CC BY
21Ученые записки Крымского федерального университета имени В. И. Вернадского «Биология, химия». Том 1 (67). 2015. № 4. С. 163-169.
УДК 547.918:543.42:615.074
САПОНИНЫ ФИТОКОМПЛЕКСА «ХЕДЕРИКС+»
Яковишин Л. А.1, Гришковец В. И.2, Корж Е. Н.1
1ФГАОУ ВО «Севастопольский государственный университет», Севастополь, Республика Крым, Россия
2Таврическая академия (структурное подразделение) ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В. И. Вернадского», Симферополь, Республика Крым, Россия E-mail: chemsevntu@rambler.ru
Установлен состав сапонинов фитокомплекса «Хедерикс+». Показано, что в нем преобладают гликозиды хедерагенина. Наибольшее содержание отмечено для 3-О-а-£-рамнопиранозил-(1®2)-О-а-L-арабниопнранознда хедерагенина (а-хедерина), его 28-0-а-£-рамнопиранозил-(1®4)-0-Р-,0-глюкопиранозил-(1®6)-0-Р-,0-глюкопиранозилового эфира (хедерасапонина С) и 3-О-сульфат-28-О-а-£-рамнопиранозил-(1®4)-0-Р-,0-глюкопиранозил-(1®6)-0-Р-,0-глюкопиранозилового эфира
олеаноловой кислоты (хедерасапонина F). В комплексе также найдены стероидные сапонины. Ключевые слова: Хедерикс+, сапонины, a-хедерин, хедерасапонин С, хедерасапонин F, ТСХ.
ВВЕДЕНИЕ
Плющ обыкновенный Hedera helix L. (Araliaceae Juss.) издавна применяют для лечения кашля [1]. На основе его листьев разработано несколько лекарственных препаратов [1, 2]. В России и странах СНГ препараты плюща являются одними из наиболее популярных средств для лечения кашля [3].
Разработаны комбинированные отхаркивающие средства, содержащие экстракт листьев плюща. Это, например, препараты «Бронхиал плюс с плющом, мальвой и витамином С» (Чешская Республика) [4] и «Бронхипрет» (Германия) [2]. «Бронхипрет» включает экстракт тимьяна обыкновенного (Thymus vulgaris) [2].
Недавно был разработан фитокомплекс «Хедерикс+» (Россия), содержащий экстракты листьев мать-и-мачехи обыкновенной Tussilago farfara L. (Asteraceae Bercht. & J. Presl), травы тимьяна ползучего (чабреца) Thymus serpyllum L. (Lamiaceae Lindl.) и листьев плюща обыкновенного [5]. «Хедерикс+» рекомендован в качестве отхаркивающего средства в комплексной терапии воспалительных заболеваний дыхательных путей.
Известно, что плющ обыкновенный содержит тритерпеновые гликозиды [1]. Они объясняют фармакологическое действие растения и препаратов на его основе. Главным действующим сапонином плюща является a-хедерин (3-O-a-Z-рамнопиранозил-(1®2)-О-а-£-арабинопиранозид хедерагенина) [6]. Установлено, что он стимулирует ß2-адренорецепторы в клетках эпителия легких и мышц бронхов. При этом альвеоциты 2-го типа образуют сурфактант, снижающий
вязкость слизи и облегчающий откашливание. Активация р2-рецепторов приводит к расслаблению мышц и расширению бронхов [6, 7].
Исследованы комплексы тритерпеновых гликозидов препаратов плюща «Геделикс» [8, 9] и «Проспан» [10]. Об особенностях гликозидного состава фитокомплекса «Хедерикс+» ранее не сообщалось. Поэтому в настоящей статье приведены результаты выделения и ТСХ-анализа суммы сапонинов этого фитокомплекса.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Использовали фитокомплекс «Хедерикс+» производства ООО «Витаукт-пром» (Россия), свидетельство о государственной регистрации
№ RU.77.99.11.003.Е.046250.11.11 от 04.11.2011.
