CC BY
23
Е
О
!о Сравнительное изучение диагностической
эффективности иммуноферментных ф тест-систем для выявления антител
| класса М к вирусу гепатита А
Карпович Л.Г.,1 Ермолаева Т.Н.,1 Родомазова Т.А.,1 Карпова Е.В.,1 Игнатьев Г.М.2
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств 5 медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва
^ 2Федеральное государственное унитарное предприятие «Научно-производственная организация
^ «Микроген» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва
О
Comparative study of diagnostic efficacy of immunoenzymatic test systems for the detection of immunoglobulin M antibodies to hepatitis A virus
Karpovich L.G.,1 Ermolaeva T.N.,1 Rodomazova T.A.,1 Karpova i.V.,1 Ignatiev G.M.2
1 Federal State Budgetary Institution "Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products" of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow
2 Federal State Unitary Company "Microgen Scientific Industrial Company for Immunobiological Medicines" of the Ministry of Health the Russian Federation, Moscow
с-\
Разработка и внедрение в практику здравоохранения иммуноферментных тест-систем для диагностики вирусного гепатита А (ВГА) является одним из важнейших направлений борьбы с этой повсеместно распространенной инфекцией. В России зарегистрирован ряд диагностических наборов реагентов - иммуноферментных тест-систем для выявления антител класса IgM к вирусу гепатита А. Представлены результаты изучения и дается сравнительная оценка диагностической эффективности коммерческих иммуноферментной тест-системы для выявления антител класса IgM к вирусу гепатита А.
Ключевые слова: гепатит А, иммуноферментная тест-система, диагностическая эффективность, антитела класса IgM, статистический метод - таблица 4-х полей.
Библиографическое описание: Карпович Л.Г., Ермолаева Т.Н., Родомазова Т.А., Карпова Е.В., Игнатьев Г.М. Сравнительное изучение диагностической эффективности иммуноферментных тест-систем для выявления антител класса М к вирусу гепатита А // Биопрепараты. 2013. № 1. С. 32- 35.
The development and introduction of immunoenzymatic test systems for the diagnosis of hepatitis A (HAV) to public healthcare is one of the most important aspects of fighting this pervasive infection. A number of diagnostic reagents kits - immunoenzymatic test systems for the detection of IgM antibodies to hepatitis A virus have been authorized in Russia. The present article contains the results of the study and provides a comparative evaluation of diagnostic efficacy of commercial enzyme immunoassay kits for the detection of IgM antibodies to hepatitis A. Key words: hepatitis A, immunoenzymatic test systems, diagnostic efficacy, IgM antibodies, statistical method - table of 4 fields.
Bibliographical description: Karpovich L.G., Ermolaeva T.N., Rodomazova T.A., Karpova E.V., Ignatiev G.M. Comparative study of diagnostic efficacy of immunoenzymatic test systems for the detection of immunoglobulin M antibodies to hepatitis A virus//Biopreparations. - 2013. - № 1. - P. 32- 35.
Для корреспонденции:
Карпова Е.В - ведущий эксперт лаборатории вирусных вакцин Испытательного центра МИБП ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России
Адрес: ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России 119002, Москва, пер. Сивцев Вражек, 41 e-mail: Karpova@expmed.ru
Статья поступила 29.07.2012 г, принята к печати 01.11.2012 г
ПРЕПАРАТЫ
Вирусный гепатит А (ВГА) является одной из наиболее распространенных в мире кишечных инфекций. Это острое заболевание печени, передающееся фекально-оральным путем, возбудителем которого является вирус гепатита А, относящийся к семейству энтеровирусов. Заболевание вирусным гепатитом А (ВГА) входит в пятерку наиболее экономически значимых инфекционных заболеваний и является одной из приоритетных проблем здравоохранения. Для ВГА характерны контактно-бытовой способ передачи инфекции, приводящий к спорадическим случаям заболевания, а также пищевой и водный пути, приводящие к вспышкам инфекции. Гепатитом А болеют преимущественно дети. Удельный вес заболеваемости детей до 14 лет в общей заболеваемости гепатитом А, по международным статистическим данным, составляет 60% и выше. Большинство зарегистрированных до настоящего времени эпидемических вспышек приходится на детский возраст. Эпидемиологическая обстановка по ВГА в России остается неблагоприятной, при этом наиболее высокий уровень заболеваемости ВГА отмечается в регионах, имеющих серьезные проблемы с обеспечением населения доброкачественной питьевой водой и состоянием систем коммунальных служб. Доля вирусного гепатита А в общей структуре вирусных гепатитов колеблется от 80 до 90%. В последние годы отмечается увеличение числа вспышек ВГА [2, 6, 7].
