CC BY
12
4. Благоприятные результаты выделения тифозно-паратифозных микробов в искусственно зараженной питьевой воде дают основание испытать этот метод для поисков тех же микробов в воде естественных водоемов.
5. Этот метод может быть рекомендован как рациональный способ обнаружения тифозно-паратифозных бактерий в больших количествах водопроводной воды.
6. Этот метод имеет важное значение при санитарно-эпидемиологи-ческой оценке воды там, где она признана годной по титру Bact. coli.
ЛИТЕРАТУРА
1. Р а х л и н а Л. Е., Микробиология и эпидемиология, № 5,1940.—2. Сочилова А.» Журнал микробиологии, т. II, в. 3, 1933.—3. Разумов А. С., Журнал микробиологии, т. I, и. 1, 1932. — 4. Холодный, Zbl. f. 'Bakteriol., Ed. 77, 1929.— 5. Иерусалимский, Журнал микробиологии, т. I, 1932. — 6. Кузнецов С. Я. и К о р-зинкин Г. С., Zbl. f. Bakteriol., Bd. 83, 1931. — 7. Королев С. А., Вологодский мол.-хоз. ин-т, бюлл. № "<6-77.-8. Дианова Е. и Ворошилова А., Журнал микробиологии, т. 1, в. 3, 1933.— 9. Askeshow, Journ. of Bacteriol., v. 25, 1933.— 10. Тетерик, Гигиена и санитария, № 9, 1939. — 11. Schmidt Е. W., Zbl. f. Bakteriol., Bd. 58,1923.-12. Wilson а. В 1 a i г, Journ. of Hygiene,26,1927.-13. Они же, Journ. of Hygiene, v. 33, No. 4, 1938. — 14. МинкевичИ. E. и Попов H.A., Журнал микробиологии и эпидемиологии, № 7—8, 1932. — 15. К и ри нова О. П., Гигиена и санитария, № 9, 1939.
Л. Н. ШУСТОВА
_ • %
Современное состояние вопроса
о заменителях агара в бактериологической
практике
Из Центральной санитарно-гигиенической лаборатории Мосгорздрава
Поиски заменителей агара начались уже давно, с 90-х годов прошлого столетия. Первоначально имелось в виду найти индиферентную основу для синтетических сред при изучении усвоения микроорганизмами того или иного вещества. В таком разрезе и была разработана методика приготовления силикатных сред (Кюне, Виноградскин, Бейерник и в последнее время Валь, Бэтчлер и Вильсон).
Со времени империалистической войны возникла необходимость освободиться от импортного для Европы и дорогого агара и найти ему дешевую и доступную замену для общебактериологических работ. В качестве заменителя агара был испробован ряд веществ как растительного происхождения, так и химических продуктов.
Так как агар представляет собой продукт, состоящий из высокомолекулярных углеводов, получаемый из водорослей (Euchemma, Geli-dium, Gigantina — тихоокеанских, Phylophora , rubens — черноморских, Aufelgia plicata — беломорских), то, естественно, прежде всего были испытаны другие вещества того же порядка, а именно: препараты из различных бурых водорослей (ламинарии, фукус пузырчатый), из зеленых водорослей (спирогира), исландский мох, алтейный корень, трагант (из мотыльковых растений), целлофан. Однако все указанные попытки не оправдали ожиданий (Циммерман, Вольфейль, Клауберг и др.). Некоторый успех был достигнут с пектиновыми веществами из яблок и других плодов. Они дают хороший гель, но только при кислой реакции (Шнайдер, Шнайдер и Бок). На них хорошо удается выращивание плесени (Функ).
В последнее время Цилшермаюом (1938). была разработана мето-.дика приготовления твердых сред на маисовом и картофельном крахмале (подробности см. в статье Разумова и Мудредовой). Картофель и крахмал давно известны в бактериологической практике как питательные субстраты для бактерий; как основа для .плотных сред •они еще не применялись. Циммерман сообщает о весьма ободряющих результатах своих опытов. Он установил возможность роста на крахмальных средах более 50 видов микробов, главным образом патогенных (только палочка инфлюэнцы и палочка злокачественного отека не дали роста). Микробы каждого вида дают вполне типичные, хотя и очень своеобразные колонии, сильно отличающиеся от вида колоний на агаре. Колонии микробов кишечно-тифозной группы, по утверждению автора, настолько характерны, что отпадает необходимость ди-ференциации по пестрому ряду. Некоторые виды дают переваривание крахмала, образуя углубления в среде, что может быть использовано как диагностический признак. Неудобством является сильное выделение воды из среды, ее мутноватость и мягкая и клейкая консистенция среды, требующая заготовки сред за 1—2 дня, подсушки их и очень осторожного штрихования.
