Научная статья на тему 'Средства биологической защиты многоцелевого назначения на основе хлорпроизводных нитробензофуроксана'

Средства биологической защиты многоцелевого назначения на основе хлорпроизводных нитробензофуроксана Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
340
160
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Юсупова Л. М., Гармонов С. Ю., Захаров И. М., Быков А. Р., Гарипов Т. В.

Изучена фунгицидная, антибактериальная и другие виды фармакологической активности 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана, 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана, а так же смесей на их основе. Установлены основные токсикологические свойства данных соединений. Проведен фармакологический скрининг ряда соединений полиядерных бензофуроксанов с целью выявления зависимости «биологическая активность строение соединения».

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Юсупова Л. М., Гармонов С. Ю., Захаров И. М., Быков А. Р., Гарипов Т. В.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Средства биологической защиты многоцелевого назначения на основе хлорпроизводных нитробензофуроксана»

Л. М. Юсупова, С. Ю. Гармонов, И. М. Захаров,

А. Р. Быков, Т. В. Г арипов, И. Ф. Фаляхов

СРЕДСТВА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТЫ МНОГОЦЕЛЕВОГО НАЗНАЧЕНИЯ НА ОСНОВЕ ХЛОРПРОИЗВОДНЫХ НИТРОБЕНЗОФУРОКСАНА

Изучена фунгицидная, антибактериальная и другие виды фармакологической активности 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана, 4,6-динитро-5,7-

дихлорбензофуроксана, а так же смесей на их основе. Установлены основные токсикологические свойства данных соединений. Проведен фармакологический скрининг ряда соединений полиядерных бензофуроксанов с целью выявления зависимости «биологическая активность - строение соединения».

В настоящее время одной из актуальных проблем ветеринарии и медицины является широкое распространение кожных заболеваний микотической и саркоптиоидозной этиологии. Это объясняется резким снижением естественной резистентности организма и возникновением иммунодефицитов, развивающихся вследствие нарушения экологического баланса и физиологически необоснованного рациона [1].

Известно широкое применение ветеринарной службой с профилактической и лечебной целью акарицидов на основе фосфорорганических препаратов (например, хлорофоса) и производных гамма-изомера гексахлорана. Недостатками данных препаратов являются высокая токсичность для животных и человека, а также возникновение отдаленных последствий их применения. Кроме того, использование гексахлорансодержащих и многих фосфорорганических соединений ограничено в связи с наличием у них мутагенных свойств. Использование данных групп препаратов до настоящего времени обоснованно только отсутствием других доступных высокоэффективных лекарственных средств. Высокая стоимость импортных препаратов, а часто и серьезные побочные эффекты, также ограничивают возможность их широкого применения, как у людей, так и в ветеринарной практике.

Производные фуроксанов и фуразанов зарекомендовали себя как соединения, обладающие высокой биологической активностью. Причем вид проявляемой активности и выраженность действия зависят от характера заместителей в гетероцикле. Так, аминофе-нилфуроксаны исследовались как нейротропные средства (в эксперименте проявили мио-релаксирующую и противосудорожную активность); некоторые нитробензофуроксаны проявляют антиангинальные и антиагрегантные свойства. Многие хлорнитропроизводные бензофуроксанов и их физические смеси запатентованы и достаточно широко используются как антибактериальные, противогрибковые и акарицидные средства [2-8].

Фуроксановые и фуразановые производные обладают близкими спектрами биологической активности, однако сила действия в каждом конкретном случае значительно различается. В проведенных ранее исследованиях [9] изучалась способность ряда производных бензодифуразанов и 4,5-фуроксанбензофуразанов задерживать рост бактерий, грибов и простейших в зависимости от структуры соединения. Оказалось, что 4,5-фуроксанбензофуразаны с различными заместителями несколько превосходят бензодифу-разановые аналоги по антибактериальному, фунгостатическому и акарицидному действию.

Таким образом, был сделан вывод, что по данным видам фармакологической активности фуроксановые соединения более перспективны, чем фуразановые.

Целью настоящей работы является определение фармакологических (фунгицидной, антибактериальной, спороцидной, противовирусной, вирулицидной, акарицидной, лярви-цидной активности) и токсикологических свойств 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана, 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана, их смесей и изучение ряда соединений полиядерных бензофуроксанов.

