CC BY
75
УДК 615.244/.246
А. М. САМПИЕВ, Н. А. ДАВИТАВЯН
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТОВ
ИЗ ТРАВЫ
И НАСТОЙКИ ИЗ КОРНЯ СТАЛЬНИКА ПОЛЕВОГО
Кафедра фармации Кубанского государственного медицинского университета
Сведения о лечебном применении стальника уходят в далекое прошлое. С древности считается, что стальник оказывает диуретическое действие и при наличии камней в почках может вызвать их выведение из организма. В народной медицине европейских стран стальник издавна применяли в качестве потогонного, кровоостанавливающего, легкого диуретического средства [1]. Некоторые авторы утверждают, что стальник обладает и противовоспалительным действием, и поэтому используют его для лечения циститов. По данным Stary, стальник можно применять и для лечения суставного ревматизма, подагры, а наружно его можно применять в форме ванн при хронических дерматозах и экземах. Известно также, что в народной медицине корень стальника используют при болезнях обмена веществ, асците, болевом синдроме, заболеваниях иммунной системы, пищеварительной системы, а траву - при болезнях почек и мочевыводящих путей, кожи и подкожной жировой клетчатки, нервной системы. Настой и отвар стальника обладают также желчегонным, анестезирующим, противовоспалительным, гемостатическим действием. Кроме того, они оказывают гипотензивное и капилляроукрепляющее действие [6].
Научное подтверждение наличия целебных свойств стальника начато в середине прошлого века. Так, исследованиями Яренкого и соавторов (Weiss, 1960) доказано, что отвар из корней стальника действует диуретически и повышает на 20% выделение мочевой кислоты. По данным Bulon, диуретическое действие обуславливается гликозидом ононидом и сапонинами. Согласно Bulkowstein, диуретический эффект оказывают только сапонины, что подтверждается и опытами, проведенными с растительными частями стальника, в ко-
торых не содержатся сапонины. В таком случае диуретический эффект не наступает [7].
В официальной медицине используется настойка корня стальника полевого, обладающая слабительным действием. Надземная часть данного растения на сегодняшний день используется лишь в народной медицине. Согласно литературным данным трава стальника, используемая в народной медицине, содержит ценный комплекс биологически активных веществ, определяющий разнонаправленный фармакологический эффект [2, 3]. В связи с данным фактом представлялось целесообразным провести фармакологический скрининг экстрактов надземной части стальника полевого.
Цель данной работы - исследование желчегонной, слабительной, анальгезирующей и диуретической активности сухих экстрактов стальника полевого.
Объектом исследования являлись разработанные сухие экстракты из травы и промышленно выпускаемая из корня настойка стальника полевого. Сырье для получения экстрактов заготавливали в Краснодарском, Ставропольском краях и Ростовской области в 20032005 гг. в период массового цветения растения.
Методики исследований
Сухие экстракты из травы стальника полевого получали путем вакуум-фильтрационной экстракции воздушно-сухого измельченного сырья 40%-ным, 50%-ным, 60%-ным и 70%-ным спиртом этиловым в соотношении 1:5. Спирт удаляли на лабораторной установке с вакуумным насосом. Сгущенный экстракт досушивали при температуре 600 С в вакуум-сушильном шкафу. Полученные сухие экстракты представляли собой гигроскопические желто-коричневые порошки, легко растворимые в воде.
V, мл 2,52 1,5 1
0,5
0
W.
W.
W.
Z
6\
W-
1 - контроль; 2 - холосас;
3 - настойка корня стальника;
4-70%-ный водно-спиртовой экстракт из травы;
5-60%-ный водно-спиртовой экстракт из травы;
6-50%-ный водно-спиртовой экстракт из травы;
7-40%-ный водно-спиртовой экстракт из травы
Диаграмма, построенная по результатам определения желчегонного действия экстрактов из травы стальника полевого и препаратов сравнения на крысах
Исследуемый объект Объём желчи, мл Д% к контролю Д% к холосасу
Контроль 1,2±0,22
Холосас 1,9±0,20X 58,3
Настойка стальника 2,1±0,30X 75,0 10,5
70%-ный экстракт из травы 2,4±0,20X 100,0 26,3
60%-ный экстракт из травы 2,5±0,20X 108,3 31,6
50%-ный экстракт из травы 2,4±0,40X 100,0 26,3
40%-ный экстракт из травы 2,1 ±0,20X 75,0 10,5
Примечание: х - изменения достоверны по отношению к контролю, р<0,05.
