CC BY
23
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА
Ж. Б. Меерманова
СРАВНИТЕЛЬНЫЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЙСТВИЯ РАЗЛИЧНЫХ ВИТРЕОСИНЕРЕТИКОВ
КазНИИ глазных болезней (Алматы)
Клеточная пролиферация на структурах стекловидного тела и на поверхности сетчатой оболочки тесно связана с ее отслойкой. Несомненно, что пролиферативная витреоретинопа-тия во многих случаях является причиной образования не только разрывов и отслоения сетчатки, но и ее рецидивов [4].
Значительную роль в патогенезе развития пролиферативной витреоретинопатии играет измененное стекловидное тело. В связи с чем, большое значение в витреоретинальной хирургии придается удалению задних гиалоидных слоев стекловидного тела, которые в норме плотно прилежат к внутренней пограничной мембране сетчатки [1, 2, 6].
В настоящее время известен полимер российского производства «Витреосинеретик», обеспечивающий сморщивание стекловидного тела и более эффективное его удаление [3, 5].
Разработанный и предлагаемый нами отечественный полимерный препарат для витреоси-нерезиса имеет преимущества. Препарат растительного происхождения, обладает более высокой биосовместимостью и выраженным свойством сморщивать стекловидное тело.
Кроме того, использование российского витреосинеретика на территории РК ограничено действующим на территории Рк с 9 апреля 2007 года приказа №58 МЗ РК «Об отзыве решения о государственной регистрации и запрещении медицинского применения лекарственных средств (инфузионных растворов), содержащих поливи-нилпирролидон низкомолекулярный медицинский 12600±2700 в качестве действующего вещества». Также известный «Витреосинеретик» не обеспечивает радикального удаления стекловидного тела, так как не обладает способностью прокрашивать стекловидное тело. Кроме того, нередко приводит к развитию послеоперационного воспалительного процесса в виде выпадения экссудата.
Нами предлагается интравитреальное введение отечественного витреосинеретика <^Кгепа1» и дипроспана.
Одновременное введение дипроспана окажет противовоспалительное, противоотечное, антипролиферативное действия. Кроме того известно, что дипроспан улучшает визуализацию стекловидного тела и эпиретинальных мембран благодаря дисперсии водонерастворимых кристаллов дипропионата бетаметазона внутри глаза и способности оседать на внутриокулярных структурах.
Цель исследования провести сравнительную морфологическую оценку способности полимеров к витреосинерезису.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Изучение реакции окружающих тканей экспериментальных животных и способности полимеров к витреосинерезису при интравитреаль-ном введении проведено на 24 кроликах (48 глаз) породы шиншилла со средней массой 2 -2,5 кг. Экспериментальные животные были разделены на четыре группы по 6 кроликов (12 глаз). В I группе в стекловидную камеру было введено 0,2 - 0,3 мл 20% раствора поливинил-пирролидона (ПВП), являющегося основой препарата российского производства «Витреосине-ретик». Во II группе в стекловидную камеру введено 0,2 - 0,3 мл отечественного витреоситнере-тика <«УКгепа1». В III группе - дипроспан в количестве 0,2 - 0,3 мл. В IV - <^Кгепа1» 0,3 - 0,4 мл с дипроспаном 0,2 - 0,3 мл.
Техника операции:
Для общего обезболивания экспериментальных животных в течение операции внутривенно дробно вводили 2,0 мл ромитара на физиологическом растворе, местно инстиллировали раствор алкаина. В 3 мм от лимба выполняли прокол склеры и выпускали 0,3 - 0,4 мл жидкой части СТ до создания легкой гипотонии. Затем с помощью инсулинового шприца в центральные отделы СТ вводили препараты (0,2 - 0,3 мл) до нормотонии.
Все кролики до и через каждые 10 мин после операции в течение 30 - 40 мин были осмотрены с помощью прямого офтальмоскопа и методом бокового освещения. Через 10, 20, и 30 мин после введения препаратов 2 кроликов из каждой группы усыпляли с помощью миорелак-санта - внутривенным введением 30 мг дитили-на, глаза энуклеировали и подвергали морфологическому исследованию.
