СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ АДАПТАЦИИ ВИРУСА ГРИППА А/H1N1 С ПАНДЕМИЧЕСКИМ ПОТЕНЦИАЛОМ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ МОДЕЛЯХ МЫШЕЙ ЛИНИИ BALB/с И ЛИНИИ C57BL/6z Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

2014, Т. 4, № 1

Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ АДАПТАЦИИ ВИРУСА ГРИППА А/ЖМ С ПАНДЕМИЧЕСКИМ ПОТЕНЦИАЛОМ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ МОДЕЛЯХ МЫШЕЙ ЛИНИИ BALB/с И ЛИНИИ C57BL/6z

Е.А. Прокопьева12, М.В. Сивай12, А.В. Глущенко1, Л.В. Шестопалова2, А.М. Шестопалов1,2

1ФГБУ Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, г. Новосибирск

2 ФГБОУ ВПО Новосибирский национальный исследовательский государственный университет

Причиной пандемии XXI века стал вирус гриппа A (H1N1)pdm09, который вызывал заболевание от легкой степени тяжести до летальных исходов в зависимости от вирулентности штамма и наличия факторов риска у пациента. В связи с тем, что данный патоген обладал высокой степенью трансмиссивности (способность эффективно передаваться от человека к человеку), появилось опасение, что в случае усиления вирулентных свойств вследствие адаптации к организму человека, возникнет новый адаптированный вариант, обладающий весьма значительным эффектом на здоровье населения планеты. Целью работы явилось изучение особенностей течения гриппозной инфекции в условиях лабораторной адаптации вируса гриппа A (H1N1)pdm09 к организму мышей линии BALB/c и линии C57BL/6z.

В лабораторных условиях ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» был проведен эксперимент по увеличению вирулентности пандемичного вируса гриппа A (H1N1)pdm09 путем серийных «слепых» пассажей через легкие мышей линии C57BL/6z (n = 245). В результате работы был получен высокопатогенный штамм, вызывающий тяжелое заболевание и гибель мышей линии C57BL/6z, задепонированный под названием A/Tomsk/13-C57Bl_ 6z/2010-MA (H1N1) в государственную коллекцию вирусов РФ. Стопроцентная летальность для мышей линии C57BL/6z была достигнута к 12 пассажу, что значительно позднее по сравнению с полученным ранее адаптированным вариантом вируса гриппа на мышах линии BALB/c, среди которых 100%-ная смертность регистрировалась к 7 пассажу. С целью выявления особенностей течения гриппозной инфекции в четко дифференцированных друг от друга генетических группах было проведено перекрестное инфицирование. Результат эксперимента показал низкую вирулентность штамма A/Tomsk/13-C57Bl_6z/2010-MA (H1N1) для мышей линии BALB/с. Кроме того, проанализированы современные данные о роли отдельных сегментов генома в повышении вирулентности вируса гриппа в условиях лабораторной адаптации в ткани легких мышей. Обсуждается значение молекулярных основ и механизмов адаптации вируса гриппа.

КЛОНИРОВАНИЕ, СЕКВЕНИРОВАНИЕ И АНАЛИЗ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ГЕНА ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО НЕКРОТИЗИРУЮЩЕГО ФАКТОРА YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS

Е.К. Псарева12, Н.Ф. Тимченко1, К.А. Собянин2, Н.В. Смирнова2, С.А. Ермолаева2

1 ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова СО РАМН, г. Владивосток

2 ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи МЗ РФ, Москва

К настоящему времени есть сведения о нескольких белковых токсинах Y. pseudotuberculosis: термолабильном и термостабильном летальных белковых

токсинах (HLT, HST), цитотоксине YopE, суперантигене YPM, факторах, нарушающих проницаемость сосудов кожи — PF-раннем и PF-позднем, цитоток-сическом некротизирующем факторе (CNF), которые играют важную роль в патогенезе псевдотуберкулезной инфекции. CNF принадлежит к уникальной группе крупных цитотоксинов, модифицирующих Rho-белки, которые являются регуляторами ак-тинового цитоскелета клетки и активируют белки RhoA, путем дезаминирования Gln63.

Цель: клонировать ген cnf Y. pseudotuberculosis в клетки E. coli, провести секвенирование и анализ последовательности с целью изучения биологической активности очищенного рекомбинантного белка CNF.

В работе использован штамм Y. pseudotuberculosis 2517 III серовара (получен от H. Mollaret, Франция). Ген cnf амплифицирован в термоциклере, с использованием праймеров 5'-GTTGCAAACTTTCCGT-CCCCA-3', 3'-ACGGCGAACTTGATAATTGCTT-5', в качестве матрицы использовали лизат штамма 2517. ПЦР-продукт клонировали в вектор pCR 8GW-TOPO, несущий ген устойчивости к спектомицину, лигазную смесь трансформировали в штамм E. coli JM 109. Отбор проводили на среде LB, содержащей spect 100 мкг/мл. Клоны, содержащие вставку, определяли с помощью ПЦР. Выделенную рекомби-нантную плазмиду сиквенировали в ЦКП «Геном». Результаты секвенирования анализировали программой «Chromas Lite Application 2.1.1.0».

В результате клонирования получена реком-бинантная плазмида, содержащая вставку около 3000 п.н. Сравнение полученной последовательности с геном cnf Y. pseudotuberculosis, штамма YPIII, представленного в базе данных GenBank http://www.ncbi. nlm.nih.gov/nuccore/12018165, показал, что ген cnf штамма 2517 идентичен на 99,9%, и содержит 3 точечные мутации: A578G, A904G, G1183A, в результате которых в последовательности белка произошли аминокислотные замены Asn192Ser, Glu301Gly, Ala394Thr. Клоны предполагается использовать для получения рекомбинантного белка CNF с целью изучения биологических свойств токсина.

Планируется аналогичное исследование rnf в штаммах Y. pseudotuberculosis, выделенных в ходе эпидемических вспышек Дальневосточной скарлатиноподобной лихорадки — новой клинико-эпидемической формы псевдотуберкулеза, впервые выявленной на Дальнем Востоке России в 1960 гг. Предварительные результаты свидетельствуют о наличии у штаммов, связанных со вспышками ДСЛ, протяженной делеции в гене cnf (Timchenko N.F. et al., 2012).

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТИВНОСТИ ТЕХНОЛОГИИ АЭРОЗОЛЬНОГО РАСПЫЛЕНИЯ ДЕЗИНФЕКТАНТОВ В МИНИМИЗАЦИИ ФАКТОРОВ, ОТВЕЧАЮЩИХ ЗА НАКОПЛЕНИЕ РЕЗИДЕНТНЫХ ШТАММОВ НА ОБЪЕКТАХ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ РОДДОМОВ

А.П. Ребещенко, А.С. Корначев, А.А. Вакарина, Л.В. Катаева

ФБУН Тюменский НИИ краевой инфекционной патологии Роспотребнадзора, г. Тюмень

Для повышения результативности биологической безопасности (ББ) роддомов апробирована технология дезинфекции помещений и оборудования