CC BY
38
УДК 541.18:658.562.012.7
Р. Ф. Бакеева, О. Е. Вахитова, В. В. Зобов, А. Д. Волошина, Т. С. Горбунова, В. Ф. Сопин
БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ МИЦЕЛЛЯРНЫХ КОМПОЗИЦИЙ НА ОСНОВЕ
5,7-ДИХЛОР-4,6-ДИНИТРОБЕНЗОФУРОКСАНА
Ключевые слова: солюбилизация, критическая концентрация мицеллообразования, поверхностно-активные вещества, биологическая активность, 5,7-дихлор-4,6-динитробензфуроксан, Trichophyton mentagrophytes и Candida albicans.
Установлена противогрибковая активность 5,7-дихлор-4,6-динитробензфуроксана, ДХДНБФО, солюбилизи-рованного в мицеллярных растворах: додецилсульфата натрия (ДСН); цетилтриметиламмонийбромида, (ЦТАБ); p-(1,1,3,3-тетраметилбутил фенокси) полиоксиэтилен гликоля; TrX-100, цетилового эфира полиок-сиэтилена (10); Brij 56 относительно Trichophyton mentagrophytes и Candida albicans.
Keywords: solubilization, critical micellar concentration, surfactant, biological activity, 5,7-dichlorine-4,6-dinitrobenzophyroxan,
Trichophyton mentagrophytes и Candida albicans.
We have studied the fungicide activity of solubilyzed 5,7-dichlorine-4,6-dinitrobenzophyroxan in micelles of cetyltrymethylammonium bromide, sodium dodecyl sulphate, Tr X 100, Brij 56 and have shown that they depress the growth of Trichophyton mentagrophytes and Candida albicans.
Разработка новых препаратов, создание новых лекарственных форм, а также технологии их получения является одним из современных направлений фармакологии. Актуальным на сегодняшний день является создание водных растворимых форм лекарственных препаратов, поскольку использование плохо растворимых лекарственных препаратов в виде порошков, микроэмульсий, суспензий достаточно часто приводит к закупорке капилляров. Одним из подходов к повышению растворимости является использование мицеллярных систем [1-6]. Однако, не ясно, будет ли сохранятся биологическая активность лекарственных веществ при солюбили-зации в мицеллах.
Биологическая активность химических соединений стимулирует их исследование на предмет пригодности для последующего применения в качестве лекарственных средств. В частности, производные бензофуроксана обладают широким спектром биологической активности [7].
Известна антибактериальная и антигрибковая активность гетероциклических производных о-хининона, способность ингибировать моноаминоокси-дазу, а также сосудорасширяющее действие определенным образом замещенных бензофуроксанов [7].
5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксан, ДХДНБФО, является компонентом некоторых биологически активных смесей [8]. Ярко выраженная антибактериальная и фунгицидная активность позволяют использовать, в качестве прекурсоров лекарственных препаратов [8].
Изученные авторами [9] 14 соединений в ряду 5,7-дизамещенных-4,6-динитробензофуроксана обладают выраженными антимикробными, антимико-тическими и акарицидными свойствами.
Исследование смеси 4-нитро- и 6-нитро-5,7-дихлорбензофуроксана - «Нитроксан» [10] показало широкий спектр проявляемой ею биологической активности - фунгицидной, бактерицидной, акари-цидной, спороцидной, вирулицидной.
Смесь 5,7-дихлор-4,6-
динитробензофуроксана, 5,7-дихлор-6-нитробензо-фуроксана и 5,7-дихлор-4-нитробензофуроксана,
которая известна как «Тримиксан» оказывает выраженный эффект на нитроксидергическое состояние организма [11]. Этим же свойством обладают «Хлофу-зан» (4-хлор-6,7-фуроксанобензофуразан) и «Феник-сан» (5,7-бис(4-гидроксифениламино)-4,6-
динитробензофу-роксан) [12].
ДХДНБФО в качестве основного компонента входит в состав лекарственной формы наружного применения «Димиксан» - двухкомпонентной системы на основе 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана и 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана. Наиболее перспективной областью применения «Димиксана» как лекарственного средства вследствие его высокой акарицидной и фунгицидной активности является ветеринария и медицина [13].
Известны антипаразитарные препараты «Де-гельм» и «Депрот», основой которых являются четвертичные соли фосфония с высшими алкильными радикалами нитрозамещённого бензофуроксана в качестве генератора N0' [14,15].
