CC BY
17
Серия «Биология. Экология» и З В Е С Т И Я
| | 2012. Т. 5, № 1. С 11-19 Иркутского
V^' / Онлайн-доступ к журналу: государственного
^ 1Щ1 ^ http://isu.ru/izvestia университета
УДК 616-008.87-07.097.931
Структура видового разнообразия лактобацилл из вагинального биотопа женщин, проживающих в г. Иркутске
1 2 2 2 2 П. А. Медведева , Ю. П. Джиоев , С. М. Попкова , И. Н. Данусевич , Л. С. Козлова ,
2 2 1 1 Н. М. Шабанова , Е. В. Бухарова , Г. В. Юринова , В. П. Саловарова
1 Иркутский государственный университет, Иркутск
2 Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН, Иркутск E-mail: alanir07@mail.ru
Аннотация. Получены данные по разнообразию лактобацилл, выделенных из вагинального биотопа женщин, проживающих в г. Иркутске. Для диагностики видов лактобацилл впервые в региональной практике использован метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Показано превалирование Lactobacillus plantarum и L. crispatus, присутствующих более чем в 50 % образцов исследуемой выборки. Выявлены три ценотиче-ские группы: дефицитная, переходная и нормоценоз. Определены комбинации ассоциации исследуемых видов: по степени видовой совместимости выделяются L. iners + L. plantarum.
Ключевые слова: виды лактобацилл, ПЦР, вагинальный биотоп, видовое разнообразие, комбинации видовых ассоциаций.
Введение
Лактобациллы представляют собой микроорганизмы, широко распространённые в организме человека. Это микроаэрофильные, грам-положительные бактерии, не образующие спор, но обладающие высокой биологической и функциональной активностью, что определяет их практическое использование в качестве пробиотиков в производстве пищевых продуктов. Они также являются важной составляющей нормальной микрофлоры пищеварительного и урогенитального тракта человека, но в наибольшей мере доминируют во влагалищной среде женщин (95-98 %) [5; 7; 8; 11; 12]. Благодаря продукции органических кислот, перекисей и бактериоцинов многие виды лактобацилл проявляют выраженную антагонистическую активность в отношении патогенных и оппортунистических микроорганизмов [7; 16; 17; 18]. В условиях кислой среды лактобактерии активно конкурируют с другими микроорганизмами за возможность продуктивного патофизиологического контакта (адгезии) с клетками эпителия влагалища, а также стимулируют иммунную систему макроорганизма [11; 12]. В то же время нарушения состава инди-генной микрофлоры (лактобацилл, бифидобактерий), которые нередко протекают бессимптомно, патогенетически связаны с широким спектром акушерских и гинекологических ос-
ложнений [1; 4; 12; 13]. Поэтому лактобациллы, будучи доминирующей флорой влагалища женщин, могут служить критерием микроэко-логического благополучия или возможных патологий в организме [4; 5; 8].
Биохимические и морфологические свойства лактобацилл являются в настоящее время основным и единственным критерием их межродовой и видовой идентификации. Важным дополнением к классической биохимической идентификации может стать метод видового генотипирования с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР). В последние годы в медицинскую практику стали внедрять молекулярно-генетические методы диагностики (ПЦР, секвенирование, биочипы), поскольку они, обладая высокой чувствительностью и специфичностью, часто предпочтительны в случае необходимости получения быстрого и достаточно точного диагностического результата [2; 6; 9; 10]. Благодаря этим методам можно получать более глубокую и обширную информацию о структуре видов на молекулярном уровне, анализировать взаимоотношения между видами на различных систематических уровнях.
Всё больший интерес как биологов, так и медиков в области клинической микробиологии представляют исследования, в которых выявляются ассоциативные взаимоотношения родственных видов [15; 17]. Результаты подобных исследований дают новую информацию
как о взаимоотношениях между видами, так и о разнообразной ответной реакции иммунной системы хозяина на определенную структуру комбинационного разнообразия ассоциации видов. Из этих исследований также следует, что от структуры и степени взаимосвязанности видов во многом зависит устойчивость микробиоты к экологическому прессингу, дисбиоти-ческим состояниям и способность формировать защитный барьер для развития многих инфекционных и неинфекционных патологий в организме хозяина [15].