Экспериментальная часть

Схемы синтеза и свойства, приведенных в статье биологически активных соединений (5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана и 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана) описаны ранее [4]. Их смеси могут быть получены как механическим смешением индивидуальных компонентов в необходимом соотношении, так и путем химического синтеза. Полиядерные соединения бензофурокса-нового ряда являются продуктами реакций нуклеофильного замещения 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана с соответствующими ароматическими аминами.

Общая методика синтеза полиядерных бензофуроксанов. Максимальный выход целевого продукта (90%) достигается при соотношении субстрат-нуклеофил 1:4 в среде пропанола-2 с добавлением воды (до 20%).

Реакцию с высокоосновными аминами (о-, м- и п-гидрокси- и о-, м- и п-метоксианилинамм, 2,6-диметиланилином) проводили при комнатной температуре за 1 час. Продукты конденсации с малоосновными аминами (о-хлор-, 2,5-, 3,4-, 5,3- дихлор-, о- и п-бром-, 2-метил-4-хлор-, 4-метил-3-хлор-, 2-метил-4-нитро-, о- и п-ацетамидо-, 2-метил-4-йоданилин, этиловый и бутиловый эфиры п-аминобензойной кислоты) получали при нагревании до 60°С в течение 2 часов.

Чистоту продуктов конденсации определяли методом тонкослойной хроматографии на пластинках «Силуфол UV-254». Строение соединений подтверждали элементным анализом, ИК-, ПМР-спектроскопией.

Фунгицидная активность каждого вещества в индивидуальном виде и в составе различных смесей определялась методом торможения роста мицелия (при экспозиции 3-5 суток), в качестве тест-объектов были использованы чистые культуры грибов Aspergilius niger BKMF-1119, которые, благодаря высокому уровню мутаций, являются наиболее устойчивыми среди грибов плесневения, и Canio-phora cerebella, дереворазрушающий гриб. Эффективность рассчитывали по формуле Эббота [10].

Антибактериальная активность. Определение бактериостатической активности препаратов in vitro проводили методом серийных разведений в жидкой питательной среде при бактериальной нагрузке 300000 микробных тел в 1 мл. Бактерицидную активность изучали путем воздействия препаратов на тест объекты при комнатной температуре (19-22оС) и дальнейшего культивирования E.coli (штамм ВКМВ-125), St. aureus (штамм 209-Р) и Bac. antracis (штамм СТИ) на мясопептонном агаре (МПА). Бактериальная нагрузка - 500000 микробных тел в 1мл. Бактериостатические и бактерицидные свойства определяли визуально по отсутствию роста культуры в пробирках после суточной и пятисуточной инкубации при температуре 37оС [11].

Вирулицидная активность определялась на вирусе "классической чумы свиней" (КЧС) штамм "Ши-Мынь".

Акарицидная активность исследовалась на клещах-накожниках (Psoroptes cuniculi) в лабораторных условиях на изолированных клещах, также и при лечении больных псороптозом кроликов. В опытах использовали по 10 особей имаго клещей-накожников, взятых из ушных раковин кроликов. Эталоном служил хлорофос. Акарицидность каждой концентрации новых веществ и хлорофоса была изучена в опытах при трехкратном повторении. Критерием оценки акарицидной активности химических веществ является величина СК50, определенная на указанных клещах.

Инсектицидная активность изучалась на десяти видах синантропных мух, слепнях, относящихся к пяти родам и представленных тремя ландшафтными зонами: лесной, лесостепной и степной.

Лярвицидное действие препаратов проверялось на личинках комаров летней генерации.

Токсичность при введении в желудок смеси изучали на белых крысах весом 170-200 г. Смесь вводили в виде водных суспензий с суммарной концентрацией действующих веществ от 0,25% до 5,00%. Животным контрольной группы вводили раствор стабилизатора. Наблюдение за клиническим состоянием животных проводили в течение 14 дней. Определяли максимально переносимую дозу (МПД); дозу, вызывающую гибель 50% животных (ЛД50) и абсолютно смертельную дозу (ЛД100). ЛД50, доверительные границы вычисляли по методу Литчфилда и Уилкоксона.

