СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ РИД, ИФА И РНИФ ПРИ ЛЕЙКОЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

ВЕТЕРИНАРИЯ И ЗООТЕХНИЯ

УДК 619:616.9-636.2

СТ. БАИСЕИТОВ1, Н.Н. НОВИКОВА2, ВС. ВЛАСЕНКО2, А.П. КРАСИКОВ

Омский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина, Омск

2

Омский аграрный научный центр, Омск

1

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ РИД, ИФА И РНИФ ПРИ ЛЕЙКОЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Согласно «Ветеринарным (ветеринарно-санитарным) правилам», действующим в настоящее время в Республике Казахстан, при выявлении коров, инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), приоритет отдается серологическим исследованиям сыворотки крови: реакции иммуно-диффузии в геле агара (РИД) и иммуноферментному анализу (ИФА). Однако ни РИД, ни более чувствительный метод ИФА не лишены недостатков. Поэтому огромное значение приобретает поиск других высокоинформативных методов лабораторной диагностики лейкоза крупного рогатого скота. Одним из них, по нашему мнению, может стать реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ), которая, наряду с ИФА и полимеразной цепной реакцией (ПЦР), согласно данным научной литературы стала неотъемлемой частью протокола исследований при большинстве заболеваний инфекционной природы. В связи с этим целью работы стало сравнительное изучение эффективности существующих методов диагностики ВЛКРС инфекции (РИД, ИФА) с РНИФ. Для реализации намеченной цели на четырех сельскохозяйственных предприятиях, расположенных в Северо-Казахстанской и Костанайской областях Республики Казахстан, суммарно было отобрано 783 пробы сыворотки крови от крупного рогатого скота в возрасте от двух лет и старше. Результаты проведенных серологических исследований тремя методами показали, что минимальное количество носителей ВЛКРС было отмечено в РИД - 216, что составило 27,6%. В то же время с помощью ИФА и РНИФ было дополнительно выявлено 18 (3,2%) животных-вирусоносителей, при этом в 99% случаев отмечено совпадение показаний двух методов. Таким образом, оценку диагностической эффективности методов можно представить в виде цепочки ИФА > РИД < РНИФ, ИФА > РНИФ.

Ключевые слова: лейкоз, крупный рогатый скот, Республика Казахстан, диагностика, иммуноф-люоресценция.

Введение

Лейкоз крупного рогатого скота является серьезной проблемой для скотоводства в Республике Казахстан, где, также как и в ряде других стран мира, данное заболевание доминирует в структуре инфекционной патологии [1-7].

В системе диагностических мероприятий вирусной инфекции особую значимость и распространение получили методы, основанные на выявлении антител к антигену вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), такие как реакция иммунной диффузии (РИД) и иммуноферментный анализ (ИФА), с помощью которых в республике осуществляется эпизоотологический контроль. Однако особенности течения лейкоза, заключающиеся в том, что при развитии заболевания у одного и того же животного может волнообразно подниматься и снижаться уровень антител, а в некоторых случаях проте-

© Байсеитов С.Т., Новикова Н.Н., Власенко В.С., Красиков А.П.|, 2020

кать без их образования, значительно осложняют диагностику данного заболевания. Многими исследователями отмечается, что ни один из используемых в настоящее время методов не позволяет однозначно выявлять всех животных-вирусоносителей. Так, согласно данным научной литературы диагностическая эффективность РИД составляет около 76%, а ИФА - свыше 83% [8-10]. Поэтому поиск путей эффективной диагностики этого заболевания является одной из важнейших задач современной ветеринарной науки.

Одним из высокоинформативных методов лабораторной диагностики, который наряду с ИФА и полимеразной цепной реакцией (ПЦР) стал неотъемлемой частью протокола исследований при большинстве заболеваний инфекционной природы, является реакция непрямой иммунофлюоресценции [11; 12].

