CC BY
53
УДК 619.614.48
Фотша Т.1., д.вет.н., професор, tif ua@meta.ua1 © Березовський А.В., д.вет.н., професор, bav13@meta.ua1 Улько Л.Г., д.вет.н., доцент, larisau@ukr.net1 Бабарук А.В., начальник служби Швденно! РСД ВК на державному кордош та
транспорту babaruk@mail.ru2
1Сумський нацюнальний аграрный утеерситет, м. Суми, Украгна 2Шеденна регюнальна служба державного еетеринарно-сантарного контролю та нагляду на державному кордош та транспортi, м. Харюе, Украгна
СУЧАСН1 СТАН I МОЖЛИВОСТ1 Р1ШЕННЯ ПРОБЛЕМИ ДЕЗШФЕКЦП ТРАНСПОРТНИХ ЗАСОБ1В
У статтi предстаелет дат по еиеченню еластиеостей нового дезтфектанту «Б^дез». Встаноелено, що препарат Б^дез чинить еиражену антимЫробну дт по еiдношенню до тест-культур E. coli та S. аиreиs за прямого контакту. Оптимальна концентращя Б^дезу за результатами дослiду 0,1 %. За експозицп 30 хеилин препарат е концентрацп 0,1 % дie бактерицидно на референс-штами. Дезтфектант Б^дез мае еисоку еiрулiцидну актиетсть по еiдношенню до РНК-емкних еiрусiе.
Шсля дезтфекцп 0,1% розчином Б^дезу росту культур не спостерйалося, що еказуе на еисоку яюсть дезтфекцп. За застосуеання препарату «Б^дез» дезтфекцтна актиетсть зберйаеться триеалий час та можлиеа дозаправка дезбар'eрiе епродоеж 96 годин, що значно полегшуе проеедення еетеринарно-сантарних заходiе за загрози занесення еисокопатогенних збудниюе тфекцп на територт Украгни.
Ключовi слова: препарат «Б^дез», дезтфекщя, тест-об'екти, референт-штами, дезбар 'ери, культури мiкроорганiзмiе.
УДК 619.614.48
Фотина Т.И., д.вет.н., профессор, tif_ua@meta.ua1 Березовский А.В., д.вет.н., профессор, bav13@meta.ua1 Улько Л.Г., д.вет.н., доцент, larisau@ukr.net1 Бабарук А.В., начальник службы Южной РСД ВК на государственной границе
и транспорте, babaruk@mail.ru2 1Сумський национальный аграрный университет, г.. Сумы, Украина 2Южная региональная служба государственного еетеринарно-санитарного контроля и надзора на государственной границе и транспорте, г. Харьков,
Украина
СОВРЕМЕННЫЕ СОСТОЯНИЕ И ВОЗМОЖНОСТИ РЕШЕНИЯ
ПРОБЛЕМЫ ДЕЗИНФЕКЦИИ ТРАНСПОРТНЫХ СРЕДСТВ
В статье представлены данные по изучению свойств нового дезинфектанта «Би-дез». Устаноелено, что препарат Би-дез оказыеает выраженное антимикробное действие по отношению к тест-культур E. coli и
© Фотша Т.1., Березовський А.В., Улько Л.Г., Бабарук А.В., 2014
410
S. aureus за прямого контакта. Оптимальная концентрация Би-дезу по результатам опыта 0,1%. По экспозиции 30 минут препарат в концентрации 0,1% действует бактерицидно на референс-штаммы. Дезинфектант Би-дез имеет высокую вирулицидную активность по отношению к РНК-содержащих вирусов.
После дезинфекции 0,1% раствором Би-дезу роста культур не наблюдалось, что указывает на высокое качество дезинфекции. За применение препарата «Би-дез» дезинфекционная активность сохраняется длительное время и возможна дозаправка дезбарьеров течение 96 часов, что значительно облегчает проведение ветеринарно-санитарных мероприятий при угрозе занесения высокопатогенных возбудителей инфекции на территорию Украины.