Целью данной работы явилось выявление региональных особенностей видового и ассоциативного разнообразия видов лактобацилл, количественная и качественная оценка их взаимоотношений в популяционной выборке из вагинального биотопа женщин, проживающих в условиях промышленного города.
Материалы и методы
Исследуемая выборка состояла из 43 образцов бактериальной культуры лактобацилл, полученных в лаборатории микроэкологии Научного центра проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН. Первичный материал был получен из вагинальных смывов от группы женщин г. Иркутска разного возраста.
Биомасса бактерий была выращена на виноградно-сахарном бульоне. Для выделения ДНК бактерий из культуральной среды использовали комплект реагентов «ДНК-сорб-В» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия). В качестве мишеней для генотипирования был выбран информационный ген 168 рРНК лактобацилл. Типирование проводили с пятью парами праймеров (табл. 1) специфичных для соответствующих видов лактобацилл, отобранных согласно рекомендациям [14; 18]. Для ПЦР-амплификации использовали коммерческий набор «АтрН8еп8-200-1» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия). Реакция амплификации для всех 5 пар праймеров была модифицирована и оптимизирована и проходила по следующей схеме: первичная денатурация ДНК-95 °С - 2 мин, далее 35 циклов амплификации при условиях: 95 °С - 1 мин, 56 °С - 1 мин, 72 °С - 1 мин и заключительная элонгация -72 °С - 3 мин. Электрофорез ПЦР-фрагментов ДНК лактобацилл проводили с использованием 1,0%-ного агарозного геля в 1-кратном трис-ацетатном буфере. Размеры амплифицирован-ных фрагментов идентифицировали в соответствии с протоколом стандартных маркеров молекулярной массы ДНК («Бегтеп^», Литва).
Таблица 1
Нуклеотидные структуры видовых праймеров, используемых для типирования лактобацилл [14; 18]
Виды лактобацилл Прайме- ры Структура нуклеотидных последовательностей Размер ампликона (н.о.)
L .gasseri F 5’- AGC GAG CTT GCC TAG ATG AAT TTG- 3’ 320
R 5’- TCT TTT AAA CTC TAG ACA TGC GTC- 3’
L. iners F 5’- CTC TGC CTT GAA GAT CGG AGT GC- 3’ 250
R 5’- ACA GTT GAT AGG CAT CAT CTG-3’
L. jensoni F 5’- AAG TCG AGC GAG CTT GCC TAT AGA- 3’ 250
R 5’- CTT CTT TCA TGC GAA AGT AGC- 3’
L. crispatus F 5’- AGC GAG CGG AAC TAA CAG ATT TAC- 3’ 154
R 5’- AGC TGA TCA TGC GAT CTG CTT- 3’
L. plantarum F 5’- AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG- 3’ 550
R 5’- GCT GGC ACG TAG TTA GCC- 3’
Примечание: F - прямой праймер; R - обратный праймер; н.о.- нуклеотидные основания
Для оценки взаимоотношений между родственными видами лактобацилл использовали формулу, определяющую коэффициент сходства между парами видов бактерий, предложенную Жаккаром (Р = ав/Ы), форм. 1 [3]. В рамках конкретного микробиоценоза взаимоотношения между двумя видами оценивали, рассматривая отношение Р/С из коэффициента сходства. При этом Р рассчитывается как вероятное число выборок, в котором два случайно попавших вида
живут совместно, равное ав/Ы (1), С - как число выборок, содержащих оба вида; а - число выборок с видом А; в - число выборок с видом В; N - общее число выборок. При этом считается, что: 1) при соотношении Р > С (или Р > 1) оба вида исключают друг друга; 2) при соотношении Р = С (или Р = 1) они могут распределяться случайно; 3) при соотношении Р < С (или Р < 1) оба вида склоны к совместному обитанию. По результатам расчётов формулы
Р = ав/Ы (1)
не определяется степень совместимости или расхождения между парами видов, здесь выявляется лишь наличие сходства или различия, что не даёт полную информацию о взаимоотношении видов. Нами использована формула
К = Р/С, (2)
где показатель К определяет степень совместимости пар видов в микробиоценозе, а количественные значения Р и С используются из выше приведённых расчётов (1). При этом, чем меньше единицы значение К, тем сильнее выражена степень совместимости пар видов, а чем оно больше единицы, тем выше степень парной несовместимости видов.
