго типа статистически значимы (и=1; р < 0,05), третьего типа аналогично (и=8; р < 0,05).
Между печеночными балками располагались клетки Купфера. Причем, около расширенных синусоидальных пространств, ядра этих клеток не визуализировались и лишь у отдельных клеток сохранялись края (рисунок 1). Ядра клеток наблюдали в центре дольки между сохранными печеночными балками. Синусоидальные пространства приобретали круглую или овальную форму, в них располагались извитые фибриллы бледной оксифильной окраски. Эти фибриллы считали новообразованными коллагено-выми волокнами. Отмечено, что отдельные расширенные синусоидальные пространства локализовались у центральной вены печеночной дольки, и напротив, были многочисленны в дольке ближе к периферии, в области портальных трактов.
Размеры ядер сохранных клеток Купфера составляли 12,467±2,752 мкм. В контрольной группе размер ядер клеток Купфера составил 10,53±1,946 мкм. При межгрупповом сравнении различия считали статистически значимыми (и=9; р<0,05).
Так, размер ядер клеток Купфера в печени животных экспериментальной группы больше значения контроля на 1,937 мкм. Значит, превышение размеров было в 1,18 раз.
Рисунок 1 - клетки Купфера
Таким образом, по сравнению с контролем, гепатоциты в острой фазе описторхоза имели полиморфное строение, ядерный аппарат варьировал в размерах, что, по-видимому, обусловлено повреждением ядерных структур и процессов транспорта, приводящее к изменению их величины. Нарушение тинкто-риальных свойств цитоплазмы гепатоци-тов связывали с возможным разрушением зерен гликогена, отеком цитоплазмы. Наличие групп клеток Краевского на периферии дольки печени, по-видимому, обусловлено резкими метаболическими нарушениями в борьбе за кислород. Хотя клетки Краевского обнаруживают при явлениях острой гипоксии [4]. Их наличие в острой фазе описторхоза вероятно связано с повреждением процессов доступа газа или транспорта через мембрану, а возможно и связывания с мембраной клетки - повреждение рецепторного аппарата. Определенную роль здесь отводили расширенным и коллагенизирован-ным синусоидальным пространствам. Расширенные синусоиды, по-видимому, сдавливали гепатоциты печеночных ба-
лок дольки. Расширение синусоидов, вероятно, связано с повышенным кровенаполнением дольки, или застоем крови в дольке из-за спазма гладких миоцитов сфинктеров вокругдольковых сосудов. Множество работ представляет данные, что при метаболических изменениях связанных с образованием свободных радикалов, так называемого окислительного стресса, происходит фиброзирование паренхимы печени [11, 12, 13]. Значит, при недостатке кислорода коллагенообразо-вание можно ассоциировать с явлениями гипоксии и сопряженного окислительного стресса в острой фазе описторхоза.
Отсутствие ядер клеток Купфера между печеночными балками считали признаком их поражения или гибели. При влиянии клеток Купфера на систему ге-патоцитов инициируются процессы конкуренции за кислород [10]. Следовательно, избирательно погибали гепато-циты или клетки Купфера. Фиброзирова-ние и дистрофия паренхимы очевидно происходила от синусоидов, вероятно, пространства Диссе. Кроме того, большие размеры сохраненных клеток Куп-
фера, возможно, характеризовали их активацию, функциональную гипертрофию в сравнении с нормой. Как известно, клетки Купфера являются специфическими макрофагами печени [7]. Значит, можно считать, что фагоцитоз при опи-сторхозе, по крайней мере, в острой фазе, является несостоятельным, из-за отсутствия естественной популяции клеток, повреждением их ядерного аппарата. Хотя возможно этот признак, как следствие, может приводить к парадоксальному всплеску функциональной активности сохранных клеток, что может оставаться предметом дискуссий и дальнейшего исследования.
Заключение. При описторхозе в острой фазе через 1 месяц и 1 неделю наблюдали полиморфность строения гепа-тоцитов классической печеночной дольки. Гепатоциты при острой фазе описторхоза отличались нарушением формы и тинкториальных свойств цитоплазмы, меньшими размерами ядра и имели структурные признаки гипоксиче-ских изменений. Сохраненные клетки Купфера имели достоверно больший размер ядра по сравнению с контролем и лежали у расширенных синусоидальных пространств, форма которых была изменена, в их просвете располагались колла-геновые фибриллы.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Барканов, В.Б. Участие хронической эндогенной интоксикации в спай-кообразовании грудной и брюшной полостей / В.Б. Барканов, В.В. Вавилов, А.Н. Горячев и др // В сб.: Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии, Волгоград. - 2010. -С.5-9.