Получение суммы сапонинов (1 способ). К 1 мл фитокомплекса приливали 5x1 мл гексана (рис. 1). Смесь перемешивали и оставляли для расслоения жидкостей. Верхний (гексановый) слой отделяли. К полученному остатку добавляли 1 мл н-бутанола, предварительно насыщенного водой. Смесь перемешивали и оставляли для расслоения жидкостей. Верхний (водно-спиртовый) слой отделяли и далее анализировали на наличие сапонинов методом восходящей ТСХ.
Получение суммы сапонинов (2 способ). К 1 мл фитокомплекса приливали 5x1 мл смеси хлороформ-бензол (7:3 по объему) (рис. 1). Смесь перемешивали и оставляли для расслоения жидкостей. Нижний (хлороформ-бензольный) слой отделяли. К полученному остатку добавляли 1 мл н-бутанола, предварительно насыщенного водой. Смесь перемешивали и оставляли для расслоения. Верхний (водно-спиртовый) слой отделяли и далее анализировали на наличие сапонинов методом восходящей ТСХ.
Вещества идентифицировали с заведомыми образцами сапонинов известного строения, выделенных нами ранее из листьев плющей канарского Hederá canariensis Willd. [11], крымского Hedera taurica Carr. [12] и обыкновенного Hedera helix L. [13, 14].
ТСХ-анализ проводили на высокоэффективных пластинках «Sorbfil» («Сорбполимер», Россия) марки ПТСХ-П-В-УФ-254 с размером частиц силикагеля 8-12 мкм (тип сорбента СТХ-1ВЭ). Длина пластинок 8 см. На пластинки наносили по 0,02 мл водно-бутанольного экстракта. Экстракт гликозидов фитокомплекса и образцы гликозидов известного строения наносили на одну и ту же пластинку для ТСХ. Для элюирования использовали системы растворителей СНС13-СН3ОН-Н2О (100:25:3) и СНС13-СН3ОН-25% водный NH3 (100:40:4). Хроматографировали дважды.
Детектирование тритерпеновых гликозидов осуществляли 0,2% раствором пара-оксибензальдегида в 1 М растворе серной кислоты [15]. Хроматограммы после обработки реагентом нагревали до 100°С. Величины Rf сапонинов приведены в табл. 1 (для трех параллельных экспериментов; погрешность определения Rf составляет ±(0,01-0,03).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Предварительно из фитокомплекса удаляли малополярные вещества (хлорофиллы и другие) двумя способами - путем обработки его гексаном (1 способ) или смесью хлороформ-бензол (2 способ) (рис. 1). Сапонины из остатков извлекали ^-бутанолом, насыщенным водой. Полученные бутанольные экстракты, по данным ТСХ, идентичны и содержат несколько соединений, обозначенных нами цифрами 1'—2' для стероидных гликозидов и 1-9 для тритерпеновых гликозидов.
Рис. 1. Схема выделения суммы сапонинов фитокомплекса «Хедерикс+».
Стероидные гликозиды 1' и 2' идентичны по своей хроматографической подвижности З-О-Р-О-глюкопиранозидам стигмастерина и Р-ситостерина (соответственно). На хроматограммах пятна гликозидов 1' и 2' имеют малиновый и красный цвет.