В связи с тем, что растворимость соединений и композиций на основе производных бензофурок-сана в воде довольно ограничена, ранее уже возникала необходимость подбора подходящего растворителя этих форм для создания наиболее удобной для применения лекарственной формы. В связи с плохой растворимостью «Эктоцида» в воде возникла необходимость подобрать подходящие растворители для создания удобных для применения лекарственных форм. Лучшим растворителем для «Эктоцида» явился диметилсульфоксид. При разработке стойких суспензий в качестве поверхностно - активных веществ авторами [16] использовались ПЭО -400 и стеарокс — 6. В качестве мазевой основы использовали ПЭО - 400, ПЭО-1500 и вазелин. Также были показаны стойкие суспезии как для композиций на основе «Димиксана». Например, были разработаны состав и методика получения солюбилизи-рованной формы «Димиксана» в водной среде [13].
Таким образом, благодаря своей биологической активности бензофуроксаны используются в качестве компонента лекарственных препаратов антигельминтного действия, при лечении грибковых
и чесоточных заболеваний, а также могут быть прекурсором лекарственных средств сосудорасширяющего, антиагрегатирующего, противоракового, ан-тилейкемического действия. Однако, биологическая активность ДХДНБФО, солюбилизированного в классических мицеллах ионных и неионных ПАВ не изучалась.
Экспериментальная часть
5,7-Дихлор-4,6-динитробензофуроксан:
o2n
no2
ДХДНБФО, синтезирован Л.М. Юсуповой в лаборатории на кафедре ХТОСА КНИТУ по известной методике [17]. Хорошо растворим в органических растворителях (ДМСО, ацетонитрил), но не растворяется в воде и гексане. Молекулярная масса 295 г/моль.
В работе использовали следующие ПАВ. Додецил-сульфат натрия (ДСН) фирмы «ЛИпсЬ». брутто-формула C12H25OSO3Na,. после трехкратной перекристаллизации из этанола. Содержание основного вещества 98%. Структурная формула:
C12H2
-О—S—ONa
Цетилтриметиламмонийбромид,
(ЦТАБ)
C16H33N+(CH3)3Br фирмы «Sigma», перекристалли-зовывали из этанола. Содержание основного вещества 99,5%.Структурная формула:
CH .
I
+
CH \ 3 CH
Br -
p-1,1,3,3-тетраметилбутил фенокси поли-оксиэтилен гликоль, Tr X-100 фирмы «Merck». Брутто формула: C14H22O(C2H4O)n , где n = 9-10. Содержание основного вещества составляет 98,5 %. Структурная формула:
CH3 CH3/=\
H3C C CH —C ^ ^O(CH2CH2O)10
CH,
CH
'3 '3
Цетиловый эфир полиоксиэтилена (10), Brij 56 (полиалкиленоксид) фирмы «Aldrich»:
C12H25O-(CH2)4-(CH2CH2O)10-H
Для приготовления растворов использовали воду дважды перегнанную деионизированную воду.
Для определения биологической активности готовили водные мицеллярные растворы в концентрациях: ДСН - 1,00*10-2 моль/л; ЦТАБ - 5,00*10-3 моль/л; Tr X-100 - 5,00*10-3 моль/л; Brij 56 -5,00*10-3 моль/л.
Антимикробное действие композиций определяли аналогично [18]. В качестве тест-объектов нами были использованы следующие микроорганизмы: Staphylococcus aureus ATCC 6538-P, Escherichia coli ATCC 25922, Bacillus cereus NCTC 8035, Candida albicans ATCC 885-653, Trichophyton
mentagrophytes var. gypseum 1773, Aspergillus niger (BKMF-1119).
Бактериостатические фунгистатические свойства изучали методом серийных разведений в жидкой питательной среде по методикам [18]. Для приготовления композиций первоначально готовили мицеллярные растворы изучаемых поверхностно-активных веществ. Затем проводили процесс солю-билизации ДХДНБФО. Для этого избыточное количество ДХДНБФО заливали раствором ПАВ определенной концентрации (в эппендорфе), и тщательно встряхивали в течение 24 часов до достижения максимальной растворимости. Осадок отделяли при помощи центрифуги при температуре 25+0,5 0С. Концентрация солюбилизированного ДХДНБФО определялась спектрофотометрически при 410 нм, в пересчете на этанол с использованием е = 2259 моль-1см-1 на спектрофотометре Agilent 8453.