Морфологические исследования проводили в Республиканском офтальмопатологоанато-мическом центре Казахского НИИ глазных болезней и на кафедре патологии и паразитологии Казахского Национального аграрного университета.
Для гистологического исследования удаленное глазное яблоко фиксировали в 12% растворе нейтрального формалина, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации от 70% до 100% и заливали целлоидин - парафином по общепринятой методике. Серийные срезы толщиной 5 - 7 мкм производились на санном микротоме. В соответствии с поставленными задачами срезы подвергали гистологическому методу исследования.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
При проведении экспериментальных исследований у обследуемых животных четырех групп после операции наблюдалась легкая локальная послеоперационная инъекция, общее состояние животных не страдало.
Биомикроскопический осмотр переднего отрезка всех опытных глаз (как до операции, так и после) характеризовался ареактивным течением и не выявил каких-либо особенностей: сосуды конъюнктивы не гиперемированы, хемоза нет, роговица прозрачная, влага передней камеры прозрачная, радужка не отечная, реакция зрачка на свет сохранена, хрусталик прозрачный.
Осмотр СТ и сетчатки с помощью прямого офтальмоскопа у всех кроликов до введения полимеров также не выявил каких-либо особенностей.
Во время операции во всех группах наблюдалось смешивание полимера со стекловидным телом и глазное дно просматривалось сквозь флер.
В первые 10 мин после операции в I, II и IV группах в стекловидной полости наблюдались нитчатые уплотнения. В I и II группах стекловидное тело было матовым. В III группе оно окрашивалось в белесоватый цвет, но его уплотнения не наблюдалось. В IV группе стекловидное тело имело белесовато-матовый цвет.
Через 20 мин в I группе сохранялись нитчатые уплотнения стекловидного тела, цвет которого оставался матовым. Во II группе наблюдалось выраженное уплотнение стекловидного тела, цвет которого также оставался матовым. В III группе стекловидное тело в верхних отделах меньше контрастировалось вследствие оседания кристаллов дипроспана. В IV группе наблюдалось выраженное уплотнение стекловидного тела, цвет которого был белесовато-матовым.
Через 30 мин после операции в I и II группах наблюдалось уплотнение стекловидного тела, более выраженное во II группе. Цвет стекловидного тела в обеих группах был матовым. В III группе стекловидное тело было окрашено только в нижней половине. В IV группе отмечалось более выраженное сморщивание стекловидного тела и хорошая его визуализация.
Морфологическое исследование экспериментального материала через 10 мин после операции показало, что в I группе стекловидное тело состояло из рыхлого центрального вещества, в котором имелись оптические пустые зоны, заполненные жидкостью. Стекловидное тело спереди прилежало к хрусталику, а на остальном протяжении в нескольких участках контактировало с сетчаткой. В 2 опытных глазах задняя отслойка стекловидного тела отсутствовала, в 2 глазах она была частичной.
Во II группе во всех опытных глазах морфологическая картина была одинаковой. Колла-геновые волокна стекловидного тела содержали полимер в виде макромолекул, за счет которого стекловидное тело имело уплотненный вид, т. е. стекловидное тело становилось более грубым. Это отмечалось в заднем и переднем пограничном слое стекловидного тела. В 3 глазах стекловидное тело оставалось фиксированным к сетчатке в области цилиарного тела и диска зри-
тельного нерва. В 1 глазу получена полная задняя отслойка стекловидного тела. Поверхность сетчатки в местах отслойки стекловидного тела была гладкой и ровной. Морфологически сетчатка сохранена, без каких-либо патологических изменений.
В III группе сетчатка имела ровную поверхность, плотно прилегала к сосудистой оболочке. Тканевой и сосудистой реакции воспалительного характера со стороны окружающих тканей не наблюдалось. Стекловидное тело прозрачное и бесструктурное. Гиалоидная оболочка стекловидного тела плотно прилагала к сетчатке. Периферическая часть стекловидного тела имела мелкосетчатую структуру. В стекловидном теле были кристаллы разной формы и величины, окрашенные эозином в слабо розовый цвет.
