CC BY
140
В ПОМОЩЬ ПРАКТИЧЕСКОМУ ВРАЧУ
В ПОМОЩЬ ПРАКТИЧЕСКОМУ ВРАЧУ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012
УДК 616.31-022-02:665.583.44]-092:612.017.1]-078.33
А. Б. Егорова, Л. Т. Мусина, И. Г Мустафин, Р. З. Уразова
СОСТОЯНИЕ МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА ПОЛОСТИ РТА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ
антисептических зубных паст в качестве лечебро-профилактических средств
ГОУ ВПО Казанский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития РФ (420012, Казань, ул. Бутлерова, д. 49)
Одним из наиболее информативных показателей (индикаторов) состояния как организма в целом, так и полости рта (ПР) является микрофлора, а также взаимодействие факторов местной и общей неспецифической резистентности организма. Изменение баланса микрофлора-макроорганизм неизбежно ведет к изменению местного иммунитета ПР Воздействие на организм различных веществ (антисептики, антибактериальные препараты и др.) может разрушить тонкие совершенные механизмы защиты.
Цель работы - определить влияние антисептиков в составе зубных паст на микробиологический и иммунологический статус здоровых лиц.
Задачи исследования: 1) изучить состояние местного иммунитета ПР при использовании антисептических зубных паст в качестве лечебно-профилактических средств гигиены; 2) определить влияние триклозана и хлоргексидина в составе зубных паст на состояние микробиоценоза ПР; 3) установить сроки безопасного использования антисептических паст; 4) выявить возможные изменения в системе микрофлора-макроорганизм при использовании антисептических средств гигиены ПР
Ключевые слова: ротовая жидкость, лизоцим, микрофлора полости рта Egorova A.B., MusinaL.T., Mustafin I.G., Urazova R.Z.
THE STATE OF LOCAL ORAL CAVITY IMMUNITY IN THE SUBJECTS USING ANTISEPTIC TOOTHPASTES AS THE THERAPEUTIC AND PROPHYLACTIC REMEDIES
The objective of the present work was to study the influence of antiseptics contained in toothpastes on the microbiological and immunological status of healthy subjects who used the antiseptic toothpastes as therapeutic and prophylactic remedies. The evaluation of local immunity in the oral cavity included the elucidation of the effects of toothpaste triclosan and chlorhexidine on the oral cavity microbiocenosis. The duration of the safe use of antiseptic toothpastes was established taking into consideration potential changes in the “microflora-microorganisms” system under effect of antiseptic personal hygienic products.
Key words: oral cavity, lysozyme, microflora of the oral cavity
Одним из наиболее информативных показателей (индикаторов) состояния как организма в целом, так и полости рта (ПР) является микрофлора, а также взаимодействие факторов местной и общей неспецифической резистентности организма [6]. Изменение баланса микрофлора-макроорганизм неизбежно ведет к изменению местного иммунитета ПР. Воздействие на организм различных веществ (антисептики, антибактериальные препараты и др.) может разрушить тонкие, совершенные механизмы защиты [4].
В настоящее время в составе зубных паст широко используют такие антисептики, как хлоргексидин и триклозан, причем существуют две формы триклозана - в комплексе с системой Гантрез (сополимер поливинилметилового эфира с малеиновым ангидридом) и без нее. Данные пасты относятся к категории лечебнопрофилактических с рекомендацией их применения ежедневно в течение неограниченного количества времени [7, 8].
По мнению ряда авторов [7, 8, 14], антисептики в составе зубных паст могут оказывать бактериостатическое (подавление усвоения незаменимых аминокислот микроорганизмами) и бактерицидное (дезорганизация цитоплазматической клеточной мембраны микробов) действие в отношении грампо-ложительных и грамотрицательных бактерий, дерматофитов и дрожжеподобных грибов.
Егорова Алена Борисовна - врач-интерн КГМУ, тел. 8 (917) 854-51-25, e-mail:[email protected]
Одним из факторов местного иммунитета ПР, содержащихся в ротовой жидкости, является лизоцим. Оценка нормы активности лизоцима в биологических жидкостях отличается при использовании различных методик. Существует метод количественной оценки состояния местного иммунитета, в котором указывается условная норма активности лизоцима, которая составляет 40% [16]. В то же время В. И. Стогний и соавт. [9] при модификации методики определения активности лизоцима в биологических жидкостях указывают на уровень активности в пределах 68-71 ± 0,7%.
В научной литературе показана возможность влияния антисептиков в составе зубных паст на микрофлору ПР [3, 6-8]. Однако вопросы длительного использования зубных паст, содержащих антисептики, и их действие на состояние микрофлоры и местного иммунитета ПР остаются недостаточно хорошо изученными.