Результаты и обсуждение
Результаты исследования, полученные посредством ПЦР-амплификации, и визуализированные электрофорезом в агарозном геле, представлены на рис. 1, количественные пока-
затели геновидового типирования представлены в табл. 2.
Используемые праймеры достаточно чётко разделяют соответствующие виды лактобацилл в общей массе микроорганизмов вагинального биотопа (рис. 1), что свидетельствует как об их высокой видоспецифичности, так и технической и информационной достоверности полученных результатов. В разной степени количественного и качественного аспекта все 5 исследуемых видов лактобацилл выявлены в исследуемой выборке (см. табл. 2). Показано, что подобранный в ходе исследования общий режим амплификации для всех пяти пар праймеров, специфичных к видам лактобацилл, является оптимальным и результативным (см. рис.
1, табл. 1). Полагаем, что такая оптимизированная технология амплификации специфичных фрагментов ДНК искомых видов позволит в перспективе разработать мультиплексный вариант ПЦР-диагностики для видовой идентификации лактобацилл.
К М
К М
<=
154 н.о.
Рис. 1. Образцы электрофореграмм результатов ПЦР-анализа с видовыми праймерами на 168 г ККА: а - Ь. ]'етопі ~ 250 нуклеотидных оснований (н.о.); Ь - Ь. iners ~250 н.о.; с - Ь. gasseri ~ 320.; d - Ь. рїапґагит ~ 550 н.о; е - Ь. егізраШ ~154 н.о.; М - маркер длины ДНК фрагментов; -К - отрицательный контроль
е
Таблица 2
Результаты видового типирования лактобацилл методом ПЦР-амплификации
№ № образца Возраст (лет) Ь. gasseri Ь. іпеп' Ь. ]етопі Ь. егізраґш Ь. рїапґа-тт Группы сочетания видов
1 663 24 - - - + + 2
2 664 21 - - - - + 1
3 665 36 - - - - - 0
4 647 36 + - - + - 2
5 672 22 + - - - - 1
6 673 27 + - - + - 2
7 681 25 - - - + - 1
8 693 29 - - - - - 0
9 694 28 - - - - - 0
10 636 26 - + + - + 3
11 630 38 - - - - + 1
12 604 34 - - - + + 2
13 607 21 + + - - + 3
14 606 19 - - - - + 1
15 586 32 - - + - + 2
16 569 23 - - + - + 2
17 633 35 + - - - + 2
18 631 29 - - + + - 2
19 568 26 - - + + - 2
20 629 30 - - - + - 1
21 621 24 - - + + + 3
22 605 41 + + + + + 5
23 584 25 - - + + + 3
24 603 35 + - + + - 3
25 632 26 - - - - + 1
26 1671 22 - + - + + 3
27 1761 34 - - - + + 2
28 1667 32 - + + + + 4
29 1760 36 - - - + + 2
30 1642 31 - + - + + 3
31 1611 36 - + + + + 4
32 1646 24 + - + + + 4
33 38 18 - - + + + 3
34 1 39 + - + + + 4
35 37 42 - + - - - 1
36 193 13 + + + + + 5
37 194 42 + + - + + 4
38 239 25 - + + + + 4
39 238 25 + - - - + 2
40 234 27 + - - - + 2
41 235 44 - - - + - 1
42 236 37 - - + - - 1
43 192 15 - - + - + 2
Всего 13 11 18 25 29
В результате ПЦР-амплификации с 43 опытными культуральными образцами лактобацилл в общем получены 96 положительных анализов. Из них 13 по размеру амплифициро-ванного ПЦР-фрагмента соответствовали виду Ь. gasseri (14 %), 11 выявились как Ь. іпею (11 %), 18 - как Ь. ]етопі (19 %), 25 - как Ь. егізраґш (26 %) и 29 - как Ь. рїапґагит
(30 %) (см. табл. 2, рис. 2). При этом в сумме доминировали виды Ь. р1аШагит и Ь. crispatus, составившие 56 % образцов исследуемой выборки. Структура сочетаемости исследуемых видов лактобацилл, представленная на рис. 3, показывает, что по количественной сочетаемости видов наибольшая частота характерна для ассоциаций двух видов (35 %). Достаточно вы-
сок также процент представительства одного вида (21 %) (см. рис. 3). Выделяется группа образцов, в которых не выявлено ни одного вида лактобацилл (7 %).