Ключевые слова: препарат «Би-дез», дезинфекция, тест-объекты, референс-штаммы, дезбарьеры, культуры микроорганизмов.
UDK 619.614.48
Fotina T.I., Doctor of Veterinary Science, Professor, tif_ua@meta.ua1 Berezovskiy A.V., Doctor of Veterinary Science, Professor, bav13@meta.ua1 Ulko L.G., Doctor of Veterinary Medicine, Associate Professor, larisau@ukr.net1 Babaruk A.V., Head of South RSD VC at the state border and transport,
babaruk@mail.ru2 1Sumy National Agrarian University, Sumy, Ukraine 2South regional office of the state veterinary and sanitary control and supervision of the state border and transport, Kharkov, Ukraine
MODERN STATE AND POSSIBLE SOLUTIONS DISINFECTING
VEHICLES
The article presents information on the properties of the new disinfectant "Bides ". It is found that the drug Bi-des has a strong antimicrobial action with respect to the test-cultures of E. coli and S. aureus for direct contact. The optimum concentration of "Bi-des" as a result of the experience of 0.1%. Upon exposure of 30 minutes preparation in a concentration of 0.1% bactericidal effect on the reference strains. Disinfectant Bi-des has high virucidal activity against RNA viruses.
After disinfecting solution 0.1% "Bi-des" crop growth was observed, which indicates high quality disinfection. For the use of the drug "B-des" disinfection activity persists for a long time and can be refueled disinfection barriers within 96 hours, greatly facilitates the animal health activities under the threat of adding the highly infectious agents on the territory of Ukraine.
Key words: "Bi-des", disinfection, test-objects, reference strains, disinfection barriers, cultures of microorganisms.
Вступ. Сучасний перюд характеризуемся попршенням етдемюлопчно! ситуаци з особливо небезпечних шфекцш. Багато в чому це обумовлено пол^ичною i економiчною нестабшьшстю в кра!ш, масовою мпращею населення всередиш краши та мiж крашами, передислокащею вшськ, вшськовими дiями в "гарячих точках", новими умовами господарювання при яких захворювання тварин зоонозами часто залишаються нерозтзнаними i
411
невщомими. Розвиток мiжнародних зв'язюв, що супроводжуються штенсивним пересуванням людей з використанням сучасних швидкохщних транспортних засобiв, може сприяти заносу карантинних хвороб в будь-яку крашу незважаючи на те, що охорону територи кра!ни здiйснюють прикордонш iнспекцiйнi пункти ветеринарно! медицини, лаборатори ветеринарно! медицини
[!, 2]. ... .
Поява i поширення шфекцшних хвороб тварин на ранiше благополучних територiях завжди загрожуе негативними наслщками для тваринництва i дико! фауни кра!ни. Захворюванiсть i загибель неiмунних до цих хвороб тварин у первинних осередках може бути значною. Занесення збудника хвороби зооантропонозого характеру створюе загрозу захворювання людей. Виникнення будь-який з цих хвороб може привести до порушення економжи кра!ни, !! господарських i культурних зв'язюв [3].
Ветеринарнiй службi не завжди вдаеться швидко розпiзнавати такi хвороби, так як вона часто вже не обiзнана про можливкть !х виникнення i не завжди мае необхщш дiагностикуми i засоби специфiчно! профiлактики. Ряд хвороб вiдноситься до групи А (за номенклатурою i класифжащею МЕБ), при виникненнi яких обов'язкове негайне оповщення Мiжнародного етзоотичного бюро. Звiдси випливають i подальшi економiчнi та iншi санкци. Недопущення виникнення i поширення ще! групи хвороб - предмет особливо! уваги ветеринарно! служби [4].
Матер1али i методи. Матерiалом для дослiджень був втизняний препарат Бi-дез. Визначення бактерицидних властивостей та дезшфекцшно! активностi нового дезшфектанту «Б>дез» проводили вiдповiдно до «Методичних вказiвок про порядок випробування нових дезшфекцшних засобiв для ветеринарно! практики» та наявних рекомендацiй. В якост тест-культур використовували музейнi штами кишково! палички (штам 1257) та золотистого стафшококу (штам 209-Р).
