CC BY
51
DOI: 10.1425 8/j cprm.2018022714
УДК 582.665.11:577.19
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В НАДЗЕМНЫХ ОРГАНАХ ATRAPHAXIS FRUTESCENS И A. PUNGENS (POLYGONАСЕАЕ), ПРОИЗРАСТАЮЩИХ В СИБИРИ
© H.A. Костикова , Е.В. Банаев, Д.К Костиков, Т.А. Кукушкина
Центральный сибирский ботанический сад СО РАН, ул. Золотодолинская, 101, Новосибирск, 630090 (Россия), e-mail: serebryakova-va@yandex.ru
Представлены результаты сравнительного изучения содержания биологически активных веществ в надземных органах двух видов растений рода Atraphaxis L. (курчавка) - A. frutescens (L.) С. Koch, и A. pungens (Bieb.) Jaub. et Spach. Установлено, что листья, репродуктивные органы и стебли растений содержат комплекс биологически активных веществ: флавонолов, дубильных веществ, катехинов, каротиноидов, пектиновых веществ (пектинов и протопектинов). Наиболее высоким содержанием всех веществ отличаются листья и репродуктивные органы курчавок. Почти по всем биохимическим показателям надземные органы А. pungens превосходят А. frutescens. В листьях и репродуктивных органах А. pungens содержание флавонолов (до 7.32% - в репродуктивных органах и до 10.10% - в листьях), дубильных веществ (до 34.30 и 27.27% соответственно) и протопектинов (до 11.29 и 7.96%), а также в листьях - катехинов (до 3.92%) и в репродуктивных органах - пектинов (до 2.63%) и каротиноидов (до 83.48 мг%) более высокое, чем у А. frutescens. Содержание катехинов в репродуктивных органах (до 3.78%) и в листьях - каротиноидов (до 273.14 мг%) выше у А. frutescens, по сравнению с А. pungens. Выделены популяции курчавок, перспективные для дальнейшего фармакологического исследования. Изучение биологически активных веществ А. frutescens и А. pungens, произрастающих в Сибири, проведены впервые.
Ключевые слова'. Atraphaxis frutescens, A. pungens, флавонолы, дубильные вещества, катехины, каротиноиды, пектиновые вещества, Сибирь.
Введение
На территории Сибири произрастают четыре вида рода Atraphaxis L. (курчавка). из которых наиболее широко распространены А. frutescens (L.) С. Koch, (курчавка кустарниковая) и А. pungens (Bieb.) Jaub. et Spach. (курчавка колющая). A. frutescens - кустарник до 70 см высотой с удлиненными неколючими ветвями. Листья от узколанцетовидных до продолговато-обратнояйцевидных, заостренные, суженные в очень короткий клиновидный черешок. Цветочные кисти конечные 3-12 см длинной. Плод - орешек темно-бурый, блестящий. При плодах 3 наружных листочка околоцветника, разрастающихся до 5-6 мм в поперечнике. Растет одиночно, иногда группами в степных и полупустынных котловинах горных районов, хорошо переносит избыточное засоление почв, типичный ксерофит или ксерофит - петрофит. Распространен в Европе, Средней Азии, Монголии, Китае и Сибири. А. pungens отличается колючими на концах ветвями и короткими боковыми соцветиями 2-3 см длиной. Наиболее типичные условия произрастания - сухие
каменистые степи и песчаные массивы. В горы поднимается до 1400 м над ур. м. Типичный ксерофит-петрофит, олиготроф, совершенно не выносит затенения, солеустойчив. А. pungens произрастает в Средней Азии, Монголии, Китае, Индии, Корее и Сибири [1, 2]. В местах совместного произрастания курчавки кустарниковой и курчавки колющей встречаются переходные формы, наличие которых
Автор, с которым следует вести переписку.
Костикова Вера Андреевна - кандидат биологических наук, научный сотрудник, e-mail: serebryakova-va@yandex.ru Банаев Евгений Викторович - доктор биологических наук, директор, e-mail: alnus2005@mail.ru Костиков Дмитрий Константинович - инженер, аспирант, e-mail: dim.kostickov@yandex.ru Кукушкина Татьяна Абдулхаиловна - старший научный сотрудник, e-mail: kukushkina-phyto@yandex.ru
некоторые исследователи связывают с процессами естественной гибридизации [1-4]. Состав и содержание биологически активных веществ в растениях A. frutescens и A. pungens, произрастающих на территории Сибири, недостаточно изучены.
Комплекс веществ, содержащихся в растениях рода Atraphaxis, определяют их полезные свойства. В надземных и подземных органах обнаружены флавонолы, флаваны, флавоны, антрахиноны, фенолкар-боновые кислоты и их производные, дубильные вещества, катехины, алкалоиды, стеролы [5-10]. Флавоно-ловые гликозиды преобладают в фенольном комплексе, выделенном из растений рода Atraphaxis [6]. Среди видов рода Atraphaxis как красильное и дубильное растение отмечены A. frutescens, A. pyrifolia Bunge и A. spinosa L. [11, 12]. Из листьев и плодов А. pyrifolia возможно получить охристую окраску [13]. Некоторые исследователи отмечают кормовую пригодность А. frutescens и А. spinosa [12, 14]. Медоносное свойство характерно для A pyrifolia и А. spinosa [7, 11, 12].
Биологическая активность растений рода Atraphaxis недостаточно хорошо изучена. Однако есть данные о том, что антрахиноны, содержащиеся в A. laetevirens (Ledeb.) Jaub. et Spach, проявляют антибактериальную активность [15], побеги A. frutescens используются при диарее [16], А. spinosa дает манну, которая в Иране используется как противолихорадочное, а также слабительное средство [17, 18]. А. frutescens проявляет антиоксидантную активность [19]. Из надземной части A spinosa L. var. sinaica Bolss. выделены вещества, которые обладают цитотоксической активностью против лейкемии [8]. Благодаря алкалоидам, содержащимся в листьях, курчавка повышает кровяное давление [12]. Из видов растений рода Atraphaxis, наиболее богатых флавонидами, получены препараты, обладающие антиокислительной и противоопухолевой активностью [6].
Цель работы - сравнительный анализ содержания биологически активных веществ в органах надземной части сибирских видов растений А. frutescens и А. pungens из разных мест произрастания.
Материалы и методы
Содержание БАВ в листьях, репродуктивных органах (плоды с цветками) и стеблях курчавок определяли в образцах из Новосибирской области, Алтайского края, Республик Алтай, Хакасия и Тыва, собранных в фазе конец цветения - начало плодоношения (табл. 1). Сырье собирали не менее чем с 10 растений и высушивали на воздухе в затененном месте. После сушки сырье измельчали, перемешивали и отбирали пробу для анализа.