28
1-9
ч.о
2
Гликозид Я2 Яз
1 Агара® Н Н
2 Агара® ОН Н
3 -ОзБ® Н Н
4 ЯМра-(1 ®2)-Лгара® Н Н
5 ЯМра-(1 ®2)-Лгара® ОН Н
6 Агара® ОН —Р01ор-(6— 1 )-Р01ер-(4— 1 )-аЯМр
7 -О3Б® Н —Р01ер-(6— 1 )-Р01ер-(4— 1 )-аЯМр
8 ЯМра-(1 ®2)-Лгара® Н —Р01ер-(6— 1 )-Р01ер-(4— 1 )-аЯМр
9 ЯМра-(1 ®2)-Лгара® ОН —Р01ер-(6— 1 )-Р01ер-(4— 1 )-аЯМр
Тритерпеновые сапонины 2, 5, 6 и 9 идентичны по своей хроматографической подвижности в различных системах растворителей (табл. 1) и цвету пятен, соответственно, 3-О-а^-арабинопиранозиду хедерагенина, 3-О-а^-рамнопиранозил-( 1 ® 2)-О-а-£-арабинопиранозиду хедерагенина, 3 -О-а^-арабинопиранозил-28-0-а^-рамнопиранозил-(1®4)-0-Р-0-глюкопиранозил-(1®6)-0-Р-0-глюкопиранозиду хедерагенина и 3-О-а-£-рамнопиранозил-(1®2)-О-а^-арабинопиранозил-28-0-а^-рамнопиранозил-(1®4)-0-Р-0-глюкопиранозил-(1®6)-0-Р-0-глюкопиранозиду хедерагенина. Гликозиды хедерагенина на пластинах для ТСХ имеют сине-фиолетовый цвет.
Соединения 3 и 7 представляют собой 3-О-сульфат олеаноловой кислоты и его 28-О-a-L-рамнопиранозил-(1®4)-О-P-D-глюкопиранозил-(1®6)-О-P-D-глюкопира-нозиловый эфир. Пятна сульфатированных соединений - ярко-розового цвета, появляются на ТСХ-пластинках в первую очередь [10].
Таблица 1
Величины Rf сапонинов, содержащихся в фитокомплексе «Хедерикс+»
Сапонин Величины Rf сапонинов
система СНС13-СН3ОН-КН3 (100:40:4) система СНС13-СН3ОН-Н2О (100:25:3)
1' 0,91 0,97
2' 0,89 0,95
1 0,83 0,91
2 0,75 0,89
3 0,71 0,66
4 0,68 0,89
5 0,53 0,79
6 0,29 0,18
7 0,25 0,07
8 0,21 0,13
9 0,19 0,10
Тритерпеновые гликозиды 1, 4 и 8 были идентифицированы как 3-О-а^-арабинопиранозид олеаноловой кислоты, 3-О-а-£-рамнопиранозил-(1®2)-О-а^-арабинопиранозид олеаноловой кислоты и 3-О-а^-рамнопиранозил-(1®2)-О-а^-арабинопиранозил-28-0-а^-рамнопиранозил-(1®4)-0-Р-0-глюкопиранозил-(1®6)-0-Р-0-глюкопиранозид олеаноловой кислоты. Пятна гликозидов олеаноловой кислоты на хроматограммах имеют розовый цвет.
В составе фитокомплекса преобладают сапонины, агликоном которых является хедерагенин, так как пятна соответствующих гликозидов на хроматограммах имели наибольшую площадь. Максимальное содержание отмечено для тритерпеновых гликозидов 4 (а-хедерин), 7 (хедерасапонин Б) и 9 (хедерасапонин С). Гликозид 9 является доминирующим среди всех сапонинов фитокомплекса. Таким образом, по разнообразию тритерпеновых гликозидов фитокомплекс «Хедерикс+» существенно
не отличается от известных немецких лекарственных препаратов от кашля
«Проспан» [5] и «Геделикс» [8, 9].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. Из фитокомплекса «Хедерикс+» выделена сумма сапонинов и проведен ее ТСХ-анализ в различных системах растворителей. Идентифицированы основные сапонины препарата, среди которых преобладают гликозиды хедерагенина.
2. В сумме сапонинов наибольшее содержание отмечено для 3-ü-a-Z-рамнопиранозил-( 1 ®2)-О-а-£-арабинопиранозида хедерагенина (a-хедерина), его 28-О-а-£-рамнопиранозил-(1®4)-О-Ь-.0-глюкопиранозил-(1®б)-О-Ь-.0-глюкопира-нозилового эфира (хедерасапонина С) и 3-О-сульфат-28-О-а-Х-рамнопиранозил-(1 ®4)-0-Р-,0-глюкопиранозил-(1 ® 6)-0-ß-,D-глюкопиранозилового эфира олеаноловой кислоты (хедерасапонина F).