Антимикробное действие изучалось для растворов ДХДНБФО, солюбилизированных в мицеллах изучаемых ПАВ в исходных концентрациях: для водного раствора - 0,00153 моль/л; для раствора Tr X-100 - 0,00488 моль/л; для Brij 56 - 0,00590 моль/л; для ДСН - 0,00595 моль/л; для ЦТАБ -0,00301 моль/л; для бинарных растворов ДМСО : Н2О (20 об.%.:80 об.%) - 2*10-2 моль/л. 1 мл соответствующего раствора ДХДНБФО добавляли непосредственно в 10 мл агаризованной питательной среды (МПА) или среды Сабуро (для грибов). Полученную суспензию тщательно перемешивали и вносили в стерильные чашки Петри. В контрольные чашки добавляли 1 мл соответствующего растворителя. Опыт проводили в трёхкратной повторности. После застывания агара на поверхность среды бактериологической петлёй наносили культуру каждого тест-штамма бактерий и грибов в виде бляшек на МПА и агар Сабуро соответственно. Чашки с МПА инкубировали при температуре (32,5±2,5)°С в течение 48 ч. Чашки со средой Сабуро инкубировали при температуре (22,5±2,5)°С в течение 5 суток.
Испытания проводили в лаборатории Химико-биологических исследований ИОФХ им. А.Е. Арбузова КНЦ РАН.
Обсуждение результатов
Для увеличения растворимости ДХДНБФО мы использовали мицеллярные растворы ионных ПАВ: цетилтриметиламмоний бромида, ЦТАБ; до-децилсульфата натрия, ДСН. В качестве неионных ПАВ использовали: Tr X-100, который имеет в составе молекулы гидрофобный (4-третоктилфенол) и гидрофильные фрагменты (из остатков оксида этилена, в количестве 9-10); Brij 56, который cодержит в качестве гидрофобного блока додецильный радикал нормального строения: C12H25O-(CH2)4-(CH2CH2O)10-H.
Для определения биологической активности использовали мицеллярные растворы соответствующих ПАВ с солюбилизированным ДХДНБФО
Впервые введенное Мак - Беном в понятие «солюбилизация» (от позднелатинского solubilis -растворимый), в настоящее время означает «коллоидное растворение, самопроизвольное и обратимое
O
O
проникание какого-либо вещества (солюбилизата), слаборастворимого в данной жидкой среде, внутрь находящихся в ней мицелл поверхностно-активного вещества или молекулярных клубков (глобул) высокомолекулярного соединения» [2].
Для организованных, в частности мицелляр-ных сред, образованных ПАВ, солюбилизация возможна благодаря их специфическому строению. Как известно, мицеллы - это агрегаты дифильных молекул, имеющих в своем составе длинный гидрофобный фрагмент (как правило, углеводородный радикал различного строения) и гидрофильный фрагмент - головную группу. Мицеллы образуются по достижении критической концентрации, которая называется критической концентрацией мицеллообразова-ния (ККМ). ККМ зависит от многих факторов. Этот вопрос хорошо описан в литературе [19-22] и поэтому мы на нем не останавливаемся. Однако отметим, что именно дифильное строение мицелл ответственно за возможность проявления солюбилизации, возможность инкорпорировать различные по гидро-фобности и полярности соединения в различной области - неполярном ядре, в области головных групп, в пограничном слое. Например, гидрофобное ядро мицеллы может быть использовано как область для инкапсулирования разнообразных плохо растворимых терапевтических и диагностических агентов. Такое инкапсулировние существенно увеличивает биодоступность, защищает их от деструктивных факторов (рис. 1) [22].
Мицеллы можно рассматривать как потенциальные системы для доставки лекарств, преимуществом которых является легкость приготовления [3].
По сути дела большинство лекарственных веществ (ЛВ) являются органическими соединениями и закономерности, выявленные для них, наблюдаются для Л В.
— Н«п4>ля|>н4>е II - | лаоополярное ПС
— Амфифильное JIC * Маленький ион
Рис. 1 - Схематическое представление солюбилизации в классических мицеллах ионных и неионных ПАВ
Согласно концепции автора [3], мицеллярная солюбилизация ЛВ может увеличить его биодоступность и стабильность, поэтому дизайн оболочки для ЛВ, является интересной задачей.