2. Максимова, Г.А. Экспериментальная модель описторхоза на хомяках (Mesocricetus auratus) / Г.А. Максимова, Н.А. Жукова, Е.В. Кашина, М.Н. Львова, А.В. Катохин и др. // Бюллетень сибирской медицины. - 2012. - № 6. - С.59-65. [
3. Одинцов, Ю.Н. Последствия ин-тернализации и фагоцитоза листерий при инфекционном процессе / Ю.Н. Одинцов,
B.М. Перельмутер // Бюллетень сибирской медицины. 2003. № 4. С. 120-126.
4. Повзун С.А. Важнейшие синдромы: патогенез и патологическая анатомия. СПб.: ООО «ИПК «Коста», 2009. 403 с.
5. Сидельникова, А.А.. Гистологические особенности гепатоцитов при остром индуцированном описторхозе / А.А. Сидельникова, Л.В. Нечаев // Материалы XIII международной заочной научно-практической конференции «Наука в современном информационном обществе»-4 октября 2017 г. - Том 3. - С.6-8.
6. Сидельникова, А.А. Новые аспекты гистоархитектоники печени в ранние сроки индуцированного описторхоза / А.А. Сидельникова, Л.В. Нечаев // Журнал научных статей «Здоровье и образование в 21 веке».- 2017. - Т. 19. - № 10. -
C. 321- 323.
7. Струков А.И., Серов В.В., Сар-кисов Д.С. Общая патология человека. М.: Медицина, 1990. С.105-114, 370-376.
8. Чистяченко Ю. С., Хвостов М.
B., Белоусов А. И., Жукова НА., Пахару-кова М. Ю., Катохин А.В. Халиков С.С., Толстикова Т.Г., Душкин А.В., Мордвинов В.А., Ляхов Н.З. Физико-химические свойства и противоописторхозное действие механохимически синтезированных супрамолекулярных комплексов альбен-дазола с полисахарида арабиногалактана Larix sibrica и Larix gmelinii. В сб.: доклады Академии Наук - 2014. - Т.456 -№ 6. - С. 1-3.
9. Шерлок Ш., Дули Дж. Заболевания печени и жёлчных путей. М.: ГЭО-ТАР, 1999. 864 с.
10. Элбакидзе, Г.М. Внутриорган-ные и внутритканевые механизмы регу-ляторных воздействий клеток Купфера на гепатоциты/ Г.М. Элбакидзе, А.Г. Ме-денцев // Вестник РАМН. - 2013. - № 2. -
C.50-55.
11. Giuseppe P. Pathogenesis of liver fibrosis: role of oxidative stress // Molecular Aspects of Medicine. - 2000. - 21(3): 4998.
12. Ghatak S., Biswas A., Dhali G.K., Chowdhury A. et al. Oxidative stress and hepatic stellate cell activation are key events in arsenic induced liver fibrosis in mice // Toxicology and Applied Pharmacology. - 2011. - 251(1): 59-69.
13. Jaeschke H., McGill, Ramachandran A. Oxidant stress, mitochondria, and cell death mechanisms in drug-induced liverinjury: lessons learned from acetaminophen hepatotoxicity // Drug Metab Rev. - 2012 - 44(1): 88-106.
14. Lee U. E., Friedman S. L. Mechanisms of hepatic fibrogenesis // Best Practice & Research Clinical Gastroenterol-ogy. -2011 - 25 (2): 195-206.
15. Surapaitoon A.,Suttiprapa S., Mairiang E.,Khuntikeo N. et al. Subsets of Inflammatory Cytokine Gene Polymorphisms are Associated with Risk of Carcinogenic Liver Fluke Opisthorchis viverrini-Associated Advanced Periductal Fibrosis and Cholangiocarcinoma // Korean J Parasitol.- 2017. - 55(3): 295-304.
СТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ГЕПАТОЦИТОВ И КЛЕТОК КУПФЕРА, ПРОВОЦИРУЕМЫЕ ОСТРОЙ ФАЗОЙ ОПИСТОРХОЗА
Сидельникова А.А.