Таблица 2
Влияние экстрактов стальника на тонус тонкого кишечника, см, М±т
Исследуемый объект Скорость движения угля активированного, см Д% относительно контроля Д% относительно сенаде
Контроль (уголь актив.) 121,5±6,2
Сенаде 126,0±9,5 3,7
Настойка стальника 126,0±8,6 3,7 0
70%-ный экстракт из травы 152,5±4,4X# 25,5 21,0
60%-ный экстракт из травы 140,2±6,2 15,4 11,3
50%-ный экстракт из травы 127,5±9,1 4,5 1,2
40%-ный экстракт из травы 125,4±5,5 3,2 -0,5
Примечание: х - изменения достоверны относительно контроля, р<0,05; # - изменения достоверны относительно сенаде, р<0,05.
Изучение фармакологической активности экстрактов стальника проводили на белых крысах обоего пола линии Wistar весом 180-240 г. Животные были разделены на группы по 6 в каждой и находились в равноценных условиях.
Водные растворы экстрактов стальника вводили per os. При изучении фармакологической активности экстрактов из травы стальника полевого полученные результаты сравнивали с эффектом препарата сравнения и с настойкой корня промышленного выпуска. Контролем служила группа животных, получавших физиологический раствор в аналогичных объёмах.
Результаты исследований обрабатывали статистически с учётом коэффициента Стьюдента, используя пакет Microsoft Excel 2000.
Изучение желчегонной активности экстрактов стальника. Опытные крысы за 12 часов до начала
исследования были лишены воды и пищи. Экстракты и настойку стальника (в пересчете на сухие вещества) вводили в дозе 200 мг/кг в форме водных растворов за 3 часа до сбора желчи. В качестве препарата сравнения использовали холосас в дозе 1,2 мл/кг.
Сбор желчи проводили у наркотизированных хлоралгидратом животных после некоторых хирургических манипуляций. Крыс фиксировали на операционном столе и от нижнего края грудины вниз производили срединный разрез длиной 2-3 см. Выделяли желчный проток, накладывали лигатуру под желудком и ниже желчного протока. В разрез кишки вводили тонкостенную полиэтиленовую трубку диаметром 2 мм, фиксировали ее и в течение 3 часов через неё производили сбор желчи [4, 5]. Результаты исследования желчегонной активности представлены в таблице 1 и на рисунке.
Таблица 3
Результаты определения анальгетической активности экстрактов стальника, M±m
Исследуемый объект Сила тока, вызвавшая локализацию болевой реакции у крыс, А
Исход Через час после введения Д, %
Контроль 19,3±1,2 20,1 ±1,4 4,14±0,12
Анальгин 18,9±0,9 33,6±1,8 77,78±2,08*
Настойка стальника 19,7±1,1 21,6±1,5 9,64±0,22
70%-ный экстракт из травы 20,3±1,3 28,9±0,9 42,36±1,54*x
60%-ный экстракт из травы 19,2±0,9 21,3±1,1 10,94±0,47
50%-ный экстракт из травы 20,1±0,8 23,8±1,2 18,41 ±1,03
40%-ный экстракт из травы 19,8±1,3 29,2±1,1 47,47±3,36*x
Примечание: * - р<0,05 - относительно контроля; х
Изучение влияния экстрактов стальника на моторику желудочно-кишечного тракта. Исследование влияния водных растворов экстрактов и настойки стальника на моторику желудочно-кишечного тракта проводили в опытах на крысах обоего пола весом 220-260 г. В течение 20 часов до эксперимента животные не получали пищу. Количество воды не ограничивали. Крысам в желудок вводили с помощью зонда 5%-ную взвесь активированного угля в 2%-ной крахмальной слизи. Через 15 минут внутрижелудочно вливали водные растворы экстрактов и настойку стальника (в пересчете на сухие вещества) в дозе 200 мг/кг. Спустя 2 часа после введения изучаемых объектов животных под эфирным наркозом забивали, вскрывали и извлекали желудок и тонкий кишечник, не отделяя их друг от друга [4, 5]. Затем растягивали их при нагрузке в 3 г измеряли метром расстояние продвижения угля в кишечнике и вычисляли показатель интенсивности моторики кишечника относительно контроля и препарата сравнения - сенаде. Доза сенаде крысам в 26 мг/кг рассчитывалась с учётом разовой дозы для человека. Результаты исследования влияния экстрактов стальника на моторику желудочно-кишечного тракта представлены в таблице 2.
