CC BY
68
иммунология
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012
УДК 616.61-002.3-092:612.017.1]-078.33-074
В. А. Бычковских, И. И. Долгушин, Э. Н. Коробейникова
сравнительное исследование показателей иммунитета и состояния про-и антиоксидантной систем у Больных с хроническим пиелонефритом единственной почки в Активной и латентной стадии заболевания
Челябинская государственная медицинская академия
Выявлено, что у больных хроническим пиелонефритом единственной почки как в активной, так и в латентной стадии заболевания нарушены противомикробная защита организма и баланс между про- и антиоксидантными системами. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости проведения комплексного иммунологического и биохимического обследования для прогноза осложнений и оценки эффективности проводимой терапии.
Ключевые слова: единственная почка, хронический пиелонефрит, иммунитет, биохимия
V.A. Bytchkovskykh, I.I. Dolgushin, E.N. Korobeynikova
THE COMPARATIVE STUDY OF INDICATORS OF IMMUNITY AND STATE OF PRO- AND ANTIOXIDANT SYSTEMS IN PATIENTS WITH CHRONIC PYELONEPHRITIS OF SINGLE KIDNEY IN ACTIVE AND
LATENT STAGES OF DISEASE It is established that in patients with chronic pyelonephritis ofsingle kidney the antibacterial defense of organism and balance between pro- and antioxidant systems are disturbed both in active and latent stages of disease. The results testify the need of organization of comprehensive immunologic and biochemical examination to establish a prognosis of complications and evaluation of effectiveness of applied treatment.
Key words: single kidney, chronic pyelonephritis, immunity, biochemistry
Хронический пиелонефрит единственной почки является наиболее частой причиной хронической почечной недостаточности и выхода больных на инвалидность [2, 8, 10]. Больные с патологией единственной почки представляют собой наиболее тяжелую группу, что связано с высоким риском развития осложнений (обтурационной анурии, гнойно-септических осложнений, почечной недостаточности). Хронический пиелонефрит склонен к многолетнему упорному течению, что объясняется многими причинами, в том числе иммунным дисбалансом, затрагивающим все звенья иммунной системы. Последнее обстоятельство способствует генерализации воспалительных процессов, уменьшению или отсутствию эффекта лечения, повышению летальности. При этом возрастает частота скрыто текущих форм, что затрудняет диагностику и лечение больных. Все это определяет актуальность проблемы [4, 7].
Исход любой воспалительной реакции во многом зависит от состояния иммунной системы. Исследования иммунитета и его отдельных звеньев при хроническом пиелонефрите свидетельствуют о частом развитии иммуносупрессии, что может быть важным фактором патогенеза заболевания [3, 9, 11, 12].
Известно, что наряду с цитокинами роль эффективных регуляторов воспалительного процесса выполняют активные формы кислорода. Вместе с тем продолжительная суперпродукция этих частиц запускает свободнорадикальное окисление, что в конечном итоге приводит к дезорганизации многих биохимических процессов в тканях [1, 5, 6].
Для корреспонденции:
Бычковских Владимир Анатольевич, доц. каф. хирургических болезней и урологии
Адрес: 454092, Челябинск, ул. Воровского, 64 Телефон: 8 (351) 268-77-72 E-mail:52vab@inbox.ru
В литературе практически отсутствуют работы по комплексному изучению иммунохимических показателей у больных с хроническим пиелонефритом единственной почки, нет данных о сравнительной характеристике изменений параметров иммунитета в зависимости от стадии воспалительного процесса.
Цель работы - провести сравнительное исследование показателей иммунитета и состояния про- и антиоксидантной систем у больных с хроническим пиелонефритом единственной почки в активной и латентной стадии заболевания.
Материалы и методы. Исследование проводили на кафедре хирургических болезней и урологии, НИИ иммунологии и ЦНИЛ Челябинской государственной медицинской академии. Объектом исследования явились 40 больных с хроническим пиелонефритом единственной почки; из них у 21 диагностирована активная стадия воспалительного процесса и у 19 - латентная стадия. Средний возраст больных составил 44,3 ± 0,82 года. Причинами нефрэктомий были мочекаменная болезнь, гидронефроз, гнойный пиелонефрит, вторично сморщенная почка, аномалии развития, травма. Контрольную группу составили 30 сопоставимых по возрасту здоровых обследованных.
При поступлении в стационар все больные прошли стандартное комплексное обследование для подтверждения хронического пиелонефрита и степени активности воспалительного процесса. Наряду с общепринятыми методами исследования у больных изучали показатели иммунитета, перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной защиты.