Резюме
При моделировании описторхоза у кроликов, взрослых самцов, инвазией по 50 метацеркариев Opisthorchis felineus через 1 месяц и 1 неделю проведено гистологическое исследование клеток печени. Порции мяса рыб (ельца) с личинками скармливали животным, через 1 месяц и 1 неделю подтверждали состоявшуюся инвазию обнаружением яиц трематод методом Като-Миура, после чего выводили животных из эксперимента. Микропрепараты окрашены гематоксилин-эозином, изучены с помощью световой микроскопии, с проведением морфометрии гепатоцитов и макрофагов печени - клеток Купфера. Целью исследования было установить особенности строения гепатоцитов и клеток Купфера в острую фазу описторхоза. Для этого измеряли клетки и их структуры, выявляли отличия от нормы в сравнении. Установлено, что гепатоциты можно разделить по структурным признакам на три группы, первый - с измененной формой, второй -двуядерные клетки, третий - с множественными структурными изменениями. По сравнению с контролем они отличались большим размером в 1,76 раз, большим размером ядра в 1,33 раза, измененными тинкториальными свойствами, по сравнению с нормой. Также проведена межгрупповая сравнительная характеристика. В классической дольке печени наблюдали отсутствие многих клеток Купфера. Лишь отдельные клетки Купфера у края расширенных синусоидальных пространств. Размеры ядер сохраненных клеток Купфера больше значений нормы в 1,18 раз. Форма синусоидальных пространств изменена, расширена, с тонкими оксифильными коллагеновыми фибриллами в просветах. Подобные изменения гепатоцитов и клеток Купфера мы трактуем как структурные изменения, ассоциированные с гипоксией и интоксикацией, обусловленные острой фазой инвазии Opisthorchis felineus. Выявленные изменения в синусоидальных пространствах классической дольки печени расцениваем как начало фиброзирования печени, но не из соединительной ткани портальных трактов, а из пространства Диссе синусоидальных сосудов.
STRUCTURAL CHANGES OF THE HEPATOCYTES AND KUPFFER CELLS, MAKING AN ACUTE PHASE OF OPISTHORCHIASIS
Sidelnikova A. A.
Summary
In the simulation of opisthorchiasis in rabbits, adult males, 50 metacercarial invasion of Opisthorchis felineus in 1 month and 1 week, histological examination of the liver cells. Servings of meat fish (Dace) larvae fed animals after 1 month and 1 week confirmed well-established invasive detection of trematode eggs using the Kato-Miura, after which animals were taken from experiment. The micro specimens hematoxylin-eosin, examined by light microscopy, morphometry of hepatocytes and macrophages liver - Kupffer cells. The aim of the study was to determine the peculiarities of the structure of hepatocytes and Kupffer cells in the acute phase of opisthorchiasis. For this I measured the cells and their structures, identify differences from the norm in comparison. It is established that hepatocytes can be divided on structural grounds into three groups, the first modified form, the second dual-core cells, the third with multiple structural changes. Compared with the control, they differed a lot size of 1,76 times, a large nucleolus size of 1,33 times, altered tinctorial properties, compared to the norm. Also conducted cross-group comparative analysis. Classic lobe of the liver was observed the absence of many of the Kupffer cells. Only a few Kupffer cells at the edge of the dilated sinusoidal spaces. The dimensions of the nuclei saved Kupffer cells more normal values of 1,18 times. The shape of the sinusoidal spaces modified, extended, with fine oxyphilic collagen fibrils in the gaps. Such changes of the hepatocytes and Kupffer cells we treated as structural changes associated with hypoxia and intoxication caused by acute phase of Opisthorchis felineus invasion. Changes in the sinusoidal spaces of the classical lobules of the liver regarded as the beginning of fibrosis of the liver, but not from the connective tissue of portal tracts, and the space of disse sinusoidal vessels.
УДК:619:579.862.1
ИЗУЧЕНИЕ РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА STREPTOCOCCUS НА РАЗЛИЧНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ
Тахавиев И.Г. - аспирант, Алимов А.М.- д.в.н., профессор ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»
Ключевые слова: бактерии, питательные среды, интенсивность роста, стрептококки.
Key words: bacteria, nutrient media, growth intensity, streptococci
Для культивирования микроорганизмов в искусственных условиях in vitro - необходимы особые субстраты — питательные среды разного химического состава, соответствующие требованиям изучаемого вида.
Питательные среды являются основным звеном в системе микробиологических работ, и их качество нередко определяет результаты всего исследования,
которые должны создавать наилучшие (оптимальные) условия для жизнедеятельности культур[5].
В последние годы значительное развитие получают многокомпонентные синтетические среды, содержащие только химически чистые соединения. Достоинством синтетических питательных сред является стандартность и воспроизводимость с высокой степенью точности.