Исследование анальгетической активности. Данный вид активности экстрактов стальника проводили на модели болевой реакции, вызываемой раздражением электрическим током. Крыс изолировали в камере, на хвост накладывали электрод и подавали ток, величину которого определяли по показателю электроимпульса-тора УИЭ-1. Критерием оценки болевой чувствительности был первый писк животных. После снятия исходных показателей болевой чувствительности крысам перорально вводили водные растворы экстрактов и настойку стальника (в пересчете на сухие вещества) в дозе 200 мг/кг. Группе сравнения вводили анальгин в дозе 10 мг/кг [5]. Контрольная группа получала физраствор в тех же объёмах. В каждой группе было по 6 крыс мужского пола линии МБ1аг массой 180-220 г. Результаты исследования анальгетической активности экстрактов стальника представлены в таблице 3.
Изучение диуретической активности. Исследования экстрактов проводили на крысах методом водной
- p<0,05 - относительно анальгина.
нагрузки (Taylor) в расчёте 25 мг/кг. Исследуемые объекты вводили в тёплом виде. Контрольная группа получала воду, группа сравнения - растительный препарат леспефлан в дозе 5 мл/кг веса животного. За сутки до опыта крысы были лишены пищи и воды. Изучаемые объекты вводили за 30 минут до исследования. После водной нагрузки животных помещали в клетки для изучения общего объема мочи и в течение 4 часов проводили учёт диуреза [4, 5]. Результаты исследования диуретической активности экстрактов стальника представлены в таблице 4.
Результаты и их обсуждение
Из данных, представленных в таблице 1, видно, что объём желчи у контрольных крыс составил 1,2±0,22 мл, холосас увеличивал данный показатель на 58,3%.
Экстракты из травы и настойка из корня стальника достоверно повышают желчеотделение в сравнении с контролем на 75-100%. По отношению к холосасу изменения носили достоверный характер и имели тенденцию к увеличению на 10,5-31,6%. Таким образом, экстракты травы стальника оказывают желчегонный эффект, превосходящий активность известного растительного препарата «холосас». В ряду исследуемых на известную активность препаратов наибольшее действие проявляет водно-спиртовой 60%-ной концентрации экстракт.
В результате данных, полученных в ходе изучения влияния экстрактов стальника на моторику желудочно-кишечного тракта и представленных в таблице 2, можно сделать заключение, что в контрольных опытах скорость продвижения угля активированного по кишечнику составила 121,5±6,2 см. На фоне сенаде уголь продвинулся на 126,0±9,5 см, то есть всего на 3,7% дальше. Такой же результат в среднем получен при введении настойки корня стальника и 50%, 40%-ных водноспиртовых экстрактов из травы стальника. На 15,4% дальше, но недостоверно продвинулся уголь на фоне 60%-ного водно-спиртового экстракта из травы. Двигательную активность кишечника достоверно (на 25,5% по отношению к контролю и на 21,0% по отношению к сенаде) увеличивал 70%-ный водно-спиртовой экстракт из травы стальника.
Исследуемый объект Объём мочи / время мл/мин
30 60 90 120 180 240
Контроль 0±0 0,28±0,18 0,40±0,31 0,70±0,31 0,86±0,16 0,86±0,16
Леспефлан 0,80±0,32 1,58±0,16X 1,75±0,22X 2,00±0,22X 2,20±0,16X 2,28±0,22X
Настойка стальника 0±0 0±0 1,65±0,22X 2,10±0,11X 2,10±0,11X 2,10±0,11X
70%-ный экстракт из травы 0±0 0,13±0,07 0,30±0,12 0,30±0,12 0,30±0,12 0,40±0,10
60%-ный экстракт из травы 0±0 0,10±0,04 0,25±0,11 0,41 ±0,11 0,65±0,14 0,92±0,18
50%-ный экстракт из травы 0±0 0,40±0,22 0,70±0,38 0,87±0,47 1,40±0,36 1,50±0,44X
40%-ный экстракт из травы 0±0 0±0 0,42±0,08 0,68±0,18 0,74±0,11 0,74±0,11
Примечание: x - изменения достоверны по сравнению с контролем, p<0,05.