3. По разнообразию тритерпеновых гликозидов фитокомплекс «Хедерикс+» существенно не отличается от лекарственных препаратов «Проспан» и «Геделикс».
Список литературы
1. Hostettmann K. Saponins / K. Hostettmann, A. Marston. - Cambrige: Cambrige University Press, 1995. - 548 p.
2. Зузук Б. М. Плющ вьющийся Hedera helix L. (аналитический обзор) / Б. М. Зузук, Р. В. Куцик, Л. И. Зузук // Провизор. - 2003. - № 12. - С. 13-14.
3. Розничный рынок препаратов для устранения симптомов простуды и кашля (R05) в России и странах СНГ // Ремедиум. - 2007. - № 8. - С. 62-64.
4. Луценко Ю. О. Маркетингове та фармакоекономiчне дослщження ринку лжарських засобiв Укра!ни на основi плюща звичайного / Ю. О. Луценко, Г. Д. Гасюк, Р. £. Дармограй // Ктшч. фармац., фармакотер. та мед. стандартиз. - 2009. - № 1-2. - С. 170-174.
5. Хедерикс+ (Hederix+). Инструкция по применению фитокомплекса. ООО «Витаукт-пром» (Россия), свидетельство о государственной регистрации № RU.77.99.11.003.E.046250.11.11 от 04.11.2011.
6. a-Hederin, but not hederacoside C and hederagenin from Hedera helix, affects the binding behavior, dynamics, and regulation of ß2-adrenergic receptors / A. Sieben, L. Prenner, T. Sorkalla [et al.] // Biochemistry. - 2009. - Vol. 48, № 15. - P. 3477-3482.
7. Boltshauser V. Wirkmechanismus von efeu entschlüsselt. Efeusaponine entfalten eine ^-adrenerge wirkung in den atemwegen / V. Boltshauser // Phytotheraphie. - 2006. - № 4. - S. 20-22.
8. Яковишин Л. А. Комплекс тритерпеновых гликозидов лекарственного препарата Hedelix® / Л.А. Яковишин, В. И. Гришковец // Химия природ. соедин. - 2003. - № 5. - С. 417-418.
9. Визначення тритерпенових глiкозидiв у препарат «Геделжс» за допомогою тонкошарово! хроматографп / Л. О. Яковшин, Г. Л. Кузнецова, М. А. Рубшсон, О. М. Корж // Фармац. журн. -2006. - № 6. - С. 62-65.
10. Исследование тритерпеновых гликозидов лекарственного препарата проспан® / Л. А. Яковишин, М. А. Вожжова, А. Л. Кузнецова, В. И. Гришковец // Журн. орг. и фарм. химии. - 2005. - Т. 3, вып. 1 (9). - С. 57-59.
11. Тритерпеновые гликозиды Hedera canariensis I. Строение гликозидов L-A, L-Bb L-B2, L-C, L-D, LEb L-Gb L-G2, L-G3, L-G4, L-Hb L-H2 и L-I¡ из листьев Hedera canariensis / В.И. Гришковец, Д.Ю. Сидоров, Л.А. Яковишин [и др.] // Химия природ. соедин. - 1996. - № 3. - С. 377-383.
12. Тритерпеновые гликозиды Hedera taurica I. Строение таурозида Е из листьев Hedera taurica /
A. С. Шашков, В. И. Гришковец, А. А. Лолойко [и др.] // Химия природ. соедин. - 1987. - № 3. -С. 363-366.
13. Тритерпеновые гликозиды Hedera helix I. Строение гликозидов L-1, L-2a, L-2b, L-3, L-4a, L-4b, L-6a, L-6b, L-6c, L-7a и L-7b из листьев плюща обыкновенного / В. И. Гришковец, А. Е. Кондратенко, Н. В. Толкачева [и др.] // Химия природ. соедин. - 1994. - № 6. - С. 742-746.