Дослщження проводили в два етапи: перший - визначення «in vitro» мммальних розведень препарату здатних забезпечити 100 % ефектившсть вщносно дослiджуваних культур мiкроорганiзмiв та з'ясування ефективностi встановлено! мiнiмально!' дози для дезiнфекцi!' у виробничих умовах.
Бактерицидну активнiсть розчину препарату «Б>дез» за прямого контакту вивчали методом серiйних розведень на культурах E. coli та S. aureus.
За стшкютю до хiмiчних дезшфжуючих речовин кишкова паличка не поступаеться багатьом патогенним неспороутворюючим i некоковим мiкроорганiзмам та навiть мае перевагу перед ними. Встановлено, що, якщо буде знищена кишкова паличка, то будуть знищеш i збудники таких хвороб, як бруцельоз, сальмонельоз, бешиха, колiбактерiоз та iн. Виключенням у цьому вiдношеннi можуть бути лише збудники туберкульозу та спороутворююча мжрофлора, стiйкiсть яко! вища шж у кишково! палички. Тому, для контролю якоси дезiнфекцi! при туберкульозi i деяких iнших iнфекцiй показниковим мжрооргашзмом признаний стафiлокок [49].
Таким чином, про якють дезiнфекцi! судять за наявшстю або вiдсутнiстю на поверхш об'ектiв E. coli та S. aureus.
412
Для дослщження на стерильнш водi готували гомогенш суспензи культур з концентрацieю 0,3-0-,5 млрд/см3, до не! додавали рiвнi об'еми дезiнфектантiв i3 розрахунку того, що !х концентрацiя в суспензи становила 0,1%, 0,25%, 0,5%, 1%, 1,5% та 2%. Суспензи шкубували при температурi 20 0С впродовж 12 год., тсля чого по 0,2 мл виЫвали на МПА. Пробiрки витримували вертикально для вшьного стiкання рiдини на дно. Контролем були суспензи, розведеш еквiвалентною кшькютю води. Висiви iнкубували в термостаи при температурi 37 0С протягом двох дiб. Про бактерицидну дш препаратiв судили за кiлькiстю колонш (колонiйутворюючих одиниць - КУО) на поверхш поживного середовища для кожно! концентрацп препарату.
Вивчення ди Ei-дезу у рiзних умовах визначали на тест-об'ектах. Для дослiдiв тест-культури E. coli та S. аиreиs вирощували на МПА. 1з добово! культури готували навжку на фiзiологiчному розчиш з вмiстом 1 млрд бактерiальних тiл за оптичним стандартом. Як тест-об'екти використовували гуму, дерево та залiзо у виглядi квадратних форм розмiром 10 х 10 см - 100 см2. Тест-об'екти очищали стерилiзували в автоклавi при температурi 120 оС впродовж одше! години.
Тест-об'екти контамшували iз розрахунку 10 млн на i 1 см2 поверхш об'екту брали 0,1 мл суспензи культури, змшували з цшьною сироваткою кровi коня (бiлковий захист) i потiм рiвномiрно розподiляли по поверхш. Контамшоваш тест-об'екти залишали в горизонтальному положенш до повного висихання. Поим !х розмiщували у кюветах горизонтально та вертикально i розприскуванням наносили розчини дослщжуваних деззасобiв, зазначаючи при цьому !х експозицiю, концентрацш та витрачену кiлькiсть. Контролем були тест-об'екти, оброблеш такою ж самою кшьюстю стерильно! водопровщно! води. Через визначений промiжок часу брали стерильним тампоном змиви з дослщних i контрольних тест-об'ектiв. Потiм по 1 см3 вихщно! суспензи з кожно! з цих пробiрок вносили у вщповщне середовище.
