CC BY
50
потенциал клеток реализуется при культивировании в составе как адгезивных, так и неадгезивных носителей на основе альгината.
Работа выполнена при поддержке совместного гранта РФФИ и ГФФИ Украины (проект № 09-04-90403-Укр_ф_а).
А.Г. Попандопуло
Лечение рефрактерной стенокардии с использованием аутогенных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток
Институт неотложной и восстановительной хирургии им. В.К. Гусака АМН Украины, Донецк, Украина Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького, Донецк, Украина pag.lctc@male.ru
A.G. Popandopulo
Treatment of refractory angina pectoralis with the use of autologous multipotent mesenchymal stromal cells
Несмотря на использование медикаментозной терапии и методов прямой реваскуляризации миокарда при ишемической болезни сердца (ИБС), проблема рефрактерной стенокардии остается актуальной. У большого количества пациентов на фоне лечения сохраняются симптомы заболевания, высок процент инвалидизации.
Цель работы — изучить эффективность применения аутогенных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (аутоММСК) костного мозга с учетом путей доставки у больных с рефрактерной стенокардией.
Материал и методы. В исследование включено 48 пациентов с рефрактерной стенокардией (45 мужчин и 3 женщины) в возрасте от 46 до 68 лет (средний возраст 53,7+1,62) с функциональным классом стенокардии ii—IV. Всем выполнено катетерное электромеханическое картирование левого желудочка (ЛЖ) с помощью системы Noga ХР, при котором выявлены обширные зоны гибернированного миокарда и рубцовые поля после перенесенных инфарктов. Оценивалось количество приступов стенокардии в сутки, частота госпитализаций, развитие инфарктов миокарда, летальность, качество жизни с использованием Миннесотского опросника а также контрольные картирования ЛЖ в сроки 6 и 12 мес.
Пациенты разделены на 4 группы. Пациентам I группы сразу после завершения процесса картирования ЛЖ были выполнены инъекции аутоММСК с применением системы навигации NOGA ХР (8—10 инъекций) — 11 пациентов. Во II группе осуществлено в/в введение — 13 больных. В III группе — интракоронарное введение — 14 пациентов. Пациентам IV группы производилось интрамиокардиальное введение физиологического раствора при выполнении катетерной навигации NOGA ХР в количестве и по объему раствора аналогичного в группе I.
Результаты. Период наблюдения составил 6—18 мес. Госпитализаций с острым коронарным синдромом или нарастанием сердечной недостаточности не было. При контроле у 32 пациентов выявлена положительная динамика (66,8%). В группе I отмечено улучшение качества жизни по Миннесотскому опроснику на 13— 38 баллов, в группе II — на 24—45 баллов, в группе III — на 26—39, в группе IV — положительной динамики не отмечено. Количество приступов стенокардии умень-
шилось с 2—8 в сут. до 1—2 у пациентов первых трех групп. В четвертой группе у 20% пациентов отмечена отрицательная динамика. При ЗхоКГ увеличилась фракция выброса левого желудочка на 5—10% и уменьшилось КДО ЛЖ на 30—50 мл (до 10—12% от исходного объема) при интрамиокардиальном введении, на 3— 8% и 20^46 мл соответственно при внутривенном введении, на 6—9% и 25—50 мл при интракоронарном введении. В IV группе эти показатели улучшились только у 1 пациента, в 70% остались на прежнем уровне, а у 2 больных зарегистрировано уменьшение ФВ и КДО. При контрольном картировании ЛЖ в первой группе у 9 (91%), во второй группе — у 10 (76,9%), в третьей группе у 11 (78,6%) отмечена положительная динамика. При этом зона гибернированного миокарда значительно уменьшилась или исчезла. На вольтажной униполярной карте увеличилась амплитуда электрограммы, что является свидетельством увеличения массы живого миокарда, на механической карте увеличилась амплитуда движения сегмента. При интрамиокардиальном введении — более выраженная динамика — преимущественно исчезновение зон гибернации в зонах инъекций. В то же время отрицательная динамика в связи с основным заболеванием отмечена нами у 20% четвертой группы. Неудовлетворительный результат у пациентов второй и третьей групп зарегистрирован в 7,7 и 7,1% соответственно. Отрицательной электромеханической динамики у пациентов первой группы нами не выявлено.
