Стандартизация листьев боярышника Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ФАРМАКОГНОЗИЯ И БОТАНИКА

Т.В. Родионова, О.М. Хишова

СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЛИСТЬЕВ БОЯРЫШНИКА

Витебский государственный медицинский университет

Проведена стандартизация листьев боярышника по основным показателям качества. Показано, что определяющим показателем при стандартизации листьев боярышника является количественное содержание биологически активных веществ

- флавоноидов и процианидинов.

ВВЕДЕНИЕ

Одним из приоритетных направлений в изучении лекарственного растительного сырья является разработка новых подходов к его стандартизации и изучение химического состава растений в целях расширения возможностей использования фармакопейных видов.

В настоящее время вызывает интерес производство лекарственных средств (ЛС) из сырья боярышника [1]. Официнальным сырьем боярышника являются плоды, цветки и листья. Химический состав боярышника разнообразен.

Флавоноиды боярышника можно разделить на флавонол-О-гликозиды, такие как гиперозид и рутин, и флавон-С-

гликозиды, такие как витексин-2”-О-рамнозид и ацетилвитексин-2’’-0 рамнозид. В листьях и цветках боярышника найдено тридцать три различных флавоноида, включающих 20 флавонов (биокверцетин, апигенин, кетогексофуранозид апигенина, 7-глюкозид апигенина, витексин, витек-син-2”-О-рамнозид, ацетилвитексин, 4’-

рамнозид витексина, 4’-рутинозид витек-сина, пиннатифидин, лютеолин, глюколютеолин, лютеолин-5-рутинозид, ориентин и др.) и 13 флавонолов (кверцетин, кверцитрин, рутин, гиперозид, кемпферол, 3-

галактозид кемпферола, 8-меток-

сикемпферол и др.).

В листьях и цветках боярышника определяют гиперозид,

рамнозид, рутин, кверцетин,

3]. В побегах боярышника (Crataegus monogyna Jacq) [4] были определены ви-тексин-2’’-0-рамнозид, витексин, гиперозид, рутин, кверцетин.

В пыльце Crataegus monogyna идентифицированы флавонол гликозиды: 8-метоксикемпферол 3-неогесперидозид и 8-метоксикемпферол 3-глюкозид, 8-

метоксикемпферол и кемпферол 3- неогес-перидозид [5].

Процианидины, или конденсированные танины, состоящие из олигомеров (OPs) или полимеров (PPs) флаван-3-ол единиц формируют отдельную группу флавонои-дов (рис. 1).

OH

витексин-O-витексин [2,

(+)-катехин

(-)-катехин

(-)-эпикатехин

(+)-эпикатехин

Рис. 1. Химическая структура и оптическая изомерия катехинов

В листьях и цветках Crataegus spp. определено присутствие процианидинов до тетрамеров [6]; процианидинов B-2 и B-5 в листьях и цветках боярышника [7]; из листьев и цветков боярышника (Crataegus

laevigata) изолированы олигомерные про-цианидины [8]. Впервые выделен тример, эпикатехин-(4Ь^-8)-эпикатехин-(4Ь^-6)-эпикатехин, и пентамер, состоящий из (-)-эпикатехиновых звеньев. Определены B-2,

B-4 и B-5, тример C-І и эпикатехин-(4b^■б)-эпикатехин-(4b^■8)-эпикатехин, и тетрамер D-І. Также найдена фракция, содержащая гексамер [8]. Авторы [9] предложили методику для качественного и количественного анализа олигомерных про-цианидинов боярышника, включая гексамеры (в цветках, листьях и плодах боярышника (Crataegus laevigata)). В исследованном сырье содержались димеры (В-2, В-4, В-5), тример (С-1), тетрамер (D-І) и пентамер (E-І), гексамер (F). Качественный состав олигомерных процианидинов в листьях, цветках и плодах боярышника одинаков, однако их количественное соотношение различно (концентрация в листьях составляла 1,б %, в цветках 1,2 % и в плодах 0,2 % в пересчете на сухое вещество). Эти исследования показывают возможность определения концентрации индивидуальных процианидинов в боярышнике, не только димеров и тримеров, но и тетрамеров, пентамеров и гексамеров.

