СТАБИЛЬНОСТЬ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ДОМАШНЕГО ХОЗЯЙСТВА В МОЗГЕ ЮВЕНИЛЬНЫХ КРЫС В МОДЕЛИ ПЕНТИЛЕНТЕТРАЗОЛ-ИНДУЦИРОВАННОГО ЭПИЛЕПТИЧЕСКОГО СТАТУСА Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Список литературы:

1. YaroslavskyA et al. Optical properties of selected native and coagulated human brain tissues in vitro in the visible and near infrared spectral range. Physics in medicine and biology, 2002: 47. 2059—73

2. Llinas R. Frog cerebellum biological basis for a computer model. Mathematical Biosciences Volume 11, Issues 1—2, 1971: 137—151

3. Fitzgerald M et al. Red/near-infrared irradiation therapy for treatment of central nervous system injuries and disorders. Reviews in the neurosciences, 2013: 24. 205—226

Шварц А.П., Коваленко А.А., Малыгина Д.А., Зубарева О.Е., Постникова Т.Ю., Зайцев А.В. 1

Институт эволюционной физиологии и бмохимии им. И. М. Сеченова РАН, Санкт-Петербург, Россия

e-mail: aleksandr.pavlovich.schwarz@gmail.com

СТАБИЛЬНОСТЬ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ДОМАШНЕГО ХОЗЯЙСТВА В МОЗГЕ ЮВЕНИЛЬНЫХ КРЫС В МОДЕЛИ ПЕНТИЛЕНТЕТРАЗОЛ-ИНДУЦИРОВАННОГО ЭПИЛЕПТИЧЕСКОГО СТАТУСА

Введение. Анализ относительной экспрессии генов (по отношению к генам домашнего хозяйства) путём количественной ОТ-ПЦР является мощным инструментом биомедицинских исследований. Поиск адекватных генов для нормализации данных количественной ОТ-ПЦР является крайне актуальным. Данная работа посвящена валидации референсных генов для ОТ-ПЦР анализа в мозге крысят в модели последствий однократного эпилептического статуса (ЭС).

Цель. Определить наиболее валидные для использования в качестве референсных для нормализации данных количественной ОТ-ПЦР гены домашнего хозяйства в различных областях коры и подкорковых структур головного мозга крысят Вистар в течение недели после пентилентетразол-индуцированного ЭС.

Материалы и методы. Судороги индуцировали у 21-дневных крысят введением пентилентетразола (ПТЗ, 70 мг/кг, в/б), для экспериментов отбирали крысят с продолжительными (>30 минут) тонико-клонические судорогами, конрольным животным вводили физраствор. Стабильность экспрессии референсных генов в медиальной префронтальной (мПФК), височной, энторинальной (ЭК) областях коры, амигдале (А) дорзальном (ДГ) и вентральном гиппокампе (ВГ) через 3 и 24 часа, 3 и 7 дней после индукции ЭС оценивали с помощью разработанных авторами оригинальных мультиплексных тест-систем для ОТ-ПЦР в реальном времени (Actb+Gapdh+B2m; Rpl13a+Sdha+Ppia; Hprt1+Pgk1+Ywhaz) с использованием онлайн-инструмента Reffinder, объединяющего 4 алгоритма для определения стабильности экспрессии референсных генов (GeNorm, NormFinder, deltaCt, Bestkeeper).

Результаты. Показатели стабильности экспрессии референсных генов были регионоспецифичны, они не совпадали даже в различных областях коры и кардинально различались между дорзальной и вентральной областью гиппокампа. Наиболее стабильно экспрес-сирующимися в течение недели после ПТЗ-индуцированного ЭС по результатам анализа оказались Pgk1, Ppia и B2m в мПФК, Ppia, Rpl13a, Sdha — в ВК, в ЭК — Pgk1, Ppia, Rpl13a; Sdha, Pgk1, и Ppia — в А, Gapdh, Ppia, Pgk1 — в ДГ и Rpl13a, Sdha and Ppia -в ВГ. При этом в мПФК, ВК и ДГ средние показатели стабильности экспрессии изученных генов были выше, чем в ВГ, А и ЭК. Следует отметить, что традиционно используемые для нормализации гены Actb и Gapdh в исследованной модели в большинстве структур мозга непригодны для использования в качестве референсных.

Выводы. Определены региональные особенности стабильности экспрессии референсных генов в мозге ювенильных крыс в течение недели после ПТЗ-индуцированного ЭС. Выбор адекватных референсных генов зависит от анализируемой области мозга, в том числе в пределах разных областей коры и гиппокампа. Эти данные могут быть использованы и другими исследователями при изучении экспрессии генов в пентилентетразоловой модели последствий эпилептического статуса.

Работа поддержана грантом РНФ № 16—15—10202, А. П. Шварц является получателем стипендии Президента Российской Федерации молодым ученым и аспирантам (СП-743.2019.4).

Цветаева Д.А.

Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН, Москва, Россия

РЕАКЦИЯ НЕЙРОНОВ СОМАТОСЕНСОРНОЙ КОРЫ НА СТИМУЛЯЦИЮ ВЕНТРО-ПОСТЕРО-МЕДИАЛЬНОГО ЯДРА ТАЛАМУСА У КРЫС ЛИНИИ WAG/RIJ

Предполагается, что триггерной зоной генерации пик — волновой активности у крыс линии ШЛО/Ш) генетически предрасположенных к абсанс — эпилепсии, является соматосенсорная кора (представительство вибрисс) [4]. В последнее время появились данные о том, что заднее ядро таламуса (РО) может быть ревербератором, обеспечивающим таламо- кортикальную циркуляцию эпи-активности [3]. Это позволяло предполагать, что стимуляция РО может инициировать реверберационный процесс. Было установлено, что у крыс ШЛО/Ш) в возрасте 6—8 месяцев, когда аб-санс — эпилепсия уже сформирована, вызванная реакция нейронов соматосенсорной коры на раздражение РО представлена фазными реакциями (чередование коротких разрядов с тормозными паузами), что было интерпретировано нами как нейронный эквивалент пик-волновой активности [1]. Такая же реакция была обнаружена при стимуляции вибрисс, что не исключает возможности участия РО в циркуляции возбуждения, но допускает вероятность первичной активации соматосенсорной коры опосредовано вентро-посте-ро-медиальным ядром таламуса (УРМ).