Таким образом, введение аутоММСК является безопасным и может быть использовано в практической медицине. Введение аутоММСК путем интрамиокар-диальных инъекций более эффективно, чем внутрисо-судистое (системное и регионарное) введение. Внутривенный и интракоронарный пути введения сопоставимы по своей эффективности. Механическая травма при интрамиокардиальном введении не имеет существенного влияния на течение основного заболевания.
В.Е. Рябинин
Состояние, возможности и перспективы развития клеточных технологий: региональные аспекты*
Лаборатория «Искусственные органы и клетки» ЮУНЦ РАМН, Челябинск, Россия
ООО «Центр Клеточных Технологий при Областной Клинической Больнице», Челябинск, Россия veryabinin@mail.ru
V.E. Ryabinin
State, opportunities and perspectives of development of cell-based technologies: regional aspects
В докладе обсуждаются вопросы, касающиеся состояния и перспектив регионального развития клеточных технологий. Подчеркивается актуальность поддержки научных исследований в области биомедицинских технологий со стороны государственных структур, частных предприятий, инвесторов и венчурных фондов. Продемонстрированы конкретные примеры такого взаимодействия и проанализированы причины возможной их недостаточной эффективности. Приведена информация о развитии клеточных технологий в Уральском федеральном округе. Показана возможность продвижения новых биомедицинских технологий в регионах за счет бюджетных средств в рамках существующих
* Статья опубликована полностью в рубрике «Оригинальные исследования».
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том V, 1У< 3, 2010
областных целевых программ (приоритетных направлений) и их коммерческой реализации путем создания малых предприятий и (или) частно-государственного партнерства с помощью целевых программ по развитию инновационной деятельности.
А.Б. Селькина, В.И. Шепитько, Г.А. Ерошенко,
О.Д. Лисаченко
Влияние трансплантации криоконсервированной плаценты на местный иммунный статус слизистой оболочки полости рта
ВГУЗ Украины «Украинская медицинская стоматологическая академия», Полтава, Украина gala_umsa@mail.ru
А.В. Sel’kina, V.l. Shepitko, G.A. Yeroshenko, O.D. Lisachenko Influence of kryopreserved placenta transplantation on the oral cavity mucosa’s local immune status
Местные защитные реакции в слизистой оболочке полости рта обеспечиваются иммунокомпетентными клетками как в составе эпителиальной пластинки (клетки Лангерганса, макрофаги, лимфоциты), так и в собственной пластинке (макрофаги, лимфоциты, плазматические клетки, тканевые базофилы). Изменение их количества и соотношения дает представление о напряженности местного защитного барьера.
Целью работы было определение клеточного состава «иммуноцитов» в собственной пластинке слизистой оболочки дорсальной поверхности языка (ДПЯ) крыс после трансплантации криоконсервированной плаценты (ККП).
Исследование выполнено на 30 крысах линии Ви-стар, 5 из которых составили контрольную группу, а 25 одноразово провели трансплантацию ККП объемом 0,125 см3 под кожу на плече. Выведение животных из эксперимента осуществляли на 2, 7, 14, 21 и 30 сут. Фрагменты слизистой оболочки ДПЯ заключали в эпон-812 по общепринятой методике, изготавливали полутонкие срезы, которые окрашивали полихромным красителем. Количество макрофагов, лимфоцитов, плазмоцитов и тканевых базофилов определяли методом стандартных площадей в 10 полях зрения. Статистическую обработку полученных цифровых данных провели при помощи программы Excel.
У животных контрольной группы в собственной пластинке ДПЯ определялись лимфоциты (0,9±,23 в п/з), макрофаги (1,0+0,29 в п/з), плазматические клетки (0,4+0,22 в гУз) и тканевые базофилы (1,2+0,29 в п/з).