В связи с изложенным предметом исследовательского интереса стало сравнительное изучение диагностической эффективности РИД, ИФА и РНИФ при лейкозе крупного рогатого скота.

Материал и методы исследований

Материалом для исследования служили пробы сыворотки крови от крупного рогатого скота красной степной и голштино-фризской пород разных возрастных групп (с 24-месячного возраста) из четырех хозяйств Северо-Казахстанской и Костанайской областей, имеющих условные обозначения А, Б, В и Г. Всего исследовано 783 животных.

Носительство ВЛКРС у коров определялось c помощью РИД в агаровом геле с использованием наборов Курской биофабрики согласно наставлению производителя (фирма «Биок», Россия). ИФА проводили в соответствии с инструкцией по применению диагностического набора для обнаружения специфических антител в сыворотке крови (производство компании ID Vet, Франция). Учет и интерпретацию результатов реакции осуществляли с помощью ИФА анализатора Multiscan FX (Thermo Scientific).

РНИФ проводили по общепринятой методике с компонентами из набора для диагностики лейкоза в РИД и люминесцирующей сывороткой против глобулинов быка (производство института им. Н.Ф. Гамалеи). Люминесценцию антител регистрировали по четырехкрестной системе с оценкой не менее трех крестов на микроскопе AXIOSTAR PLUS (производство CARL ZEIS, Германия).

Результаты исследований и их обсуждение

Анализ полученных результатов, представленных в табл. 1, показал, что количество РИД-позитивных проб на разных сельхозпредприятиях варьировало от 31 до 87, что составило 17,7-35,65% от числа проведенных исследований. В общей сложности с помощью РИД выявлено 216 вирусоносителей (27,6%).

Таблица 1

Результаты диагностических исследований на лейкоз в РИД, ИФА и РНИФ

Буквенные обозначения объектов Количество исследуемых проб Выявлено носителей ВЛКРС, гол. (%)

РИД ИФА РНИФ

А 217 53 (24,4) 60 (27,65) 60 (27,65)

Б 175 31 (17,7) 35 (20,0) 35 (20,0)

В 244 87 (35,65) 87 (35,65) 86 (35,2)

Г 147 45 (30,6) 51 (34,7) 51 (34,7)

Итого 783 216 (27,6) 233 (29,75) 232 (29,6)

В ИФА и РНИФ по сравнению с РИД число проб, имеющих антитела к вирусу лейкоза, увеличилось соответственно до 233 (29,75%) и 232 (29,6%). Повышенное количество носителей ВЛКРС, выявленное с помощью ИФА и РНИФ, наблюдалось

только на сельхозпредприятиях А, Б и Г, при этом с помощью этих методов дополнительно выделено от 2,3 до 4,1% инфицированных животных. Следует отметить, что по результатам сравнительных испытаний ИФА и РНИФ установлено 100%-ное их совпадение в этих трех хозяйствах. Еще в одном объекте (пункт В) отклонение было несущественным.

Образование комплекса «антиген - антитело» в случае положительной РНИФ наблюдали в люминесцентном микроскопе как зеленое свечение (рисунок).

Положительный результат реакции непрямой флюоресценции (зеленое свечение с оценкой на 4 креста) в поле зрения люминисцентного микроскопа: увеличение 10 х 100

На следующем этапе были проанализированы случаи совпадения и расхождения в РИД, ИФА и РНИФ. Результаты представлены в табл. 2.

Таблица 2

Результаты сравнительной оценки диагностической эффективности РИД, ИФА и РНИФ

Статус животных Количество голов ИФА РНИФ ИФА (+) РНИФ (+)

ИФА (-) ИФА (+) РНИФ (-) РНИФ (+)

РИД (-) 567 549 18 549 18 17

РИД (+) 216 1 215 2 214 214

Всего 783 550 233 551 232 231

Примечание. Т (-) отрицательная реакция; (+) положительная реакция.