14. Тритерпеновые гликозиды Hedera helix III. Строение тритерпеновых сульфатов и их гликозидов /
B. И. Гришковец, А. Е. Кондратенко, А. С. Шашков, В .Я. Чирва // Химия природ. соедин. -1999. - № 1. - С. 87-90.
15. Яковишин Л. А. Детектирующие реагенты для ТСХ тритерпеновых гликозидов / Л. А. Яковишин // Химия природ. соедин. - 2003. - № 5. - С. 419-420.
SAPONINS OF THE PHYTOCOMPLEX HEDERIX+
Yakovishin L. A.1, Grishkovets V. I.2, Korzh E. N.1
1Sevastopol State University, Sevastopol, Crimea, Russian Federation
2V.I. Vernadsky Crimean Federal University, Simferopol, Crimea, Russian Federation
E-mail: chemsevntu@rambler.ru
A recently developed the phytocomplex Hederix+ (Vitauct-prom, Russia), containing extracts of common coltsfoot leaves Tussilago farfara L. (Asteraceae Bercht. & J. Presl), creeping thyme herb Thymus serpyllum L. (Lamiaceae Lindl.) and common ivy leaves Hedera helix L. (Araliaceae Juss.). Hederiks+ is recommended as an expectorant in the treatment of inflammatory diseases of the respiratory tract.
It is known that different ivy species containing triterpene glycosides. Their presence explains the pharmacological effect of ivy and drugs based on it.
Beforehand a low polar substance (chlorophylls ets.) removed from phytocomplex by treating it with hexane or a mixture of chloroform-benzene. Saponins were extracted from obtained residue by n-butanol saturated with water. The butanol extracts were analyzed by TLC. According to TLC they containing several groups of saponins.
Saponins of Hederix+ were identified using authentic samples of triterpene and steroid glycosides of known structure that we isolated from leaves of Canary ivy Hedera canariensis Willd., common ivy Hedera helix L. and Crimean ivy Hedera taurica Carr.
By TLC analysis there were identified oleanolic acid 3-O-sulfate, 3-O-sulfate-28-O-a-Z-rhamnopyranosyl-(1®4)-O-b-D-glucopyranosyl-(1®6)-O-b-.D-glucopyranoside, 3-O-a-Z-arabinopyranoside, 3-O-a-Z-rhamnopyranosyl-(1®2)-O-a-Z-arabinopyranoside and 3-O-a-Z-rhamnopyranosyl-(1®2)-O-a-Z-arabinopyranosyl-28-O-a-Z-
rhamnopyranosyl-( 1 ®4)-O-b-D-glucopyranosyl-( 1 ®6)-O-b-D-glucopyranoside.
The hederagenin glycosides are predominat in studying phytocomplex. The highest content was observed for hederagenin 3-O-a-Z-rhamnopyranosyl-(1®2)-O-a-Z-arabinopyranoside (a-hederin), oleanolic acid 3-O-sulfate-28-O-a-Z-rhamnopyranosyl-(1®4)-O-P-D-glucopyranosyl-(1®6)-O-P-.D-glucopyranoside (hederasaponin F) and hederagenin 3-O-a-Z-rhamnopyranosyl-(1®2)-O-a-Z-arabinopyranosyl-28-O-a-Z-rhamnopyranosyl-(1 ®4)-O-b-D-glucopyranosyl-(1 ®6)-O-b-D-glucopyranoside
CAnQHMHbl QMTOKOMn^EKCA «XEflEPMKC+»
(hederasaponin C), with the latter dominating. Moreover, were found hederagenin 3-O-a-Z-arabinopyranoside and 3-O-a-Z-arabinopyranosyl-28-O-a-Z-rhamnopyranosyl-(1®4)-O-ß-D-glucopyranosyl-(1®6)-O-ß-D-glucopyranoside.
In addition to triterpene glycosides there were identified two steroid glycosides: stigmasterol and ß-sitosterol 3-O-ß-D-glucopyranosides.