Интересно отметить, что для определения содержания рутина, витексин-2-О-рамнозида, витексина, гиперозида [10] в боярышнике (Crataegus monogyna) применен метод капиллярного электрофореза. Для определения процианидинов [11] предложена методика денситометрическо-го определения.

В боярышнике определяют амигда-лин [12]. Из плодов боярышника (Crataegus pinnatifida) выделили 32 летучих соединения [13], главными компонентами которых были цис-3-гексенол, цис-3-гексенил ацетат, а-терпинеол, фурфурал, гексанол, гексил ацетат, нонанал, цитраль, 3-пентен-2-он и транс-2-деценал. В настойке боярышника определены 3-гексен-

1-ол, евгенол, диэтиловый эфир, 2-метил-пентеноивая кислота и лимонная кислота.

В цветках Crataegus monogyna содержатся высшие спирты, альдегиды и жирные кислоты. Сложные эфиры высших спиртов содержат количество углеродных атомов от Сзб до C48; тритерпеноиды были представлены урсоловой и олеаноловой кислотами [14].

Высшие жирные кислоты в плодах представлены миристиновой, пальмитиновой, стеариновой, олеиновой, линолевой кислотами (в липофильной фракции). В плодах также содержатся лимонная, винная и яблочная кислоты, каротиноиды, ок-сикумарины, ß-ситотерин, холин, найдены кофейная и хлорогеновая кислоты, амины (фенилэтиламин, тирамин, ометоксифени-лэтиламин).

Из плодов Crataegus flava выделен ранее неизвестный эудесманолид [15] (рис.

2)

OH

OH

Рис. 2. Эудесманолид из плодов Crataegus flava

Таким образом, основными биологически активными веществами боярышника, по содержанию которых должна проводиться стандартизация, являются флаво-ноиды и процианидины.

При стандартизации сырья боярышника выделяют два подхода [16]: определение содержания индивидуальных веществ (флавоноидов и процианидинов) и определение общего количества фенолов.

Для количественного определения действующих веществ в сырье боярышника и ЛС на его основе предложено многочисленное количество методик: спектрофотометрических, с применением метода ВЭЖХ, гравиметрических. Флавоноиды определяют в пересчете на гиперозид, рутин, кверцетин, витексин, витексин-2”-О-рамнозид (рис. 3), процианидины - в пересчете на цианидина хлорид.

Ранее нами установлено [17, 18], что содержание флавоноидов и проциани-динов в листьях боярышника в 2 - 2,5 раза выше по сравнению с плодами и цветками. Следовательно, в качестве сырья для производства высокоэффективных ЛС на основе боярышника следует использовать листья.

Целью данных исследований является стандартизация листьев боярышника по основным показателям качества.

Национальной Академии наук Республики Беларусь (НАН РБ) и в питомнике «Ула-новичи» (Витебская область) во время цветения и высушенные листья дикорастущих и культивируемых кустарников или небольших деревьев боярышника кровавокрасного (Crataegus sanquinea Pall) и боярышника колючего (Crataegus oxyacantha sensu Pojark) семейства розоцветных (Rosaceae).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ В работе использовали собранные и заготовленные на базе Ботанического сада

OH OH

рутин R=Glc-O-Rhamn витексин витексин-2''-О-рамнозид

Рис. 3. Флавонол-О-гликозиды и флавон-С-гликозиды

При стандартизации листьев боярышника изучались внешние и микроскопические признаки, качественные реакции, основные числовые показатели, проводилось количественное определение действующих веществ, рассматривались требования к упаковке, маркировке, микробиологической чистоте, транспортированию и хранению, исследовался срок годности и на основании литературных данных был сделан вывод об основном фармакологическом действии.

Приемка листьев боярышника и отбор проб сырья для анализа проводилась в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Республики Беларусь (ГФ РБ) [19].

Определение подлинности листьев боярышника проводили по качественным цветным реакциям на основные группы

биологически активных веществ: флаво-ноиды (появление лимонно-желтого окрашивания в реакции спиртового извлечения из сырья с раствором алюминия хлорида) и процианидины (появление красной окраски при взаимодействии спиртового извлечения сырья с солями железа).