Цель работы - определить влияние антисептиков в составе зубных паст на микробиологический и иммунологический статус здоровых лиц.
Задачи исследования: 1) изучить состояние местного иммунитета ПР при использовании антисептических зубных паст в качестве лечебро-профилактических средств гигиены; 2) определить влияние триклозана и хлоргексидина в составе зубных паст на состояние микробиоценоза ПР; 3) установить сроки безопасного использования антисептических паст; 4) выявить возможные изменения в системе микрофлора-макроорганизм при использовании антисептических средств гигиены ПР.
- 159 -
ИММУНОЛОГИЯ № 3, 2012
1 -я группа (зубная паста с триклозаном и системой Гантрез)
2- я группа (зубная паста с триклозаном)
3- я группа (зубная паста с хлоргексидином) 1 -я группа (зубная паста без антисептиков; контроль)
Изменение (в %) количественного состава микрофлоры зубной бляшки (а), слизистой оболочки языка (б) и слизистой оболочки десны (в) при использовании зубных паст.
1 — до исследования; 2 — через 2 нед; 3 — через 1 мес.
Материалы и методы. Для эксперимента были отобраны 53 здоровых лица в возрасте 19-20 лет, которые до начала исследования для гигиены ПР использовали различные зубные пасты. Для чистоты опыта лиц, использовавших ранее антисептические зубные пасты (n = 5), распределили по разным группам. Все пациенты дали согласие на проведение эксперимента, кроме того, в течение 1 мес они должны были использовать конкретную зубную пасту и зубную щетку средней жесткости.
У 3 испытуемых через 2 нед от начала исследования выявили ОРВИ, у 1 - беременность. Этих лиц мы исключили из эксперимента.
Пациентов разделили на 4 группы: 1-я группа (n = 13) применяла зубную пасту, содержащую 0,3% триклозана с системой Гантрез; 2-я группа (n = 13) - зубную пасту, содержащую 0,3% триклозана; 3-я (n = 11) - зубную пасту, содержащую 0,2% хлоргексидина; 4-я (n = 13) - зубную пасту без антисептиков (контроль).
В работе использовали клинические и микробиологические тесты. Исследование проводили в течение 1 мес.
Каждому пациенту выдали “Дневник наблюдения”, содержащий следующие пункты: 1) вкус зубной пасты; 2) наличие аллергического или раздражающего действия зубной пасты в ПР; 3) ощущение в ПР после чистки зубов; 4) наличие непри-
ятного запаха из ПР в течение 12 ч; 5) наличие воспалительных заболеваний в ПР во время исследования; 6) применение местных антибактериальных препаратов во время исследования; 7) использование общих антибактериальных препаратов во время исследования; 8) появление соматических заболеваний во время исследования.
Активность лизоцима в ротовой жидкости определяли по модифицированной методике З. В. Ермолаевой [1]. Эталонную тест-культуру и стандарт для исследования получили в ГИСК им. Тарасевича. Активность лизоцима ротовой жидкости вычисляли по формуле: L = (D0 - D1) / D0 . 100%,
где L - активность лизоцима (в %); D0 - оптическая плотность до инкубации; D1 - оптическая плотность после инкубации.
Микробиологические исследования проводили микроскопическим и бактериологическим методами по стандартным методикам.
ПР как экологическая ниша разделяется на достаточно отличающиеся друг от друга биотопы: зубную бляшку, слизистую оболочку десны, слизистую оболочку языка и другие. Физико-химические особенности каждого из них - рН десны, вязкость, температура, наличие органических соединений и остатков пищи, парциальное давление газов - обеспечивают существенные различия в их составе.
Состояние микрофлоры ПР у пациентов оценивали на основании исследования трех биотопов: зубной бляшки, соскоба с языка, мазка со слизистой оболочки десны. Зубную бляшку собирали со всех поверхностей зуба (щечной, язычной/ небной, жевательной, дистальной, медиальной) стерильной кюретажной ложечкой до заполнения всего объема. Мазок со слизистой оболочки десны и соскоб с языка брали стерильным ватным тампоном. В первом случае материал эмульгировали, а в остальных суспензировали в пробирках, содержащих 10 мл раствора NaCl. Полученные гомогенаты являлись исходными, их разводили методом двукратных серийных разведений, взвесь зубной бляшки до значения 1:80, мазка со слизистой оболочки десны и соскоба с языка до значения 1:160. В результате серий проведенных опытов мы пришли к следующему выводу: данные разведения являются наиболее удобными и оптимальными для последующего подсчета колоний, образующихся на чашках с питательным агаром [11]. Полученные разведения высевали на 5% кровяной агар, инкубировали в термостате при температуре 37oC в течение 24 ч. Затем производили подсчет колоний, регистрируя культуральные особенности и наличие гемолиза.