Для дезiнфекцi!' використовували 0,1%, 0,25%, 0,5%, 1%, 1,5% та 2% розчини Ei-дезу. Експозищя становила 30 хв, 1, 2, 3 i 4 години. По закшченш експозицп з тест-об'екпв, стерильними ватними тампонами вщбирали хiмiчну речовину (двократно центрифугували з дистильованою водою по 30 хвилин при 2500 об/хв). Осад тсля другого центрифугування розбавляли 1 мл стерильного фiзiологiчного розчину i виавали по 0,5 мл на середовище КОДА (об'екти контамшоваш E. coli ) Яккть дезшфекци визначали за змшою кольору середовища з бузково-червоного у зелений чи салатний.
По закшченш обеззаражування тест-об'екпв, контамшованих S. аиreиs, робили змиви, мютили !х у фiзiологiчний розчин i центрифугували. Осад пiсля другого центрифугування розводили 1 мл стерильного фiзiологiчного розчину i висiвали по 0,5 см3 в 5 см3 МПБ з 6,5% хлористого натрш. Через 48 годин шкубацп при температурi 37-38 0С робили посiв на 8,5% сольовий МПА. Поави витримували в термостат 48 годин при температурi 37-38 0С. Для тдтвердження росту стафiлококiв готували мазки, фарбували !х за Грамом i проводили мжроскопш. Один iз заражених тест-об'екпв не обробляли i
413
витримували протягом часу знезаражування (контроль), тсля чого робили поЫви аналопчно дослщним зразкам.
Противiрусну актившсть та токсико-бiологiчнi властивост експериментального препарату визначали за загально визначеними методами. При цьому використовували вiруси грипу людини та птищ: A/PR -8/34H1N1 та вiрус гепатиту каченят. Противiрусну дiю препарату вивчали по вщношенню до вiрусу грипу птахiв та вiрусу гепатиту каченят з наступним визначенням !х вiрулентностi на сприйнятливих до збудникiв моделях, а саме - на 10-добових курячих ембрюнах. При цьому використовували дози 1000 Щ50 /см3 та 1 млн Щ50 /см3 - шляхом контакту in vitro впродовж 1, 2, 3, 10 та 30 хвилин при температурi 22 i 370C, а також з шокулящею в аланто!сну порожнину курячих ембрiонiв. Через 48 годин шкубаци при 370C, iз них вiдбирали алантоiсну рщину i дослiджували !! в реакци гемаглютинацi! та реакцi! непрямо! аглютинаци. Контролем були проби вiрусiв, ям не обробляли дезiнфектантом.
Наукова новизна полягае в експериментальному обrрунтуваннi застосування препарату «Б>дез» для дезiнфекцi! транспортних засобiв, предметiв та обладнання в системi ветеринарно-санiтарних заходiв з недопущення заносу високопатогенних збудникiв iнфекцiй на територш Укра!ни на прикордонних шспекцшних пунктах ветеринарно! медицини та дезопромивочних станщях.
Результати дослщжень. Встановлено, що препарат Б>дез чинить виражену антимжробну дiю по вiдношенню до тест-культур E. coli та S. aureus за прямого контакту. 0,1% розчин Бьдез дiе бактерицидно по вщношенш до культур E. coli та S. aureus, а при використанш 0,05% розчину на МПА вiдмiчено рiст поодиноких колонiй тест-культур (3 колош! - E. coli та 4 колони - S. aureus). Оптимальна концентращя Б>дезу за результатами дослщу 0,1%.