Для выбора подходящей среды требуется предварительное изучение растворимости ЛВ в системах мицеллярных ПАВ, что и было проведено для ДХДНБФО в [1] и показано на основе анализа физико-химических характеристик солюбилизации,
что предпочтительными для этих целей являются мицеллы неионных ПАВ.
5,7-дихлор-4,6-динитробензфуроксан является прекурсором лекарственных препаратов, однако неизвестно сохранится ли его биологическая активность в мицеллярных растворах. В связи с этим нами исследовано действие ДХДНБФО, солюбилизи-рованного в мицеллах ДСН, ЦТАБ, Tr X-100, Brij 56 на Staphilococcus aureus, Escherich, Bacillus cere-us, Trichophyton mentagrophyte, Aspergillus niger, Candida albicans. Методика определения биологической активности показана в экспериментальной части, а результаты испытаний - в табл.1 Таблица 1 - Результаты испытаний на биологическую активность мицеллярных растворов
ДХДНБФО
Наиме- Бактериальные Культуры грибов
нование культуры
препара- Staph Esch Ba- Tricho Asp Can
та ylococ cus eric hia cillu s phyto n ergil lus dida albic
aureus coli ce- menta ni- ans
ATCC AT reus groph ger AT
6538- CC NC ytes BK CC
P 259 TC var. MF- 885-
22 803 5 gypse um 1773 111 9 653
ЦТАБ (5*10-3 моль/л) - - - ± ± +
1+ЦТАБ ± ± ± - ± -
I 0,0030
моль/л
Вгу56 (5*10-3 моль/л) + + + ± + +
1+Вгу 56 + + + - ± -
I 0,00590
моль/л
Тг Х-100 + + + - ± ±
(5*10-3 моль/л)
1+Тг X- + + + - ± -
100
I 0,0049
моль/л
ДСН (1*10-2 + + + - ± -
моль/л)
1+ДСН + + + - ± -
I 0,0060
моль/л
ДМСО: Н2О + + + + + +
(20%): (80%)
1+ДМСО + + + - ± -
I 0,02
моль/л
Н2О + + + + + +
1+Н2О + + + - ± -
I 0,0016
моль/л
Контроль + + + + + +
тест-
микроор-
ганизмов
I-ДХДНБФО
Наличие такого же роста тест-микроорганизмов, как в контроле, обозначают знаком (+), отсутствие роста знаком (-), слабый, замед-
ленный или угнетённый рост знаком - (±). Если по сравнению с контролем на средах с препаратом наблюдают заметное уменьшение количества колоний на чашках (более 70%) или отсутствие роста тест-микроорганизмов, можно сделать заключение о наличие антимикробного действия.
Антибактериальным действием ДХДНБФО, солюбилизированный в мицеллах ДСН, Tr X 100, Brij 56 не обладает. Мицеллы ЦТАБ обладают антибактериальным действием. Следует отметить, что ДХДНБФО способствует незначительному угнетению роста бактериальных тест-штаммов Staphylo-coccus aureus ATCC 6538-P, Escherichia coli ATCC 25922, Bacillus cereus NCTC 8035. При этом ДХДНБФО проявляет одинаковое противогрибковое действие в водных и водно-мицеллярных средах. Причем в отношении дрожжеподобного гриба Candida albicans и Trichophyton mentagrophytes (возбудитель дерматозов человека и животных) наблюдается полное угнетение тест-микроорганизмов, а в случае фитопатогенного гриба Aspergillus niger происходит лишь незначительное замедление его роста.
Таким образом, антигрибковая активность ДХДНБФО сохраняется в мицеллярных системах, изученных анионного и неионных ПАВ. Учитывая данные по солюбилизации и сохранение антигрибковой активности, мицеллярные системы неионных ПАВ можно рекомендовать в качестве наноконтей-неров для ДХДНБФО при разработке систем транспорта лекарственных веществ. В этом случае предпочтительными являются мицеллы неионных ПАВ Brij 56 и Tr X-100 вследствие их меньшей токсичности и меньших значениях концентраций при которых образуются мицеллы, ККМ.
Авторы выражают благодарность профессору КХТОСА КНИТУ за предоставленный образец ДХДНБФО.