Из результатов следует, что большая часть выборки (63 %) представлена дефицитным содержанием видов лактобацилл (от 0 до 2 видов, при этом первый показатель не свидетельствует о полном отсутствии видов лактобацилл в исследуемой выборке: здесь могут присутствовать другие, нетипируемые в данном исследовании, виды лактобацилл). Данное состояние количественного ограничения видов мы назвали дефицитным, считая, что малое содержание основных видов лактобацилл или их отсутствие в определённом микробиоценозе влагалища женщин может быть отклонением от нор-
мы, что сужает потенциал возможностей рода лактобацилл влиять на гомеостатическую структуру микробиоты влагалища. Понятием «нормоценоз» в данном исследовании мы обозначили количественный состав видов лактобацилл (4 и более видов) в этом микробиоценозе, полагая, что подобная многовидовая структура лактобацилл должна быть устойчивой и достаточной для его нормального функционирования. Нормоценоз (группы с 4-5 видами лактобацилл) у женщин в данном исследовании определялся всего в 19 % случаев. Сочетание с тремя видами лактобацилл также наблюдается в 19 %. Данное состояние определили как переходное между дефицитным и нормальным, считая его неустойчивым в процессе функционирования микробиоценоза.
353025£ 20-
14
15 11
Г ■—'
10
5
26
1 1
Ь. даБзеп I.. теге I.. ]епзоп1 I.. спБра^Б I.. р!ап1агит
Рис. 2. Частота выявления отдельных видов лактобацилл в вагинальном биотопе женщин
35
30
25
г£ 20-
ТС
| 1510 5 0
21
14
0 видов 1 вид 2 вида 3 вида 4 вида 5 видов
Рис. 3. Вариабельность видовой сочетаемости лактобацилл вагинального биотопа
7
5
Таким образом, согласно результатам данной работы в вагинальном биотопе исследуемой выборки нами определены три уровня микроэкологического статуса согласно количественным показателям видового присутствия лактобацилл: нормоценоз, переходная стадия, дефицитное состояние. Дефицитное состояние видов лактобацилл вагинального биотопа отражает высокую степень отклонения от нормы и свидетельствует о нарушении микроэкологи-ческого гомеостаза, вследствие чего, возможно, запускаются воспалительные процессы.
Как указывалось выше, для количественной оценки степени взаимоотношений между близкородственными видами лактобацилл в работе применялись математические расчёты по выявлению коэффициента сходства Жаккара (1) между парами видов [3]. Расчётные результаты приведены в таблице 3, где представлены 6 пар комбинационных вариантов сочетаний видов лактобацилл, выведенные из данных таблицы
2. Значения С получены из общего количества ассоциаций видов, в которых встречается данная пара сочетающихся видов. Согласно данным таблицы 3, все значения коэффициента сходства Р оказались меньше показателя С, что свидетельствует о склонности к совместимости
полученных пар видов, показанной знаком (+). Поскольку формула Жаккара не выявляет степени близости (склонности к родству или к симбиозу) определённых пар видов, то, следуя разработанной нами формуле (2), возможно определять коэффициенты уровней совместимости парных ассоциаций видов в их комбинационном спектре. Полученные коэффициенты К дают информацию о том, насколько сформировавшаяся пара видов совместима в данном сочетании и насколько она отличается от соседних пар комбинационного спектра ассоциаций видов. Используемые формулы (1) и (2) являются универсальными и могут применяться для расчётов их коэффициентов при любых комбинационных вариациях парных ассоциаций видов. Мерой различий между комбинационными вариантами ассоциаций видов является положение, при котором меньший количественный показатель коэффициента К свидетельствует о большей степени совместимости между видами, т. е., чем более коэффициент К < 1, тем больше выражена степень совместимости между парой видов, тогда как при отношении К = 1 ассоциация полученных пар считается случайной или временной связью между видами.
