CC BY
15
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии явного или потенциального конфликта интересов, связанного с публикацией статьи.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Литература /References
1. Miyake K. Innate immune sensing of pathogens and danger signals by cell surface Toll-like receptors. Semin Immunol. 2007;19(1): 3-10. DOI: 10.1016/j.smim.2006.12.002.URL: https:// pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17275324/ (accessed 10.05.2022).
2. Богодухова Е.С., Байке Е.Е. Полиморфизм генов Toll-подобных рецепторов как возможный фактор предрасположенности к развитию туберкулеза // Туберкулез и болезни легких. 2018. Т 96. № 9. С. 11-16. [Bogodukhova E.S., Baike E.E. Polymorphism of genes of Toll-like receptors as a potential factor of predisposition to tuberculosis. Tuberkulez i bolezni legkikh. 2018;96(9):11-16. (In Russ.)] DOI: 10.21292/2075-1230-2018-96-9-11-16.
3. Isik Z., Leblebici A., Demir Karaman E., Karaca C., Ellidokuz H., Koc A. et al. In silico identification of novel biomarkers for key players in transition from normal colon tissue to adenomatous polyps. PLoS ONE 2022;17(4): e0267973. DOI: 10.1371/journal.pone.0267973 Available at: URL:https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/ journal.pone.0267973 (accessed 10.05.2022).
4. Okun E., Griffioen K.J., Lathia J.D., Tang S.C., Mattson M.P. et al. Toll-like receptors in neurodegeneration. Brain Res Rev. 2009;59(2): 278-292. DOI: 10.1016/j. brainresrev.2008.09.001. Available at: URL:https://pubmed. ncbi.nlm.nih.gov/18822314/(accessed 10.05.2022).
5. Lang T.A., Altman D.G. Statistical analyses and method in the published literature: The SAMPL guidelines. Medical Writing. 2016; 5(3): 31-36. DOI: 10.18243/ eon/2016.9.7.4 Available at: URL:https://journal.emwa.org/ statistics/statistical-analyses-and-methods-in-the-published-literature-the-sampl-guidelines/ (accessed 07.05.2022).
6. Мудров В.А. Алгоритмы статистического анализа качественных признаков в биомедицинских исследова-
ниях с помощью пакета программ SPSS // Забайкальский медицинский вестник. 2020. №1. С. 151-163. [Mudrov V.A. Statistical analysis algorithms of qualitative features in biomedical research using the SPSS software package. Zabaikal'skiimeditsinskii vestnik. 2020; 1: 151-163. (In Russ.)]
7. Rea L., Parker R. Designing and conducting research. 4thEdition. San-Francisco: Jossey-Bass, 2014. 353 p.
8. Тюкавкина С.Ю., Лабушкина А.В., Оксенюк О.С. Роль Toll-подобных рецепторов в иммунопатоге-незе нефропатий // Журнал фундаментальной медицины и биологии. 2017. №1. С. 17-26. [Tyukavkina S.Yu., Labushkina A.V., Oksenyuk O.S. The role of Toll-like receptors in the immunopathogenesis of the nephropathies with fibrosis. Zhurnal fundamental'noi meditsiny i biologii. 2017;1:17-26. (In Russ.)] Доступно по: URL: https://cyberleninka.ru/ article/n/rol-toll-podobnyh-retseptorov-v-immunopatogeneze-nefropatiy. Ссылка активна на 02.06.2022.
9. Крохалева Ю.А., Страмбовская Н.Н. Но-сительство генетического полиморфизма Толл-рецепторов и концентрация IL-1P, IL-6 в плазме крови у больных мозговым инсультом // Успехи современного естествознания. 2015. № 7. С. 7-11 [Krokhaleva Yu.A., Strambovskaya N.N. Nositel'stvo geneticheskogo polimorfizma TOLL-retseptorov i kontsentratsiya IL-1P, IL-6 v plazme krovi u bol'nykh mozgovym insul'tom. Uspekhi sovremennogo estestvoznaniya. 2015;7:7-11. (In Russ.)] Доступно по: URL: https://natural-sciences.ru/ru/article/ view?id=35479. Ссылка активна на 02.06.2022.
