CC BY
40Ученые записки Крымского федерального университета имени В. И. Вернадского Биология. Химия. Том 4 (70). 2018. № 2. С. 226-234.
УДК 547.918:543.42
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЛАВНЫХ ТРИТЕРПЕНОВЫХ ГЛИКОЗИДОВ
ИЗ ЛИСТЬЕВ ПЛЮЩА
Яковишин Л. А.1, Гришковец В. И.2
'ФГАОУ ВО «Севастопольский государственный университет», Севастополь, Россия 2Таврическая академия (структурное подразделение) ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В. И. Вернадского», Симферополь, Республика Крым, Россия E-mail: [email protected]
Предложен способ выделения главных тритерпеновых гликозидов плюща а-хедерина (З-О-а-L-рамнопиранозил-(1^2)-О-а-£-арабинопиранозида хедерагенина) и хедерасапонина С (З-О-а-L-рамнопиршозил-(1^2)-О-а-£-арабинопиршозил-28-О-а-£-рамшпиршозил-(1^4)-О-Р-Д-глюкопирано-зил-(1^6)-О-Р-Д-глюкопиранозид хедерагенина), включающий экстракцию растительного сырья 70 % водным изопропиловым спиртом с последующим разделением и очисткой выделенных веществ колоночной хроматографией на силикагеле. Строение изолированных гликозидов подтверждено химическими методами, а также ИК-, масс- и ЯМР-спектроскопией.
Ключевые слова: тритерпеновые гликозиды, а-хедерин, хедерасапонин С, плющ, хроматография, ИК-Фурье-спектроскопия, масс-спектроскопия, ЯМР-спектроскопия.
ВВЕДЕНИЕ
Тритерпеновые гликозиды - это низкомолекулярные биорегуляторы, проявляющие широкий спектр биологической активности [1]. Они являются действующими веществами ряда лекарственных растений и препаратов, разработанных на их основе [1, 2]. Плющ обыкновенный Hedera helix L. (Araliaceae Juss.), издавна применяемый для лечения кашля [1, 2], содержит ряд тритерпеновых гликозидов олеананового типа.
Терапевтический эффект препаратов плюща обыкновенного объясняется наличием тритерпеновых гликозидов [1, 3, 4]. Среди них основным действующим веществом является а-хедерин (а-гедерин, сапиндозид А, калопанакс-сапонин А, 3-О-а-£-рамнопиранозил-(1^2)-О-а-£-арабинопиранозид хедерагенина, гликозид 1; рис. 1) [3, 4]. Гликозид 1 стимулирует Р2-адренорецепторы в клетках эпителия легких и мышц бронхов. В плюще преобладает пролекарственная форма гликозида 1 - хедерасапонин С (гедерасапонин С, хедеракозид С, гедеракозид С, 3-О-а-£-рамнопиранозил-(1^2)-О-а-£-арабинопиранозил-28-О-а-£-рамнопиранозил-(1 ^4)-О-р -^-глюкопиранозил-(1 ^6)-О-р -D-глюкопиранозид хедерагенина,
гликозид 2; рис. 1) [1], при гидролизе которого образуется гликозид 1.
На основе листьев плюща обыкновенного разработано несколько лекарственных препаратов [2, 5]. Это монокомпонентные препараты проспан (Германия) [1, 2, 5], геделикс (Германия) [2, 5], гербион сироп плюща (Словения) [6,
7], а также комбинированные препараты бронхипрет (Германия) [2, 5] и бронхиал плюс с плющом, мальвой и витамином С (Чешская Республика) [5]. Недавно арсенал лекарственных средств на основе плюща пополнился монокомпонентными препаратами гедерин [5, 8] и пектолван плющ [9, 10] (Украина), а также средством гедехил [11] (Беларусь). В России и странах СНГ препараты на основе листьев плюща являются одними из наиболее популярных средств для лечения кашля [12].
В медицинской практике также используют комбинированное гомеопатическое средство галиум-хеель (Германия), содержащее экстракт Hedera helix. Оно показано для активации неспецифических защитных механизмов организма, в частности при хронических заболеваниях [5]. В Грузии применяют бронхоспазмолитик кавсурон на основе плюща кавказского [13].