Количественное определение флавонолов проводили по методике В.В. Беликова и М.С. Шрайбе-ра [20], в которой использована реакция комплексообразования флавонолов с хлоридом алюминия. Около 0.5 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в колбу емкостью 100 мл и исчерпывающе экстрагировали 70% этиловым спиртом, контролируя полноту экстракции реакцией с 5% раствором гидроксида натрия (до исчезновения желтой окраски), далее замеряли объем профильтрованного объединенного экстракта. Затем по 0.1 мл экстракта помещали в 2 пробирки емкостью 5 мл, прибавляли в одну пробирку 0.2 мл 2% спиртового раствора хлорида алюминия, в другую - 1-2 капли 30% уксусной кислоты и доводили объем раствора 96% спиртом до метки. Растворы перемешивали и через 40 мин измеряли оптическую плотность раствора с хлоридом алюминия на спектрофотометре СФ-26 при длине волны 415 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя раствор с уксусной кислотой для сравнения. Количественное содержание катехинов в пробе определяли по калибровочной кривой, построенной по рутину фирмы «Chemapol».
Для определения содержания катехинов брали навеску 0.5 г сырья (точная навеска) экстрагировали 80% этиловым спиртом трижды (30, 25, 20 мл) по 30 мин на водяной бане при температуре кипения спирта. Вытяжки объединяли и замеряли объём полученного экстракта. В две пробирки отбирали аликвоту по 0.8 мл экстракта. В одну из них приливали 4 мл 1% раствора ванилина в концентрированной соляной кислоте и доводили объёмы до 5 мл в обеих пробирках концентрированной соляной кислотой. Пробирку без ванилина использовали как контроль. При наличии катехинов в пробе образуется розовое, малиновое или оранжево-красное окрашивание. Через 5 мин измеряли интенсивность окрашенных растворов на СФ-26 при длине волны 504 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Количественное содержание катехинов в пробе определяли по калибровочной кривой, построенной по (±) - катехину фирмы «Sigma» [21].
Количественное определение танинов (гидролизуемых дубильных веществ) проводили по методике JIM. Федосеевой [22]. Навеску сырья 2 г помещали в колбу и добавляли 250 мл очищенной воды. Экстрагировали при умеренном кипячении в течение 30 мин. Охлаждали, переносили в мерную колбу на 250 мл
и доводили водой до метки. После экстракции 10 мл извлечения переносили в мерную колбу на 100 мл, добавляли 10 мл 2% водного раствора аммония молибденовокислого. Содержимое колбы доводили до метки очищенной водой, оставляли на 15 мин. Интенсивность образовавшейся окраски измеряли на спектрофотометре СФ-26 при длине волны 420 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. В качестве стандартного образца использовали ГСО танина (1 класс по ГОСТ 8.315-97).
Содержание каротиноидов определяли в ацетоново-этанольном экстракте. Навеску сырья 0.1 г растирали в ступке до однородной массы, добавляя последовательно 0.1 г углекислого кальция (для нейтрализации органических кислот, так как каротиноиды неустойчивы в кислой среде), 1 мл диметилформамида (для устойчивости пигментов) и 2 мл сернокислого натрия безводного. Экстракцию каротиноидов проводили ацетоном (40 мл - 1 раз и далее 10 мл - 2 раза), после этого экстракцию продолжали 96% этанолом (5 мл - 3 раза) для извлечения ликопина. Затем исчерпывающе, до исчезновения окраски, ацетоном. Замеряли объем объединенного экстракта [23]. Далее экстракты разбавляли ацетоном так, чтобы при измерении на спектрофотометре величина оптической плотности разбавленных растворов находилась в пределах от 0.1 до 0.8. Замеры содержания каротиноидов проводили при длинах волн 662, 644 нм (для хлорофиллов а и Ь) и 440,5 нм (для каротиноидов) на спектрофотометре СФ-26. Расчет концентрации каротиноидов (мг/дм3) проводили по формуле: Скар = 4.695 х D440,5 - 0.268 х (5.134 х D662 - 20.436 х D644), где D - оптическая плотность экстракта; Скар - концентрация каротиноидов, мг/дм3. Содержание каротиноидов (мг%) находили по формуле: X (мг%) = Скар х у х у2 х Ю0 / M х у3 х Ю00, где Скар - концентрация каротиноидов, мг/дм3; V - объем исходной вытяжки, мл; Vi - объем исходной вытяжки, взятой для разбавления, мл; Уг -объем разбавленной вытяжки, мл; M - масса абсолютно сухого сырья, г. [24].
Пектиновые вещества (протопектины и пектины) определяли бескарбазольным методом, основанном на получении специфического желто-оранжевого окрашивания уроновых кислот с тимолом в сернокислой среде. Измельченную точную навеску сухого материала массой 2-3 г трехкратно экстрагировали горячим 80% этиловым спиртом в соотношении 1 : 10 на кипящей водяной бане с обратным холодильником 20-30 мин (для извлечения свободных углеводов, которые мешают определению пектиновых веществ) и фильтровали через бумажный фильтр в колбу. Отфильтрованную пробу высушивали при 50 °С до исчезновения запаха спирта.
Экстракция водорастворимого пектина: остаток помещали в колбу и приливали 50 мл очищенной воды, нагретой до 45 °С и экстрагировали на водяной бане в течение 1 ч. Жидкость отфильтровывали в мерную колбу на 100 мл, промывали водой и после охлаждения доводили объем до метки. Извлечение протопектина: остатки после извлечения водой переносили в экстракционную колбу, заливали 50 мл 0.3 н соляной кислоты и нагревали полчаса на кипящей водяной бане с обратным холодильником. Фильтровали в мерную колбу на 200 мл и промывали 2-3 раза горячей водой. Фильтр вместе с осадком возвращали в ту же экстракционную колбу, приливали 50 мл 1% раствора лимоннокислого аммония и ставили на кипящую водяную баню на полчаса. Фильтровали в колбу, где находится фильтрат солянокислой вытяжки, промывали горячей водой, после охлаждения доводили до метки. Реакция с тимолом: в 3 пробирки брали 0.5 мл экстракта водорастворимого пектина и протопектина и при охлаждении приливали концентрированную серную кислоту по каплям, затем пробирки нагревали 6 мин на кипящей водяной бане, охлаждали и прибавляли в 2 пробирки с экстрактом 0.1 мл 0.2% спиртового раствора тимола и тщательно перемешивали. После реакции с тимолом плотность окрашенных растворов замеряли на спектрофотометре Agilent 8453 при длине волны 480 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Количественное содержание пектинов и протопектинов в пробе определяли по калибровочной кривой, построенной по галактуроновой кислоте фирмы «Merck» [24, 25].