Изучались такие числовые показатели как: содержание суммы флавоноидов; содержание суммы процианидинов; влажность; зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте; листья, утратившие окраску, другие части растения; органическая примесь; минеральная примесь.

Определение влажности цельного и измельченного сырья проводилось согласно ГФ XI [24].

Золу нерастворимую в хлористоводородной кислоте, определяли по Государст-

венной фармакопее Республики Беларусь, п. 2.8.1.

Содержание допустимых примесей в листьях боярышника определяли согласно Государственной фармакопее Республики Беларусь, п. 2.8.2. К примесям относятся: посторонние части данного растения, утратившие окраску, предусмотренную частной статьей или части данного растения, не являющиеся лекарственным растительным сырьем; органическая примесь (части других неядовитых растений); минеральная примесь (земля, песок, камешки).

Таблица 1 - Сравнительные данные по описанию и количественному определению официнального сырья боярышника в различных фармакопеях

Фарма- копея Статья Описание Количественное определение

ГФ XI «Плоды боярышника» [20] Собранные в фазу полного созревания и высушенные плоды дикорастущих и культивируемых кустарников или небольших деревьев различных видов боярышника (Crataegus), сем. Rosaceae: боярышника сглаженного - C. laevigata (Poir.) D.C. (боярышника колючего - C. oxyacantha sensu Pojark.), боярышника Королькова - C. korolkovii L., Henry (боярышника альтайского - C. altaica (lond.) Lange), боярышника желтого - C. chlorocarpa Lenne еt C. koch., боярышника даурского - C. dahurica Koehne ex Schneid., боярышника однопестичного - C. monogyna Jacg., боярышника германского - C. alemanniensis Cin., боярышника пятипестичного - C. pentagyna Waldst et Kit, боярышника восточнобалтийского - C. orientobaltica Cin., боярышника отогнуточашелистико-вого - C. curvisepala Lindm., боярышника курземского - C. x curonica Cin., боярышника даугавского - C. x dunensis Cin. Не менее 0,06 % флавоноидов, в пересчете на гиперозид

ГФ XI «Цветки боярышника» [20] Боярышник кроваво-красный - С. sanguinea Pall., боярышник сглаженный - C. laevigata, боярышник Королькова - C. Korolkowii, боярышника желтого, даурского, однопестичного, германского, восточнобалтийского, отогнуточашелистикового, курземского, пятипестичного Не менее 0,5% гиперозида в пересчете на абсолютно сухое сырье

ЕФ «Hawthorn berries» [21] Высушенные ложные плоды Crataegus monogyna Jacg. (Lindm.), или Crataegus laevigata (Poir.) D.C. (C. oxyacantha L.) или их гибриды, или смесь этих ложных плодов Не менее 1 % процианидинов, в пересчете на цианидина хлорид и на сухое сырье

BrPh «Hawthorn Berries» [22] Crataegus monogyna Jacq. (Lindm.), или Crataegus laevigata (Poir.) D.C. (synonym: Crataegus oxyacantha L.). или их гибриды, или смесь этих ложных плодов Не менее 1 % процианидинов, в пересчете на цианидина хлорид и на сухое сырье

BrPh «Hawthorn Leaf and Flower» [22] Целые или резаные цветки Crataegus monogyna Jacq. (Lindm.), C. laevigata (Poiret) D.C. (C. oxyacanthoides Thuill.) или их гибриды, и, более редко, другие виды Crataegus, включая C. pentagyna Waldst. et Kit. ex Willd., C. nigra Waldst. et Kit., C. azarolus L. Не менее 1,5 % флавоноидов в пересчете на гиперозид и на сухое сырье

USP «Hawthorn Leaf with Flower» [23] Сухие верхушки молодых цветущих ветвей длиной около 7 см Crataegus monogyna Jacq. (Lindm.), C. laevigata (Poiret) Не менее 0,6 % флавон-С-гликозидов, в пересчете на витексин, и не менее 0,45 % флавонол-О-гликозидов, в пересчете на гиперозид и на сухое сырье

Вестник фармации №2 (40) 2008 При стандартизации предусмотрена оценка микробиологической чистоты листьев боярышника в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Республики Беларусь, п.п. 2.6.12, 2.6.13, 5.1.4 (категория 3Б).