Функциональное состояние фагоцитарного звена иммунной системы оценивали по фагоцитарной активности нейтрофилов, фагоцитарному числу, интенсивности фагоцитоза и результатам спонтанного и стимулированного теста с нитросиним тетразо-лием (НСТ). Лизосомальную активность нейтрофилов крови определяли по методике И. С. Фрейдлин (1986).
Определение активности компонентов комплемента С3а-С5а проводили с использованием соответствующих тест-
систем для иммуноферментного анализа производства ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург) и автоматического анализатора Personal Lab (Италия).
Содержание продуктов ПОЛ и антиоксидантной защиты оценивали, изучая первичные общие полиеновые, диеновые конъюгаты, вторичные кетодиеновые и сопряженные трие-ны, шиффовы основания. Их значения определяли в гептан-изопропановых липидных экстрактах. Активность каталазы в сыворотке крови и эритроцитах определяли по методике М. А. Королюк и соавт. (1988), исследование церулоплазмина в сыворотке крови - по методу Ревина в модификации С. В. Бестужевой и В. Г. Колб (2000), активность супероксиддисму-тазы - по методике С. Чевари и соавт. (1988). При определении С-реактивного белка (СРБ) в сыворотке крови использовали анти-СРБ-латекс-реагент. Для определения продуктов ПОЛ использовали методику И. А. Волчегорского и соавт. (1989).
При статистической обработке данных для проверки статистической достоверности различий средних в трех выборках использовали критерий Фридмана с последующим попарным сравнением групп с помощью критерия Манна—Уитни. При выполнении условий нормальности распределения использован однофакторный дисперсионный анализ с последующим попарным сравнением групп с помощью критерия Ньюмена-Кейлса. Различия считали достоверными при двустороннем уровне значимости p < 0,05. Математическую обработку результатов исследования проводили с использованием пакета прикладных программ Statistica for Windows 6.0 Excel 7.0.
Результаты и обсуждение. Сравнительный анализ показал, что у больных с хроническим пиелонефритом единственной почки в активной и латентной стадии воспаления есть общие изменения в иммунной системе: достоверное увеличение количества нейтрофилов и уменьшение количества лимфоцитов в сравнении с группой практически здоровых лиц, но в активной фазе воспаления отмечается также лейкоцитоз, достоверно высокий уровень белков острой фа-
зы: СРБ и церулоплазмина, тогда как в латентной стадии наблюдается лишь тенденция к более высокому уровню указанных белков в сравнении с контрольной группой (табл. 1, 2). Несмотря на то что фагоцитарная активность нейтрофилов одинаково увеличивалась в обеих группах обследованных, достоверных различий интенсивности фагоцитоза не выявлено. И все же в активной фазе воспаления отмечено снижение интенсивности фагоцитоза на 36%, а в латентной - на 46%. Не отмечено достоверных различий показателей в группах обследованных по показателям НСТ-теста, хотя у больных с хроническим пиелонефритом единственной почки в активной фазе воспаления показатель интенсивности спонтанного НСТ-теста снизился на 25%, а в латентной - на 36%.
Полученные результаты свидетельствуют о снижении функции фагоцитирующих клеток у больных с хроническим пиелонефритом единственной почки в обеих фазах воспаления. Вместе с тем отмечен достоверно высокий уровень лизо-сомальной активности нейтрофилов в активной и латентной фазах воспаления в сравнении с показателями в контрольной группе, что, как нам представляется, заслуживает внимания.