Главный дефект среды — это, повидимому, невозможность использования ее для заливки и для глубинных посевов, так как для образования крахмального студня требуется температура 80—100° и среда должна готовиться непосредственно в чашках или пробирках при нагревании до этой температуры. На крахмальной основе возможно приготовлять и некоторые специальные среды: кровяные, сывороточные среды с малахитовой и бриллиантовой зеленью, среды Эндо и Дри-гальского. Проверочных работ с этой средой со стороны других авторов *в доступной мне литературе не встретилось.
Из химических продуктов были попытки использовать поливиниловые алкоголи—вещества с формулой СН2СНОН из группы высокомолекулярных углеводородов, склонных к образованию коллоидов. Шюц, предложивший в 1937 г. такого рода среды, отмечает их мягкость и вязкость, которую можно устранить добавлением конгорот. Кишечно-тифозная группа растет на них так же, как на агаровых средах; возможно изготовление диференциальных сред (добавление 3°/о лактозы н индикатора бромтимолблау).
Наибольший интерес среди химических заменителей представляет, несомненно, жидкое стекло, которое под воздействием кислот (и некоторых других веществ) дает кремневый гель.
Метод силикатных сред разработан Хетче и Мюнхом и проверен многими авторами (Циммерман, Хольборн, Клауберг). В СССР он освоен Разумовым и Мудрецовой.
Жидкое или растворимое стекло представляет собой смесь щелочных окислов натрия и калия с кремнеземом с общей формулой Г^О. лБЮг, где Иг означает ЫагО или КЮ, ал — неопределенное количество молекул БЮг, приходящихся на молекулу щелочных окислов. Для характеристики жидкого стекла служит его модуль, т. е. отношение числа грамм-молекул БЮг к числу грамм-молекул ЫагО, его удельный вес и его концентрация, выражаемая в градусах Боме. Жидкое стекло имеет резко щелочную реакцию; при добавлении кислот она нейтрализуется и ¡переходит в состояние геля (ом. статью Разумова и Мудрецовой). Кремневый гель по структуре резко отличается от агарового студня: он не обладает эластичностью агара, поверхность его хрупкая, легко рвущаяся, консистенция мягкая. Это обстоятельство сильно затрудняет посевы петлей на его поверхности. Кроме того, он отдает очень большое количество воды, до 10°/о своего объема, и требует специальных приемов для сушки и посева. Валь рекомендует посев пастеровской пипеткой с загнутым наподобие крючка концом. Рост
колоний на кремневых средах сливной, отдельные колонии получаются с трудом.
Хетче и Мюн готовили свою силикатную среду на дрожжевом экстракте с примесью овощного экстракта и без добавления поваренной соли. Вначале они разработали методику исследования воды, причем не только счет колоний, но и определение коли-индекса производили «методом глубинных посевов, т. е. путем заливки определенного объема воды средой.
Авторы получили при счете колоний цифры, совпадавшие с числом колоний на агаровых и желатиновых средах (через 48 часов). Определение коли-индекса производилось комбинированным способом: методом заливки и методом посева в жидкую среду. Общий объем воды брался в 100 мл; из них в чашки Дригальского вносилось два объема по 10 мл и заливались силикатной средой с лактозой и азолитмином, а 80 мл засевались в бульон с азолитмином. О наличии кишечной палочки судят по изменению цвета среды и газообразованию; для проверки колонии кишечной палочки отвивают для определения индол-образования. Цифры коли-индекса получались у авторов совпадающие с цифрами при заливке средой Конради-Дригальского.
Работая с кремневыми средами и изучая значение добавления различных веществ, авторы сделали ценное наблюдение, состоявшее в том, что добавление сульфита натрия в количестве 0,05—0,06% при реакции рН выше 6,6 значительно улучшает рост микроорганизмов, заменяя в этом отношении пептон; величина колоний возрастает на 50%. Это наблюдение, а также увеличение самого числа колоний были подтверждены и другими авторами (Хольборн/ Клауберг). Сульфит натрия следует вводить просто в жидкое стекло в количестве 1%. Авторы применили свою среду и для посевов молока, а в дальнейшем и для поверхностных посевов, в частности, для исследования испражнений. Для этой цели в среду добавлялись лактоза и азолитмин; попытка приготовить среду типа Эндо не дала положительных результатов. По данным авторов, вьгсеваемость кишечно-тифозной группы получилась удовлетворительная. Большое затруднение представляет в работе с этой средой обильное выделение воды. Авторы рекомендуют закладывать в крышку чашек картонные пластинки, пропитанные 68% раствором хлористого кальция и простерилизованные при 100° в течение 3—4 часов, чашки заготавливают заранее и ставят на 3—4 часа в термостат. Можно также чашки заготовить накануне, выдержать их в течение ночи в леднике в положении вверх дном, затем слить выделившуюся воду и подсушить в термостате 3—4 часа.