Рис. 1. Строение главных тритерпеновых гликозидов плюща (а-хедерина (гликозида 1: R = Н) и хедерасапонина С (гликозида 2: R = ^ßGlcp-(6-^1)-ßGlcp-(4^1)-aRhap)
Недавно в России разработан фитокомплекс хедерикс+, содержащий экстракты листьев плюща обыкновенного, листьев мать-и-мачехи обыкновенной Tussilago farfara L. (Asteraceae Bercht. & J. Presl) и травы тимьяна ползучего (чабреца) Thymus serpyllum L. (Lamiaceae Lindl.) [14, 15]. Хедерикс+ рекомендован в качестве отхаркивающего средства в комплексной терапии воспалительных заболеваний
дыхательных путей.
Тритерпеновые гликозиды из растительного сырья традиционно экстрагируют спиртами, водой или их смесями [1]. При этом чистые спирты недостаточно экстрагируют высокополярные, а вода - малополярные гликозиды. Гликозиды из плюща обычно извлекают метанолом, этанолом или их водными растворами [1622]. Однако в метаноле может происходить их трансформация [1].
С целью получения тритерпеновых гликозидов 1 и 2 нами предложен перспективный способ их выделения из листьев различных видов плюща.
30
29
'COOR
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Листья плюща крымского Hederá taurica Carr. были собраны в окрестностях г. Севастополя, канарского Hederá canariensis Willd. - получены из коллекции Ботанического сада Ботанического института им. В. Л. Комарова РАН и Донецкого ботанического сада, а обыкновенного Hedera helix L. - собраны в окрестностях г. Львова. Растительное сырье высушивали при комнатной температуре (20-22 °С).
Листья плюща канарского, крымского и обыкновенного в количестве по 500 г сухого веса последовательно экстрагировали при 50 °С по 60 мин.: тремя порциями смеси хлороформ - бензол (9:1, по объему) по 5000 мл и пятью порциями 70 % водного 2-пропанола по 5000 мл. Спиртовые экстракты объединяли и далее упаривали.
Полученную сумму тритерпеновых гликозидов разделяли хроматографически на 4000 г силикагеля L при градиентном элюировании системами растворителей хлороформ - этанол (2:1 —> 1:1, по объему), насыщенными водой. Выделенные гликозиды подвергали дополнительной очистке от примесей фенольных соединений хроматографически на силикагеле L при элюировании смесями растворителей хлороформ - этанол (2:1, по объему), насыщенной 10 % водным аммиаком (для гликозида 1), и хлороформ - этанол (1:1, по объему), насыщенной 10 % водным аммиаком (для гликозида 2). Чистоту выделенных соединений контролировали с помощью ТСХ.
Таблица 1
Химические сдвиги сигналов атомов 13С агликонных частей тритерпеновых гликозидов 1 и 2 (5, м.д., 0 - ТМС, C5D5N)
С-атом Тритерпеновый гликозид С-атом Тритерпеновый гликозид
1 2 1 2
1 38.9 38.9 16 23.9 23.5
2 26.2 26.0 17 46.7 47.2
3 82.1 82.1 18 42.1 41.8
4 43.5 43.5 19 46.5 46.3
5 47.3 47.7 20 30.9 30.8
6 18.4 18.3 21 34.4 34.1
7 33.0 32.9 22 33.2 32.6
8 39.8 40.1 23 64.4 64.6
9 48.3 48.3 24 13.8 13.8
10 36.9 37.0 25 16.2 16.3
11 23.8 23.9 26 17.4 17.6
12 122.8 122.9 27 26.2 26.2
13 144.8 144.3 28 180.3 176.6
14 42.2 42.2 29 33.2 33.2
15 28.4 28.4 30 23.9 23.8
В результате получили гликозиды 1 и 2, выход которых в пересчете на сухое растительное сырье составил, соответственно, для листьев плюща крымского -
1,9 % и 3,5 %, листьев плюща обыкновенного - 1,7 % и 3,9 % и листьев плюща канарского - 2,9 % и 4,9 %. Структуру выделенных гликозидов подтверждали химическими методами (кислотный и щелочной гидролизы) и ТСХ-анализом, как описано в [23, 24].
Полным кислотным гидролизом 1 получены рамноза, арабиноза и хедерагенин. Масс-спектр (ионизация электрораспылением) 1: [М1-Н]- (749.463 (100.0 %)), [М1+Ка]+ (773.566 (100.0 %)). По ТСХ, ИК-, масс- и 13С ЯМР-спектру гликозид 1 идентичен 3-О-а-£-рамнопиранозил-(1^2)-О-а-£-арабинопиранозиду хедерагенина [23, 24]. Спектр ЯМР 13С гликозида 1 приведен в таблицах 1 и 2.