Таким образом, 70%-ный экстракт стальника из травы повышает тонус и перистальтику кишечника.
Как видно из результатов, представленных в таблице 3, при введении экстрактов стальника наблюдалось увеличение болевого порога у крыс. Настойка стальника и 50%, 60%-ный водно-спиртовые экстракты вызывали незначительное снижение боли (на 9,64-18,41%). На фоне 70%-ного водно-спиртового экстракта из травы стальника сила тока, вызвавшая локализацию у крыс, на 38% выше, чем в группе контрольных животных. 40%-ный водно-спиртовой экстракт снижал болевую реакцию на 42,53%.
В сравнительном аспекте с анальгином экстракты стальника из травы в концентрациях 70% и 40% оказывали менее выраженное анальгезирующее действие, то есть на 35,42% и 30,31% ниже, чем у препарата-стандарта.
Таким образом, 70% и 40%-ный водно-спиртовые экстракты из травы стальника оказывают мягкий обезболивающий эффект, причём он достоверно на 1/3 слабее, чем действие анальгина.
Как видно из данных, представленных в таблице 4, настойка корня стальника начиная с 90-й минуты до окончания наблюдения даёт объём диуреза, близкий к эффекту леспефлана. Относительно контроля изменения диуреза у животных на фоне экстракта из корня в этот временной отрезок носили достоверный характер. Экстракты из травы стальника не оказывали заметного действия на диуретическую активность почек подопытных крыс.
Таким образом, настойка стальника оказывает диуретическое действие, сопоставимое с эффектом растительного аналога леспефлана.
В результате проведенного сравнительного фармакологического скрининга экстрактов из травы с настойкой из корня стальника полевого, а также лекарственных препаратов, широко используемых в медицинской практике, можно заключить, что надземная часть данного растения перспективна как источник получения
лекарственных средств слабительного, желчегонного и мягкого обезболивающего действия. По итогам проведенных исследований наиболее приемлемым экстрагентом для получения суммарного препарата из надземной части стальника является спирт этиловый 70%-ной концентрации.
Поступила 07.09.2006
ЛИТЕРАТУРА
1. Георгиевский В. П., Комиссаренко H. Ф., Дмитрук С. Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1990. С. 226-229.
2. Давитавян H. А., Сампиев А. М. Исследования по выбору оптимального экстрагента для получения жидкого экстракта травы стальника полевого / Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. тр. Вып. 60. Пятигорск, 2005. С. 96-97.
3. Машковский М. Д. Лекарственные средства: В 2 т. Т. 1. 14-е изд., перераб., исправ. и доп. М.: ООО «Издательство «Новая волна», 2000. 540 с.
4. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. В. П. Фисенко. М.: Медицина, 2000. 398 с.
5. Сернов Л. H., Гацура В. В. Элементы экспериментальной фармакологии. М., 2000. 351 с.
6. Современная фитотерапия / Под ред. В. Петкова. София: Медицина и физкультура, 1988. С. 272-273.
7. Харакоз М. Ф. Лекарственные растения Краснодарского края. 3-е изд., перераб. и доп. Краснодар: Сов. Кубань, 1997. С. 239-242.
A. M. SAMPIEV, N. A. DAVITAVJAN
COMPARATIVE STUDYING OF PHARMACOLOGICAL ACTIVITY OF EXTRACTS FROM THE HERB AND TINCTURES FROM THE ROOT ONONIS ARVENSIS L
In view of presence in a herb Ononis complex of biologically active substances comparable to a root research of
УДК 615.014.414
pharmacological activity of an elevated part of the given plant in the relation choleretic, laxative, anesthetizing and diuretic actions was represented expedient.
As a result of the lead comparative pharmacological screening extracts from a herb and tincture of a root Ononis, and also the medical products widely used in medical practice, it is established, that the elevated part
of the given plant is perspective as a source of reception of medical products laxative, choleretic and soft anesthetizing action. On results of the lead researches the most comprehensible solvent for reception of a preparation from an elevated part Ononis is spirit aethylicus 70 % of concentration.