Полученные данные подвергали статистическому и корреляционному анализу, применяли методы математической статистики для расчета критерия достоверности, средних величин, средних ошибок и др. Расчеты и основные исходные данные визуализировали буквенно-цифровым способом и средствами Microsoft Excel 2000 и Microsoft Word 2000.
Результаты и обсуждение. У большинства (97,5 ± 0,05%) пациентов до начала исследования отмечали низкую интенсивность кариеса, хорошую гигиену ПР, здоровое состояние тканей пародонта (индекс РМА = 0).
По данным “Дневника наблюдения”, большинство (92 ± 0,05%) пациентов указали на приятный вкус применяемых зубных паст, отсутствие аллергического и раздражающего действия, неприятного запаха из ПР в течение дня. Во время эксперимента у них не наблюдалось воспалительных заболеваний в ПР. Во время исследований они не принимали антибактериальные препараты.
До начала использования зубных паст микрофлора ПР у обследуемых лиц была в пределах нормы. В составе зубных бляшек преобладали кокковые формы микроорганизмов над палочковидными и нитевидными. Негемолитические формы бактерий доминировали над гемолитическими в соотношении 1:0,1. Аналогичные результаты были получены и через 2 нед использования зубных паст (см. рисунок).
Через 1 мес эксперимента у лиц, использовавших зубные пасты с антисептиками, в составе микробиоценоза произошли изменения: уменьшилось общее количество жизнеспособных бактерий. До начала исследования общее количество колоний
- 160 -
В ПОМОЩЬ ПРАКТИЧЕСКОМУ ВРАЧУ
Таблица 1
Активность (в %) лизоцима через 2 нед исследования
Группа пациентов Активность лизоцима р*
1-я 31,2 ± 0,21
2-я 36,31 ± 0,32
3-я 56,5 ± 0.17 < 0,01
4-я (контроль) 31,7 ± 0,11
Таблица 2
Активность (в %) лизоцима через 1 мес исследования
Группа пациентов Активность лизоцима р*
1-я 44,93 ± 0,21 < 0,01
2-я 44,4 ± 0,17 < 0,01 (Т4-Т2)
3-я 56,4 ± 0,31
4-я (контроль) 32,0 ± 0,07
* - относительно контроля.
на чашках Петри составляло в среднем 172,3 ± 3,4, а через 1 мес эксперимента снизилось до 56,6 ± 1,2 колонии. Кроме того, изменился качественный состав микробиоценоза. Применение антисептических зубных паст одновременно привело к уменьшению общего количества негемолитических и увеличению зеленящих и гемолитических видов бактерий. Соотношение негемолитических форм к гемолитическим составило 0,2:1. Причем описанные выше изменения значительно более выражены в 1-й и 3-й группах, нежели во 2-й. В 4-й группе (контроль) изменений не наблюдали (см. рисунок).
Активность лизоцима у обследуемых нами здоровых лиц до начала исследования колебалась от 31,2 до 54,5%, составив в среднем 32 ± 0,17%. Полученный параметр активности лизоцима (32 - 0,17%) в ротовой жидкости мы приняли за норму.
Через 2 нед эксперимента у пациентов контрольной группы изменений активности лизоцима не наблюдали. Не изменилась она в 1-й (31,23 ± 0,21%) и во 2-й (36,31 ± 0,32%) группах (пасты, содержащие триклозан с системой Гантрез и без нее). Однако произошло статистически достоверное повышение уровня активности лизоцима в 3-й группе у лиц, использовавших зубную пасту с хлоргексидином, до 56,5 ± 0,17% (р < 0,01) (табл. 1, 2).
Через 1 мес эксперимента в контрольной группе активность лизоцима осталась без изменений (32 ± 0,07%), не изменилась она и в 3-й группе (56,4 ± 0,31%) по сравнению с таковой в предыдущие 2 нед эксперимента. В 1-й и 2-й группах показатели статистически достоверно увеличились до 44,93 ± 0,21% (р < 0,01) и 44,4 ± 0,17% (р < 0,01) соответственно. Таким образом, в результате проведенного эксперимента мы выявили изменение неспецифической резистентности ПР в сторону активации факторов местного иммунитета. Результаты наших исследований согласуются с данными А. В. Ство-лыгина и соавт. [8], которые в своих исследованиях показали, что уровень активности лизоцима зависит от срока действия раздражающего фактора. Вначале наблюдается резкое увеличение активности местного иммунного ответа, затем при переходе процесса в хроническую стадию резерв организма истощается, что ведет к резкому снижению активности лизоцима и других факторов местного иммунитета ПР.