Токсичность при нанесении на кожу исследовали на белых крысах массой 120-160 г, используя водные суспензии с той же концентрацией исследуемых веществ. Животным первой группы суспензии наносили ежедневно на наружную поверхность ушной раковины, второй - на предварительно выстриженный участок кожи размером 2^2 см. Животным контрольных групп наносили дистиллированную воду со стабилизатором. Обработку крыс проводили в течение 10 дней.

При исследовании местного действия на слизистой оболочке вносили суспензии однократно в конъюнктивальный мешок кролика в количестве 1-2 капель в течение 7 дней.

Изучение кожно-резорбтивного действия. Реакцию организма крыс на исследуемые вещества изучали путем часовой экспозиции хвоста в пробирках с суспензиями при температуре 28оС. Хвосты контрольных животных помещали в пробирки с водой и стабилизатором. О кожно-резорбтивном действии судили по наблюдению за физиологическим состоянием крыс в течение 14 дней.

Кумулятивные свойства изучали на белых крысах массой 120-160 г с использованием теста субхронической токсичности. Смесь в дозе ЛД50 наносили накожно животным опытной группы первые 4 дня. Затем каждые последующие 4 дня дозу повышали в 1,5 раза. Длительность опыта 24±4 дня. К концу опыта доза составила 8,5 ЛД50. Результаты исследования оценивали по отношению к средним эффективным дозам острого и подострого действия.

Аллергенные свойства. Исследование сенсибилизирующих свойств проводили на белых крысах массой 120-160 г и кроликах массой 2,0-2,5 кг. Перед опытом оценивали первичнораздражающее действие. У животных предварительно выстригали волосы на участке спины размером 2^2 см у крыс, 5x5 - у кроликов. Подопытных крыс делили в разных количествах на 8 групп. Первым трем группам наносили и втирали однократно соответственно 0,25%, 0,5% и 1% суспензии в течение 15 дней, другим трем группам - двукратно в день в течение того же времени. Всего животным на один и тот же участок кожи наносили 10-30 аппликаций. Контрольным группам по той же схеме наносили дистиллированную воду со стабилизатором.

Подопытным кроликам выстригали два участка кожи с двух сторон от позвоночного столба и наносили скарификатором царапины. На одну сторону наносили суспензии исследуемых веществ, на другую - 0,01% раствор гистамина гидрохлорида. Наблюдение за состоянием кожи животных проводили через 30 минут, 24, 48 и 72 часа.

Результаты и их обсуждение

На первом этапе наших исследований проводили изучение биологической активности смесей 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана с 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксаном (смесь I) различных по составу, в сравнении с составляющими компонентами в чистом виде.

Информация о результатах исследования фунгицидной активности приведена в таблице 1. Установлено, что в индивидуальном виде 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан проявляет наибольшую активность в отношении грибов Авре^Шш ш§ег и менее эффективен в случае, когда тест-объектом является СошорЬога сегеЬе11а, а 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксан - наоборот. Изучение активности смесей показало, что экспериментальная концентрация, при которой наблюдается эффективное подавление роста в отношении тест-объектов, в целом ниже, чем у индивидуальных компонентов и у теоретически рассчитанной величины, т.е. имеет место синергетический эффект. Коэффициент синергизма для всех составов выше единицы, максимальное значение (19,54) зафиксировано для состава, содержащего до 10% 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана.

Таблица 1 - Сравнительные данные по фунгицидной активности смесей 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана и 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана

Тест- объект Соотношение компонентов в смеси, % Концентрация состава (^0,%), вызывающая 50% ингибирование роста мицелия грибов Коэффи- циент синер- гизма

МНБФ ДНБФ Индивиду- альных компонен- тов Смеси экспе-рименталь-ные Смеси теоретиче- ские

ЛБре^Шш ш§ег 100 0 0,0013 - - -

90 10 0,0002 0,0038 19,54

80 20 0,0005 0,003 6,3

70 30 0,0007 0,0027 3,86

60 40 0,0007 0,0024 3,75

50 50 0,00064 0,0021 3,21

40 60 0,0056 0,0018 1,42

30 70 0,0012 0,0017 1,156

20 80 0,0013 0,0015 0,93

10 90 0,0015 0,0014 0,90

0 100 0,05 - - -

СошЮга сегеЬе11а 100 0 0,0126 - - -

90 10 0,0017 0,0011 0,65

80 20 0,0014 0,0012 0,88

70 30 0,0013 0,0014 1,07

60 40 0,00056 0,00158 2,85

50 50 0,0006 0,00185 3,08

40 60 0,00064 0,0022 3,41

30 70 0,00058 0,0028 4,83

20 80 0,00058 0,0038 6,55

10 90 0,00062 0,0058 9,35

0 100 0,001 - - -

Более высокая фунгицидная активность предложенных составов, возможно, объясняется способностью исходных компонентов смеси образовывать друг с другом сложные межмолекулярные комплексы, стабилизированные водородными связями.