В полном кислотном гидролизате 2 идентифицированы рамноза, арабиноза, глюкоза и хедерагенин. Щелочным гидролизом 2 получен прогенин, идентичный гликозиду 1. Масс-спектр (ионизация электрораспылением) 2: [М2-Н]- (1219.642 (100.0 %)), [М2+Ка]+ (1243.765 (100.0 %)). По ТСХ, ИК-, масс- и 13С ЯМР-спектру гликозид 2 идентичен 3-0-а-£-рамнопиранозил-(1^2)-0-а-£-арабинопиранозил-28-0-а-£-рамнопиранозил-(1^4)-0-р-,0-глюкопиранозил-(1^6)-0-р-^-глюкопи-ранозиловому эфиру хедерагенина [24]. Спектр ЯМР 13С гликозида 2 приведен в таблицах 1 и 2.
Таблица 2
Химические сдвиги сигналов атомов 13С углеводных частей тритерпеновых гликозидов 1 и 2 (5, м.д., 0 - ТМС, С5Б5])
С-атом Тритерпеновый гликозид
1 2 2 2
Ага' Ага' 01е'" ЯЬа.....
1 104.3 104.3 95.9 102.8
2 75.9 75.9 74.0 72.6
3 74.5 74.5 78.7 72.8
4 69.4 69.4 70.9 74.0
5 65.6 65.6 78.1 70.4
6 - - 69.3 18.6
ЯЬа" ЯЬа" 01е""
1 101.7 101.7 104.9
2 72.4 72.4 75.4
3 72.6 72.6 76.5
4 74.2 74.2 78.4
5 69.8 69.8 77.2
6 18.5 18.5 61.4
ИК-спектры сняты с твердых образцов на ИК-Фурье-спектрометре ФТ-801 (СИМЕКС, Россия) с универсальной оптической приставкой НПВО (нарушенного
полного внутреннего отражения) с элементом из селенида цинка. Для работы с ИК-спектрометром ФТ-801 использовали программу 2аШ. 3.5 (СИМЕКС, Россия).
ИК-спектр гликозида 1 (V, см1): 3394 (ОН), 2934 (СН), 1698 (С=О), 1653 (С=С), 1456 (СН), 1386 (СН), 1363 (СН), 1338 (СН), 1304 (СН), 1264 (СН), 1234 (СН), 1206 (СН), 1124 (С-О-С, С-ОН), 1074 (С-О-С, С-ОН), 1050 (С-О-С, С-ОН), 1029 (С-О-С, С-ОН), 984 (=СН).
ИК-спектр гликозида 2 (V, см1): 3351 (ОН), 2924 (СН), 1728 (С=О), 1623 (С=С), 1455 (СН), 1386 (СН), 1363 (СН), 1260 (СН), 1231 (СН), 1202 (СН), 1048 (С-О-С, СОН), 1027 (С-О-С и С-ОН), 981 (=СН).
Масс-спектры получены на спектрометре Вгикег Daltonics micrOTOF-Q с ионизацией электрораспылением. Использовали программное обеспечение шюгОТОРсоп1хо1Тм2.2 [25]. 13С-ЯМР-спектры получены на приборе Вгикег WM-250 (62.9 МГц для 13С) (Вгикег, Германия) для растворов веществ в пиридине^.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Для исключения ферментативного гидролиза гликозидов при измельчении свежесобранного растительного сырья его предварительно высушивали при комнатной температуре, а затем измельчали. Экстракцию проводили при температуре 50 °С, чтобы предотвратить потерю нативности гликозидов.
Растительное сырье последовательно экстрагировали тремя порциями смеси хлороформ - бензол и пятью порциями 70 % водного изопропилового спирта. Использование в качестве экстрагента изопропилового спирта исключает образование артефактов гликозидов. Спирт предложенной концентрации позволяет извлекать из сырья как средне- (гликозид 1), так и высокополярные (гликозид 2) тритерпеновые сапонины.