Решение диагностических и эпидемиологических аспектов проблемы гепатита А во многом определяется возможностями используемых методических подходов. До настоящего времени с целью детекции специфических маркеров ВГА в эпиднадзоре широко применяют иммуноферментный анализ (ИФА) для выявления специфических антител к вирусу гепатита А класса 1дМ и 1дО. Антитела класса 1дМ (анти-ВГА 1дМ) начинают вырабатываться в конце инкубационного периода, который длится в среднем в течение 30 дней, и с первых дней болезни. Антитела этого класса синтезируются у всех больных независимо от течения заболевания. Обнаружение их позволяет выявить бессимптомную инфекцию, что имеет большое практическое значение для выявления заболевших в процессе эпидемиологического обследования очагов. Синтез специфических антител 1дО (анти-ВГА 1дО) начинается в конце первой-начале второй недели болезни. Они являются маркером перенесенного вирусного гепатита А или поствакцинального иммунитета. Для диагностики острых форм ВГА этот серологический маркер значения не имеет. Вирусный антиген (АГ ВГА) серологическим диагностическим маркером не является, так как циркулирует в крови кратковременно. Его обнаруживают в фекалиях в инкубационном периоде и, как правило, в течение первых двух-трех недель болезни. Данный маркер также используется для выявления вируса гепатита А в объектах окружающей среды.
Разработка методов диагностики гепатита А и внедрение их в практику здравоохранения является одним из важнейших направлений борьбы с этой широко распространенной инфекцией.
Иммуноферментные тест-системы, направленные на выявление антител класса 1дМ к вирусу гепатита А, являются надежным средством ранней дифференциальной диагностики заболевания и необходимы для клинических и эпидемиологических исследований.
Потребности практического здравоохранения в тест-системах данного класса удовлетворены далеко не полностью.
В настоящее время в РФ зарегистрированы иммуноферментные тест-системы:
«ИФА-АНТИ-НАV-М-Рекомб», ООО НПО «Диагностические системы» Н. Новгород;
«Вектогеп А-1дМ», ЗАО «Вектор БиАльгам» Новосибирск;
«Вектогеп А-1дМ-стрип», ЗАО «Вектор-Бест» Новосибирск.
«ИФА-анти-ВГА-1дМ», ЗАО «ЭКОлаб» (г. Электро-горск Московской области).
Указанные тест-системы характеризуются:
- укомплектованностью разборными планшетами;
- возможностью их дробного использования на протяжении всего срока годности;
- время инкубации при постановке опытов составляет у «Вектогеп А-1дМ» ЗАО «Вектор БиАльгам» - 5 часов, у остальных тест-систем - 1,5 ч;
- в наборах в качестве иммуносорбента использованы полистироловые планшеты с иммобилизованными на них антителами к 1дМ человека или АГ ВГА.
Испытанию подлежали предварительно отконтроли-рованные в ГИСК им. Л. А. Тарасевича серии препаратов, качество которых соответствовало требованиям нормативной документации.
Задачами исследования являлось: сравнительное изучение диагностической эффективности 4 вышеуказанных ИФА тест-систем с помощью оценки показателей выявляемости анти-ВГА 1дМ, специфичности, вероятности установления положительного и отрицательного диагнозов, а также коэффициентов соответствия %2 и сопряженности рЫ2 [1] с препаратом сравнения.
Материалы и методы
Материалом для исследования служили образцы сывороток крови лиц, больных гепатитом А и контрольных групп.
Опытную группу представляли больные гепатитом А (взрослые - старше 18 лет) - 45 человек;
Контрольная группа (62 человека) состояла из лиц, привитых инактивированной вакциной против ГА производства ЗАО «Вектор-БиАльгам» «ГЕП-А-ин-ВАК» -30 человек; здоровых доноров, не имевших печеночной патологии в течение последних двух лет, - 32 человека. Сыворотки больных были взяты однократно на первой неделе заболевания, привитых - после завершения курса вакцинации [3-5].
Объем каждого образца сыворотки составлял не менее 0,5 мл. Аликвоты всех сывороток (по 0,2 мл) до постановки опыта хранили при температуре минус 20оС.