Исследования, проведенные в идентичных условиях (указанны выше), выявили, что по фунгицидной активности 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан и 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксан превосходят эталон [12] как минимум на два порядка, а все их смеси - на три порядка.

Поскольку существует простой способ получения смеси I, а именно состава с соотношением 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксан: 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан -

30:70, исключающий стадии выделения индивидуальных соединений в чистом виде и их смешивания, дальнейшие исследования, касающиеся данной смеси проводили именно при таком соотношение компонентов. Оказалось, что смесь одновременно обладают несколькими видами биологической активности (табл. 2), помимо фунгицидной, выраженной акарицидной и высокой бактерицидной. Так, смесь эффективно подавляет рост St. aureus даже при суммарной концентрации веществ в питательной среде 0,025 мг/мл, минимальная концентрация при которой проявляется акарицидное действие - 0,069.

Далее нами путем механического смешения были получены смеси 4,6-динитро-

5,7-дихлорбензофуроксана с 4-нитро-5,7-дихлорбензофуроксаном (смесь II) и тройная смесь 5-нитро-4,6-дихлор-, 4-нитро-5,7-дихлор- и 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксанов (смесь III). Согласно данным, представленным в таблице 2, смеси II и III по акарицидной активности в отношении тест-объекта клеща Psoroptes cuniculi значительно (смесь II - на порядок, а смесь III - в несколько сотен раз) превосходят смесь I. Смесь II по способности подавлять рост St. aureus незначительно уступает смеси I, тем не менее, является высокоактивной, в наибольшей степени бактерицидное действие выражено у смеси III.

Смесь I и ее индивидуальные компоненты в чистом виде подвергли дальнейшим испытаниям на выявление вирулицидной и спороцидной и подтверждение бактерицидной активности. При этом в число тест-объектов вошли: вирус КЧС шт. "Ши-Мынь", E. coli шт. ВКМВ-125 и Bac. antracis шт. СТР. Результаты эксперимента показали, что 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксан, 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан и их смесь обладают вирулицидной активностью в концентрации 0,25% при экспозиции в течение 30 минут. Кроме того, объекты исследования эффективно подавляют рост бактерий E. coli в концентрации 0,5%, спороцидные свойства проявляются при концентрации 0,025% в отношении Bac. anthracis при воздействии в течение двух часов.

При изучении лярвицидного и инсектицидного действия производных бензофу-роксанов на примере смеси I выявили, что препарат в 0,5% концентрации вызывает гибель 40% синантропных мух и 40% личинок комаров. В емкостях с большой широкой поверхностью при смешивании соединения с водой гибель личинок наступает через 812 часов.

Следующим этапом нашей работы явились исследования по определению токсичности при внутреннем введении, при нанесении на кожу, кожно-резорбтивного действия, кумулятивных и аллергенных свойств для смеси I.

Проведенные исследования показали, что однократное нанесение на кожу подопытных животных указанной смеси в дозах 500, 1000, 2500 и даже 5000 мг/кг не вызывает гибели животных. В целом, данные токсикологических исследований позволяют отнести изучаемую смесь к третьему классу умеренно опасных веществ при внутреннем введении и к четвертому классу малоопасных веществ при наружном применении [13].