Результаты, представленные в табл. 2, свидетельствуют о том, что ИФА и РНИФ являются более чувствительными, чем РИД, методами. Так, с их помощью было дополнительно выявлено 18 (3,2%) инфицированных животных, отрицательных в РИД, при этом в 17 случаях реакция была положительной одновременно в ИФА и РНИФ.

Следует отметить, что из 233 проб, давших положительные результаты в ИФА, в 231 случае (99%) отмечены совпадения с РНИФ, что указывает на идентичность диагностической эффективности этих методов. В то же время совпадения РИД с ИФА и РНИФ составили свыше 98%, наблюдались лишь единичные случаи расхождения результатов. В частности, отмечена у одного животного положительная реакция в ИФА на фоне отрицательных результатов в РИД и РНИФ. Сходная картина наблюдалась еще

в одном случае, но с той разницей, что РНИФ была позитивной, тогда как показатели РИД и ИФА были негативными.

Заключение

На основании сравнительного анализа диагностической эффективности существующих методов диагностики ВЛКРС (РИД и ИФА) с РНИФ можно заключить, что реакция непрямой иммунофлюоресценции имеет достаточно высокую чувствительность, сопоставимую с ИФА. Схематично результативность лабораторных методов можно представить в цепочке: ИФА > РИД < РНИФ, ИФА > РНИФ.

В настоящее время из-за высокой стоимости наборов и оборудования для проведения иммуноферментного анализа метод не приобрел достаточно широкого распрастранения, поэтому, согласно ветеринарно-санитарным правилам, действующим на территории Республики Казахстан [13], его используют только для уточнения диагноза при выявлении положительного результата в РИД. В связи с этим считаем, что РНИФ может найти успешное применение для постановки диагноза на ВЛКРС в качестве альтернативного метода.

1 2 2 -7

S.T. Bajseitov , N.N. Novikova , V.S. Vlasenko , A.P. Krasikov

1

Omsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin, Omsk Omsk Agrarian Scientific Center, Omsk

2

Comparative evaluation of diagnostic efficiency of immunodiffusion reaction (IDR),

ELISA and indirect reaction of immunofluorescence (IIR) for cattle leukemia

In the current "Veterinary (Veterinary Sanitary) Rules" of the Republic of Kazakhstan, when detecting cows infected with bovine leukemia virus (BLV), priority is given to serological studies of blood serum: agar gel immunodiffusion reactions (IDR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). However, neither the IDR nor the more sensitive ELISA methods are not without drawbacks. Therefore, the search for other highly informative methods for laboratory diagnosis of cattle leukemia is of great importance. One of them, in our opinion, may be the indirect immunofluorescence reaction which, along with ELISA and polymerase chain reaction (PCR), according to the literature, has become an integral part of the research protocol for most diseases of an infectious nature. In this regard, the aim of our work was a comparative study of the effectiveness of existing methods for the diagnosis of BLV infection (IDR, ELISA) with IIR. To achieve this goal, a total of 783 blood serum samples were taken from cattle aged 2 years and older in 4 agricultural enterprises located in the North Kazakhstan and Kostanay Regions of the Republic of Kazakhstan. The results of serological studies carried out by three methods showed that the minimum number of carriers of BLV was noted in IDR - 216, which amounted to 27.6%. At the same time, using ELISA and IIR, an additional 18 (3.2%) virus-bearing animals were detected, while in 99% of cases, the coincidence of the two methods was noted. Thus, an assessment of the diagnostic effectiveness of the methods can be represented in the form of a chain of ELISA > IDR < IIR, ELISA > IIR.

Keywords: leukemia, cattle, Republic of Kazakhstan, diagnosis, immunofluorescence.