10. Freeley S.J., Giorgini A., Tulone C., Popat R.J., Horsfield C. et al. Toll-Like Receptor 2 or Toll-Like Receptor 4 Deficiency Does Not Modify Lupus in MRLl pr Mice. PLoS ONE 2013;8(9): e74112. DOI:10.1371/journal.pone.0074112 Available at: URL:https://journals.plos.org/plosone/ article?id=10.1371/journal.pone.0074112 (accessed 30.05.2022)
11. Li X.X., Sun G.P., Meng J., Li X., Tang YX. etal. Role of Toll-Like Receptor 4 in Colorectal Carcinogenesis: A Meta-Analysis. PLoS ONE. 2014; 9(4): e93904. DOI:10.1371/journal. pone.0093904Available at: URL:https://journals.plos.org/plosone/ article?id=10.1371/journal.pone.0093904 (accessed 30.05.2022).
УДК 576.53 DOI 10.24412/2220-7880-2023-1-41-45
сравнение методов выделения мононуклеаров
из костного мозга для получения мезенхимальных стромальных клеток
Пестрикова А.О., Попонина Е.А., БутолинаМ.А., Исаева Н.В., Минаева Н.В., Зорина Н.А., Фокина Е.С.
ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови ФМБА России», Киров, Россия (610027, г. Киров, ул. Красноармейская, 72), e-mail: pestrikova.work@gmail.com
Применение мезенхимальных стромальных клеток (МСК) для научных исследований и клеточной терапии требует их выращивания в достаточных количествах in vitro. В качестве источника предшественников МСК в настоящее время наиболее часто используется костный мозг. Выделение фракции мононуклеаров из костного мозга возможно несколькими способами. Целью данного исследования является сравнение градиентного и седиментационного методов выделения мононуклеаров из костного мозга, предназначенных для дальнейшего получения МСК. В настоящей работе проведено сравнение результатов выделения мононуклеаров у 25 здоровых лиц и 45 больных множественной миеломой с применением градиента плотности Lympholite-H и 0,2%-ного раствора метилцеллюлозы. Последующий посев в питательную среду позволяет получить первичную культуру МСК. Проведены расчет эффективности выделения мононуклеаров, а также оценка функциональной активности выделенных клеток путем определения количества колониеобразующих единиц фибробластов. Морфологические признаки полученной культуры и иммунофенотипическая характеристика клеток соответствовали минимальным критериям отнесения их к МСК, которые установлены Международным обществом клеточной терапии. Эффективность фракционирования костного мозга с применением обоих методов сопоставима у здоровых лиц, тем не менее колониеобразующая способность клеток выше при исполь-
Вятский медицинский вестник, № 1(77), 2023
зовании градиента плотности. У больных множественной миеломой предпочтителен метод выделения мононуклеаров с применением метилцеллюлозы.
Ключевые слова: мезенхимальные стромальные клетки, мононуклеары, градиент плотности, метилцеллюлоза.
methods for isolation of bone marrow mononuclear cells for obtaining mesenchymal stromal cells: comparative analysis
Pestrikova A.O., Poponina E.A., Butolina M.A., Isaeva N.V., Minaeva N.V., Zorina N.A., Fokina E.S.
Kirov Research Institute of Hematology and Blood Transfusion under the Federal Medical Biological Agency, Kirov, Russia (610027, Kirov, Krasnoarmeyskaya St., 72), e-mail: pestrikova.work@gmail.com
The use of mesenchymal stromal cells (MSCs) for research and cell therapy requires their cultivation in sufficient quantities in vitro. Bone marrow is currently the most common source of MSC precursors. There are several ways to isolate mononuclear cell fraction from the bone marrow. This study is aimed to compare two MSC separation techniques, density gradient separation and sedimentation methods for the isolation of mononuclear cells from the bone marrow. In this study we compare results of isolation of mononuclear cells in 25 healthy individuals and 45 patients with multiple myeloma using Lympholite-H density gradient and 0.2% methyl-cellulose solution. Subsequent seeding of the obtained cells allows to get a sufficient number of MSCs. We have evaluated the efficiency of mononuclear cell isolation and the functional activity of isolated cells by determining the number of colony-forming units of fibroblasts. The morphological features of the obtained culture and the immunophenotypic characteristics of the cells meet the minimum criteria defined by International Society for Cellular Therapy for classifying them as MSCs. Both methods of bone marrow fractionation show efficiency in healthy individuals, but colony-forming ability is higher with density gradient centrifugation. The isolation of mononuclear cells using methyl-cellulose is preferable in multiple myeloma patients.