Для установления подлинности листьев боярышника нами предложено также проводить микроскопический анализ цельного и измельченного сырья по основным диагностическим признакам.

При стандартизации предусмотрено количественное определение суммарного содержания в листьях боярышника основных групп фармакологически активных веществ - флавоноидов и процианидинов.

Спектрофотометрический метод стандартизации растительного сырья, содержащего флавоноиды, основан на определении количества продуктов реакции комплексообразования с алюминия хлоридом, при котором происходит батохром-ный сдвиг полосы поглощения флавонои-дов с 330-350 нм до 390-410 нм. В качестве РСО использовали рутин, дифференциальный спектр поглощения которого в аналитических условиях совпадает со спектром поглощения флавоноидов боярышника (X ~ 407 нм).

Нами экспериментально разработаны оптимизированные условия извлечения флавоноидов из измельченных листьев боярышника, включающие следующие элементы:

1) использование в качестве экстрагента спирта этилового 70 %;

2) продолжительность экстракции - 1

ч;

3) температура экстракции - температура кипения раствора;

4) соотношение сырье-экстрагент -1:20.

С извлечением из сырья, полученным при указанных условиях, после его фильтрации проводили реакцию комплек-сообразования с 2 % раствором алюминия хлорида в среде буферного раствора pH 4,0. Оптическую плотность раствора определяли на спектрофотометре СФ-46 в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 409 нм. В качестве стандарта ис-

пользовали аналогично обработанный раствор РСО рутина. Влияние сопутствующих окрашенных примесей исключается путем вычитания оптической плотности испытуемого и стандартного растворов, регистрируемой без добавления алюминия хлорида.

Для количественного определения процианидинов листьев боярышника нами использован модифицированный метод Porter [17].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Стандартизация листьев боярышника включает:

разработку методик анализа листьев боярышника по основным показателям качества;

изучение стабильности основных показателей качества сырья в процессе хранения.

Следует отметить, что в фармакопе-ях разных стран нет единообразия в стандартизации сырья боярышника (табл. 1).

Сравнительное описание внешнего вида цельных и измельченных листьев боярышника кроваво-красного и колючего приведено в таблице 2.

При микроскопии листа боярышника видны фрагменты верхней эпидермы с многоугольными клетками и нижней эпидермы с извилистыми боковыми стенками и устьицами, многочисленные простые толстостенные волоски, друзы оксалата кальция (рис. 4).

Исследуемые листья боярышника соответствовали требованиям Государственной фармакопеи Республики Беларусь по показателю качества микробиологическая чистота. . В 1 г сырья допускается наличие не более 104 аэробных бактерий и не более 102 грибов в 1 г; энтеробактерий и других грамотрицательных бактерий: не более 102 в 1 г; отсутствие Escherichia coli в 1 г; отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г. В 10 г препарата не допускается присутствие Salmonella. Сырье в условиях испытания не обладало антимикробным действием.

Таблица 2 - Сравнительное описание цельных и измельченных листьев боярышника

Боярышник кроваво-красный (Crataegus sanguínea Pall) Боярышник колючий (Crataegus oxyacantha L.)

Листья в очертании обратнояйцевидные, яйцевидные или яйцевидноромбические, на вершине острые, с клиновидным основанием, с каждой стороны неглубоко-надрезанные обычно на 3, реже на 1-2 лопасти или же с 1-6 крупными зубцами, по краям, кроме основания, острозубчатые, с обеих сторон волосистые. Черешки желобчатые, голые или негустоволосистые. Длина листовой пластинки 2 -10 см, ширина 2,5 - 5 см, длина черешка до 5 см. Цвет листьев с верхней стороны темно-зеленый, с нижней - несколько светлее. Запах слабый. Вкус горьковатый, слегка вяжущий. Листья в очертании обратнояйцевидные с тупой, реже острой верхушкой и клиновидным основанием, в верхней части 3-5-7-лопастные или раздельные, с выступающей снизу сетью жилок, по краям, кроме основания, городчато-зубчатые, редко остро-зубчатые, голые, иногда снизу с бородками из волосков в углах жилок. Длина листовой пластинки до 6 см, ширина - до 5 см, длина черешка до 3 см. Цвет листьев ярко-зеленый с более светлой нижней стороной. Запах слабый. Вкус сладковато-горький, слегка вяжущий.