Список литературы References

1. Бахтахунов Ю.Х. Мониторинг и анализ 1. Bahtahunov Yu.H. Monitoring i analiz эпизоотической ситуации по распространенности epizooticheskoj situacii po rasprostranennosti lejkoza лейкоза крупного рогатого скота в Казахстане / krupnogo rogatogo skota v Kazahstane / Yu.H. Bah-Ю.Х. Бахтахунов, С.Б. Маманова, У.Г. Рахметова // tahunov, S.B. Mamanova, U.G. Rahmetova // Инновационные агробиотехнологии в животновод- Innovacionnye agrobiotekhnologii v zhivotnovodstve i стве и ветеринарной медицине : сб. тр. I Евразий- veterinarnoj medicine : sb. tr. I Evrazijskoj nauch.-ской науч.-практ. конференции (17-20 ноября, prakt. konferencii (17-20 noyabrya, Sankt-Peterburg). -Санкт-Петербург). - СПб., 2015. - С. 36-39. SPb., 2015. - S. 36-39.

2. Гулюкин М.И. Мониторинг эпизоотиче- 2. Gulyukin M.I. Monitoring epizooticheskoj ской ситуации по лейкозу крупного рогатого скота situacii po lejkozu krupnogo rogatogo skota v tovarnyh в товарных и племенных хозяйствах Российской i plemennyh hozyajstvah Rossijskoj Federacii za 2014

Федерации за 2014 и 2015 годы / М.И. Гулюкин, И.И. Барабанов, Л.А. Иванова [и др.] // Ветеринария и кормление. - 2016. - № 4. - С. 5-41.

3. Власенко В.С. Математическое моделирование проявления серологических реакций при лейкозной инфекции в Омской области / В.С. Власенко, Е.С. Борисов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - 2018. - Т. 234(II). - С. 53-58.

4. Просвирнин Г.С. Анализ эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в отдельных регионах РФ / Г.С. Просвирнин // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2019. - № 2. - С. 36-39.

5. Rodriguez S.M. Preventive and therapeutic strategies for bovine leukemia virus : lessons for HTLV / S.M. Rodriguez, A. Florins, N. Gillet [et al.] // Viruses. - 2011. - Vol. 3(7). - P. 1210-1248.

6. Krasikov A.P. Kazahstan Respublikasy SoltYStik Kazahstan oblysynda IKM lejkozynyH virusy bojynsha jepizootologija ly^sholu / A.P. Krasikov, A.T. Eleusizova, S.T. Bajseitov // "3i: intellect, idea, innovation - intellekt, ideja, innovacija". - 2018. -№ 1. - S. 46-52.

7. Yu C. Genotyping bovine leukemia virus in dairy cattle of Heilongjiang, north eastern China / C. Yu, X. Wang, Y. Zhou // BMC Vet. Res. - 2019. -Vol. 15(1). - № 179. - URL: https://doi.org/10.1186/s12917-019-1863-3.

8. Крикун В.А. Лейкоз крупного рогатого скота и иммунологическая толерантность / В.А. Крикун // Ветеринария. - 2002. - № 6. - С. 7-9.

9. Двоеглазов Н.Г. Оценка эффективности различных методов диагностики инфекции вируса лейкоза крупного рогатого скота : автореф. дис. ... кан. вет. наук: 16.00.03 / Двоеглазов Николай Геннадьевич. - Новосибирск, 2009. - 20 с.

10. Ковалюк Н.В. Методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота : учеб. пособие / Н.В. Ковалюк, Л.И. Якушева. - М. : Россельхоз-академия, 2012. - 39 с.

11. Москалец О.В. Сравнительная характеристика лабораторных методов диагностики инфекционной патологии в клинической практике / О.В. Москалец, А.Е. Машков, Е.З. Друзюк [и др.] // Педиатрия. - 2006. - № 5. - С. 32-35.

12. Урываев Л.В. О контаминации клеточных культур вирусом диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота (BVDV) / Л.В. Урываев, А.В. Дедова, Л.В. Дедова [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2012. - Т. 153. - № 1. - С. 88-93.