Известно, что белки лизосомального аппарата нейтро-фильных гранулоцитов являются физиологически активными веществами, определяющими многие закономерности процессов фагоцитоза и воспаления. Часто лизосомальный аппарат клеток включается в развитие патологических сдвигов за счет резкого неуправляемого усиления катаболических функций. Из табл. 1 видно, что у обследованных нами больных при снижении фагоцитарной активности и повышении лизосомальной активности нейтрофилов в активной и латентной стадии воспаления содержание С5а-компонента комплемента достоверно ниже, чем в контрольной группе. С5а-компонент комплемента - активный регуляторный пептид, за счет которого (совместно с другими пептидами) может осуществляться модуляция отдельных реакций воспалительного процесса. Одновременно с этим уровень СЗа-компонента комплемента у больных с хро-
Таблица 1
Показатели иммунитета у больных с хроническим пиелонефритом единственной почки в активной и латентной стадии (X ± т)
Показатель Активная фаза - 1 (n = 21) Латентная фаза - 2 (n = 19) Здоровые (n = 30) P
Лейкоциты, 109/л 8,31 ± 0,96 5,87 ± 0,27 5,45 ± 0,16 p1-2 < 0,005 p1-K < 0,005
Лимфоциты, % 14,4 ± 1,6 19,7 ± 2,3 26,0 ± 1,1 p1-K < 0,001 P2-K < 0,05
Нейтрофилы, % 73,8 ± 1,8 66,3 ± 2,7 60,0 ± 1,3 P1-K 0,001 P1-2 < 0,05 P2_K < 0,057
Активность нейтрофилов, % 40,6 ± 1,7 47,7 ± 3,0 34,5 ± 1,8 P1-K < 0,05 P2-K < 0,01
Интенсивность фагоцитоза, усл. ед. 3,46 ± 0,19 2,87 ± 0,23 5,41 ± 1,17 > 0,05
НСТ-тест нейтрофилов:
активность, % 17,6 ± 3,5 14,4 ± 2,7 23,6 ± 2,2 > 0,05
спонтанный индекс, усл. ед. 0,254 ± 0,058 0,205 ± 0,041 0,342 ± 0,036 > 0,05
НСТ-тест индуцированный:
активность, % 37,2 ± 4,5 31,0 ± 2,5 36,5 ± 2,3 > 0,05
индекс, усл. ед. 0,554 ± 0,069 0,491 ± 0,037 0,485 ± 0,039 > 0,05
Лизосомальная активность нейтрофилов, усл. ед. 269,3 ± 15,4 276,2 ± 24,2 192,6 ± 9,3 P1-K < 0,001 P2-K < 0,001
СЗа, нг/мл 143,0 ± 18,3 116,5 ± 4,5 83,5 ± 2,6 P1-K < 0,001 P2-K < 0,05 P1-2 < 0,05
С5а, нг/мл 37,5 ± 7,3 41,0 ± 7,9 98,2 ± 2,4 P1-K < 0,001 P1-K < 0,001
Примечание. Для оценки статистической значимости различий использован критерий Манна--Уитни.
Таблица 2
Показатели состояния про- и антиоксидантной систем у больных с хроническим пиелонефритом единственной почки в активной и латентной стадии (X ± т)
Показатели Ед. почка, активная фаза - 1 (n = 21) Ед. почка, латентная фаза - 2 (n = 19) Здоровые (n = 30) Р
Общие полиеновые кислоты (Е220), Ед/мл:
гептан 1,43 ± 0,12 1,73 ± 0,23 0,88 ± 0,06 P1-K < 0,05
Р2-К < 0,01
изопропанол 5,54 ± 0,61 4,78 ± 0,38 3,31 ± 0,29 A-K < 0,05
Р2-К < 0,01
Диеновые конъюгаты (Е232), Ед/мл:
гептан 0,866 ± 0,114 1,101 ± 0,176 0,597 ± 0,059 Р1-К < 0,05
Р2-К < 0,05
изопропанол 3,08 ± 0,38 2,54 ± 0,24 1,38 ± 0,28 Р1-К < 0,05
Р2-К < 0,05
Кетодиеновые, с сопряженными триеновыми (Е278), Ед/мл:
гептан 0,206 ± 0,064 0,167 ± 0,043 0,129 ± 0,022 p > 0,05
изопропанол 2,55 ± 0,72 1,73 ± 0,22 0,78 ± 0,10 Р1-К < 0,005
Р2-К < 0,005
Е232/220, усл. ед.:
гептан 0,587 ± 0,058 0,623 ± 0,029 0,746 ± 0,116 p > 0,05
изопропанол 0,553 ± 0,039 0,525 ± 0,020 0,491 ± 0,101 p > 0,05
Е278/220, усл. ед.:
гептан 0,134 ± 0,039 0,085 ± 0,015 0,155 ± 0,030 p > 0,05
изопропанол 0,398 ± 0,057 0,352 ± 0,031 0,282 ± 0,038 p > 0,05
Церулоплазмин, мг/л 332,0 ± 20,4 298,5 ± 10,0 276,3 ± 5,0 p^ < 0,005
p1-2 < 0,05
С-реактивный белок, мг/л 26,1 ± 8,0 7,1 ± 1,8 6,7 ± 0,8 p^ < 0,001
p1-2 < 0,005
Каталаза сыворотки, мкат/л 26,3 ± 2,3 28,7 ± 2,1 19,2 ± 0,9 p^ < 0,005
p^ < 0,001
Каталаза эритроцитов, мкат/л 21,4 ± 1,9 22,4 ± 2,1 26,3 ± 0,9 p^ < 0,005
p2^ < 0,01
Супероксиддисмутаза, усл. ед./мл 0,78 ± 0,14 1,01 ± 0,11 1,27 ± 0,7 p > 0,05
Коэффициент антиоксидантной защиты, усл. ед. 0,59 ± 0,10 0,54 ± 0,03 1,58 ± 0,02 p^ < 0,05
p-K < 0,05
ническим пиелонефритом единственной почки в обеих фазах заболевания достоверно превышает показатель в контрольной группе. Известно, однако, что СЗа-компонент комплемента не только увеличивает проницаемость сосудистой стенки, но и усиливает хемотаксис и активность нейтрофилов, что в свою очередь стимулирует образование протеолитических ферментов и свободных радикалов.