Таблица 2 - Биологическая активность производных бензофуроксана и их смесей

Заместители Антибактериальная активность (МБСК, мг/мл) Акарицидная активность (СК50, мг/мл)

Р2 Рэ

Н N02 С1 N02 - 0,024

С1 то же то же то же - 0,090

X то же Вг то же 0,025 0,0067

^^N02 то же шт& то же 0,1 0,3

N02 то же л о К) то же 0,0125 0,0494

^^С00Н то же 0 о о 0 1 то же 0,00312 0,0029

N02 N=4 С1 N02 N=4 С1 0,0056 0,0339

то же N=4 Вг то же N=4 Вг 0,0067 0,025

то же HN-^3 то же HN-^3 - >0,1

Смеси

N02 С'У>'0С'ГГЛ0 02^^к^02^^1вм С1 0 С1 0 0,025 0,069

N02 N02 02ы^Г^ С1 0 С1 0 0,0312 0,0044

N02 N02 С1*Л C'Y^;N■0C'YY^0 С1 0 С1 0 С1 0 0,0156 0,00014-0,0004

N02 N Н0^^’ ^^Н2 С1 0 0,025 0,0075

Результаты по изучению кожно-резорбтивного действия показали, что исследуемая смесь в концентрациях 0,25%, 0,5% и 1% не оказала токсического действия на физиологическое состояние животных. На коже хвостов не отмечено отека, покраснений, шелушения и деструктивных явлений.

В опытах по определению кумулятивных свойств смеси не удалось вызвать гибели ни одной крысы, хотя каждое животное получило суммарную дозу 3813 мг/кг массы тела.

Изучение аллергенных свойств смеси показало отсутствие контактного дерматита у крыс от нанесения исследуемых веществ в концентрациях 0,25-1,00% в течение опыта, кроме того данные концентрации не вызывают изменение картины периферической крови. В опытах по определению аллергической реакции организма кроликов в ответ на

0,25%-0,5% концентрации смеси не наблюдалась реакция. После аппликации 1% концентрации через 24 часа появляется незначительное уплотнение по ходу царапины, которое исчезает на вторые сутки.

Таким образом, смесь 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана и 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана в соотношении 70:30 в исследованных концентрациях и дозах не обладала раздражающим, аллергизирующим, кожно-резорбтивным и кумулятивным действием.

Логичным продолжением данного исследования явился синтез и изучение ряда конденсированных бензофуроксанов, обладающих потенциальной фунгицидной активностью. В качестве нуклеофильного агента использовались ароматические амины, а именно, анилин, м- и п-нитроанилин, м-хлоранилин, п-аминобензойная кислота и 2-амино-4-хлорпиридин. Полиядерные производные бензофуроксанов были получены путем химического синтеза по описанным выше методикам. В ИК-спектрах полиядерных производных четко регистрируется один пик в области характерной для вторичных аминов 33603380 см-1 ^Н) и область 1680 см-1 (^=N-0), которая характерна для фуроксанового цикла. В ПМР-спектрах, где протоны бензольных колец проявляются в области 7.1-7.3 м.д., группам NH отвечают синглеты в области 9.5-9.7 м.д.

Результаты исследований бактерицидной и акарицидной активности, проведенных в идентичных с указанными выше условиями, полученных полиядерных бензофуроксанов представлены в таблице 2; фунгицидной - в таблице 3. Из таблиц 2, 3 видно, что активность зависит от структуры замещающего ароматического амина. Активность 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана и 4,6-динитро-5,7-дибромбензофуроксана уменьшается при замене галогена на ариламинное ядро, свободное от заместителей. Присутствие атомов галогена, либо карбоксильной группы как в ароматическом, так и гетероциклическом ядре, придает большинству соединений высокую бактерицидную и акари-цидную активность. Так, наиболее активны соединения, полученные при конденсации

5,7-дигалоген-4,6-динитробензофуроксанов с п-аминобензойной кислотой и галогенсодержащими производными 2-аминопиридина. Введение нитрогрупп в пара-положение относительно центра замещения вызывает уменьшение биологической активности, нитрогруппа в мета-положении не изменяет, либо незначительно снижает активность исходного бензофуроксана.