Измельченное сырье представляет собой кусочки листьев различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм. Цвет от темно-зеленого до более светлого. Запах слабый, вкус горьковатый, слегка вяжущий. Измельченное сырье представляет собой кусочки листьев различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм. Цвет ярко-зеленый, запах слабый, вкус сладковато-горький, слегка вяжущий.

/-'Г'")

rrf&L

Рис. 4. Микроскопия листа боярышника кроваво-красного.

1 - верхний эпидермис; 2 - нижний эпидермис; 3 -простой толстостенный волосок; 4 - друзы оксалата кальция; 5 - край листа.

Влажность сырья листа боярышника составила от 5,74% до 6,45%. Относительная погрешность количественного определения суммы флавоноидов в листьях боярышника спектрофотометрическим ме-

тодом не превышала 2 % [18]. Суммарное содержание процианидинов в листьях боярышника определяется в пересчете на циа-нидина хлорид. Результаты определения

Вестник фармации №2 (40) 2008

процианидинов в листьях боярышника представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Результаты количественного определения процианидинов в листьях боярышника

Серия X n S Sx t (p,f) Дх 8 ,%

I 5,99 5 0,073 0,033 2,78 0,09 0,55

II 6,67 5 0,26 0,12 2,78 0,32 1,79

III 5,64 5 0,13 0,06 2,78 0,16 1,06

IV 5,5 5 0,078 0,035 2,78 0,01 0,63

Как видно из таблицы 3, содержание процианидинов в листьях - от 5,50% до 6,67%. Предложенная методика [17] не требует наличия стандартных образцов, быстро выполнима, обеспечивает высокую воспроизводимость результатов и может быть рекомендована для анализа сырья и ЛС боярышника.

По таким показателям качества как листья, утратившие окраску, другие части растения, органическая примесь, минеральная примесь исследуемые листья боярышника полностью соответствовали требованиям п. 2.8.2. Государственной фармакопеи Республики Беларусь (количество посторонних примесей в каждой группе не превысило 2 %).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, в фармакопеях разных стран нет единообразия в стандартизации сырья боярышника: в монографиях на цветки и плоды ГФ XI принята стандартизация по гиперозиду, в Европейской фармакопее плоды стандартизируются по процианидинам, в Американской фармакопее листья и цветки боярышника стандартизируются по витексину и гиперозиду.

Нами проведена стандартизация листьев боярышника для промышленного производства ЛС, по внешнему виду цельных и измельченных листьев боярышника, микроскопическим признакам, микробиологической чистоте, влажности сырья и содержанию биологически активных веществ (флавоноидов и процианидинов).

Несомненная польза ЛС боярышника, его мягкое действие, не токсичность, хорошая переносимость - это залог его дальнейшего исследования для изучения оптимальных условий применения, совер-

шенствования методов стандартизации и создания обоснованной технологии разрабатываемых ЛС.

SUMMARY T.V. Rodionova, O.M. Khishova

STANDARDIZATION OF LEAVES OF THE HAWTHORN Standardization of hawthorn's leaves according to the basic indicators of quality is executed. It is shown, that a determinative indicator at standardization of hawthorn's leaves is the quantitative content of biologically active substances - flavonoids and proanthocyanidins.

ЛИТЕРАТУРА

1. Хишова, О.М. Фармакологическое действие боярышника кроваво-красного и применение в медицине / О.М. Хишова, Е.В. Кравченко, Т.В. Родионова // Вестник фармации. - Витебск - № 2 (24). - 2004. -С. 69 - 76.

2. Phytochemical research of hawthorn species introduced in Lithuania / Jakstas V. [et al.] // Medicina (Kaunas). - 2003. - 39 Suppl 2. - P. 80-4.

3. Research of the amounts of flavonoids accumulated in the crude drug of single-styled hawthorn / Jakstas V. [et al.] // Medicina (Kaunas). - 2003. - 39(2). - P. 45-9.

4. Research of the amounts of flavonoids accumulated in the buds of single-styled hawthorn / Jakstas V. [et al.] // Medicina (Kaunas). - 2004. - 40(8). - P. 750-2.