13. Ветеринарные (ветеринарно-санитар-ные) правила. Утверждены приказом Министра сельского хозяйства Республики Казахстан от 29 июня 2015 года № 7-1/587. Зарегистрированы в Министерстве юстиции Республики Казахстан 25 августа 2015 года № 11940.

i 2015 gody / M.I. Gulyukin, I.I. Barabanov, L.A. Ivanova [i dr.] // Veterinariya i kormlenie. -2016. - № 4. - S. 5-41.

3. Vlasenko V.S. Matematicheskoe modeliro-vanie proyavleniya serologicheskih reaktsiy pri ley-koznoy infektsii v Omskoy oblasti / V.S. Vlasenko, E.S. Borisov // Uchenyie zapiski KGAVM im. N.E. Baumana. - 2018. - T. 234(II). - S. 53-58.

4. Prosvirnin G.S. Analiz epizooticheskoj situacii po lejkozu krupnogo rogatogo skota v otdel'nyh regionah RF / G.S. Prosvirnin // Voprosy normativno-pravovogo regulirovaniya v veterinarii. -2019. - № 2. - S. 36-39.

5. Rodriguez S.M. Preventive and therapeutic strategies for bovine leukemia virus : lessons for HTLV / S.M. Rodriguez, A. Florins, N. Gillet [et al.] // Viruses. - 2011. - Vol. 3(7). - P. 1210-1248.

6. Krasikov A.P. Kazahstan Respublikasy SoltYStik Kaza^stan oblysynda IKM lejkozynyH virusy bojynsha jepizootologija ly^sholu / A.P. Krasikov, A.T. Eleusizova, S.T. Bajseitov // "3i: intellect, idea, innovation - intellekt, ideja, innovacija". - 2018. -№ 1. - S. 46-52.

7. Yu C. Genotyping bovine leukemia virus in dairy cattle of Heilongjiang, north eastern China / C. Yu, X. Wang, Y. Zhou // BMC Vet. Res. - 2019. -Vol. 15(1). - № 179. - URL: https://doi.org/10.1186/s12917-019-1863-3.

8. Krikun V.A. Lejkoz krupnogo rogatogo skota i immunologicheskaya tolerantnost' / V.A. Krikun // Veterinariya. - 2002. - № 6. - S. 7-9.

9. Dvoeglazov N.G. Ocenka effektivnosti raz-lichnyh metodov diagnostiki infekcii virusa lejkoza krupnogo rogatogo skota : avtoref. dis. ... kan. vet. nauk: 16.00.03 / Dvoeglazov Nikolaj Gennad'evich. -Novosibirsk, 2009. - 20 s.

10. Kovalyuk N. V. Metody diagnostiki lejkoza krupnogo rogatogo skota : ucheb. posobie / N.V. Kovalyuk, L.I. Yakusheva. - M. : Rossel'hozakademiya, 2012. - 39 s.

11. Moskalec O.V. Sravnitel'naya harakteristika laboratornyh metodov diagnostiki infekcionnoj patolo-gii v klinicheskoj praktike pediatriya / O.V. Moskalec, A.E. Mashkov, E.Z. Druzyuk [i dr.] // Pediatriya. -2006. - № 5. - S. 32-35.

12. Uryvaev L.V. O kontaminacii kletochnyh kul'tur virusom diarei - bolezni slizistyh obolochek krupnogo rogatogo skota (BVDV) / L.V. Uryvaev, A.V. Dedova, L.V. Dedova [i dr.] // Byulleten' ekspe-rimental'noj biologii i mediciny. - 2012. - T. 153. -№ 1. - S. 88-93.

13. Veterinarnye (veterinarno-sanitarnye) pravi-la. Utverzhdeny prikazom Ministra sel'skogo ho-zyajstva Respubliki Kazahstan ot 29 iyunya 2015 goda № 7-1/587. Zaregistrirovany v Ministerstve yusticii Respubliki Kazahstan 25 avgusta 2015 goda № 11940.