Keywords: mesenchymal stromal cells, mononuclear cells, density gradient, methylcellulose.
Введение
Красный костный мозг (КМ) содержит гемопо-этические и стромальные клетки. Гемопоэтические клетки за счет способности к неограниченной пролиферации и дифференцировке обеспечивают поддержание и обновление пула форменных элементов крови. Клетки стромы костного мозга представлены остеобластами, адипоцитами, эндотелиальными клетками кровеносных сосудов, гладкомышечными клетками, перицитами, фибробластами стромы, создают микроокружение стволовых кроветворных клеток.
Предшественниками всех видов клеток, необходимых для образования стромы и поддержания эффективного кроветворения, являются мезенхималь-ные стромальные клетки (МСК) [1, 2]. МСК могут быть выделены из жировой ткани, костного мозга, периферической крови, пупочного канатика, пульпы зуба, синовиальной оболочки, амниотической жидкости. В костном мозге МСК присутствуют в небольшом количестве (0,001-0,01%), тем не менее он часто используется в качестве их источника [3].
В настоящее время существует большое количество направлений использования МСК в клинической практике, в том числе в онкогематологии. Их применение возможно при гипофункции трансплантата гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). МСК способны ускорить процесс приживления введенных ГСК и, соответственно, восстановление гемопоэза за счет создания оптимального стромального микроокружения [4]. Благодаря своим иммуномодулирую-щим свойствам МСК также нашли применение в лечении реакции «трансплантат против хозяина» после пересадки аллогенных ГСК [5].
Культивирование МСК в условиях in vitro позволяет нарабатывать и заготавливать требуемые количества клеток. Материал для культивирования МСК получают путем разделения на градиенте плот-
ности и методом спонтанной седиментации. К моно-нуклеарам КМ относятся лимфоциты, субпопуляция моноцитов и бластные гемопоэтические клетки.
Принцип разделения клеток крови и костного мозга в градиенте плотности, основанный на различиях в величине плавучей плотности форменных элементов крови, был описан в 1968 г. Воуит А. При центрифугировании в градиентном растворе клетки крови перемещаются в пробирке до тех пор, пока не достигнут области градиента, где их плавучая плотность равна плотности среды [6]. При этом плавучая плотность мононуклеаров меньше, чем таковая величина используемого градиента, поэтому данные клетки располагаются над ним. Гранулоциты и эритроциты, имеющие большую плавучую плотность, в процессе центрифугирования опускаются на дно пробирки [7].
В качестве градиента плотности для разделения клеток крови можно использовать смесь фиколла с рентгеноконтрастными веществами с высокой плотностью, например урографин или верографин. Фи-колл - фирменное название синтетического высокомолекулярного сополимера сахарозы и эпихлоргидрина. В исследованиях используют 6,1%-ный или 9,0%-ный растворы фиколла с молекулярной массой 400 кДа. Фиколл в данной смеси выступает как агент, агрегирующий эритроциты, а рентгеноконтрастные вещества с высокой плотностью необходимы для создания изо-тоничности и плотности 1,077 г/см3, необходимой для выделения лимфоидных клеток человека.
Седиментационный метод выделения мононуклеаров основан на различиях скорости спонтанного оседания форменных элементов крови в среде высокомолекулярных полимеров, например метил-целлюлозы, декстрана-60, 10%-ного раствора ги-дроксиэтилкрахмала или 3%-ного раствора желатина. Полимер способствует агрегации эритроцитов в «монетные столбики», которые в силу более высокой
плотности опускаются на дно пробирки. Грануло-циты имеют высокую плотность в связи со значительным содержанием гранул, они также эффективно осаждаются при инкубации с метилцеллюлозой. Различная эффективность выделения мононуклеаров может быть обусловлена неодинаковой скоростью осаждения отдельных фракций ядерных клеток [8, 9].