Таблица 3 - Зависимость фунгицидной активности от структуры полиядерных бен-зофуроксанов (тест-объекты Aspergilius niger)

Различную эффективность исследуемых полиядерных бензофуроксанов можно объяснить, если учесть, что для реализации биологического действия у данных соединений является необходимым присутствие электроноакцепторных групп в положении 4 (нитро-, фенилсульфонильная группа), повышающих реакционную способность бензофуроксано-вого цикла, а также атомов водорода или легко уходящих групп (РИЭ, С1, РИ302) в 7 положении. Только такие структуры способны образовывать “комплексы Мейзенгеймера” с биологическими субстратами, выключая их из нормального метаболизма [2,14]. Естественно, что прочность связи ароматических аминов (анилин, м- и п-нитроанилин, м-хлоранилин, п-аминобензойная кислота и 2-амино-4-хлорпиридин) с бензофуроксановым фрагментом неодинакова. Атомы галогена, карбоксильная и нитрогруппа обусловливают специфическое распределение электронной плотности и легкость отрыва уходящей группы. Выраженность биологического действия также зависит от способности соединений проникать через биологические мембраны, определяемой растворимостью соединений.

На основании проведенных исследований синтезированных соединений можно сделать вывод, что за биологическую активность ответственны такие функциональные

группы, как хлор и нитро-группа. Таким образом, синтезированные соединения бензофу-роксанового ряда превосходят по акарицидной активности все ранее известные соединения как минимум на два порядка. Хлорофос, долго находивший широкое применение в качестве акарицидного препарата в ветеринарии, имеет СК50=0,71. До синтеза соединений бензофуроксанового ряда лучшими акарицидами считались соединения, для которых СК50 составляла 0,1 %.

Дополнительно обнаруженные биологические эффекты изучаемых смесей, а именно, антибактериальная, вирулицидная, лярвицидная, инсектицидная активность, открывают широкие возможности для их внедрения в медицинскую практику в качестве препаратов, проявляющих противопаразитарные, антибактериальные и противогрибковые свойства.

Выводы

Исследованы фунгицидные, антибактериальные, вирулицидные, лярвицидные, инсектицидные свойства 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана, 4,6-динитро-5,7-дихлорбензо-

фуроксана и их смесей различных составов.

Выявлено синергетическое взаимодействие 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана и

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

4.6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана в смесях. Максимальный зафиксированный коэффициент синергизма - 19,54.

Определены параметры токсичности смеси 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана и

4.6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана в соотношении 70:30.

Изучена биологическая активность ряда соединений полиядерных бензофурокса-нов, установлена связь между структурой замещающего ароматического амина и биологической активностью. Выявлены наиболее перспективные соединения.

Литература

1. Каримова Р.Г. Фармако-токсикологическая оценка замещенных бензодифурозана: Автореф. дис. ... канд. биол. наук/- Казань, 2003.

2. Хмельницкий Л.И., Новиков С.С., Годовикова Т.И. Химия фуроксанов. Реакции и применение. - М.: Наука, 1996. - 430с.

3. Патент РФ 2032678, Бюл. изобрет., № 10 (1995).

4. Патент РФ 2051913, Бюл. изобрет., № 1 (1996).

5. Патент РФ 2058141, Бюл. изобрет., № 11 (1996).

6. Патент РФ 2067863, Бюл. изобрет., № 29 (1996).

7. Патент РФ 2076803, Бюл. изобрет., № 10 (1997).

8. Патент РФ 2169564, Бюл. изобрет., № 5 (2001).

9. Левинсон Ф.С., Евгеньев М.И., Ермолаева Е.А., Ефимов С.И., Фаляхов. И.Ф., Гарипов Т.В., Каримова Р.Г. // Хим.фарм. журнал. 2003, Т.37, № 10, с. 12-15.

10. ХорсфоллДж. Фунгициды и их действие. - М.: ИЛ, 1948. -345с.

11. Методы экспериментальной химиотерапии / Под ред. Г.Н.Першина. М.: Медицина, 1971. - 426с.

12. ГОСТ 277074. Масло каменно-угольное.

13. ГОСТ 12.1.007-76. Вредные вещества. Классификация и требования безопасности.

14. Альберт А. // Избирательная токсичность. - М.:Медицина, 1989.

© Л. М. Юсупова - д-р хим. наук, проф. каф. химической технологии органических соединений азота КГТУ; С. Ю. Г армонов - д-р хим. наук, проф. каф. аналитической химии, сертификации и менеджмента качества КГТУ; И. М. Захаров - асп. той же кафедры; А. Р. Быков - соискатель той же кафедры; Т. В. Гарипов - д-р вет. наук, проректор по учебной работе КГАВМ; И. Ф. Фаляхов -д-р хим. наук, зав. каф. химической технологии органических соединений азота КГТУ.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.