Все биохимические показатели рассчитаны на массу абсолютно сухого сырья. Определения проводили в двухкратной повторности. Статистическую обработку данных осуществляли в пакете MS Excel и пакете Past с учетом общепринятых методических указаний по биологической статистике [26]. Определяли среднеарифметические значения биохимических показателей (Хср), которые представлены в таблицах 2 и 3. Ошибка (Мх) соответствовала допустимым значениям достоверности и была крайне мала (0.0070.01). Рассчитывали коэффициент вариации (С, %). Уровень изменчивости оценивали по эмпирической шкале С.А. Мамаева [27]. Для сравнения исследуемых видов растений по биохимическим показателям и выявления перспективных выборок с наиболее высоким содержанием ценных БАВ использовали метод главных компонент (РСА).
Таблица 1. Характеристика образцов сырья растений рода Atraphaxis
Описание места сбора материала; дата сбора
Atraphaxis fnitescens
Новосибирская обл., Ордынский р-н, окр. с. Антоново, берег р. Обь; 109 м. над ур. м.; спиреево-полынно-злаковая степь; 11.07.2013 г.
Омская обл., Калачинский р-н, г. Калачинск, правый берег р. Омь; 85 м. над ур. м.; спиреево-полынно-злаковая степь; 05.08.2014 г.
Алтайский кр., Бурлинский р-н, окр. с. Петровка, берег оз. Большое Топольное; 99 м. над ур. м.; спиреево-полынно-злаковая степь; 13.07.2013 г.
Алтайский кр., Славгородский р-н, окр. г. Яровое, берег оз. Большое Яровое; 91м. над ур. м.; спиреево-полынно-злаковая степь; 14.08.2015 г.
Алтайский край, Угловский р-н, берег оз. Большой Тассор (горько-соленое); 227 м. над ур. м.; спиреево-полынно-злаковая степь; 13.08.2015 г.
Респ. Хакасия, Усть-Абаканский р-н, окр д. Камышовая, оз. Улуг-Коль (горько-соленое); 482 м. над ур. м.; караганово-полынно-злаковая степь; 06.08.2015 г.
Респ. Тыва, Кызылский р-н, окр. с. Кара-Хаак, лев. берег р. Большой Енисей; 665 м. над ур. м.; полынно-разнотравная степь; 28.07.2015 г.
Респ. Тыва, Пий-Хемский р-н, Уюкский хребет, окр. г. Кызыл, степь; 645 м. над ур. м.; караганово-полынная степь; 09.07.2014 г.
Респ. Тыва, Кызылский р-н, Уюкский хребет, окр. с. Ээрбек, долина р. Ээрбек; 640 м. над ур. м.; карагано-во-злаковая степь; 1.08.2015 г.
Респ. Тыва, Улуг-Хемский р-н, окр. с. Хайыракан, берег р. Хайыракан; 560 м. над ур. м.; караганово-полынная степь; 01.08.2015 г.
Респ. Тыва, Барун-Хемчиксий р-н, окр с. Шекпээр; 844 м. над ур. м.; караганово-полынно-злаковая степь; 03.08.2015 г.
Atraphaxis pimgens
Респ. Хакасия, Орджоникидзевский р-н, окр. с. Июс, гора Сундук; 447 м. над ур. м.; караганово-злаковая степь; 05.07.2014 г.
Респ. Хакасия, Ширинский р-н, окр. с. Фыркал, берег оз. Фыркал (пресное); 422 м. над ур. м.; караганове -злаковая степь; 05.07.2014 г.
Респ. Хакасия, Аскизский р-н, по трассе Ак-Довурак - Абакан (А161), между ст. Скальная и ст. Камышта; 339 м. над ур. м.; караганово-полынная степь; 06.07.2014 г.
Респ. Тыва, Чаа-Хольский р-н, берег Саяно-Шушенского водохранилища; 687 м. над ур. м.; спиреево-караганово-злаковая степь; 12.07.2014 г.
Респ. Тыва, Пий-Хемский р-н, окр. пос. Шивилиг; 923 м. над ур. м.; караганово-злаковые заросли; 26.07.2015 г.
Респ. Тыва, Кызылский р-н, окр. с. Кара-Хаак, лев. берег р. Большой Енисей; 665 м. над ур. м.; караганово-полынно-злаковая степь; 27.07.2015 г.
Респ. Тыва, Пий-Хемский р-н, Уюкский хребет, окр. г. Кызыл, берег р. Енисей; 645 м. над ур. м.; карагано-во-злаковая степь; 09.07.2014 г.
Респ. Тыва, Кызылский р-н, окр. п. Сукпак, вдоль дороги Кызыл - Шагонар; 624 м. над ур. м.; караганово-злаковая степь; 10.07.2014 г.
Респ. Тыва, Тандинский район, левый берег р. Элегест, отроги Восточного Тану-Ола; 791 м. над ур. м.; караганово-полынно-злаковая степь; 10.07.2014 г.
Респ. Тыва, Эрзинский р-н, в 20 -ти км от с. Эрзин;1062 м. над ур. м.; спиреево-злаковая степь; 29.07.2015 г.
Респ. Тыва, Барун-Хемчикский р-н, окр с. Шекпээр;844 м. надур. м.; спиреево-злаковая степь; 03.08.2015 г. Респ. Алтай, Кош-Агачский р-н, окр. с. Кокоря, урочище Кызылшин, правый берег р. Чуя, в 2-х км севернее п. Кокоря; 1948 м. надур. м.; караганово-злаковая степь; 03.08.2015 г.
Результаты и обсуждение
Впервые на территории Сибири проведено сравнительное изучение содержания биологически активных веществ в листьях, репродуктивных органах и стеблях A. frutescens и A. pimgens из 23 природных популяций Сибири.
Фитохимическое изучение растений рода Atraphaxis выявило, что надземные органы растений содержат ценные БАВ: флавонолы, катехины, дубильные вещества, каротиноиды и пектиновые вещества (пектины и протопектины) (табл. 2 и 3).