Полученные хлороформно-бензольные экстракты, по данным ТСХ, содержали малополярные вещества, а спиртовые - смесь тритерпеновых гликозидов. Суммы тритерпеновых гликозидов разделяли методом колоночной хроматографии на силикагеле при градиентном элюировании системами растворителей хлороформ -этанол, насыщенными водой. При этом получили гликозиды 1 и 2.
Дополнительную очистку тритерпеновых гликозидов от примесей фенольных соединений и других сопутствующих веществ проводили хроматографически на силикагеле при элюировании смесями растворителей хлороформ - этанол, насыщенными водным аммиаком. Чистоту выделенных соединений контролировали с помощью ТСХ.
Структуры выделенных гликозидов 1 и 2 подтверждали химическими методами, а также ЯМР-, масс- и ИК-спектроскопией. Полный кислотный гидролиз гликозида 1 дает рамнозу, арабинозу и хедерагенин. В кислотном гидролизате гликозида 2 идентифицированы рамноза, арабиноза, глюкоза и хедерагенин. Щелочным гидролизом 2 получен прогенин, идентичный гликозиду 1.
Гликозиды 1 и 2, по результатам гидролиза, ТСХ и спектральным данным аналогичны, соответственно, 3-О-а-£-рамнопиранозил-(1^2)-О-а-£-
арабинопиранозиду [23, 24] и 3-0-а-£-рамнопиранозил-(1^2)-0-а-£-
арабинопиранозил-28-0-а-£-рамнопиранозил-(1^4)-0^-^-глюкопиранозил-(1^6)-0^-^-глюкопиранозиду хедерагенина [24]. Наибольшее содержание в сырье установлено для гликозида 2.
Предложенный способ позволяет получать гликозиды из плющей с большим выходом, чем ранее предложенные [1, 17, 23]. Также преимуществами данного способа выделения являются проведение экстракционных процессов в мягких условиях, исключающих деструкцию гликозидов и образование артефактов, отсутствие необходимости в дорогостоящем оборудовании и малостадийность процесса.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. Разработан способ получения преобладающих тритерпеновых гликозидов 1 и 2 из листьев плющей крымского, канарского и обыкновенного.
2. Выход сапонинов из растительного сырья составил 1,7-2,9 % (для гликозида 1) и 3,5-4,9 % (для гликозида 2).
Список литературы
1. Hostettmann K. Saponins / K. Hostettmann, A. Marston. - Cambrige: Cambrige University Press, 1995. - 548 p.
2. Зузук Б. М. Плющ вьющийся Hedera helix L. (аналитический обзор) / Б. М. Зузук, Р. В. Куцик, Л. И. Зузук // Провизор. - 2003. - № 12. - С. 13-14.
3. a-Hederin, but not hederacoside C and hederagenin from Hedera helix, affects the binding behavior, dynamics, and regulation of ß2-adrenergic receptors / A. Sieben, L. Prenner, T. Sorkalla [et al.] // Biochemistry. - 2009. - Vol. 48, № 15. - P. 3477-3482.
4. Boltshauser V. Wirkmechanismus von efeu entschlüsselt. Efeusaponine entfalten eine ß-adrenerge wirkung in den atemwegen / V. Boltshauser // Phytotheraphie. - 2006. - № 4. - S. 20-22.
5. Луценко Ю. О. Маркетингове та фармакоекономiчне дослщження ринку лжарських засобгв Украши на основi плюща звичайного / Ю. О. Луценко, Г. Д. Гасюк, Р. £. Дармограй // Клшч. фармац., фармакотер. та мед. стандартиз. - 2009. - № 1-2. - С. 170-174.
6. Синоверська О. Б. Ефектившсть препарату «Гербюн сироп плюща» у лжуванш дгтей iз гострим бронхтгом / О. Б. Синоверська, С. В. Макян // Совр. педиатрия. - 2015. - № 1. - С. 50-56.
7. Колесник П. О. Оцшка ефективносл препарату «Гербюн сироп плюща» залежно вщ термшу його призначення дням з гострим простим бронхггом / П. О. Колесник, В. В. Петрщак, С. В. Цяпець // Совр. педиатрия. - 2015. - № 8. - С. 67-73.
8. Яковишин Л. А. Тритерпеновые гликозиды лекарственного препарата «Гедерин» / Л. А. Яковишин, В. И. Гришковец, И. А. Жолудь // Методы и объекты хим. анализа. - 2011. - Т. 6, № 2. - С. 119-123.