В IV группе стекловидное тело в задней пограничной зоне было отслоено, в некоторых участках имелся контакт с сетчаткой. Гиалоидная оболочка стекловидного тела в области отслоения местами имела извилистую поверхность. Высота отслоения гиалоидной мембраной от сетчатки в центральных отделах была больше по сравнению с экваториальными и периферическими отделами. В передней и частично в периферических зонах отслоение стекловидного тела было незначительным и наблюдались зоны контакта с внутренней пограничной мембраной сетчатки. В участках контакта стекловидное тело имело мелкосетчатую структуру. Поверхность сетчатки ровная. Воспалительной реакции со стороны окружающих тканей не наблюдалось.
Через 20 мин после операции в I группе в 1 опытном глазу задняя отслойка стекловидного тела отсутствовала, в 2 глазах она была частичной и в 1 - полной.
Во II группе стекловидное тело было уплотненным. В 2 глазах стекловидное тело оставалось фиксированным к сетчатке в области ци-лиарного тела и диска зрительного нерва. В 2 глазах получена полная задняя отслойка стекловидного тела. Поверхность сетчатки в местах отслойки стекловидного тела была гладкой и ровной. Морфологически остатков коллагеновых волокон не было видно. Макромолекулы полимера обнаруживались в ретрогиалоидном пространстве, между сетчаткой и задней гиалоидной мембраной.
В III группе сетчатка имела ровную поверхность, была равномерно окрашена, гистологическая структура полностью сохранялась. Со стороны окружающих тканей реакций воспалительного характера не наблюдалось. Кровеносные сосуды были умеренно наполнены. Стекловидного тело хорошо окрашивалось, имело мелкосетчатую структуру с мелкими кристаллами слабо, окрашенными эозином.
В тот же срок наблюдения в IV группе стекловидное тело было полностью отслоено от сетчатки и находилось в центральной части глазного яблока в виде отдельных скоплений, окра-
шенных гематоксилин-эозином в бледно-розовый цвет и имело мелкосетчатую структуру. Некоторые участки стекловидного тела были сильно сморщены и уплотнены. В полости стекловидного тела имелись кристаллы разной формы, окрашенные слабо гематоксилин-эозином. Изменений со стороны сетчатки не было.
Через 30 мин после интравитреального введения полимера в I группе в 1 глазу отсутствовала задняя отслойка стекловидного тела, в 1 глазу она была частичной и во 2 - полной.
Во II группе получена полная задняя отслойка стекловидного тела во всех глазах. Стекловидное тело было уплотненным. Поверхность сетчатки в местах отслойки стекловидного тела гладкая.
В III группе сетчатка имела ровную поверхность, плотно прилегала к сосудистой оболочке. Стекловидное тело было прозрачным и бесструктурным. Гиалоидная оболочка стекловидного тела плотно прилегала к сетчатке. Периферическая часть стекловидного тела имела мелкосетчатую структуру. В стекловидном теле были кристаллы разной формы и величины, окрашенные эозином в слабый розовый цвет. Тканевой и сосудистой реакции воспалительного характера со стороны окружающих тканей не наблюдалось.
В те же сроки в IV группе стекловидное тело было уплотнено, полностью отслоено от сетчатой оболочки и находилось в центральной части глазного яблока. Сморщенное стекловидное тело окрашено гематоксилин - эозином в бледно-розовый цвет и имело мелкосетчатую структуру. В полости стекловидного тела имелись кристаллы разной формы, слабо окрашенные гематоксилин -эозином. Изменений со стороны сетчатки не наблюдалось. Тканевой и сосудистой реакции со стороны окружающих тканей не отмечено. Кровеносные сосуды были умеренно наполнены.
Во всех 4 группах при морфологическом исследовании сосудистой оболочки признаков отечности не обнаружено. Она прилежала на всем протяжении. Отмечалось небольшое смещение цилиарных отростков к радужке. Радужка, угол передней камеры и роговица не были изменены. Сетчатка сохранена без каких-либо патологических изменений. В III и IV группах кристаллы дипроспана обнаруживались в стекловидном теле.