Keywords: Hederix+, saponins, a-hederin, hederasaponin C, hederasaponin F, TLC.
References
1. Hostettmann K., Marston A., Saponins, 548 p. (Cambrige University Press, Cambrige, 1995).
2. Zuzuk B.M., Kutsik R.V., Zuzuk L.I., Ivy creeping Hedera helix L. (analytical review), Provizor, 12, 13 (2003). (in Russ.).
3. The retail market for drugs to eliminate the symptoms of colds and cough (R05) in Russia and CIS countries, Remedium, 8, 62 (2007). (in Russ.).
4. Lutsenko Yu.O., Gasjuk A.D., Darmohray R.Ye., Marketing and pharmacoeconomic investigations of the medicines, based on the Hedera helix content, in ukrainian market, Clinic. Pharm., Pharmacother. & Med. Standardiz., 1-2, 170 (2009). (in Ukr.).
5. Hederix+, Instructions for use of phytocomplex, Vitauct-prom (Russia), certificate of state registration № RU.77.99.11.003.E.046250.11.11 on 04.11.2011. (in Russ.).
6. Sieben A., Prenner L., Sorkalla T., Wolf A., Jakobs D., Runkel F., Häberlein H., a-Hederin, but not hederacoside C and hederagenin from Hedera helix, affects the binding behavior, dynamics, and regulation of ß2-adrenergic receptors, Biochemistry, 48 (15), 3477 (2009).
7. Boltshauser V. Wirkmechanismus von efeu entschlüsselt. Efeusaponine entfalten eine ^-adrenerge wirkung in den atemwegen, Phytotheraphie, 4, 20 (2006).
8. Yakovishin L. A., Grishkovets V.I., Triterpene glycosides of the medicinal preparation Hedelix®, Khim. Prirod. Soedin, 5, 417 (2003). (in Russ.).
9. Yakovishin L. A., Kuznetsova A. L., Rubinson M. A., Korzh E.N., Determination of the triterpene glycosides in the medicinal preparation hedelix by TLC, Farm. Zhurn., 6, 62 (2006). (in Ukr.).
10. Yakovishin L. A., Vozhzhova M. A., Kuznetsova A. L., Grishkovets V.I., Study of triterpene glycosides of the drug prospan®, Zhurn. Org. Farm. Khim., 3 (1), 57 (2005). (in Russ.).
11. Grishkovets V. I., Sidorov D. Yu., Yakovishin L. A., Arnautov N. N., Shashkov A. S., Chirva V.Ya., Triterpene glycosides of Hedera canariensis I. Structures of glycosides L-A, L-Bi, L-B2, L-C, L-D, L-Ei, L-Gj, L-G2, L-G3, L-G4, L-H1, L-H2, and L-I1 from the leaves of Hedera canariensis, Khim. Prirod. Soedin, 3, 377 (1996). (in Russ.).
12. Shashkov A. S., Grishkovets V. I., Loloyko A. A., Chirva V. Ya., Triterpene glycosides of Hedera taurica I. Structure of tauroside E from the leaves of Hedera taurica, Khim. Prirod. Soedin., 3, 363 (1987). (in Russ.).
13. Grishkovets V.I., Kondratenko A.E., Tolkacheva N.V., Shashkov A.S., Chirva V.Ya., Triterpene glycosides of Hedera helix I. The structures of glycosides L-1, L-2a, L-2b, L-3, L-4a, L-4b, L-6a, L-6b, L-6c, L-7a, and L-7b from the leaves of common ivy, Khim. Prirod. Soedin, 6, 742 (1994). (in Russ.).
14. Grishkovets V. I., Kondratenko A. E., Shashkov A. S., Chirva V. Ya., Triterpene glycosides of Hedera helix III. Structure of the triterpene sulfates and their glycosides, Khim. Prirod. Soedin., 1, 87 (1999). (in Russ.).
15. Yakovishin L. A., Developers for TLC of triterpene glycosides, Khim. Prirod. Soedin., 5, 419 (2003). (in Russ.).