Отбор больных вирусными гепатитами и другими заболеваниями проводили клиницисты на основании
С33
Таблица 1. Результаты выявления анти-ВГА-1дМ в сыворотках лиц опытной и контрольных групп с помощью 4-х исследуемых ИФА тест-систем
Опытная группа Контрольные группы
№ п/п Наименование препарата Образцы сывороток Образцы сывороток
Положительные Отрицательные Положительные Отрицательные
1 «Вектогеп А-IgM-стрип» ЗАО «Вектор-Бест» 42 3 2 60
2 «ИФА-АНТИ-HAV-M-Рекомб» НПО «Диагностические системы» 42 3 1 61
3 «Вектогеп А-IgM» ЗАО «Вектор-БиАльгам» 43 2 0 62
4 «ИФА-анти-ВГА-^» ЗАО «ЭКОлаб» 43 2 1 61
тщательных клинико-лабораторных исследований (анамнез, биохимические исследования крови или ПЦР на наличие РНК вируса гепатита А).
Материалы для исследований были получены из 1-ой городской клинической больницы г. Орехово-Зуево Московской обл., Центральной реабилитационной больницы и станции переливания крови г. Павловский Посад.
Все собранные образцы сывороток больных гепатитом А и лиц контрольных групп перед исследованием были скомплектованы в блоки и зашифрованы.
Сыворотки крови исследовали с использованием коммерческих «ИФА-АНТИ-НАV-М-Рекомб», «Вектогеп А-1дМ», «Вектогеп А-1дМ-стрип», «ИФА-анти-ВГА-1дМ» тест-систем в период срока их годности согласно инструкциям по применению.
Статистическую обработку полученных данных проводили по методу альтернативной корреляции с использованием таблиц 4-х полей.
Результаты и обсуждение
Анализ результатов иммуноферментного анализа, полученных после расшифровки всего массива сывороток, показал следующее.
В группе больных гепатитом А (45 человек), клинический диагноз которых был ранее подтвержден в условиях стационара, нами было выявлено с помощью исследуемых тест-систем «ИФА-анти-ВГА-1дМ», «ИФА-АНТИ-НАV-М-Рекомб», «Вектогеп А-1дМ», «Вектогеп А-1дМ-стрип» серопозитивных сывороток 43, 42, 43, 42 соответственно.
Из 62 образцов сывороток людей контрольных групп, не содержавших по предварительным данным анти-ВГА 1дМ, исследованных нами также с помощью 4 изучаемых тест-систем, число отрицательных проб составило соответственно 61, 61, 62, 60. Результаты приведены в таблице 1.
На основании полученных результатов с помощью метода корреляционной статистики (таблицы 4-х полей) были рассчитаны показатели диагностической эффективности препаратов в двух вариантах относительно двух коммерческих тест-систем: 1) «Вектогеп
A-IgM-стрип» (табл. 2) и 2) <^A-AH™-HAV-M-PeKOM6» (табл. 3), выбранных в качестве референтных препаратов сравнения. Были определены: выявляемость, специфичность, вероятность установления положительного и отрицательного диагнозов, суммарный показатель совпадения результатов диагностики (с2).
Применение таблицы 4-х полей позволяет определять также сопряженность испытуемого и референтного препарата сравнения с помощью критерия соответствия или коэффициента с2
Однако коэффициент с2 указывает только на наличие связи между двумя препаратами и не может служить непосредственной оценкой тесноты связи. Поэтому, чтобы оценить степень взаимосвязи пользуются коэффициентами рЫ2. При этом phi2 может принимать значения от 0 до 1, где условно выделяют 5 степеней взаимосвязи:
0,01-0,04 - слабая;
0,05-0,16 - легкая;
0,17-0,36 - умеренная;
0,37-0,64 - существенная;
0,65-1,0 - сильная.
Таким образом, из отдельных цифровых показателей с помощью выбранного алгоритма можно вывести единый суммарный смысловой показатель оценки испытуемых тест-систем по степени связи с референтным препаратом, а также по отношению с другими параллельно аттестуемыми тест-системами, что и было использовано нами в работе.