ВЫВОДЫ
Таким образом, в ходе эксперимента установлено, что витреосинерезис при интравитре-альном введении российского «Витреосинерети-ка», по сравнению с «Vitrenal», был выражен
слабее и для более полного сморщивания стекловидного тела требовалось больше времени.
«Vitrenal» при взаимодействии со стекловидным телом приводил к его уплотнению и уменьшению объема, в результате чего происходила задняя отслойка стекловидного тела. При этом не наблюдалось повреждения сетчатки, сосудистой оболочки, цилиарного тела.
Дипроспан не вызывал витреосинерезис, но более четко контрастировал стекловидное тело и его гиалоидную мембрану, окрашивая их в беловато-матовый цвет, что обеспечивало хорошую визуализацию стекловидного тела.
Одновременное интравитреальное введение препаратов «Vitrenal»^ и дипроспана вызывало полную отслойку задней гиалоидной мембраны СТ, хорошо контрастировало стекловидное тело и позволило бы предотвратить воспалительные реакции в послеоперационном периоде.
ЛИТЕРАТУРА
1. Использование жидких перфторорганических соединений нового поколения в хирургическом лечении отечно-гемморрагических форм диабетической ретинопатии /Я. И. Глинчук, З. К. Суб-анбаева, А. В. Киселев, Д. О. Шкворченко // Новые технологии микрохирургии глаза: Матер. 4 науч.-практ. конф. - Оренбург, 1995. - С. 50 -51.
2. Киселев А. В. Комплексное лечение патологии центрального отдела глазного дна: Дис. ...д-ра мед. наук. - М., 2001. - С. 236.
3. Лечение отслоек сетчатки с разрывами в заднем полюсе глаза, осложненных пролифератив-ной витреоретинопатией, с применением жидких перфторорганических соединений /С. Н. Федоров, Я. И. Глинчук, В. Г. Сидоренко и др. // Офтальмохироургия. - 1994. - №4 . - С. 18 - 24.
4. Тахчиди Х. П. Тампонада силиконовым маслом при лечении гигантских ретинальных разрывов / Х. П. Тахчиди, В. Н. Казайкин //Новые направления в лечении витреоретинальной патологии: сб. науч. статей. - М., 2000. - С. 82 - 88.
5. Шкворченко Д.О. Индукция задней отслойки стекловидного тела путем введения интраопера-ционного витреосинерезиса при введении водорастворимых полимеров (экспериментально-морфологическое исследование) //Вестн. офтальмологии. - 2001. - №3. - С. 16 - 20.
6. Lewis H. Vitrectomy for diabetic macular traction and associated whith posterior hyaloidal traction /H. Lewis, G. Abrams, V. Randy //Ophthalmology. -1992. - V. 99. - P. 753 - 759.
Поступила 01.07.09
Zh. B. Meyermanova
COMPARATIVE MORPHOLOGIC INVESTIGATION OF EFFICACY OF DIFFERENT VITREOSYN E RETICS
The comparative analysis of the ability of polymers to vitreosyneresis was made. The reactions of adjacent tissues in the experimental animals and the ability of polymers to vitreosyneresis at the intravitreal injection were studied.
Мешрманова Ж.Б.
ОТАНДЬЩ «VITRENAL» ВИТРЕОСИНЕРЕТИГ1Н ДИПРОСПАНМЕН Б1РГЕ КОЛДАНУДЬЩ ТИ1МД1Л1Г1Н ЭКСПЕРИМЕНТТЕ САЛЫСТЫРМАЛЫ БАРАЛАУ
Полимерлердщ витреосинерезиске кабшеттшИне салыстырмалы сараптама жYргiзiлдi. Эксперимент™ жануарлардыч тiндерiне эсерiн жэне шыны тэрiздi денеге полимерлердi ечпзгенде оныч витреосинерезиске кабшеттшп зeрттeлдi.