Key words: Ononis arvensis L., a herb, laxative effect.
А. М. САМПИЕВ, Е. Б. НИКИФОРОВА, М. Р. ХОЧАВА
КУКУРУЗНЫЕ РЫЛЬЦА:
ОТ ВЫЯВЛЕНИЯ ДЕЙСТВУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ ДО СОЗДАНИЯ ТЕХНОЛОГИИ МАЛООТХОДНОЙ ПЕРЕРАБОТКИ СЫРЬЯ. Сообщение 1. ПРОБЛЕМА НОРМИРОВАНИЯ КАЧЕСТВА И ПОЛУЧЕНИЯ ФИТОПРЕПАРАТОВ, ОРИЕНТИРОВАННЫХ НА СОДЕРЖАНИЕ ДЕЙСТВУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ. ФИТОХИМИЯ КУКУРУЗНЫХ РЫЛЕЦ КАК ПЕРВЫЙ ЭТАП В УСТАНОВЛЕНИИ ДЕЙСТВУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ
Кафедра фармации Кубанского государственного медицинского университета
Современное производство лекарственных средств должно быть направлено на получение продуктов, в полной мере отвечающих целям эффективности и безопасности применения. Залогом успеха при этом являются строгое соблюдение правил надлежащей производственной практики (0МР) и объективная, научно обоснованная оценка качества готового лекарственного средства. Среди всех существующих разнообразных критериев качества любого лекарственного средства, несомненно, наиболее важным является количественное содержание в нем действующих фармакологически активных веществ. Действующие вещества определяют терапевтическую ценность и область медицинского применения лекарственного средства и, следовательно, должны являться важнейшим и определяющим ориентиром в разработке его норм качества и создании целенаправленной технологии.
Когда речь идет о синтетической фармацевтической субстанции или лекарственном препарате, ее содержащем, понятие «действующее вещество» является четко конкретизированным, а данный показатель качества уверенно контролируемым соответствующим методом. Но фармакотерапия в настоящее время оперирует значительным количеством лекарственных средств растительного происхождения, которые представлены как собственно растительным сырьем (ЛРС), так и разнообразными продуктами его переработки, чаще всего суммарными фитопрепаратами. Каждый вид ЛРС является уникальным комплексом биологически активных веществ (БАВ), целиком или отдельными представителями которого определяется его применение. И в данном случае понятие «действующее вещество» на практике в силу ряда причин перестает быть конкретным, научно обоснованным, а стандартизация по этому показателю часто вызывает затруднения. Кроме того, для установления четкой взаимосвязи между наличием
в ЛРС определенной группы БАВ и его фармакологическим действием должны проводиться сложные комплексные фармакохимические исследования. Такие исследования предполагают выделение из растительного объекта индивидуальных природных соединений или, по крайней мере, основных групп БАВ, изучение их фармакологических свойств и дальнейшую конкретизацию действующих веществ. Трудоемкость, длительность и дороговизна таких исследований в большинстве случаев делают их невозможными. Да и их достоверность иногда можно поставить под сомнение, поскольку процесс выделения индивидуальных БАВ и даже групповой фракции из растительных объектов не исключает изменения их нативных свойств, а значит, и изменения возможно присущей им изначально природной биоактивности, то есть не исключает получения в результате исследований артефакта. Таким образом, фактически отсутствует методологический подход, упрощающий и оптимизирующий путь установления действующих веществ в ЛРС и суммарных фитопрепаратах.
В силу вышеизложенного стандартизация ЛРС или суммарных фитопрепаратов зачастую проводится по содержанию извлекаемой тем или иным экстрагентом суммы БАВ, то есть по так называемым «экстрактивным веществам» или «сухому остатку». В тех же случаях, когда разработчик в соответствии с современными требованиями к составлению фармакопейной статьи вместо суммы БАВ вносит показатель содержания конкретной группы («действующие вещества»), этот выбор бывает, как правило, условным. За действующие вещества принимается либо преобладающая в количественном отношении группа БАВ, либо имеющая, мягко говоря, отдаленное отношение к фармакологическому эффекту, но методика определения которой доступна и проста в исполнении для разработчиков и производителя. Среди широко известных видов ЛРС