Байсеитов Саят Тулебаевич, аспирант, Омский ГАУ, sayat_bayseitov@mail.ru; Новикова Наталья Николаевна, канд. вет. наук, Омский АНЦ, novnik00@mail.ru; Власенко Василий Сергеевич, д-р биол. наук, доц., Омский АНЦ, 76@list.ru; Красиков Александр ПантелеевиЧ, д-р вет. наук, проф., Омский ГАУ.

Baiseitov Sayat Tulebaevich, Postgraduate, Omsk SAU, sayat_bayseitov@mail.ru; Novikova Natalia Nikolaevna, Cand. Vet. Sci., Omsk ASC, nov-nik00@mail.ru; Vlasenko Vasily Sergeevich, Doc. Biol. Sci., Ass. Prof., Omsk ASC, vvs-76@list.ru;

Krasikov Alexander Panteleyevich|, Doc. Vet. Sci.

Prof., Omsk SAU.

УДК 619:616:577:636.2

М.В. ЗАБОЛОТНЫХ1, Е.Н. ИЛЬ2, Д.Е. ИЛЬ2

1 Омский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина, Омск, Российская Федерация

2Северо-Казахстанский государственный университет им. М. Козыбаева, Петропавловск, Республика Казахстан

ВЛИЯНИЕ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ «ФЕЛУЦЕН» НА МЕТАБОЛИЗМ И ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНУЮ ОЦЕНКУ МОЛОКА ВЫСОКОПРОДУКТИВНЫХ КОРОВ

В настоящее время из-за интенсивного внедрения инновационных технологий в животноводство и увеличения производства молока наблюдается чрезмерная функциональная нагрузка на все органы и системы организма животного, следствием этого являются глубокие метаболические нарушения в организме, в результате которых происходит преждевременная выбраковка животных с относительно высокими показателями продуктивности. Особое значение имеют нарушения обмена веществ, они рассматриваются не как заболевание конкретного органа, а как заболевание организма в целом. Своевременные и адекватные корректирующие действия помогут в достижении главной цели для сельскохозяйственного производителя - в получении больших объемов высококачественного молока от здоровых коров. Проведение ежемесячных анализов молока в централизованной организации и практическое использование результатов, достигнутых международными производителями молока при реализации стратегии по улучшению молочного стада, может привести к получению дополнительной тонны молока в год от одной коровы. Иными словами, это может быть достижимо при минимизации случаев клинического и субклинического кетоза благодаря лучшему контролю здоровья стада и качества молока. Качество молока и продуктов, изготовленных из него, напрямую зависит от здоровья животного и хода обменных процессов в его организме. Стрессы, нарушение режимов кормления, содержания, доения коров приводят к нарушению обмена веществ, а также к снижению качества молока и значительному экономическому ущербу. Метаболические процессы напрямую связаны с молочной продуктивностью, с показателями продуктивности. С увеличением производства молока риск метаболических нарушений увеличивается. Высокие надои указывают на то, что кормление должно основываться на точном расчете рациона, безупречном управлении кормом, а также на мониторинге и анализе наиболее важных данных о продуктивности. Целью исследований явилось изучение влияния кормовой добавки «Фелуцен» при коррекции метаболических нарушений и определении ветеринарно-санитарной оценки молока у высокопродуктивных коров. Исследования проводились на высокопродуктивных коровах симментальской породы с введением опытной группе в комбикорм кормовой добавки в дозировке 350 грамм на голову в сутки. Весь материал получен с помощью лабораторных, биохимических и статистических методов. После введения в рацион питания животных кормовой добавки повысилась продуктивность коров, наблюдается улучшение вете-ринарно-санитарной оценки молока, показатели крови приблизились к норме и увеличились сроки эксплуатации животных. Комплексная кормовая добавка «Фелуцен» оказывает регулирующее действие на усвоение кальция и каротина, способствует нормализации функций печени за счет снижения активности

© Заболотных М.В., Иль Е.Н., Иль Д.Е., 2020