Таблица 2. Содержание биологически активных веществ в надземных органах А. /ги(евсет, произрастающего в Сибири (в пересчете на абсолютно сухое сырье)
№ Флавонолы, Дубильные Катехины, Каротиноиды, Пектины, Протопектины,
образца % вещества, % % мг % % %
р.о. 3.02 9.99 1.08 23.75 0.45 3.17
1 л 3.63 13.81 0.33 146.81 0.53 2.79
CT 2.39 1.47 0.23 7.73 0.43 2.13
р.о. 3.36 15.58 0.92 19.59 1.79 5.97
2 л 2.08 16.91 0.44 251.92 3.15 5.70
CT 0.68 4.71 0.45 2.11 0.85 4.08
р.о. 2.63 9.64 1.08 12.08 0.59 3.59
3 л 3.60 15.25 0.20 37.33 0.82 4.74
CT 0.53 2.45 0.22 4.10 0.73 4.27
р.о. 5.65 20.50 2.14 30.50 1.67 6.45
4 л 3.19 19.57 0.44 163.09 0.75 4.30
CT 0.53 2.27 0.32 8.84 0.72 2.33
р.о. 2.90 25.67 2.77 22.28 1.77 6.30
5 л 2.24 14.50 0.50 72.56 0.82 5.20
CT 0.81 4.87 0.91 8.76 1.17 3.24
р.о. 4.05 16.49 3.21 19.09 1.43 4.27
6 л 2.54 16.62 0.19 131.65 3.41 3.95
CT 0.67 2.86 0.42 9.16 0.95 2.73
р.о. 2.39 19.15 3.71 28.89 1.15 4.11
7 л 1.02 22.22 0.30 183.79 2.55 4.17
CT 0.52 3.03 0.41 5.95 1.15 2.65
р.о. 3.92 19.53 3.78 28.92 0.73 6.56
8 л 1.74 16.30 0.33 152.44 0.90 7.00
CT 0.77 5.21 0.56 11.65 0.82 5.43
р.о. 2.40 14.88 2.42 29.06 0.82 4.56
9 л 1.25 12.07 0.18 123.15 0.74 4.93
CT 0.62 3.58 0.36 8.70 0.74 3.05
р.о. 3.58 16.27 2.85 29.40 0.75 3.78
10 л 1.55 22.25 0.34 241.42 0.57 4.29
CT 0.47 3.23 0.37 - 0.46 1.81
р.о. 3.27 15.57 3.19 22.73 0.78 2.75
11 л 1.48 19.87 0.25 273.14 0.77 4.64
CT 0.84 5.12 0.65 9.49 0.77 4.01
Примечание, р.о. - репродуктивные органы; л. - лист; ст. - стебель; «-» - эксперимент не проводился.
Анализ содержания БАВ в отдельных органах А /п11е.\сеп.\ показал, что более высоким содержанием флавонолов (до 5.65% - в репродуктивных органах и до 3.63% - в листьях), дубильных веществ (до 25.67% и до 22.25% соответственно), пектинов (до 1.79% и до 3.41%), протопектинов (до 6.56 и до 7%) характеризуются листья и (или) репродуктивные органы, каротиноидов - листья (до 273.14 мг%), катехинов - репродуктивные органы (до 3.78%) (табл. 2). Распределение веществ в надземных органах А pungens несколько иное, чем у А. /пие.\сеп.\: более высоким содержанием флавонолов (до 7.32% - в репродуктивных органах и до 10.1% - в листьях), дубильных веществ (до 34.30% и до 27.27%, соответственно), катехинов (до 3.46% и до 3.92%), протопектинов (до 11.29% и до 7.96%) характеризуются листья и (или) репродуктивные органы, каротиноидов - листья (до 172.90%), пектинов - репродуктивные органы (до 2.63%) (табл. 3).
Г.И. Высочиной [9] выявлено, что содержание флавоноидов у растений рода. I и-арЬах'^ значительно варьирует. В соцветиях курчавки кустарниковой обнаружено до 3.16% и в листьях до 3.39% флавоноидов. Нами выявлено, что в репродуктивных органах А. /пие.\сел.\ содержание такой высокоактивной группы флавоноидов, как флавонолы (2.39-5.65%) практически в два раза больше, чем в листьях и стеблях (табл. 2). Популяция курчавки кустарниковой в окр. г. Яровое выделяется наиболее высоким содержанием флавонолов в репродуктивных органах (5.65%). Следует также отметить, что растения А /пие.\сел.\ из некоторых популяций (окр. с. Антоново, окр. с. Петровка и окр. г. Яровое) содержат достаточно высокое количество флавонолов не только в репродуктивных органах, но и в листьях. Содержание флавонолов в листьях курчавки кустарниковой колеблется от 1.02% до 3.63%. В листьях этого вида ранее обнаружены сво-
бодные агликоны флавонолов - кверцетин, кемпферол, а также гликозиды кверцетина, кемпферола и ми-рицетина [5, 6, 28-30]. Отмеченные популяции растений с высоким содержанием флавонолов произрастают преимущественно в спиреево-полынно-злаковых степях южных районов Западно-Сибирской равнины на высоте 85-227 м. н. у. м.
Содержание флавонолов у A. pungens выше, чем у A. frutescens, и достигает в репродуктивных органах 7.32%, а в листьях - 10.1% (табл. 3). Выделяются по этому показателю растения из окр. г. Кызыл, в которых содержание флавонолов в листьях (10.1%) самое высокое, тогда как в остальных популяциях их содержание достигает 5.56%. Высокое содержание флавонолов в листьях и репродуктивных органах обнаружено также в растениях, произрастающих в Респ. Хакассия (образцы №12-13) в караганово-злаковых или караганово-полынных степях гор Южной Сибири на высоте 339-447 м. н. у. м. М.К. Кукенов иВ.П. Михайлова [31] выявили в листьях курчавки колючей до 20.6% флавоноидов, причем наибольшее их содержание приходится на фазу цветения. В надземной части курчавки колючей обнаружены флавоно-лы кверцетин, кемпферол и их гликозиды [6, 9].