Микробиоценоз ПР здорового человека в основном представлен условно-патогенными микроорганизмами, которые существуют в равновесии с макроорганизмами. При хроническом воздействии антисептиков баланс микроорганизм - макроорганизм может нарушиться, что вызывает изменение количественного и качественного состава микробов и изменение их вирулентности.
В свою очередь изменение в микробиоценозе ПР провоцирует активацию местной неспецифической резистентности организма, что неизбежно должно отразиться на активности факторов местного иммунитета ПР, и в частности на уровне лизоцима.
выводы
1. Антисептики способны влиять на уровень местного иммунитета ПР, вызывая вначале повышение иммунологической функции, а при длительном воздействии (более 2 нед) - ее угнетение.
2. Использование антисептических зубных паст (более 2 нед) приводит к количественному и качественному изменению микробной флоры ПР, что является неблагоприятным прогнозом в развитии дисбактериоза.
3. Назначение и использование антисептических зубных паст должно быть только по показаниям и в течение ограниченного количества времени - не более 2 нед.
4. При длительном использовании антисептических зубных паст в системе микрофлора - макроорганизм происходит изменение состояния микробиоценоза, что может отразиться на уровне активности местного иммунитета ПР.
литература
1. Барер Г. М. Терапевтическая стоматология: болезни пародонта. -М., 2010.
2. Барер Г. М. Терапевтическая стоматология: заболевания слизистой оболочки полости рта. - М., 2010.
3. Боровский Е. В., Данилевский Н. Ф. Атлас заболеваний слизистой оболочки полости рта. - М., 1981.
4. Боровский Е. В., Машкиллейсон А. Л. Заболевания слизистой оболочки полости рта и губ. - М., 1991.
5. Иванова Л. А., Чередникова А. Б. Микрофлора полости рта здорового человека // Современные аспекты медицины и биологии.
Ч. 2: Материалы V межрегиональной науч. конф. 21-24 апр. 2008 г. - Ижевск, 2008. - С. 312-314.
6. Мателло С. Н., Купец Т. В., Акулович А. В. Клинический подход к выбору антисептических зубных паст на основе антисептиков и натуральных компонентов // Пародонтология. - 2007. - № 3 (44). -С. 69-72.
7. Олейник И. Н., Покровская В. Н. Современные аспекты биологии и иммунологии // Микробиология. - 1989. - № 6. - С. 91-97.
8. Стволыгин А. В. и др. Влияние лечебно-профилактической зубной пасты Мексидол Дент Актив на состояние местного иммунитета полости рта у лиц с хроническим катаральным гингивитом // Клин. иммунол. - 2007. - Т. 8, № 1. - С. 12-14.
9. Стогний В. И., Голик В. П., Ткаченко В. В. и др. Способ определения активности лизоцима в слюне и сыворотке крови // Лаб. дело. -1989. - № 8. - С. 54.
10. Улитовский С. Б. Средства индивидуальной гигиены полости рта.
- СПб., 2002.
11. Улитовский С. Б. Энциклопедия профилактической стоматологии.
- СПб., 2004.
12. Уразова Р. З., Мусина Л. Т., Егорова А. Б. Сравнительный анализ антисептических зубных паст // Практ. мед. - 2009. - № 01 (33). -С. 84-86.
13. Федоров Ю. А., Володкина В. В. Оценка очищающего действия зубных гигиенических средств и качество ухода за полостью рта // Терапевтическая и ортодонтическая стоматология. - Л., 1971. -Вып. 1. - С. 117-119.
14. Шумский А. В. Иммунопатогенетический подход в лечении воспалительных заболеваний полости рта // Пародонтология. -2005. - № 4 (37). - С. 18-22.
15. Bolden T. E., Zambon J. J., Sowinski J. et al. Клиническое воздействие зубной пасты, содержащей триклозан, сополимер и фторид натрия в кремниевой основе, на образование зубного налета и гингивита: клиническое исследование продолжительностью в шесть месяцев // J. Clin. Dent. - 1992. - N 4. - P. 125-131.
16. Bundesinstitut fuer Risikobewertung. Triclosan nur im Bereich anwen-den, um Resistenzbildungen vorzubeugen. Stellungnahme 2006 Mai 08; 030.
17. CampbellL., ZirwasM. J. Triclosan // Dermatitis. - 2006. - Vol. 17, N 4. - P. 204-207.
Поступила 22.09.11
- 161 -