А. Ш. Орадова
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ M.TUBERCULOSIS
Казахский Национальный медицинский университет им. С. Д. Асфендиярова, кафедра лабораторной диагностики и молекулярной медицины (Алматы)
Обнаружение микобактерий туберкулезного комплекса в клинических образцах является одним из основных диагностических подходов во фтизиатрии. В настоящее время традиционные микробиологические методы выявления возбудителя по своей эффективности уже не удовлетворяют клиницистов. Быстрый метод бактериоскопии обладает низкой чувствительностью: для обнаружения микобактерий туберкулеза (МБТ) необходимо, чтобы 1 мл материала содержал не менее 100 тыс. микробных клеток. Люминесцентная микроскопия увеличивает чувствительность бактериоскопии на 10 - 30%. Чувствительность бактериологического посева значительно выше -20 - 100 МБТ, однако, исследование занимает длительное время - 1 - 2 мес. В связи с этим МБТ в нашей стране выявляют в среднем лишь у 50 - 60% больных активным туберкулезом
В последние годы показано, что различные молекулярно-биологические методы позволяют проводить детекцию микобактерий туберкулезного комплекса (МТК) непосредственно в клиническом материале в течение нескольких часов, определять их лекарственную чувствительность. Однако в практическом здравоохранении диагностика туберкулеза и его лечение продолжают основываться на культуральном методе. Идентификация микобактерий в клинической лаборатории остается сложной и длительной процедурой. Она основывается на фенотипических особенностях: скорость роста, морфология колоний, пиг-ментообразование, биохимические свойства - и занимает не менее 6 нед [2].
В настоящее время традиционные микробиологические методы выявления микобактерий туберкулеза (МБТ) не удовлетворяют требованиям клиницистов. Быстрый метод бактериоскопии обладает низкой чувствительностью, более чувствителен культуральный метод исследования (посев клинического материала на плотные яичные среды), но исследование занимает 1 - 2 мес.
За рубежом широкое распространение
получила радиометрическая система ВАСТЕС для быстрого обнаружения живых МБТ в жидкой питательной среде. Микобактерии культивируют в жидкой ВАСТЕС среде, где в качестве источника углерода используется меченая 14С пальмитиновая кислота. При положительных данных бакте-риоскопического исследования рост МБТ обнаруживали радиометрически на 7 - 10 день и на 14 - 21 дни при отрицательных данных [1].
К недостаткам этого метода, ограничивающим возможность его широкого применения, относятся:
■ высокая себестоимость исследования;
■ необходимость применения радиоактивных изотопов и специального радиометрического оборудования, сложность работы с изотопной технологией;
■ необходимость дополнительного посева на плотную питательную среду при возникновении проблем с идентификацией или интерпретацией результатов [3]. Следовательно, задача быстрой микробиологической диагностики туберкулеза далека от окончательного решения. В ряде фтизиобакте-риологических лабораторий Казахстана в последние годы используются автоматизированные системы бульонного культивирования микобакте-рий, однако для идентификации изолятов методы генетического анализа не применялись.
Биологический метод применяется для выявления не только типичных, но и разнообразных, биологически измененных, форм возбудителя, в частности L-трансформированных и фильтрующихся форм.
Самым восприимчивым к туберкулезной инфекции лабораторным животным является морская свинка. Считается, что ее заражение позволяет диагностировать туберкулез при наличии в материале, использованном для заражения, 1 - 5 микробных клеток.
Метод ПЦР основан на ферментативной амплификации выбранных специфических участков генома бактерий рода Mycobacterium tuberculosis M. bovis, M. africanum, M. microti), их дальнейшей детекции и идентификации. Аналитическая чувствительность метода, определяемая при последовательных разведениях суспензии бактериальных клеток, очень высока и составляет от 1 пг до 5 фг микобактериальной ДНК, что эквивалентно выявлению 1 - 10 бактериальных клеток.
В настоящее время существует ряд разработок по использованию ПЦР в диагностике туберкулеза, но до сих пор не найдена оптимальная маркерная последовательность в геноме My-