Таблица 3. Содержание биологически активных веществ в надземных органах А pungens, произрастающего в Сибири (в пересчёте на абсолютно сухое сырье)
№ об- Флавонолы, Дубильные Катехины, Каротиноиды, Пектины, Протопектины,
разца % вещества, % % мг% % %
р.о. 7.32 34.30 3.46 53.11 2.63 11.29
12 л 4.71 20.54 2.53 144.45 1.03 7.96
ст 0.62 4.61 0.84 10.06 0.41 2.84
р.о. 2.77 14.68 0.74 83.48 1.00 5.05
13 л 5.56 21.81 3.92 172.90 0.55 7.55
ст 0.66 5.00 0.74 8.14 0.66 3.09
р.о. 4.72 21.73 0.89 78.99 1.63 6.79
14 л 3.27 13.06 0.77 133.79 0.56 4.24
ст 1.29 7.93 0.82 12.85 0.63 3.30
р.о. 2.21 11.50 0.82 26.90 0.99 4.43
15 л 3.42 15.66 0.27 82.57 0.73 4.60
ст 0.60 4.12 0.76 1.30 0.49 2.67
р.о. 3.21 13.06 0.61 72.06 1.38 4.90
16 л 3.56 15.70 0.84 158.67 0.58 5.31
ст 0.46 3.17 0.69 14.88 0.66 1.67
р.о. 3.40 11.76 0.47 25.85 1.98 4.70
17 л 3.85 12.95 0.31 136.28 0.61 4.68
ст 0.45 2.19 0.57 10.73 1.01 1.58
р.о. - - - - - -
18 л 10.10 27.27 0.39 151.98 0.63 5.45
ст 0.67 3.88 0.20 11.56 0.51 2.10
р.о. 3.14 15.15 0.94 26.04 1.41 5.87
19 л 2.88 11.70 0.95 86.48 0.51 4.95
ст 0.54 3.72 0.40 10.08 0.99 2.99
р.о. 3.51 17.56 1.68 19.05 1.58 4.89
20 л 2.25 11.01 0.28 54.01 0.64 4.79
ст 0.54 2.51 0.58 7.66 0.51 2.11
р.о. 3.66 17.14 0.92 39.80 2.48 5.52
21 л 2.43 12.11 0.56 94.20 0.55 4.39
ст 0.43 3.01 0.42 7.28 0.62 1.77
р.о. 2.87 14.96 0.89 61.79 1.89 5.46
22 л 3.72 16.84 0.88 159.17 0.86 2.70
ст 0.59 5.21 0.81 9.08 0.83 3.81
р.о. 3.32 17.29 0.76 29.24 1.52 4.73
23 л 3.26 12.00 0.27 66.20 0.75 4.65
ст 0.84 2.41 0.36 7.56 0.88 1.96
Примечание: р.о. - репродуктивные органы; л - лист; ст - стебель; «-» - эксперимент не проводился.
Содержание катехинов в репродуктивных органах более высокое у A. frutescens и достигает 3.78%, в листьях содержится очень мало катехинов (до 0.50%). Наиболее высокие показатели содержания катехинов у растений, произрастающих в караганово-полынных или караганово-злаковых степях гор Южной Сибири на высоте 482-844 м. н. у. м. (№6-11). У A. pungens в листьях (до 3.92%) и репродуктивных органах (до 3.46%) содержание катехинов примерно одинаковое. Наибольшим их содержанием характеризуются растения курчавки кустарниковой из Респ. Хакассия, произрастающие в караганово-злаковых степях.
Содержание дубильных веществ у A. frutescens более высокое в репродуктивных органах (9.6425.67%) и листьях (12.07-22.25%), по сравнению со стеблями (1.47-5.21%). Наиболее высокие показатели выявлены у растений из Алтайского края, произрастающих в спиреево-полынно-злаковых степях и у растений из Респ. Тыва, произрастающих в полынно-разнотравных или караганово-злаковых степях. Содержание дубильных веществ у A. pungens выше, чем у A. frutescens и достигает в репродуктивных органах 34.30%, а в листьях - 27.27%. Выделяются по этому показателю растения из респ. Хакассия и респ. Тыва, произрастающие в караганово-злаковых степях.
Содержание каротиноидов в листьях A. frutescens (до 273.14 мг%) практически в девять раз превышает их содержание в репродуктивных органах (до 30.50%). В листьях A. pungens (до 172.90%), как и у А. frutescens, содержание каротиноидов более высокое, чем в репродуктивных органах (до 83.48%).
В листьях A. frutescens содержание пектинов (до 3.41%) и протопектинов (до 7%) немного выше, чем в репродуктивных органах (до 1,79% пектинов и до 6.56% - протопектинов). Содержание пектинов у А. pungens, в отличие от A. frutescens, в 2 раза выше в репродуктивных органах (до 2.63%) по сравнению с листьями (до 1.03%) и стеблями (до 1.01%). Содержание протопектинов у курчавки колючей практически в полтора раза выше в репродуктивных органах (до 11.29%), чем в листьях (до 7.96%).
В стеблях курчавок содержание БАВ небольшое. Однако некоторые вещества содержатся в достаточном количестве - протопектины (до 5.43% - у A. frutescens и до 3.81% - у A. pungens) и дубильные вещества (до 5.21 и 7.93% соответственно).
Исследование содержания всех БАВ в органах курчавок методом главных компонент показало, что два вида образуют единое облако в системе координат, но происходит некоторое смещение двух видов в разные полюса облака (рис. 1). Первая компонента положительно коррелирует с содержанием катехинов, протопектинов в листьях, флавонолов, дубильных веществ, каротиноидов и протопектинов в репродуктивных органах. Больше всего этих веществ содержится в надземных органах A pungens из Респ. Хакассия (популяции № 12, 13 и 14). Эти популяции выделяются от всех остальных и менее всего сходны по содержанию БАВ с A. frutescens. Тывинские же популяции A. pungens (№15-22) и популяция из Респ. Алтай (№23) более близки к А. frutescens. Вторая компонента положительно коррелирует с содержанием пектинов в листьях, катехинов в репродуктивных органах, пектинов и протопектинов в стеблях. Содержание этих веществ более высокое у A. frutescens из Тывинских популяций (№7, 8 и 11), популяций из Респ. Хакасия (№6) и Омской области (№2). Эти популяции больше всего отличаются по содержанию веществ от A. pungens. Алтайские популяции A. frutescens (№3-5) и некоторые Тывинские популяции (№9 и 10) более близки к A. pungens. Обособленное положение занимает популяция A frutescens из Новосибирской области (№1), которая отличается самым высоким содержанием флавонолов в стеблях растений (2.39%), хотя другие показатели БАВ не очень высоки. Возможно, это обусловлено тем, что популяция произрастает на краю ареала вида. Ранее выявлена меньшая изменчивость морфологических признаков растений курчавки кустарниковой в популяциях, расположенных на краю ареала вида - в Новосибирской и Омской областях по сравнению с растениями из Алтайского края и Респ. Тыва. Это свидетельствует о ксерофитной природе курчавки. В менее жестких условиях обитания, в лесостепи, растения A frutescens формируют более длинные листовые пластинки, более широкие соцветия, у них больше размеры орешка и внутреннего лепестка околоцветника. Минимальные значения некоторых признаков A. frutescens из Новосибирской области, практически, соответствуют максимальным у растений из популяций Алтайского края и Респ. Тыва. По ряду показателей (например, по ширине листовой пластинки и длине орешка) лимиты не пересекаются вовсе [32].