Проверочные работы с кремневой средой были поставлены Циммерманом, Хольборном и Клаубергом. Наззанные авторы нашли кремневую среду неподходящим субстратом для поверхностных посевов вследствие мягкости и дряблости геля. В отношении счета колоний Хольборн приходит к выводу, что кремневая среда дает резкое отставание {в 5—10 раз) от желатиновой среды, но при добавлении сульфита цифры выравнивались. Клауберг (работа 1941 г.), считая среду непригодной для поверхностных посевов, отмечает, что при счете колоний цифры, получаемые на силикатной среде, много ниже, чем получаемые на желатине, но не на много разнятся от цифр, получаемых на агаре.
Для уменьшения отдачи воды Клауберг пробовал применять крышки из мягкого картона, алюминия, разрыхленного амальгамированием, из глины, сушку чашек в струе теплого воздуха, сушку при 80° с предварительным подсушиванием 2—3 дня при комнатной температуре, добавление в кремневую среду желатины, растительной слизи, пектиновых фабричных препаратов, порошкообразного силикагеля и т. п. Лучшие результаты в смысле придания большой эластичности поверхности геля он получил от добавления глицерина и аспарагина, а также
от добавления 5% крови или сыворотки при снижении содержания жидкого стекла до 3—4% вместо 8—10%, которые необходимы для получения плотного геля. (Повышение содержания жидкого стекла выше 10% тормозит развитие бактерий и не является индиферентным для них.) На модифицированных таким способом средах он получил развитие «почти типичных» колоний кишечно-тифозной группы.
Разумов и Мудрецова (1942) получили по счету колоний цифры, совпадающие с числом колоний на агаре (температура и срок проращивания не указаны). Они получили также типичные колонии кишечной палочки при поверхностном посеве на силикатной среде Эндо.
Нгши предварительные данные, относящиеся к еще незаконченным опытам, показывают, что число колоний на силикатных средах при температуре выращивания 37° совпадает в достаточной мере с числом колоний на агаровых средах (причем через 48 часо'в проращивания совпадение получается более полным), но колонии на силикатных средах отличаются меньшей величиной. Добавление сульфита натрия действительно улучшает рост и увеличивает размеры колоний. При заливке посевов воды силикатной средой удобно готовить ее в отдельных пробирках, куда вносят точно сначала 9,4 мл «кислого-рабочего бульонам, а потом 0,6 мл жидкого стекла, тщательно смешивают в пробирке, опрокидывая ее несколько раз, и выливают в чашку на внесенную туда воду, смешивают, как обычно, покачиванием, дают образоваться гелю, после чего помещают чашки вверх дном в термостат.
Среда удобна для счета колоний, очень прозрачна и проста для приготовления и употребления, не требует стерилизации, расплавления и т. п.
Что касается поверхностных посевов на силикатные среды, скошенные в пробирках, разлитые в чашках, и на силикатную среду Эндо, то тут результаты, полученные мной, менее удовлетворительны; как это-отмечают все авторы, работавшие с силикатными средами, поверхность кремнегеля. даже после многодневной сушки слишком дряблая, легко рвется петлей и шпаделем, рост получается сливной, развития отдельных колоний не получается 1.
Подводя итоги вышеприведенным литературным данным, можно сделать следующий вывод: идеальная и универсальная замена агара еще не найдена, но пути к этому намечены, а именно необходимо проверить данные, полученные Циммерманом на крахмальных средах. Если эти данные будут подтверждены, (можно будет считать допустимым комбинированное применение силикатных и крахмальных сред, т. е. замену агара силикатной средой для счета колоний и-замену агара крахмальной средой для поверхностных посевов или использование силикатной среды для заливки, а агаровых сред только для поверхностных посевов.
1 Необходимо отметить, что встречаются сорта жидкого стекла, не допускающие развития микробов, Очевидно, из-за наличия вредных для них прямее ей, так что при пользовании техническим стеклом необходимо предварительно проверить его пригодность для выращивания бактерий. )