Таким образом, полученные результаты могут свидетельствовать о нарушении противоинфекционной защиты больных с хроническим пиелонефритом единственной почки как в активной, так и в латентной стадии воспаления.
Низкая фагоцитарная активность и высокая лизосомальная акивность нейтрофилов служит, вероятно, прогностическим признаком хронизации процесса. Лизосомы могут накапливать продукты ПОЛ, выступая как вторичные антиоксиданты, но при этом они сами повреждаются, высвобождая ферменты в цитоплазму и вызывая гибель субклеточных структур. Наши данные по изучению показателей ПОЛ и антиоксидантной защиты показали, что у больных с пиелонефритом единственной почки в обеих фазах заболевания абсолютное содержание всех продуктов ПОЛ в сыворотке крови (за исключением ке-тодиеновых с сопряженными триеновыми в гептановом ли-пидном экстракте в латентной фазе) достоверно превышает
показатели у практически здоровых людей (см. табл. 2). В то же время относительное содержание продуктов ПОЛ (и. е. о.) имеет лишь тенденцию к повышению, что может косвенно свидетельствовать о снижении окислительной способности жирных кислот и энергодефиците. Подобное заключение подтверждается достоверно высоким уровнем общих полиеновых и низкой НСТ-активностью у обследованных в обеих стадиях воспаления (см. табл. 1, 2).
Образование высоких концентраций активных форм кислорода и накопление продуктов ПОЛ ведет к истощению системы антиоксидантной защиты, что проявляется в интенсификации деструктивных процессов. Наши данные по изучению показателей антиоксидантной защиты у обследованных больных с хроническим пиелонефритом единственной почки показали, что активность супероксиддисмутазы в активной стадии воспаления достоверно ниже, чем в контрольной группе. В латентной стадии у больных имеется тенденция к снижению активности этого фермента. Одновременно у больных активность каталазы в эритроцитах в обеих фазах заболевания достоверно ниже, а в сыворотке крови - достоверно выше, чем у здоровых людей (см. табл. 2). Учитывая, что каталаза - внутриклеточный фермент, низкая его активность в эритроцитах и высокая - в сыворотке крови является
показателем нарушения клеточных мембран и выхода фермента в кровь.
У обследованных больных с хроническим пиелонефритом единственной почки только в активной стадии достоверно увеличено содержание церулоплазмина, который обладает супероксиддисмутазной активностью. Возможно, это компенсаторная реакция организма. В то же время известно, что це-рулоплазмин при активации свободнорадикального окисления может проявлять прооксидантную активность вместо антиок-сидантной. Коэффициент антиоксидантной защиты у больных с хроническим пиелонефритом единственной почки в активной и латентной стадии воспаления достоверно ниже, чем в контрольной группе (см. табл. 2).
Полученные результаты свидетельствуют об активности процессов ПОЛ и нарушении баланса между про- и антиокси-дантной системами у обследованных больных в обеих фазах заболевания.
Таким образом, проведенное сравнительное исследование позволило установить, что у больных с хроническим пиелонефритом единственной почки нарушены противоинфекци-онные реакции иммунной системы и баланс между про- и антиоксидантной системами как в активной, так и в латентной стадии заболевания. Отмеченные изменения могут иметь значение в генезе ряда ведущих симптомов этого тяжелого заболевания. Полученные результаты, по нашему мнению, свидетельствуют о необходимости проведения комплексного иммунологического и биохимического обследования больных с хроническим пиелонефритом единственной почки, которое может быть использовано для прогноза осложнений (низкая
фагоцитарная и высокая лизосомальная активность) и тяжести состояния больных, а также для проведения целенаправленной терапии с целью коррекции нарушений в иммунной и антиоксидантной системах и оценки эффективности проводимой терапии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Большая энциклопедия медицинской диагностики / Абрамович О. Д., Попович С. Е., Самарцев П. К. и др. - М., 2007. - С. 343.