Анализ межпопуляционной изменчивости содержания вторичных метаболитов показал, что практически все изученные вещества у A ftutescens и A pungens имеют высокую или очень высокую изменчивость (рис. 2). Среднюю изменчивость содержания имеют только дубильные вещества (19%) в листьях А. frutescens. У A. pungens сильно изменчиво содержание катехинов в листьях и репродуктивных органах, каротиноидов в репродуктивных органах и флавонолов в листьях, у A. frutescens - пектинов в репродук-
тивных органах и листьях, каротиноидов в листьях и стеблях и флавонолов в стеблях. Содержание практически всех БАВ в листьях и репродуктивных органах более изменчиво у А. рш1^еп.\. кроме пектинов в листьях и репродуктивных органах, а также каротиноидов в листьях. В стеблях же наоборот изменчивость содержания всех веществ выше у А. /ппе.\сеп.\ (29-67%), либо находится практически на одном уровне с изменчивостью содержания веществ у второго вида (29-40%). Возможно, различия в изменчивости содержания БАВ в разных органах у курчавок имеют видовое значение.
Рис. 1. Распределение образцов А. /гШеясепя (+) и А. ршщет (СИ) в пространстве I (27%) и II (17%) главных компонент по содержанию БАВ в органах надземной части
Рис. 2. Межпопуляционная изменчивость содержания БАВ в надземных органах. 1. /гше.\сеп.\ - Я и А. ршщепя - Ш. По вертикали - коэффициент вариации, %; по горизонтали - биологически активные вещества: 1 - флавонолы, 2 - дубильные вещества, 3 - катехины, 4 - каротиноиды, 5 - пектины, 6 - протопектины
Заключение
Растения сибирских видов Atraph axis fr и te seen s и A. pun gens представляют определенный интерес для медицины, так как содержат комплекс биологически активных веществ. Сравнительное фитохимиче-ское изучение растений курчавок показало, что у A. frutescens более высокое содержание флавонолов, дубильных веществ, пектинов, протопектинов в листьях или репродуктивных органах, каротиноидов - в листьях, катехинов - в репродуктивных органах. В надземных органах A. pun gens распределение веществ несколько иное, чем у A. frutescens: более высоким содержанием флавонолов, дубильных веществ, катехинов, протопектинов характеризуются листья или репродуктивные органы, каротиноидов - листья, пектинов - репродуктивные органы.
В листьях и репродуктивных органах A. pun gens содержание флавонолов (до 7.32% - в репродуктивных органах и до 10.10% - в листьях), дубильных веществ (до 34.30 и 27.27%, соответственно) и прото-
пектинов (до 11.29 и 7.96%), а также в листьях - катехинов (до 3.92%) и в репродуктивных органах - пектинов (до 2.63%) и каротиноидов (до 83.48 мг%) более высокое, чем у A. frutescens. Содержание катехинов в репродуктивных органах (до 3.78%) и в листьях - каротиноидов (до 273.14 мг%) выше у A. frutescens, по сравнению с A. pungens.
Более близкими по содержанию вторичных метаболитов оказались популяции A pungens, произрастающие в Респ. Тыва и Респ. Алтай и популяции A frutescens из Алтайского края и Респ. Тыва. Популяции A. pungens, произрастающие в караганово-злаковых или караганово-полынных степях Респ. Хакассии, перспективны с практической точки зрения, так как отличаются высоким содержанием катехинов и протопектинов - в листьях, флавонолов, дубильных веществ, каротиноидов и протопектинов - в репродуктивных органах. Самое высокое содержание пектинов - в листьях, катехинов - в репродуктивных органах, пектинов и протопектинов - в стеблях у A. frutescens из некоторых Тывинских популяций, а также популяций из Респ. Хакасия и Омской области.
Содержание БАВ у A frutescens и A pungens в Сибири очень изменчиво. Более высокая изменчивость содержания БАВ в листьях и репродуктивных органах у A. pungens, в стеблях - у A. frutescens.
Список литературы
1. Кашина Л.И. YojiAtraphaxisL. -Курчавка// Флора Сибири. Новосибирск, 1992. Т. 5. С. 108-109.
2. Коропачинский И.Ю., Встовская Т.Н. Древесные растения Азиатской России. Новосибирск, 2002. 707 с.
3. Bao В-J., Li A-J. A study of the genus Atraphaxis in China and the system of Atraphaxideae (Polygonaceae) // Acta Phytotaxonomica Sinica. 1993. N31 (2). Pp. 127-139.
4. Ловелиус О. Л. Систематический обзор -popp. Atraphaxis L. (Polygonaceae) // Новости систематики высших растений. 1978. Т. 15. С. 114-128.
5. Чумбалов Т.К., Омуркамзинова В.Б. Полифенолы Atraphaxis frutescens. III. II Химия природ, соединений. 1975. №3. С. 424.
6. Омуркамзинова В.Б. Фенольные соединения некоторых растений рода Atraphaxis L.: автореф. дис. ... канд. хим. наук. Алма-Ата, 1978. 22 с.
7. Растительные ресурсы СССР: цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Magnoliaceae-Limoniaceae. Л., 1984. 460 с.
8. El-Gamal A.A., Takeya К., Itokawa Н, Halim A.F., Amer М.М., Saad H.-E.A., Awad S.A. Studies on the chemical constituents of Atraphaxis spinosa L. var. sinaica Boiss // Natural Medicines. 1994. Vol. 48 (4). Pp. 304-306.
9. Высочина Г.И. Фенольные соединения в систематике и филогении семейства гречишных. Новосибирск, 2004. 240 с.
10. Nakano Н., Kosemura S., Mamonov L.K., Cantrell Ch.L. 8-0-acetyl-7-0-methylgossypetin from Atraphaxis laetevi-rens И Chemistry of Natural Compounds. 2016. Vol. 52. N1. Pp. 127-129.
11. Павлов H.B. Растительное сырье Казахстана (Растения: их вещества и использование). М.; Л., 1947. 550 с.
12. Аллаяров И. Полезные дикорастущие растения Северо-Западного Узбекистана // Распространение и природные запасы полезных растений Узбекистана. 1974. Вып. 1. С. 76-162.
13. Шукуров А.Ш., Станюкович М.Б. Основные красильные растения Таджикистана // Известия АН ТаджССР. Отделение биологических наук. 1972. Т. 2. №47. С. 19-24.