Таблица 3
Степень совместимости парных сочетаний видов лактобацилл
Видовые комбинации Значения С Значения Р Склонность к совместимости Степень совместимости К=Р/С
Ь. crispatus + Ь. р1аШагит 17 16,86 + 0,99
Ь. gaseri + Ь. crispatus 8 7,56 + 0,95
Ь. тег' + Ь. р1аШатт 10 7,42 + 0,74
Ь. gaseri + Ь. р1аШатт 9 8,77 + 0,97
Ь. /enseni + Ь. сп'раШ' 13 10,47 + 0,81
Ь. ^/enseni + Ь. р1аПатт 14 12,14 + 0,87
Примечание: + положительная форма совместимости
Как видно из данных табл. 3, наиболее совместимой парой видов в исследуемой выборке оказались Ь. iners + Ь. р1аШат~ит (К = 0,74). В данном случае из выявленных парных ассоциаций видов наиболее часто в популяционной выборке встречается пара Ь. crispatus + Ь. р1аШатт (см. табл. 3), однако, как следует из значения К = 0,99, союз этой пары видов, скорее всего, непрочен. Как видим, значения К не находятся в прямой корреляционной зависимости от показателя частоты встречаемости того или иного сочетания пар видов, что может свидетельствовать о самостоятельности значений формирующих его характеристик. Возможно, это связано с разными особенностями
биологических свойств связывающихся видов, а также со средовыми условиями формирования пар видов в организме хозяина. Можно также предположить, что некоторые пары сочетающихся видов находятся в ассоциации с другими видами, не типируемыми нами, что может являться фактором, в какой-то мере снижающим близость взаимной совместимости.
Таким образом, в данной работе впервые с использованием методов молекулярногенетического типирования представлены структуры видового, ценотипического и комбинационного разнообразия видов лактобактерий в вагинальном биотопе. Эта информация может являться отражением как межвидовых
связей лактобацилл, так и характеристикой ассоциативно-симбиотических взаимоотношений между макроорганизмом и представителями его микробиот. Исходя из этого, можно предположить, что данные взаимоотношения могут играть немаловажную роль в формировании иммунного статуса человека и являться при разных формах и уровнях межвидовых взаимоотношений пусковыми факторами развития многих гинекологических осложнений у женщин. Несмотря на небольшую исследуемую выборку, полученные результаты являются достаточно обоснованными и указывают на необходимость продолжения исследований в этом направлении.
Выводы
1. В исследуемой выборке представлены все 5 определяемых видов лактобацилл, в качестве доминирующих видов вагинального биотопа определены L. crispatus и L. р1аШагит.
2. Выявлены три уровня микроэкологиче-ского статуса вагинального биотопа: нормоце-ноз, переходная стадия, дефицитный статус.
3. В вагинальном биотопе обследуемой группы женщин преобладает дефицитный состав сочетания видов (от 0 до 2) лактобацилл (63 %), а нормоценоз с сочетанием 4-5 видов представлен всего у 19 % пациенток.
4. Предполагается, что превалирование в вагинальном микробиоценозе женщин дефицитного видового состава лактобацилл может свидетельствовать о риске развития патоценоза в вагинальном биотопе.
5. Определены комбинации ассоциаций исследуемых видов в популяционной выборке: по степени наибольшей видовой совместимости выделяется пара L. iners + L. plantarum.
Литература
1. Акушерство: Национальное руководство /
Э. К. Айламазян [и др.]. - М. : ГЭОТАР-Медиа,
2007. - 1200 с.
2. Бондаренко В. М. Молекулярно-генетические и молекулярно-биологические исследования представителей родов Bifidobacterium и Lactobacillus // Вестн. РАМН. - 2006. - № 1. - С. 18-23.
3. Гайдашев И. П. Анализ и обработка данных : спец. справ. / И. П. Гайдашев. - СПб. : Питер, 2001. -750 с.
4. Гарден А. С. Детская и подростковая гинекология / А. С. Гарден. - М. : Медицина, 2001. - 238 с.
5. Глушанова Н. А. Лактобациллы в исследовании и коррекции резидентной микрофлоры человека : дис. ... канд. мед. наук / Н. А. Глушанова. -
1999. - 177 с.