5. 8-Methoxykaempferol 3-

neohesperidoside and other flavonoids from bee pollen of Crataegus monogyna / JeanClaude Dauguet [et al.] // Phytochemistry. -1993. - Vol. 33 (6). - P. 1503-1505.

Вестник фармации №2 (40) 2008

6. Evaluation of different detection modes for the analysis of procyanidins in leaves and flowers of Crataegus spp. Part II. Liquid chromatography-mass spectrometry / Gabriela E. Rohr [et al.] // Phytochemical Analysis. -Vol. 11(2). - P. 113 - 120.

7. Quantitative reversed-phase highperformance liquid chromatography of pro-cyanidins in Crataegus leaves and flowers / Gabriela E. Rohr [et al.] // Journal of Chromatography A. - 1999. - Vol. 835(1-2). - P. 5965.

8. Isolation and identification of oligomeric procyanidins from Crataegus leaves and flowers / Ulla Svedström [et al.] // Phytochemistry. - 2002. - 60. - P. 821-825.

9. High-performance liquid chromatographic determination of oligomeric pro-cyanidins from dimmers up to the hexamer in hawthorn / Ulla Svedström [et al.] // Journal of Chromatography A. - 2002. - 968. - P. 53-60.

10. Capillary electrophoretic analysis of flavonoids in single-styled hawthorn (Crataegus monogyna Jacq.) ethanolic extracts / A. Ur-bonaviciüte [et al.] // Journal of Chromatography A. - 2006. -1112. - P. 339-344.

11. TLC-densitometric determination of 2,3-cis-procyanidin monomer and oligomers from Hawthorn / M. Vanhaelen [et al.] // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. - 1989. - Vol. 7(12). - P. 18711875.

12. Determination of amygdalin in hawthorn by high performance liquid chromatography / Se Pu. - 2005. - 23(5). - P. 496-8.

13. Identification of volatile compounds of hawthorn by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) / Chen L. [et al.] // Se Pu.

- 1997. - 15(3). P. 219-21.

14. A comparison of the composition of epicuticular wax from red raspberry (Rubus idaeus L.) and hawthorn (Crataegus monogyna Jacq.) flowers / D.W. Griffiths [et al.] // Phytochemistry. - 2000. - Vol. 55(2). -P.111-6.

15. A new eudesmanolide from Crataegus flava fruits / Ahmed A. Ahmed [et al.] // Fi-toterapia. - 2001. - Vol. 72. - P. 756-759.

16. Variability of total flavonoids in Crataegus — Factor evaluation for the monitored production of industrial starting material

/ Wieland Peschel [et al.] // Fitoterapia. -2008. - 79. -P. 6-20.

17. Хишова, О.М. Количественное определение процианидинов плодов боярышника/ О.М. Хишова, Г.Н. Бузук // Химикофармацевтический журнал. - 2006. - № 2. -С. 20-21.

18. Хишова, О.М. Сравнительная количественная оценка содержания флавонои-дов в растительном сырье боярышника кроваво-красного / О.М. Хишова, Т.В. Родионова // Вестник фармации. - Витебск -2008. - № 1 (79). -С. 15-18.

19. Государственная фармакопея Республики Беларусь. Т.1. Общие методы контроля качества лекарственных средств / Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении; под общ. ред. Г.В. Годовальни-кова. - Минск: Минский государственный ПТК полиграфии, 2006. - 656 с.

20. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. -

11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - С. 241 - 244, 283 - 289.

21. European Pharmacopeia 2007 [электронный ресурс]. - электр. текст. данные и программа. Index+. System simulation Ltd,

2006. - 1 электр. опт. диск (CD-ROM).

22. British Pharmacopeia 2007. Version

11.0 [электронный ресурс]. - электр. текст. данные и программа. Crown Copyright,

2007. - 1 электр. опт. диск (CD-ROM).

23. USP-NF-2007 [электронный ресурс]. -электр. текст. данные и программа - 1 электр. опт. диск (CD-ROM).

24. Государственная Фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа / МЗ СССР.

- 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - С. 285 - 286.

Поступила 23.06.2008 г.