На 2-е сут. после трансплантации ККП количество всех изученных клеток, особенно макрофагов (в 6 раз) и плазмоцитов (в 9 раз) статистические достоверно увеличилось, что может служить морфологическим подтверждением формирования иммунного ответа в слизистой оболочке языка в ответ на введение плацентарной ткани. Количество лимфоцитов и тканевых
+
3,2+0,18 в п/з соответственно (р<0,05).
На 7-е сут. эксперимента количество лимфоцитов соответствовало показателям в контрольной группе животных. Нормализация количества тканевых базофилов определялась до 14 сут. наблюдения. К 21 сут. эксперимента количество всех изученных клеток не отличалось от значений в контрольной группе.
Таким образом, трансплантация ККП вызывает изменение количества и соотношения «иммуноцитов» в собственной пластинке ДПЯ. Однако наличие в ККП
биологически активных веществ способствует быстрой реализации иммунного ответа и восстановлению морфофункционального состояния слизистой оболочки ДПЯ до 14 сут. наблюдения.
С.А. Сергеев 1, Н.В. Кошелева 1 а, И.Н. Сабурина а,
М.Л. Семенова 1
Оптимизация результатов трансплантации клеток в сетчатку, поврежденную лазерным излучением на модели эксплантационной культуры
1 МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
2 Институт общей патологии и патофизиологии РАМН, Москва, Россия
embryossa@gmail.com
S.A. Sergeev, N.V. Kosheleva, I.N. Saburina, M.L. Semenova Cells transplantation results optimization using the explantation retina culture model damaged by laser émission
Применение клеточных технологий, a именно, трансплантация нейрональных стволовых/прогениторных клеток (НСПК) и клеток пигментного эпителия (ПЗ), в современной офтальмологии дало возможность восстанавливать утраченное зрение после необратимых повреждений сетчатки. Однако полученные как в клинике, так и в эксперименте данные наблюдения за репарацией дефектов сетчатки после клеточной трансплантации часто носят противоречивый характер и не позволяют добиться желаемого результата. Остается бесспорной решающая роль нового микроокружения на судьбу трансплантированных клеток, однако наглядно продемонстрировать зависимость активности участия введенных в организм клеток от места и способа инъекции удается при сравнении экспериментов in vivo и in vitro с применением модели органотипического эксплантационного культивирования.
Нами были предложены модели трансплантации GFP+ НСПК 4-го пассажа и клеток ПЗ 6-го пассажа мышей линии C57BL/6-Tg(ACTB-EGFP)/0sb/J в эксплан-тационную культуру сетчатки (37°С, 5%С02 DMEM/F12, + глутамин, + dFGFn EGF (Юнг/мл), В27, N2 и 10% Fêtai clone) и их инъекции интравитриально (10 ООО кл./2 мкл), ретробульбарно (300 ООО кл/10 мкп) и супрахориоидально (300 ООО кл./2 мкл) крысам линии Campbell в возрасте 14 сут. с последующим иммуногистохимическим анализом экспресии p-lll-тубу-лина и GFAP.
После трансплантации in vivo на основании ЗРГ установлено, что клетки ПЗ как при интравитриальной, так и при ретробульбарной трансплантации через 4 и 6 сут. оказывают слабоположительное влияние на функциональное состояние сетчатки крыс Campbell возраста 25 сут. и позволяет сохранить функциональную активность сетчатки у крыс до 36 сут. Статистически достоверно увеличивается толщина ONL у опытных животных возраста 27 и 43 сут. При супрахориоидаль-ной трансплантации клеток ПЗ отмечено выраженное стабилизирующее влияние трансплантации на процессы дегенерации, развивающиеся в ONL у крыс Campbell и сохранение высокого уровня функциональной активности сетчатки. При супрахориоидальной трансплантации НСПК функциональная активность сетчатки животных была в 3 раза ниже, чем при аналогичной трансплантации клеток ПЗ, несмотря на статистически неразличимые морфологические данные толщины ONL.
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том V, № 3, 2010