6. Использование молекулярно-генетических методов для типирования бифидобактерий и анализ видовой архитектоники кишечного микробиоценоза у жителей промышленного города / Ю. П. Джиоев [и др.] // Изв. Иркут. гос. ун-та. Сер. Биология. Экология. - 2009. - Т. 2, № 2. - С. 68-74.
7. Новые подходы к изучению и оценке микробиоценоза влагалища. Аутофлора человека в норме и в патологии / К. Я. Соколова [и др.]. - Горький : Медицина. - 1988. - С. 5-10.
8. Особенности нормальной микрофлоры влагалища у девочек дошкольного возраста / А. С. Ан-кирская [и др.] // Микробиология. - 2004. - Т. 4. -
С. 54-58.
9. ПЦР в реальном времени [Электронный ресурс] : сайт. - URL: http://www.ld.ru/catalog/rts/pcr/ realtime-pcr.html.
10. Семинский И. Ж. Молекулярные основы, принципы, алгоритм и возможности ПЦР-диагностики / И. Ж. Семинский // Использование полимеразной цепной реакции в диагностике инфекционных заболеваний. - Иркутск : Сиб. унив. изд-во, 2004. - 496 с.
11. Соловьёва А. В. Характеристика влагалища в норме и патологии : дис. . канд. мед. наук / А. В. Соловьёва. - М., 1987. - 165 с.
12. Уварова Е. В. Влагалище как микроэкосистема в норме и при воспалительных процессах гениталий различной этиологии / Е. В. Уварова, Ф. Ш. Султанова // Гинекология : журн. для практ. врачей. -2002. - № 4. - С. 189-195.
13. Факторы риска и математическое прогнозирование материнской смертности от основных акушерских причин в Приморском крае / С. Н. Ле-щанкина [и др.] // Бюл. ВснЦ СО РАМН. - 2005. -№ 5 (43). - С. 60-66.
14. Экспрессия гена зелённого флуоресцентного белка (GFP) Aequoria Victoria в бактериальных клетках Lactobacilluss plantarum / А. Н. Шкопоров [и др.] // Журн. микроб. эпидем. иммунологии. -
2008. - № 4. - С. 33-37.
15. Association between Lactobacillus species and bacterial vaginosis-related bacteria, and bacterial vaginosis scores in pregnant Japanese women / R. Tamrakar [et al.] // BMC Infect. Dis. - 2007. -N 11. - P. 128.
16. Brown W. J. Variations in the vaginal bacteria flora: a preliminary report / W. J. Brown // Ann. Intern. Med. - 1982. - Vol. 96, N 6. - P. 931-934.
17. Quadri L. E. Regulation of antimicrobial peptide production by autoinducer-mediated quorum sensing in lactic acid bacteria / L. E. Quadri // Antonie Van Leeuwenhoek. - 2002. - Aug; 82 (1-4). - P. 133-145.
18. Quantitative analysis of diverse Lactobacillus species present in advanced dental caries / R. Byun [et al.] // J. of Clinical Microbiology. - 2007. - N 7. -Р. 3128-3136.
19. The Identification of Vaginal Lactobacillus Species and the Demographic and Microbiologic Characteristics of Women Colonized by These Species / M. A. D. Antonio [et al.] // The J. of Infectious Diseases. - 1999. - Vol. 180, N 6. - P. 1950-195.
Structure of species diversity of lactobacilli from vaginal biotopes of women living in Irkutsk sity
P. A. Medvedevai, Yu. P. Dzhioev2, S. M. Popkova2, I. N. Danusevich2, L. S. Kozlova2,
N. M. Shabanova2, G. V. Yurinovai , V. P. Salovarovai
1 Irkutsk State University, Irkutsk
2 Scientific Centre of the Family Health and Human Reproduction Problems SB RAMS, Irkutsk
Abstract. For the first time in a regional medical practice for the diagnosis of lactobacilli used polymerase chain reaction (PCR). Diversity of results obtained by 5 species of lactobacilli isolated from vaginal biotopes women living in the city of Irkutsk. Shown the prevalence of two types - L. plantarum and L. crispatus, present in more than 50 % of the samples of the study populations. Identified three groups of cenotypical study sample: deficiency, transient and normocenozes. Determined by a combination of association species study in a community sample and in the degree of compatibility of the species are distinguished L. iners + L. plantarum.