Получение МСК играет важную роль в исследованиях стромы при множественной миеломе (ММ). ММ - злокачественное заболевание, обусловленное трансформацией B-лимфоцитов, пролиферирующих в интрамедуллярных пространствах костного мозга. Существуют исследования, доказывающие участие элементов стромы КМ в развитии патологического процесса, поэтому МСК являются потенциальной мишенью для разработки клеточных препаратов. На основе способности МСК мигрировать к опухолевому очагу возможно их использование для доставки противоопухолевых агентов. Также есть варианты нацеливания эндогенных МСК специальными агентами на направленную остеогенную дифференцировку in vivo [10, 11].
Вопрос выбора метода выделения мононуклеа-ров в зависимости от особенностей исходного образца КМ недостаточно изучен, что определяет актуальность настоящего исследования.
Цель работы: сравнение градиентного и седи-ментационного методов выделения мононуклеаров из костного мозга, предназначенных для дальнейшего получения МСК.
Задачи работы:
1. Оценить содержание ядросодержащих клеток (ЯСК) в исходном материале.
2. Определить эффективность методов выделения мононуклеаров КМ у здоровых лиц и больных ММ.
3. Изучить колониеобразующую способность полученных мононуклеаров.
Материал и методы
Мононуклеары выделяли из КМ пациентов с диагнозом ММ, получавшим лечение на базе ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России в период с 2018 по 2021 гг. (n=45), возраст варьировал от 38 до 80 (медиана 57) лет. Количество мужчин - 21, женщин - 24. Пациенты к моменту взятия КМ прошли от 2 до 13 курсов VCD, от 1 до 5 курсов PAD, от 2 до 7 VRD и 1-2 курса винорелбина. Полный ответ на проведенную терапию наблюдался у 8 больных, частичный ответ - у 24, прогрессия - у 1. Исследован материал КМ от доноров ГСК с 2018 по 2021 гг. (n=25), возраст составил от 14 до 48 (медиана 30) лет. Количество мужчин - 16, женщин - 9. КМ получали путем аспирации из задней ости подвздошной кости. Материал отбирался в пробирку с транспортной средой DUlbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) (StemCells Technologies, Канада), содержащей гепарин (Sigma, 2 ед./мл) в качестве антикоагулянта. Объем КМ, полученного от пациентов во время миелоэксфузии под общим наркозом, составил от 8 до 42 (медиана 20) мл (из них 5-10 мл транспортной среды). Объем КМ от доноров - от 15 до 90 (медиана 42) мл (10 мл транспортной среды).
Выделение мононуклеаров методом градиентного центрифугирования с применением Lympholite-Н (Cedarline, Канада) осуществляли путем наслаивания всей порции взятого в исследование костного мозга на градиент в объемном соотношении 2:1 соответственно и последующего центрифугиро-
вания при 400 g в течение 20 мин. После центрифугирования извлекали средний слой ядерных клеток и градиента, находящийся между верхним прозрачным слоем плазмы и нижним плотным слоем эритроцитов. Отмывание клеток от градиента производили питательной средой DMEM путем трехкратного центрифугирования при 90g в течение 10 мин и ресу-спендирования полученного осадка.
Процедура выделения мононуклеаров методом седиментации включала в себя смешивание образца с 0,2%-ным раствором метилцеллюлозы (Acros Organics, Бельгия) в объемном соотношении 2:1. Пробу инкубировали в течение 1 часа при температуре 20-25 °С. После разделения образца на два слоя, собирали верхний слой, содержащий фракцию мононуклеаров. Полученные клетки отмывали питательной средой DMEM от остаточных количеств полимера двухкратным центрифугированием при 90g в течение 10 мин.
Подсчет концентрации ядерных клеток в исходном образце и после выделения мононуклеаров осуществляли унифицированным методом с использованием уксусной кислоты в камере Горяева (микроскоп лабораторный тринокулярный Micros, Австрия) [12]. Для сравнения способов выделения мононукле-аров определяли эффективность каждого из них. Под эффективностью понимали отношение количества выделенных мононуклеаров к общему числу ЯСК в образце КМ, выраженное в процентах.