Литература
1. Бакеева, Р.Ф. Солюбилизационная способность неионных ПАВ по отношению к биологически активному 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксану / Р.Ф.Бакеева, О.Е. Вахитова, Л.М. Юсупова, В.Ф. Сопин // Вестник Казан. технол. ун-та. - 2013. - Т16. - №4. - С.73-77.
2. Mc Bain, Н.ЕХ. Solubilization and related phenomena / H.E.L Mc Bain; Е. Hutehillson // N.Y. Acad. Press. - 1955. -254 р.].
3. Bhat, P.A. Rather Solubilization Capabilities of Some Cationic, Anionic, and Nonionic Surfactants toward the Poorly Water-Soluble Antibiotic Drug Erythromycin / P. A. Bhat, A. A. Dar, G. Mohammad /J. Chem.Eng.Data. - 2008. - V.53. - P. 1271-1277]
4. Бакеева, Р.Ф. Использование наноструктурированных мицеллярных сред для модификации 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксана при определении ароматических аминов / Р.Ф.Бакеева, Т.С. Горбунова, О.Е. Вахитова, Л.И. Сафиуллина, С.Ю. Гармонов, Л.М. Юсупова // Вестник Казан. технол. ун-та. - 2010 г.- № 10 с.37-45
5. Бакеева, Р.Ф. Модификация 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксана для применения в качестве аналитического реагента и компонента биологически активных композиций. Ч.1 иммобилизация смешанными мицеллами / Р.Ф.Бакеева, Т.С. Горбунова, Л.И. Сафиул-лина, О.Е., Вахитова, С.Ю. Гармонов, Л.М. Юсупова,
В.Ф. Сопин // Вестник Казан. технол. ун-та. - 2010 г.- № 5 С.48-54
6. Бакеева, Р.Ф. Модификация 5,7-дихлор-4,6-динитробензофуроксана для применения в качестве аналитического реагента и компонента биологически активных композиций. 4.II Солюбилизация смешанными мицеллами / Р.Ф.Бакеева, Т.С. Горбунова, Л.И. Сафиуллина, О.Е. Вахитова, С.Ю. Васютина, Л.М. Юсупова, В.Ф. Сопин // Вестник Казан. технол. ун-та. - 2010 г.- № 5 с.60-65
7. Хмельницкий, Л.И. Химия фуроксанов (реакции и применение) / Л.И. Хмельницкий, С.С Новиков, Т.И. Годовикова. - М.: Наука, 1996. - 430с.
8. Юсупова, Л.М., Спатлова,. Л.В., Фаляхов, И.Ф., Гари-пов, Т.В., Шиндала, М.К. Биологическая активность функциональнозамещенных нитропроизводных бензо-фуроксанов // Материалы второй международной конф. «Химия и биологическая активность кислород - и серосодержащих гетероциклов». - Черноголовка - 2003. - С. 122.
9. Пат.2255935 Российская Федерация. 5,7-Дизамещенный-4,6-динитробензфуроксан общей формулы С6К406(Ю)2, обладающий акарицидной и бактерицидной активностью/Л.М. Юсупова, И.Ф. Фаляхов, Л.В. Спатлова, Т.В. Гарипова; опубл. 10.07.2005, Бюл.№19]
10. Салахова, А.С. Разработка рационального способа получения высокоэффективного лекарственного препарата «Нитроксан» // Дисс. к. х. н. - Казань, - 1999. -153с., 69.
11. Мухаметшина, А.М. Разработка технологии получения высокоэффективного биологически активного вещества «Тримиксан» широкого спектра действия: /автореф. дисс. канд. хим. наук: 15.00.02 / А.М.Мухаметшина.-Казань, 2008. - 19 с.
12. Пат. 2169564 РФ, МКИ 7А61К31/4184; А61Р31/10. Состав для лечения сквамозно-гиперкератотической формы рубромикоза стоп и кистей / Куклин В.Т., Тор-бина О.В., Фридин В.В., Молодых Ж.В., Гарипов Т.В.; ИОФХ им. А.Е.Арбузова Казанского филиала РАН, Казанская государственная медицинская академия, Казанский государственный технологический университет. -№98112830/14; заявл. 06.07.1998; опубл. 27.06.2001
13. Горелова, Е.Г. Нитропроизводные дихлорбензофурок-сана и их акрицидные составы в водных средах: автореф. дисс. канд. хим. наук: 15.00.02 / Горелова Елена Георгиевна.- Казань, 2009, - 18 с.