Данные, представленные в таблицах 2 и 3, свидетельствуют о высокой и практически равной специфичности и выявляемости анти-ВГА IgM всеми испытуемыми тест-системами по отношению к двум препаратам, условно выбранным нами в качестве референтных для статистического обсчета. Показатели, свидетельствующие о вероятности установления положительного и отрицательного диагнозов, также незначительно варьировали и были высокими, составляя 93,7-97,8 и 95,3-98,4% относительно референтных препаратов. Из таблиц 2 и 3 видно, что значение основного смыслового показателя, свидетельствующего о степени связи между испытуемыми и референтными препаратами, колебалось в наших опытах в пределах 0,78-0,89, что в
ПРЕПАРАТЫ
®ph^2 может принимать значения от 0 до 1.
Таблица 3. Показатели диагностической эффективности препаратов «Вектогеп А-1дМ-стрип», «ИФА-анти-ВГА-1дМ», «Вектогеп А-1дМ» в сравнении с референтным препаратом «ИФА-АНТИ-HAV-M- Рекомб» (НПО «Диагностические системы»)
Таблица 2. Показатели диагностической эффективности препаратов «ИФА-АНТИ-HAV-M-Рекомб», «ИФА-анти-ВГА-1дМ», «Вектогеп А-1дМ» в сравнении с референтным препаратом «Вектогеп А-1дМ-стрип» (ЗАО «Вектор-Бест»)
Испытуемый препарат Выявляемость (%) Специфичность (%) Вероятность установления положительного диагноза (%) Вероятность установления отрицательного диагноза (%) Коэффициент соответствия С2 (%) Средний показатель сопряженности в квадрате (рМ2) *
«ИФА-АНТИ-HAV-M- Рекомб» НПО «Диагностические системы» 95,555 96,747 95,555 96,774 91,498 0,855
«ИФА-анти-ВГА-^» ЗАО «ЭКОлаб» 95,6525 98,360 97,777 96,774 95,257 0,890
«Вектогеп А-IgM» ЗАО «Вектор-БиАльгам» 95,45473 96,825 95,454 96,825 88,149 0,823
Испытуемый препарат Выявляемость (%) Специфичность (%) Вероятность установления положительного диагноза (%) Вероятность становления отрицательного диагноза (%) Коэффициент соответствия С2 (%) Средний показатель сопряженности в квадрате (рЫ2)*
«Вектогеп А-IgM-стрип» 93,181 96,825 95,348 95,312 87,310 0,816
ЗАО «Вектор-Бест»
«ИФА-анти-ВГА-^» 95,4545 98,412 97,674 98,412 94,817 0,886
ЗАО «ЭКОлаб»
«Вектогеп А-IgM» 93,023 95,312 93,023 95,312 83,494 0,780
ЗАО «Вектор-БиАльгам»
"^12 может принимать значения от 0 до 1.
соответствии с пятью градациями рЫ2, свидетельствует о сильной (от 0,65 до 1,0) степени связи между ними.
Полученные результаты характеризуют исследованные ИФА тест-системы как обладающие высокой диагностической эффективностью.
Воспроизводимость результатов оценивалась с 3 сериями тест-систем. Были взяты 30 положительных и 30 отрицательных образцов из сывороток лиц опытных и контрольных групп. Анализ показал 100% совпадение результатов при повторных постановках теста.
Литература:
1. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Ленинград: Медгиз, 1962. 179 с.
2. Вирусные гепатиты в РФ. Аналитический обзор. СПб, 2005. Вып. 5. С. 19-39.
3. Зверев В.В. Вакцинопрофилактика вирусного гепатита А // Вакцинация. 2001. № 4. С. 7.
4. Карпович Л.Г., Калашникова Т.В., Горбунов М.А. с соавт. Сравнительное изучение иммуногенно-сти инактивированной вакцины против гепатита А «ГЕП-А-ин-ВАК» по данным экспериментальных и клинических исследований // Вопр. вирусологии. 1995. № 5 С. 268-270.
5. Патент на изобретение № 2314125 «Способ получения инактивированной вакцины против вируса гепатита А». Опубл. 10.01.2008 г. ЗАО Вектор-Би-Альгам, РФ.
6. Учайкин В.Ф., Нисевич Н.И., Чередниченко Т.В. Вирусные гепатиты от А до ТТУ у детей. М.: «Новая Волна», 2003. 431 с.
7. Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Ершова О.Н. с соавт. Характеристика современных проявлений эпидемического процесса гепатита А в Российской Федерации и эффективность вакцинации для профилактики и купирования вспышки этой инфекции // Эпидемиол. вакцинопрофил. 2006. № 4. С. 21-29.