14. Ларин И.В., Агабабян Ш.М., Работнов T.A., Любская А.Ф., Ларина В.К., Касименко М.А. и др. Кормовые растения сенокосов и пастбищ СССР. Л.; М., 1951. Т. 2. 948 с.
15. Nakano Н., Schräder К.К., Mamonov L.K., Kustova T.S., Mursaliyeva V.K., Cantrell C.L. Isolation and Identification of Flavobacterium columnare and Streptococcus iniae Antibacterial Compounds from the Terrestrial Plant Atraphaxis laetevirens II Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2012. Vol. 60. Pp. 10415-10419.
16. Беглянова М.И., Опарин C.B. Некоторые алкалоидоносные растения Красноярского края // Ученые записки Красноярского педагогического института. 1959. Т. 15. С. 117-127.
17. Роллов А.Х. Дикорастущие растения Кавказа, их распространение, свойства и применение. Тифлис, 1908. 599 с.
18. Harrison S.G. Manna and Its Sources // Kew Bulletin. 1950. Vol. 5. N3. Pp. 407-^17.
19. Костикова B.A., Шалдаева T.M., Костиков Д.К. Изучение антиоксидантной активности Atraphaxis frutescens (L.) С. Koch, произрастающего в Сибири // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2014. №4. С. 51-52.
20. Беликов В.В. Методы анализа флавоноидных соединений // Фармация. 1970. №1. С. 66-72.
21. Кукушкина Т.А., Зыков A.A., Обухова Л.А. Манжетка обыкновенная (Alchemia vulgaris L.) как источник лекарственных препаратов природного происхождения // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы VII Международного съезда. СПб., 2003. С. 64-69.
22. Федосеева Л.М. Изучение дубильных веществ подземных и надземных вегетативных органов бадана толстолистного (Bergenia Crassifolia (L.) Fitsch.), произрастающего на Алтае // Химия растительного сырья. 2005. №2. С. 45-50.
23. Кривенцов В.И. Методические рекомендации по анализу плодов на биохимический состав. Ялта, 1982. 21 с.
24. Ермаков А.И., Арасимович В.В., Ярош Н.П. и др. Методы биохимического исследования растений. JL, 1987. 429 с.
25. Кривенцов В.И. Бескарбазольный метод количественного спектрофотометрического определения пектиновых веществ // Труды Никитского ботанического сада. 1989. Т. 109. С. 128-137.
26. Зайцев Г.Н. Математика в экспериментальной ботанике. М., 1990. 296 с.
27. Мамаев С.А. Основные принципы методики исследования внутривидовой изменчивости древесных растений //Индивидуальная эколого-географическая изменчивость растений. 1975. Вып. 94. С. 3-14.
28. Чумбалов Т.К., Омуркамзинова В.Б. Полифенолы Atraphaxis frutescens II Химия природных соединений. 1971. №1. С. 120.
29. Костикова В.А., Кукушкина Т.А., Костиков Д.К. Фотохимическое изучение Atraphaxis frutescens (L.) С. Koch, произрастающего в Сибири// Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. 2015. №4(15). С. 27-32.
30. Чумбалов Т.К., Мухамедьярова М.М., Омуркамзинова В.Б. Полифенолы некоторых видов курчавок Казахстана // Сборник работ по химии. 1973. Вып. 3. С. 54-57.
31. Кукенов М.К., Михайлова В.П. Динамика накопления флавоноидов у интродуцированных представителей семейства гречишных // Труды института ботаники АН КАЗССР. 1971. Т. 29. С. 139-147.
32. Костиков Е.В., Банаев Е.В. Изменчивость морфологических признаков Atraphaxis frutescens (L.) С. Koch. II Известия Самарского научного центра Российской академии наук. 2016. Т. 18. №2. С. 101-113.
Поступило в редакцию 15 июля 2017 г.
После переработки 30 ноября 2017 г.
Для цитирования: Костикова В.А., Банаев Е.В., Костиков Д.К., Кукушкина Т.А. Сравнительное изучение содержания биологически активных веществ в надземных органах А1гар11ах18 Рпйевсеш и А. Ршщепв (Ро^опасеае), произрастающих в Сибири // Химия растительного сырья. 2018. №2. С. 77-87. БОР 10.14258ЛсР11М.2018022714
Kostikova V.A.*, Banaev E.V., Kostikov D.K., Kukushkina TA. COMPARATIVE STUDY OF THE CONTENT OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES IN THE ABOVEGROUND ORGANS OF ATRAPHAXIS FRUTESCENS AND A. PUNGENS (POLYGONACEAE), GROWING IN SIBERIA
Central Siberian Botanical Garden, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, ul. Zolotodolinskaya, 101, Novosibirsk, 630090 (Russia), e-mail: serebryakova-va@yandex.ru
The results of comparative study of the content of the biologically active substances in the aboveground organs of Atraphaxis frutescens (L.) C. Koch, and A. pungens (Bieb.) Jaub. et Spach. are presented. It is established that plants contain a rich complex of biologically active substances: flavonols, tannins, catechins, carotenoids, pectin substances. The leaves and the reproductive organs of the Atraphaxis differ in the highest content of all substances. Almost on all biochemical indices above-ground organs A. pungens surpass in A. frutescens. In leaves and reproductive organs of A. pungens the content of flavonols (up to 7.32% - in reproductive organs and up to 10.10%) - in leaves), tannins (up to 34.30% and 27.27%), respectively) and pro-topectins (up to 11.29 and 7.96%o), and also in leaves - catechins (up to 3.92%o) and in reproductive organs - pectins (up to 2.63%) and carotenoids (up to 83.48 mg%) higher than at A. frutescens. The content of catechins in the reproductive organs (up to 3.78%o) and in leaves - carotenoids (up to 273.14 mg%) is higher in A. frutescens. Populations of Atraphaxis perspective for further pharmacological researches are allocated. Researches of biologically active substances A. frutescens and A. pungens growing in Siberia are spent for the first time.
Keywords: Atraphaxis frutescens, A. pungens, flavonols, tannins, catechins, carotenoids, pectin substances, Siberia.
References
1. KashinaL.I. Flora Sibiri. [Flora of Siberia], Novosibirsk, 1992, vol. 5, pp. 108-109. (in Russ.).
2. Koropachinskii I.Iu., Vstovskaia T.N. Drevesnye rasteniia Aziatskoi Rossii. [Woody plants of Asian Russia], Novosibirsk, 2002, 707 p. (in Russ.).
Corresponding author.