14. Пат. 2413513 Российская Федерация, МПК A61K A61P. Антигельминтная композиция на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензо-фуроксана / Галкина И.В., Егорова С.Н., Юсупова Л.М., Мавлиханов Р.Ф., Лутфуллина Н.А., Воробьева Н.В., Тудрий Е.В., Спатлова Л.В., Штырлин Ю.Г., Галкин В.И., Лутфуллин М.Х.; заявитель и патентообладатель Казанский государственный университет (RU), Галкина Ирина Васильевна (RU). — № 2009112924 ; заявл. 06.04.2009; опубл. 10.03.2011, Бюл. № 7. — 11 с.
15. Пат.2452477 Антибактериальная и антимикотическая композиция широкого спектра действия на основе солей фосфония и замещенного бензофуроксана / Галкина И.В., Поздеев О.К., Шулаева, Егорова С.Н., Юсупова Л.М., Тудрий Е.В., Бахтиярова Ю.В., Морозова Л.Г., Кипенская Л.В., Клюшина Л.В., Закирзянова Ф.Н., Галкин В.И.; Федеральное государственное автономное образовательное Учреждение высшего профессионального образования «Казанский (Приволжский) Федеральный Университет» (ФГАОУ ВПО КФУ) (RU), Галкина И.В. (C1RU).RU 2452477; заявл. 12.01.2011; опубл. 10.06.2012 Бюл. №16.
16. Пат. 2404975 Российская Федерация, МПК C07D A61K A61P. Антигельминтное средство [Текст] / Юсу-
пова Л.М., Спатлова Л.В., Гармонов С.Ю., Галкина И.В., Бакеева Р.Ф., Лутфуллин М.Х., Идрисов А.М., Никифоров П.Г., Лутфуллина Н.А.; заявитель и патентообладатель Казанский государственный технологический университет (ЯИ), Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана (ЯИ). — № 2009115058; заявл. 20.04.2009; опубл. 27.10.2010, Бюл. № 30. — 10 с.]
17. Пат. 2032678 Российская Федеоация, Бюл. № 10 (1995;
18. Милованова. С.Н. Методы экспериментальной химиотерапии. - 2-е изд. / С.Н. Милованова, З.Г. Степанищева // М.: Медицина". - 1971. - С. 318-321,81. Ведьмина, Е.А. Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней / Е.А. Ведьмина, Н.М. Фу-рер //М.: "Медицина".- 1964. - Т.1. - С. 670-675]. [18]ГФ XII ОФС (42-0067-07) с. 163-166 (метод реплекаций).
19. Фролов, Ю.Г. Курс коллоидной химии. Поверхностные явления и дисперсные системы: учебник для вузов / Ю.Г. Фролов; 2-е изд., перераб. и доп. // М.: «Химия» -1988. - 464 с.,
20. Миттел, К. Мицеллообразование, солюбилизация и микроэмульсии / К. Миттел; пер. с англ. - М.: Мир.-1980. - 597 с.
21. Русанов, А.И. Мицеллообразование в растворах поверхностно-активных веществ / А.И. Русанов. - СПб.: Химия,1992. - 280 с.
22. Бакеева, Р.Ф. Мицеллярные и жидкокоисталлические структуры в аналитической химии / Р.Ф.Бакеева - Казань: Новое знание. - 2000. - 108 с.
©Р. Ф. Бакеева - д-р хим. наук, проф. каф. аналитической химии, сертификации и менеджмента качества КНИТУ, bakeeva@kstu.ru, О. Е. Вахитова - асс. той же кафедры, vakhi_olga@yadex.ru; В. В. Зобов - д-р биол. наук, зав. лаб. химико-биологических исследований ИОФХ им. А.Е. Арбузова КазНЦ РАН; проф. каф. прикладной экологии К(П)ФУ, zobov@iopc.ru; А. Д. Волошина - мл. науч. сотр. лаб. химико-биологических исследований ИОФХ им. А.Е. Арбузова КазНЦ РАН; Т. С. Горбунова - канд. хим. наук, доц. каф. . аналитической химии, сертификации и менеджмента качества КНИТУ; В. Ф. Сопин - д-р хим. наук, проф., зав. каф. аналитической химии, сертификации и менеджмента качества КНИТУ.