Культивирование МСК осуществляли в полной питательной среде следующего состава: среда aMinimum Essential Medium Eagle (StemCells Technologies, Канада), богатая тромбоцитами плазма (4%), гепарин, L-глутамин 2 мМ (StemCells Technologies, Канада). Культуру МСК инкубировали при температуре 37 °С в атмосфере 5%-ного углекислого газа (СО2-инкубатор Sanyo MCO-5AC, Япония). На 14-е сутки культивирования производили подсчет КОЕ-Ф с использованием инвертированного микроскопа МС-700 (I) Micros (Австрия). После процесса культивирования производилось определение иммунофенотипических характеристик полученных клеток методом лазерной проточной цитометрии (BD FACS Canto II, США). Оценивалась экспрессия молекул CD44, CD73, CD90, CD105, CD34, CD45, CD117, HLA-DR.
Результаты представляли в виде медианы и квартилей. Для сравнения групп использовали непараметрический критерий Манна - Уитни, различия считали значимыми при уровне p<0,05.
Результаты и их обсуждение
В табл. 1 представлены характеристики КМ пациентов и доноров.
Таблица 1
Характеристики исходных образцов костного мозга
Показатель Больные ММ (n=45) Доноры (n=25)
Концентрация ЯСК в исходном образце, х106/мл 8,0* (4,9; 10,7) 19,5* (10,8; 23,4)
Общее количество ЯСК в исходном образце, х106/мл 156,8* (78,4; 277,5) 522,9* (390,0; 924,5)
Примечание: * различия статистически значимы (p<0,05).
Вятский медицинский вестник, № 1(77), 2023
Исходные образцы КМ больных ММ и здоровых лиц отличались по концентрации ядерных клеток, в группе пациентов клеточность КМ была ниже (р=0,018), медиана составила 8,0 (4,9; 10,7) х106/мл против 19,5 (10,8; 23,4) х106/мл у доноров. При транспортировке исходной пробы в среде происходит разбавление образца КМ в 1,7 раза для пациентов и в 1,3 раза - для доноров. Низкая концентрация ядерных клеток в КМ пациентов с ММ может быть последствием многократных курсов химиотерапии в анамнезе.
Результаты сравнения методов выделения моно-нуклеаров на градиенте плотности и седиментацией в обеих группах представлены в табл. 2.
Показатели эффективности градиентного и седи
Эффективность выделения мононуклеаров из КМ доноров не зависела от применяемого способа. Как на градиенте плотности, так и с применением метилцеллюлозы получены сопоставимые результаты (49,8% против 46,9% соответственно, р=0,727). У больных эффективность выделения МНК на Lympholite-Н ниже, чем при использовании 0,2%-ного раствора метилцеллюлозы (42,7% против 51,3%, р=0,042). Выделение мононуклеаров способом седиментации из КМ пациентов с ММ по эффективности сопоставимо с результатами, полученными при выделении МНК из КМ здоровых лиц.
Таблица 2
нтационного методов выделения мононуклеаров
Показатель Градиентный р Седиментационный р
Больные ММ (п=15) Доноры (п=17) Больные ММ (п=30) Доноры (п=8)
Количество ЯСК в исходном образце х106/мл 8,0* (5,9; 10,9) 19,5* (11,4; 23,4) 0,002 7,9* (4,5; 10,3) 14,4* (11,8; 22,7) 0,013
Эффективность, % 42,7* (28,6; 53,0) 49,8 (41,2; 61,5) 0,090 51,3* (33,6; 69,1) 46,9 (41,6; 57,4) 0,816
Примечание: * различия статистически значимы (р<0,05).
При микроскопировании культур, полученных после посева выделенной фракции, отмечались вытянутые клетки веретеновидной формы с небольшим количеством отростков и высокой адгезивной способностью к пластику. По данным иммунофеноти-пирования первичных культур, не менее 95% клеток экспрессировали в высокой степени CD44, CD73, CD90, CD105, вместе с этим отсутствовали или экс-прессировались в низкой степени маркеры гемопо-этических клеток ^34, CD45, CD117 и ^А^). Перечисленные выше признаки позволяют опреде-хштькульту ры кзеток как мезенпимяльные в соответ-стечи с мчиимсльньшикрптериеми? определенными Мезадунеродным ьСществом тлетсчитй терачии.
Проведено членение фушнщонельто. акзчо-ности клеток, полученных разными методами вы-деленкек МздиьньКОЕ-Ф посее поеевафрккции монок^келенов, вещеленной при помощь гредиен-зе усотнлсьи,рьвнтоссь Ш,95 ну мононз^кте-
арте, о °;ля лолучтнных ив менонуюееудов
с примененсем мееилцелшолозы, - 8,65 но. 1хШ6 мононуклеаров. Различия статистически не значимы (р=0,775).