9. Когут Ю. Терапия кашля у детей с применением препаратов на растительной основе: отечественный опыт / Ю. Когут // Совр. педиатрия. - 2013. - № 2. - С. 70-73.
10. Яковшин Л. О. Тритерпеновi глжозиди лжарського препарату «Пектолван плющ» / Л. О. Яковшин, В. I. Гришковець, О. М. Корж // Фармац. журн. - 2010. - № 3. - С. 56-60.
11. Листок-вкладыш по медицинскому применению лекарственного средства гедехил. - Режим доступа: http://ft.by/preparaty/product/view/1/181.
12. Розничный рынок препаратов для устранения симптомов простуды и кашля (R05) в России и странах СНГ // Ремедиум. - 2007. - № 8. - С. 62-64.
13. Kemertelidze E. P. Biologically active compounds and original remedies from plants growing in Georgia / E. P. Kemertelidze // Bull. Georg. Natl. Acad. Sci. - 2007. - Vol. 175, № 1. - P. 91-96.
14. Хедерикс+ (Hederix+). Инструкция по применению фитокомплекса. ООО «Витаукт-пром» (Россия), свидетельство о государственной регистрации № RU.77.99.11.003.E.046250.11.11 от 04.11.2011.
15. Яковишин Л. А. Сапонины фитокомплекса «Хедерикс+» / Л. А. Яковишин, В. И. Гришковец, Е. Н. Корж // Ученые записки Крымского федерального университета им. В. И. Вернадского. Биология. Химия. - 2015. - Т. 1 (67), № 4. - С. 163-169.
16. Искендеров Г. Б. Химическое исследование тритерпеновых гликозидов ягод плюща обыкновенного / Г. Б. Искендеров, С. Ш. Мусаева // Химия растит. сырья. - 2015. - № 3. - С. 193-197.
17. Triterpenoid saponins from the leaves of Hedera helix / R. Elias, A. M. Diaz Lanza, E. Vidal-Ollivier [et al.] // J. Nat. Prod. - 1991. - Vol. 54, № 1. - P. 98-103.
18. Triterpene saponins from the fruits of Hedera helix / E. Bedir, H. Kirmizipekmez, O. Sticher, I. Calis // Phytochemistry. - 2000. - Vol. 53, № 8. - P. 905-909.
19. Studies on nepalese crude drugs III. On the saponins of Hedera nepalensis K. Koch / H. Kizu, S. Kitayama, T. Nakatani [et al.] // Chem. Pharm. Bull. - 1985. - Vol. 33, № 8. - P. 3324-3329.
20. Studies of the constituents of Hedera rhombea Bean. I. Glycosides of hederagenin / M. Shimizu, M. Arisawa, N. Morita [et al.] // Chem. Pharm. Bull. - 1978. - Vol. 26, № 2. - P. 655-659.
21. Triterpenoid saponins from berries of Hedera colchica / V. Mshvildadze, R. Elias, R. Faure [et al.] // Chem. Pharm. Bull. - 2001. - Vol. 49, № 6. - P. 752-754.
22. Triterpenoid saponins from leaves of Hedera pastuchowii / V. Mshvildadze, R. Elias, R. Faure [et al.] // Chem. Pharm. Bull. - 2004. - Vol. 52, № 12. - P. 1411-1415.
23. Тритерпеновые гликозиды Hedera taurica I. Строение таурозида Е из листьев Hedera taurica / А. С. Шашков, В. И. Гришковец, А. А. Лолойко [и др.] // Химия природ. соедин. - 1987. - № 3. -С. 363-366.
24. Тритерпеновые гликозиды Hedera canariensis I. Строение гликозидов L-A, L-B1, L-B2, L-C, L-D, L-E1, L-G1, L-G2, L-G3, L-G4, L-H1, L-H2 и L-I1 из листьев Hedera canariensis / В. И. Гришковец, Д. Ю. Сидоров, Л. А. Яковишин [и др.] // Химия природ. соедин. - 1996. - № 3. - С. 377-383.
25. Молекулярные комплексы тритерпеновых гликозидов с L-тирозином и их биологическая активность / Л. А. Яковишин, А. В. Лекарь, Е. В. Ветрова [и др.] // Biopolym. Cell. - 2012. - Т. 28, № 1. - С. 62-67.