3. Bao B-J., Li A-J. Acta Phytotaxonomica Sinica, 1993, no. 31 (2), pp. 127-139.
4. Lovelius O.L. Novosti sistematiki vysshikh rastenii, 1978, vol. 15, pp. 114-128. (in Russ.).
5. Chumbalov T.K., Omurkamzinova V.B. Khimiiaprirodnykh soedinenii, 1975, no. 3, pp. 424. (in Russ.).
6. Omurkamzinova V.B. Fenol'nye soedineniia nekotorykh rastenii roda Atraphaxis L.: avtoref. dis. ... kand. khim. nauk. [Phenolic compounds of some plants of the genus Atraphaxis L.: avtoref. dis. ... cand. chem. science], Alma-Ata, 1978, 22 p. (in Russ.).
7. Rastitel'nye resursy SSSR: tsvetkovye rasteniia, ikh khimicheskii sostav, ispol'zovanie. Semeistva Magnoliaceae-Limoniaceae. [Plant resources of the USSR: flowering plants, their chemical composition, use. Families of Magnoliaceae-Limoniaceae], Leningrad, 1984, 460 p. (in Russ.).
8. El-Gamal A.A., Takeya K., Itokawa H., Halim A.F., Amer M.M., Saad H.-E.A., Awad S.A. Natural Medicines, 1994, vol. 48 (4), pp. 304-306.
9. Vysochina G.I. Fenol'nye soedineniia v sistematike i filogenii semeistva grechishnykh. [Phenolic compounds in the taxonomy and phylogeny of the buckwheat family], Novosibirsk, 2004, 240 p. (in Russ.).
10. Nakano H., Kosemura S., Mamonov L.K., Cantrell Ch.L. Chemistry of Natural Compounds, 2016, vol. 52, no. 1, pp. 127-129.
11. Pavlov N. V. Rastitel'noe syr'e Kazakhstana (Rasteniia: ikh veshchestva i ispol'zovanie). [Vegetable raw materials of Kazakhstan (Plants: their substances and use)]. Moscow; Leningrad, 1947, 550 p. (in Russ.).
12. Allaiarov I. Rasprostranenie iprirodnye zapasypoleznykh rastenii Uzbekistana, 1974, no. 1, pp. 76-162. (in Russ.).
13. Shukurov A.Sh., Staniukovich M.B. Izvestiia AN TadzhSSR. Otdelenie biologicheskikh nauk, 1972, vol. 2, no. 47, pp. 19-24. (in Russ.).
14. Larin I.V., Agababian Sh.M., Rabotnov T.A., Liubskaia A.F., Larina V.K., Kasimenko M.A. i dr. Kormovye rasteniia senokosov i pastbishch SSSR. [Forage plants of hayfields and pastures of the USSR], Leningrad; Moscow, 1951, vol. 2, 948 p. (in Russ.).
15. Nakano H., Schrader K.K., Mamonov L.K., Kustova T.S., Mursaliyeva V.K., Cantrell C.L. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2012, vol. 60, pp. 10415-10419.
16. Beglianova M.I., Oparin S.V. Uchenye zapiski Krasnoiarskogopedagogicheskogo instituta, 1959, vol. 15, pp. 117-127. (in Russ.).
17. Rollov A.Kh. Dikorastushchie rasteniia Kavkaza, ikh rasprostranenie, svoistva i primenenie. [Wild plants of the Caucasus, their distribution, properties and applications], Tiflis, 1908, 599 p. (in Russ.).
18. Harrison S.G. Kew Bulletin, 1950, vol. 5, no. 3, pp. 407^17.
19. Kostikova V.A., Shaldaeva T.M., Kostikov D.K. Voprosy biologicheskoi, meditsinskoi i farmatsevticheskoi khimii, 2014, no. 4, pp. 51-52. (in Russ.).
20. Belikov V.V. Farmatsiia, 1970, no. 1, pp. 66-72. (in Russ.).
21. Kukushkina T.A., Zykov A.A., Obukhova L.A. Aktual'nye problemy sozdaniia novykh lekarstvennykh pre-paratov prirodnogo proiskhozhdeniia: materialy VIIMezhdunarodnogo s"ezda. [Actual problems of creating new drugs of natural origin: materials of the VII International Congress], St. Petersburg, 2003, pp. 64-69. (in Russ.).
22. Fedoseeva L.M. KhimiyaRastitel'nogo Syr'ya, 2005, no. 2, pp. 45-50. (in Russ.).
23. Kriventsov V.I. Metodicheskie rekomendatsii po analizu plodov na biokhimicheskii sostav. [Methodical recommendations on the analysis of fetuses on the biochemical composition], Ialta, 1982, 21 p. (in Russ.).
24. Ermakov A.I., Arasimovich V. V., Iarosh N.P. i dr. Metody biokhimicheskogo issledovaniia rastenii. [Methods of biochemical research of plants], Leningrad, 1987, 429 p. (in Russ.).
25. Kriventsov V.I. Trudy Nikitskogo botanicheskogo sada, 1989, vol. 109, pp. 128-137. (in Russ.).
26. Zaitsev G.N. Matematika v eksperimental'noi botanike. [Mathematics in experimental botany], Moscow, 1990, 296 p. (in Russ.).
27. Mamaev S.A. Individual'naia ekologo-geograficheskaia izmenchivost'rastenii, 1975, no. 94, pp. 3-14. (in Russ.).
28. Chumbalov T.K., Omurkamzinova V.B. Khimiia prirodnykh soedinenii, 1971, no. 1, p. 120. (in Russ.).
29. Kostikova V.A., Kukushkina T.A., Kostikov D.K. Izvestiia vuzov. Prikladnaia khimiia i biotekhnologiia, 2015, no. 4(15), pp. 27-32. (in Russ.).
30. Chumbalov T.K., Mukhamed'iarova M.M., Omurkamzinova V.B. Sbornik rabotpo khimii, 1973, no. 3, pp. 54-57. (in Russ.).
31. Kukenov M.K. i Mikhailova V.P. Trudy instituta botaniki ANKAZSSR, 1971, vol. 29, pp. 139-147. (in Russ.).
32. Kostikov E.V., Banaev E.V. Izvestiia Samarskogo nauchnogo tsentra Rossiiskoi akademii nauk, 2016, vol. 18, no. 2, pp. 101-113. (in Russ.).
Received July 15, 2017 Revised November 30, 2017
For citing: Kostikova V.A., Banaev E.V., Kostikov D.K, Kukushkina T.A. Khimiya Rastitel'nogo Syr'ya, 2018, no. 2, pp. 77-87. (in Russ.). DOI: 10.14258/jcprm.2018022714