35
30
25
| 20
© 15 3
' 9
о
Рис.СравнениеколичестваКОЕ-Ф, полученных после посева МНК, выделенных разными методами из КМбольных ММи доноров
Для мононуклеаров, выделенных из КМ больных ММ, отсутствует зависимость колониеобра-
зующей способности от метода получения. Так, значение КОЕ-Ф в случае применения градиента плотности (п=15) - 9,40 КОЕ-Ф на 1х106 мононуклеаров; а при использовании метилцеллюлозы (п=30) -10,65 КОЕ-Ф на 1х106 мононуклеаров (рис.). Различия статистически не значимы (р=0,267).
Для КМ доноров статистически значимо выше значение КОЕ-Ф после посева фракции мононуклеаров, выделенных на градиенте плотности Lympholite-Н в сравнении с клетками, полученными при использовании метилцеллюлозы (13,25 КОЕ-Ф на 1х106 мононуклеаров против 7,74 КОЕ-Ф на 1х106 мононуклеаров соответственно, р=0,027).
Проведена оценка времени выполнения каждого из методов. Фракционирование КМ на градиенте плотности составило от 140 до 160 (медиана 150) мин. Время получения мононуклеаров с применением метилцеллюлозы занимало от 110 до 130 (медиана 120) мин. Таким образом, применение обоих методов в практике сопоставимо по временным затратам.
Выводы
1. При сравнении эффективности двух методов выделения мононуклеаров из КМ доноров - с применением градиента плотности Lympholite-Н и 0,2%-ного раствора метилцеллюлозы - получены сопоставимые результаты. Для выделения МНК из КМ больных ММ предпочтителен метод с применением раствора 0,2%-ной метилцеллюлозы.
2. Колониеобразующая активность клеток, выделенных из КМ доноров в результате применения градиента плотности, оказалась статистически значимо выше значения КОЕ-Ф, полученных методом седиментации на 0,2%-ном растворе метилцеллюлозы, поэтому первый способ выделения у здоровых лиц является оптимальным. Количество КОЕ-Ф, полученных в результате посева МНК, выделенных из КМ больных ММ, сопоставимо для обоих методов.
и ЬутрЬоШе-Н больные ММ
□ МТЦ больные ММ
□ ЬутрЬоШе-Н доноры
□ МТЦ доноры
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии явного или потенциального конфликта интересов, связанного с публикацией статьи.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Литература/References
1. Samsonraj R.M., Raghunath M., Nurcombe V. et al. Concise Review: Multifaceted Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells for Use in Regenerative Medicine. Stem Cells TranslationalMedicine. 2017;6(12):2173-2185.
2. Бигильдеев А.Е. Устройство и регуляция отдела стволовых мезенхимных клеток: автореф. дис. <...> докт. биол. наук. Москва; 2017. 270 с. [Bigil'deev A.E. Ustroistvo i regulyatsiya otdela stvolovykh mezenkhimnykh kletok [dissertation]. Moscow; 2017. 270 p. (In Russ.)]
3. Мезен Н.И. Стволовые клетки: учеб.-метод. пособие. Минск: БГМУ, 2014. 62 с. [Mezen N.I. Stvolovye kletki: Manual. Minsk: BSMU; 2014. 62 p. (In Russ.)]
4. Кривенко С.И., Дедюля Н.И., Селезнева Е.А. и др. Подготовка и характеристика трансплантата мезенхи-мальных стволовых клеток жировой ткани для совместного введения с аллогенными гемопоэтическими стволовыми клетками пациентам при онкогематологических заболеваниях // Медицинские новости. 2012. №11. С. 82-84 [Krivenko S.I., Dedyulya N.I., Selezneva E.A. et al. Preparation and description of adipose-derived mesenchymal stem cells' transplants for cotransplantation with hematopoietic stem cells in therapy of hematologic malignancies disorders. Medical News. 2012;11:82-84. (In Russ.)]
5. Zhao K., Liu O. The clinical application of mesenchymal stromal cells in hematopoietic stem cell transplantation. J. Hematol. Oncol. 2016;9:46-54.
6. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow. Scand. J. Clin. Lab. Investig. 1968;21(97):1-9.
7. Патент РФ на изобретение № 2496871С1/27.10.2013. Бюл. № 30. Осутин С.В., Немков А.С., Белый С.А. Способ выделения стволовых клеток из костного мозга для внутрисосудистого введения. [Patent RUS №2496871C1/ 27.10.2013. Byul. №30. Osutin S.V., Nemkov A.S., Belyy S.A. Sposob vydeleniya stvolovykh kletok iz kostnogo mozga dlya vnutrisosudistogo vvedeniya. (In Russ.)]
8. Walasek M., Os R. Hematopoietic stem cell expansion: challenges and opportunities. Annals of the New York Academy of Sciences, Vol 1266, No 1 (August 17), 2012: 138-150
9. Лимфоциты: Методы. Пер. с англ. / Под ред. Дж. Клауса. М.: Мир, 1990. 30с. [ J. Klaus, editor. Limfotsity: Metody. Moscow: Mir; 1990. 30p. (In Russ.)]
10. Семенова Н.Ю., Чубарь А.В., Енукашвили Н.И. и др. Перестройка ключевых элементов стромального микроокружения костного мозга при множественной миеломе // Вестник гематологии. 2020. №1. С.15-21. [Semenova N.Yu., Chubar' A.V., Enukashvili N.I. et al. Reconstruction of key elements of the stromal microenvironmentof the bone marrow in multiple myeloma. Bulletin of Hematology. 2020;1:15-21. (In Russ.)]
11. Xu S., Veirman D.K., Becker D. et al. Mesenchymal stem cells in multiple myeloma: a therapeutical tool or target? Leukemia 32, 2018; 1500-1514.
12. 0ФС.1.7.2.0008.15. Определение концентрации микробных клеток. Государственная фармакопея Российской Федерации. М.: Минздрав России, 2018. II том, с. 2788-2790. [0FS.1.7.2.0008.15. Opredelenie kontsentratsii mikrobnykh kletok. Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiiskoi Federatsii. Moscow: Ministry of Health of Russia; 2018. Vol. II. P. 2788-2790. (In Russ.)]
УДК 616.31-001.4 DOI 10.24412/2220-7880-2023-1-45-50
температурные показатели альтерации слизистой оболочки полости рта при воздействии лазерным излучением длиной волны 445±40 nm и 810±10 nm
Романенко Н.В., Тарасенко С.В., Суворов А.Ю., Джиджавадзе С.В., Деревянкин А.А.
ФГАОУ ВО «Первый МГМУ имени И.М. Сеченова» Минздрава России, Москва, Россия (119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2), e-mail: romanenko.natalia@gmail.com
В статье представлены результаты экспериментального исследования, проведенного с целью определения возможностей применения в клинической стоматологической практике новой лазерной технологии голубого света длиной волны 445±40 nm, излучение которого характеризуется особенностью препарирования мягких тканей бесконтактным способом. Объектом изучения были 24 половозрелые лабораторные крысы-самцы породы WISTAR. В процессе исследования установлено, что при формировании разреза слизистой оболочки полости рта лазерным излучением длиной волны 445±40 nm нагрев тканей достигает 59 °С (max), что значительно ниже показателя температуры - 81 °С (max), определенного при формировании разреза слизистой оболочки полости рта лазерным излучением длиной волны 810±10 nm (p<0,001). Рассечение эпителиального слоя клеток слизистой оболочки полости рта при воздействии лазерным излучением длиной волны 445±40 nm начинало происходить при температуре 47,08±0,996 °С, что достоверно (p<0,001) ниже показателя, полученного при использовании лазерного излучения длиной волны 810±10 nm (56,33±4,21 °С). Средние значения температуры тканей в области линии операционных разрезов, созданных лазерным излучением длиной волн 445±40 nm и 810±10 nm, составили 52,4±4,2 °С и 63,6±7,4 °С соответственно. Полученные результаты указывают на безопасность инновационной лазерной технологии голубого света.
Ключевые слова: диодный лазер, лазерное излучение длиной волны 810±10 nm, лазерное излучение длиной волны 445±40 nm, температурные показатели, голубой лазер.