Key words: species of lactobacilli, PCR, vaginal biotopes,
Медведева Полина Алексеевна Иркутский государственный университет 664QQ3 г. Иркутск, ул. Сухэ-Батора, 5 магистрант тел. (3952) 24-18-55
Джиоев Юрий Павлович Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН 664Q25, г. Иркутск, ул. К. Маркса, 3 кандидат биологических наук старший научный сотрудник тел. (3952) 33-39-52 E-mail: alanirQ7@mail.ru
Попкова София Марковна Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН 664Q25, г. Иркутск, ул. К. Маркса, 3 доктор биологических наук руководитель лаборатории микроэкологии тел. (3952) 33-34-41
Данусевич Ирина Николаевна Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН 664QQ3, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 1б младший научный сотрудник тел. (3952) 33-39-52 E-mail: anyavolokitina@mail.ru
Козлова Любовь Сергеевна
Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН 664QQ3, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 1б кандидат медицинских наук, зав. лабораторией клинической иммунологии и аллергологии тел. (3952) 24-б8-21 E-mail: clinica@irk.ru
species diversity, a combination of association species.
Medvedeva Polina Alekseevna Irkutsk State University 5 Sukhe-Bator St., Irkutsk, 664003 undergraduate student phone: (3952) 24-18-55
Dhzioev Yuri Pavlovich Scientific Centre of the Family Health and Human Reproduction Problems SB RAMS 3 K. Marx St., Irkutsk, 664025 Ph. D. in Biology senior research scientist phone: (3952) 33-39-51,
E-mail: alanir07@mail.ru
Popkova Sofia Markovna Scientific Centre of the Family Health and Human Reproduction Problems SB RAMS
3 K. Marx St., Irkutsk, 664025 D. Sc. of Biology, Head of Laboratory of Microecology phone: (3952) 33-34-41
Danusevich Irina Nikolaevna Scientific Centre of the Family Health and Human Reproduction Problems SB RAMS 16 Timiryazev St., Irkutsk, 664003 junior research scientist phone: (3952) 33-39-51 E-mail: anyavolokitina@mail.ru
Kozlova Lubov Sergeevna Scientific Centre of the Family Health and Human Reproduction Problems SB RAMS 16 Timiryazev St., Irkutsk, 664003 Ph. D. in Medicine, Head of Laboratory of Clinical Immunology and Allergology phone: (3952) 24-68-21 E-mail: clinica@irk.ru
Шабанова Наталья Михайловна Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН 664Q25, г. Иркутск, ул. К. Маркса, 3 младший научный сотрудник тел. (3952) 33-39-52
Бухарова Екатерина Михайловна Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека СО РАМН 664Q25, г. Иркутск, ул. К. Маркса, 3 младший научный сотрудник тел. (3952) 33-39-52
Юринова Галина Валерьевна Иркутский государственный университет 664QQ3 г. Иркутск, ул. Сухэ-Батора, 5 кандидат биологических наук, доцент тел. (3952) 24-18-55 E-mail: yurinova@yandex.ru
Саловарова Валентина Петровна Иркутский государственный университет 664QQ3 г. Иркутск, ул. Сухэ-Батора, 5 доктор биологических наук, профессор зав. кафедрой физико-химической биологии тел. (3952) 24-18-55 E-mail: vsalovarova@rambler.ru
Shabanova Natalia Mikhaylovna
Scientific Centre of the Family Health
and Human Reproduction Problems SB RAMS
3 K. Marx St., Irkutsk, 664025
junior research scientist
phone: (3952) 33-39-52
Bukharova Ekaterina Vladimirovna
Scientific Centre of the Family Health
and Human Reproduction Problems SB RAMS
3 K. Marx St., Irkutsk, 664025
junior research scientist
phone: (3952) 33-39-52
Yurinova Galina Valeryevna Irkutsk State University 5 Sukhe-Bator St., Irkutsk, 664003 Ph. D. of Biology, ass. prof. phone: (3952) 24-18-55 E-mail: yurinova@yandex.ru
Salovarova Valentina Petrovna
Irkutsk State University
5 Sukhe-Bator St., Irkutsk, 664003
D. Sc. of Biology, Prof., Head of Department
of Physical and Chemical Biology
phone: (3952) 24-18-55
E-mail: vsalovarova@rambler.ru