За вивчення ди Бьдезу на тест-культури з використанням тест-об'екив з рiзною експозицiею встановлено, що за експозици 30 хвилин препарат в концентраци 0,05 % не знищуе культури кишково! палички та стафшококу з жодного тест-об'екту, тодi як у виглядi 0,1 % розчину у виЫвах з гумово! та металево! поверхнi росту культур Е. соИ не спостер^алося. За експозици препарату «Бьдез» 60 хв. на аналопчних тест-об'ектах було отримано також результати, як i в попередньому дослщженш
Встановлено, що препарат Б>дез за експозицi! 2 години у 0,25 % концентраци знищуе кишкову паличку на дерев'янш поверхш, а 0,1 % концентрацi! на металевш та гумовiй. Аналогiчнi результати отримано i за експозицi! 3 та 4 години. Виходячи з цього встановлено, що немае потреби збшьшувати час експозици препарату бшьше шж на 2 години. За експозици 120 хвилин знищував кишкову паличку на дерев'янш поверхш в концентраци 0,5% розчину, а при дослщженш змивiв з гумово! та металево! поверхш встановлено, що даний препарат забезпечуе девiталiзацiю кишково! палички у виглядi 0,25% розчину.
414
Дерево,25
Гума J 0,2
Метал 0,15
0,1 0,05
0,5 1 2 3 4
Рис. 1. Оптимальна концентращя та експозищя розчину Bi-дез для р1зних
тест-об'ект1в
Визначено, що дезiнфектант Ei-дез мае високу вiрулiцидну активнiсть по вiдношенню до РНК-вмкних вiрусiв, а саме до вiрусу грипу птицi та вiрусу гепатиту каченят. Крiм того препарат не виявився токсичним для бших мишей та 10-добових курячих ембрiонiв. Ui данi дають основу на проведення широких виробничих випробувань по визначенню практично! та економiчно! доцiльностi використання запропонованого дезшфектанту з метою профилактики iнфекцiйних хвороб.
За результатами дослщу було визначено, що Ei-дез при експозици 10 i 30 хвилин активний по вщношенню кишково! палички в розведеннi вiдповiдно 1:160710 та 1:224995. Середне бактерицидне розведення дорiвнювало 1:192853.
Фенольний коефщент дорiвнював 1007, тобто по вщношенню кишково! палички препарат в тисячу раз виявився актившшим за фенол.
Разом з тим слщ вщм^ити, що в присутност сироватки кровi бактерицидна актившсть дезiнфектанту - знижувалась. При використанш в якостi тест-культури штамiв E. coli та S. aureus бшковий шдекс складав 3,84.
Отже Ei-дез «in vitro» виявив високу активнiсть по вiдношенню до грампозитивних та грамнегативних мiкроорганiзмiв.
В наступнш серi! дослiдiв було проведено виробниче випробування препарату «Ei-дез» для дезшфекци транспортних засобiв та заправки дезбар^в. З цiею метою було вдабрано проби з транспортних засобiв до проведення дезшфекци та через 30 хвилин, 1 та 2 години. Також проведено дослщи щодо активност дезшфекцшного розчину впродовж певного перюду часу в дезбар'ерах.
У посiвах iз вiдiбраних проб з транспортних засобiв було виявлено рют культур S. aureus, E. coli , та сальмонел. Шсля дезiнфекцi! (через 30 хвилин. 1 та 2 години) 0,1% розчином Ei-дезу росту культур видшених попередньо не спостер^алося, що вказуе на високу яккть дезшфекци. За використання 0,05 %
0
415
розчину препарату «Бьдез» у поЫвах проб взятих через 30 хв. тсля дезшфекци було виявлено ркт колонш S. aureus (табл. 1).
Таблиця 1
Результати бактершлоНчних дослщжень змнв1в з noBepxHi транспортних _засобiв до та тсля дезшфекцй' розчином БЬдезу_
Перюд дослiдження Контроль / рют (проб) Дослвд / pier (проб)
Бi-дез 0,1%
До дезшфекци S. aureus - 3; E. coli - 4; S. aureus - 2; E. coli - 4;
ca^bMOHe^H - 2; сальмонели - 1;
Шсля дезiнфекцiï
через: 30 хв S. aureus - 1; E. coli - 2; Не видшено
1 год E. coli - 6; S. aureus - 3; Не видшено
2 год E. coli - 7; S. aureus - 3. Не видшено
Бьдез 0,05%
До дезшфекци S. aureus - 3; E. coli - 4; S. aureus - 2; E. coli - 4;
ca^bMOHe^H - 2; ca^bMOHe^H - 1;
Шсля дезшфекци через: 30 хв S. aureus - 1; E. coli - 2; S. aureus - 1; E. coli - 0;
1 год E. coli - 6; S. aureus - 3; E. coli - 2; S. aureus - 1;
2 год E. coli - 7; S. aureus - 3. E. coli - 4; S. aureus - 3.