THE METHOD OF ISOLATION OF IVY LEAVES MAIN TRITERPENE
GLYCOSIDES
Yakovishin L. A.1, Grishkovets V. I.2
1Sevastopol State University, Sevastopol, Russia
2V.I. Vernadsky Crimean Federal University, Simferopol, Russia
E-mail: [email protected]
Triterpene glycosides from ivy Hedera L. (Araliaceae Juss.) are one of the most important plant saponins. Ivy leaves have been used in folk medicine in several centuries. Triterpene glycosides a-hederin (hederagenin 3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1^2)-O-a-L-arabinopyranoside, glycoside 1) and hederasaponin C (hederacoside C, hederagenin 3-O-a-L-rhamnopyranosyl-(1^2)-O-a-L-arabinopyranosyl-28-0-a-L-rhamnopyranosyl-(1^4)-0-p-D-glucopyranosyl-(1^6)-0-p-D-glucopyranoside, glycoside 2) are dominant saponins in the most species of the ivy genus.
We isolated glycoside 1 and 2 from leaves of Canary ivy Hedera canariensis Willd., common ivy Hedera helix L. and Crimean ivy Hedera taurica Carr.
Leaves of Canary ivy Hedera canariensis Willd., common ivy Hedera helix L. and Crimean ivy Hedera taurica Carr. (Araliaceae Juss.) (each of 500.0 g dry weight) were comminuted and defatted with chloroform-benzene (9:1) (each of 3 x 5000 ml); the glycosides were extracted with 70 % aqueous 2-propanol (each of 5 x 5000 ml). The total extractive substances so obtained were separated on 4000 g of SiÜ2 with elution by water-saturated chloroform-ethanol (2:1 —> 1:1). This yielded the glycosides 1 and 2. Additional purification of the glycosides by the elimination of phenolic compounds was implemented by chromatography on SiÜ2 with elution by chloroform-ethanol (2:1) saturated with 10 % aqueous NH3 (for glycoside 1) and elution by chloroform-ethanol (1:1) saturated with aqueous 10 % NH3 (for glycoside 2). As a result we obtained glycosides 1 and 2 (in terms for dry plant raw materials respectively: for leaves of Hedera taurica - 1,9 % and 3,5 %, leaves of Hedera helix - 1,7 % and 3,9 %, and leaves of Hedera canariensis - 2,9 % and 4,9 %).
The structure of glycosides 1 and 2 was confirmed by chemical (acid and alkaline hydrolysis), physical (FTIR, 13C NMR, EIMS) methods and TLC analysis.
Keywords: triterpene glycosides, a-hederin, hederasaponin C, ivy, chromatography, FTIR spectroscopy, mass spectroscopy, NMR spectroscopy.
References
1. Hostettmann K., Marston A., Saponins, 548 p. (Cambrige University Press, Cambrige, 1995).
2. Zuzuk B. M., Kutsik R. V., Zuzuk L. I., Ivy creeping Hedera helix L. (analytical review), Provizor, 12, 13 (2003). (in Russ.).
3. Sieben A., Prenner L., Sorkalla T., Wolf A., Jakobs D., Runkel F., Häberlein H., a-Hederin, but not hederacoside C and hederagenin from Hedera helix, affects the binding behavior, dynamics, and regulation of ß2-adrenergic receptors, Biochemistry, 48 (15), 3477 (2009).
4. Boltshauser V., Wirkmechanismus von efeu entschlüsselt. Efeusaponine entfalten eine ß-adrenerge wirkung in den atemwegen, Phytotheraphie, 4, 20 (2006).
5. Lutsenko Yu. O., Gasjuk A. D., Darmohray R. Ye., Marketing and pharmacoeconomic investigations of the medicines, based on the Hedera helix content, in ukrainian market, Clinic. Pharm., Pharmacother. & Med. Standardiz., 1-2, 170 (2009). (in Ukr.).
6. Synoverska O., Makjan M., The effectiveness of the drug herbion ivy syrup in the treatment of children with an acute bronchitis, Sovr. Pediatriya, 1, 50 (2015). (in Ukr.).
7. Kolesnyk P., Petrishchak V., Tsyapets S., Evaluation of efficacy of syrup «Herbion ivy extract» depending on the timing of its appointment to children with acute bronchitis, Sovr. Pediatriya, 8, 67 (2015). (in Ukr.).