2. Босин В. Ю, Дерюгина Л. А. // Сов. мед. - 1990. - № 8. - С. 41-51.
3. Винницкий Л. И., Бунятян К. А., Инвияева Е. В. // Аллергол. и иммунол. - 2007. - Т. 8, № 2. - С. 203-205.
4. Калугина Г. В., Клушанцева М. С., Шехаб Л. Ф. Хронический пиелонефрит. - М., 1993.
5. Корецкая И. А., Гева О. Н., Вавилова Т. П. // Клин. лаб. диагн. -2010. - № 9. - С. 60-64.
6. Лабораторные методы исследования / Под ред. В. В. Меньшикова. - М., 1987.
7. Переверзев А. С. Инфекции в урологии. - Харьков, 2006.
8. Румянцев В. Ю., Лопаткин Н. А., Яненко Э. К. // Урология. -2001. - № 4. - С. 6-9.
9. ТерехинаН. А., ПетровичЮ. А. Свободно-радикальное окисление и антиоксидантная система. - Пермь, 1992.
10. Baudoin P., Provost A. P., Molenuar J. C. // Am. J. Kidney Dis. -1993. - Vol. 21, N 6. - P. 603-611.
11. ReeaR. S. // Rev. Med. Microbiol. - 1992. - Vol. 3. - P. 9-14.
12. Roberts J. A., KuackM. B., Martin L. N. // Urol. Res. - 1995. - Vol. 23, N 1. - P. 33-37.
Поступила 22.04.11
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 616.916.1-078.33
С. Г. марданлы, Е. А. Амелина, Р. Р. Гафаров
разработка иммуноферментных тест-систем для диагностики краснухи
Закрытое акционерное общество «ЭКОлаб», Электрогорск московской области
Разработаны две новые иммуноферментные тест-системы для лабораторной диагностики краснухи, в которых использованы натуральный антиген вируса краснухи. Тест-системы по своим характеристикам не уступают известным зарубежным аналогам и могут быть рекомендованы для широкого использования в клинико-диагностических лабораториях учреждений здравоохранения при определении антител классов G, M к вирусу краснухи как для диагностики заболевания, так и для массового серологического изучения иммунного статуса населения и оценки эффективности вакцинации.
Ключевые слова: иммуноферментный анализ, антитела, краснуха
S.GMardanly, Ye.A. Amelina. R.R. Gafarov
THE DEVELOPMENT OF IMMUNE-ENZYME TEST-SYSTEMS TO DIAGNOSE RUBELLA
Two new immune-enzyme test-systems are developed to diagnose rubella using the natural antigen of rubella virus. The test-systems by their characteristics are equal with the known international models and can be recommended for large implementation in clinical diagnostic laboratories of health institutions to detect antibodies classes G, M to rubella virus both for disease diagnosis and mass serologic examination of immune status ofpopulation and evaluation of effectiveness of vaccination.
Key words: immune-enzyme analysis, antibody, rubella
Среди методов серологической диагностики краснухи в настоящее время наиболее отвечает требованиям лабораторной практики иммуноферментный анализ (ИФА). Он достаточно прост, быстровыполним, высокочувствителен и специфичен; возможна автоматизация постановки и документирования результатов анализа.
Для корреспонденции: Амелина Елена Анатольевна, сотр.
Адрес: 142530, Московская обл., Электрогорск, ул. Буденного, 1
Телефон: (49643) 3-17-45
Е-таП:еко1аЬ^еЬ^аг@таП.га
Известно, что антитела класса М (]^М-антитела) к вирусу краснухи появляются в крови уже через 1 нед после инфицирования и сохраняются в течение последующих 1-3 мес. Антитела класса О (^О-антитела) появляются вскоре после появления IgМ-антител и сохраняются, как правило, на всю оставшуюся жизнь [5]. Только в редких случаях их не удается определить через 15-20 лет после перенесенной краснухи. Реинфицирование в таких случаях приводит к их повторному появлению с резким подъемом титров на фоне бессимптомного течения инфекции.
С учетом этих особенностей динамики антителообразова-ния при краснухе ИФА может быть использован как для ранней диагностики первичной краснухи, так и для диагностики