Аналiзуючи результату дослiду слщ зазначити i наступний факт -розчин Бьдез не мае гострого запаху тому не чинить незручностей при обробщ транспортних засобiв, особливо це стосуеться господаря транспорту чи водiя. Препарат е абсолютно нешкщливий для здоров'я людей.
Вивчаючи тривалкть активностi препарату «Б>дез» нами було встановлено, що даний препарат збер^ав свою актившсть по вiдношенню до тест-культур впродовж чотирьох дiб навт пiсля дозаправки дезбар'еру у сшввщношенш 1: 1 тобто при зниженш концентраци препарату (табл. 2).
Таблиця 2
Актившсть Bi-дезу за використання для заправки дезбар'ер1в.
Перюд вшбору проб дезшфектанту Бьдез
0,1 % 0,05 %
24 годин - -
48 годин - -
72 години - +/6
96 годин - +/11
120 годин - +/13
144 години +/5* +/24
Примггка: «-» - в1дсуттсть росту колонш на поверхн1 живильного середовища;
«+» - наявтсть росту колонш на поверхнг живильного середовища; *5 - кшькгсть колонш Отже, за застосування препарату «Б>дез» дезшфекцшна актившсть збер^аеться тривалий час та можлива дозаправка дезбар'ерiв впродовж 96 годин, що значно полегшуе проведення ветеринарно-саштарних заходiв за загрози занесення високопатогенних збудниюв iнфекцi! на територiю Укра!ни.
416
Рис. 2. Тривалкть дезшфекщйно!* активного препарату Б1-дез
Висновки. Дезiнфекцiйний 3aci6 «Б>дез» в 0,1% концентраци повнiстю знезаражують Е. coli та S. aureus на поверхнях тест-об'екпв через 10 хв. Ефективш концентраци дезiнфектанту вiдносно референс-мiкроорганiзмiв регламентовано в настановi щодо 1х застосування.
За застосування препарату «Б>дез» дезiнфекцiйна активнiсть зберiгаeться тривалий час та можлива дозаправка дезбар'eрiв впродовж 96 годин, що значно полегшуе проведення ветеринарно-санiтарниx заxодiв за загрози занесення високопатогенних збудниюв шфекци на територш Укра1ни.
Перспективи подальших дослвджень. Визначення ефективностi препарату «Бi-дез» для дезшфекци вагонiв на спецiальниx дезшфекцшно-промивних станцiяx
Л1тература
1. Сысоева М. М. Дезинфекция объектов ветеринарного надзора препаратом "Тримицин-вет" : автореф. дис. ... канд. вет. наук: спец. 06.02.05. -Ветеринарная санитария, экология, зоогиена и ветеринарно-санитарная экспертиза / Марина Михайловна Сысоева. - М., 2011. - 18 с.
2. Журенко С.Г. Обработка воды ЭМП ИНЧ. Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии / С.Г. Журенко // Российский журнал, 2009. - № 2. - с.31- 34.
3. Иванов В.Г. Обеззараживание объектов ветеринарно-санитарного надзора. Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. / В.Г. Иванов, С.Г. Журенко // Российский журнал, 2009. - № 2. - с.27-30.
4. Профилактика и меры борьбы с карантинными и малоизвестными болезнями с/х животных / Зооресурс. [Електронний ресурс] Точка доступу : http: // zooresurs.ru/veterinariya / 726-osobennosti-veterinarnogo-obsluzhivaniya-krupnykh-ferm-i-zhivotnovodcheskikh-kompleksov.html.
Рецензент - д.с.-г.н., професор Козенко О.В.
417