8. Yakovishin L. A., Grishkovets V. I., Zholud I. A., Triterpene glycosides of the medicinal preparation "Hederin", Metody i Ob "ekty Himicheskogo Analiza, 6 (2) 119 (2011). (in Russ.).
9. Kogut Yu., Cough therapy in children with plant-based drugs: domestic experience, Sovr. Pediatriya, 2, 70 (2013). (in Russ.).
10. Yakovishin L. A., Grishkovets V. I., Korzh E. N., Triterpene glycosides of the medicinal preparation «Pectolvan Hedera helix», Pharm. Zhurn., 3, 56 (2010). (in Ukr.).
11. Leaflet-liner for the medical use of the drug gedehil, Access mode: http ://ft. by/preparaty/product/view/1/181. (in Russ.).
12. The retail market for drugs to eliminate the symptoms of colds and cough (R05) in Russia and CIS countries, Remedium, 8, 62 (2007). (in Russ.).
13. Kemertelidze E. P., Biologically active compounds and original remedies from plants growing in Georgia, Bull. Georg. Natl. Acad. Sci., 175 (1) 91 (2007).
14. Hederix+, Instructions for use of phytocomplex, Vitauct-prom (Russia), certificate of state registration № RU.77.99.11.003.E.046250.11.11 on 04. 11. 2011. (in Russ.).
15. Yakovishin L. A., Grishkovets V. I., Korzh E. N., Saponins of the phytocomplex Hederix+, Scientific Notes of V.I. Vernadsky Crimean Federal University. Biology. Chemistry, 1 (4) 163 (2015). (in Russ.).
16. Iskenderov G. B., Musayeva S. Sh., Chemical investigation of triterpene glycosides of berries of common ivy, KhimijaRastitel'nogo Syr'ja, 3, 193 (2015). (in Russ.).
17. Elias R., Diaz Lanza A. M., Vidal-Ollivier E., Balansard G., Faure R., Babadjamian A., Triterpenoid saponins from the leaves of Hedera helix, J. Nat. Prod., 54 (1) 98 (1991).
18. Bedir E., Kirmizipekmez H., Sticher O., Calis I., Triterpene saponins from the fruits of Hedera helix, Phytochemistry, 53 (8) 905 (2000).
19. Kizu H., Kitayama S., Nakatani T., Tomimori T., Namba T., Studies on nepalese crude drugs III. On the saponins of Hedera nepalensis K. Koch, Chem. Pharm. Bull., 33 (8) 3324 (1985).
20. Shimizu M., Arisawa M., Morita N., Kizu H., Tomimori T., Studies of the constituents of Hedera rhombea Bean. I. Glycosides of hederagenin, Chem. Pharm. Bull., 26 (2) 655 (1978).
21. Mshvildadze V., Elias R., Faure R., Debrauwer L., Dekanosidze G., Kemertelidze E., Balansard G., Triterpenoid saponins from berries of Hedera colchica, Chem. Pharm. Bull., 49 (6) 752 (2001).
22. Mshvildadze V., Elias R., Faure R., Rondeau D., Debrauwer L., Dekanosidze G., Kemertelidze E., Balansard G., Triterpenoid saponins from leaves of Hedera pastuchowii, Chem. Pharm. Bull., 52 (12) 1411 (2004).
23. Shashkov А. S., Grishkovets V. I., Loloyko А. А., Chirva V. Ya., Triterpene glycosides of Hedera taurica I. Structure of tauroside E from the leaves of Hedera taurica, Khim. Prirod. Soedin., 3, 363 (1987). (in Russ.).
24. Grishkovets V. I., Sidorov D. Yu., Yakovishin L. A., Arnautov N. N., Shashkov А. S., Chirva V. Ya., Triterpene glycosides of Hedera canariensis I. Structures of glycosides L-A, L-B1, L-B2, L-C, L-D, L-E1, L-G1, L-G2, L-G3, L-G4, L-H1, L-H2, and L-I1 from the leaves of Hedera canariensis, Khim. Prirod. Soedin, 3, 377 (1996). (in Russ ).
25. Yakovishin L. A., Lekar A. V., Vetrova E. V., Borisenko N. I., Borisenko S. N., Grishkovets V. I., Molecular complexes of the triterpene glycosides with L-tyrosine and their biological activity, Biopolym. Cell, 28 (1) 62 (2012). (in Russ.).
