CC BY
68
МЕДИЦИНА
УДК 616.419: 616.155.392.8
С.А. АГАФОНКИН, Л.А. ЛЮБОВЦЕВА, Т.В. АГАФОНКИНА
СОСТОЯНИЕ АВТОНОМНОЙ РЕГУЛЯЦИИ КОСТНОМОЗГОВОГО КРОВЕТВОРЕНИЯ ПРИ ОСТРОМ МИЕЛОБЛАСТНОМ ЛЕЙКОЗЕ
Введение
В настоящее время проблеме опухолевой трансформации клетки посвящается большое число научных исследований. Успехи фундаментальных наук в этой области - залог успеха в работе по снижению смертности от злокачественных новообразований.
Сегодня считается доказанным, что в развертывании и регуляции клеточных реакций организма важная роль принадлежит нейромедиаторам, гормонам и другим биологически активным веществам [11]. Биогенные амины (БА) осуществляют регуляцию всех функций организма [8], участвуют в первичном и вторичном иммунном ответе [3,5]. Они способствуют дифференцировке клеток, участвуют в автономном управлении органов [6]. Однако до настоящего времени роль морфологических структур, содержащих биогенные амины, в процессе дифференцировки и пролиферации клеток, а также патогенезе онкологических заболеваний остается малоизученной.
С современных позиций все виды лейкозов развиваются на основе патофизиологических закономерностей, имеющих общее значение как для лейкозов, так и для опухолей других локализаций. Как известно, лейкозы - частная форма злокачественных новообразований. В связи с чем изучение патологического кроветворения необходимо для того, чтобы понять механизмы, регулирующие процессы роста и дифференцировки клеток в норме и патологии, что, возможно, даст возможность найти точки приложения химических, физических и биологических воздействий, корректирующих патологические состояния кроветворения.
Материал и методы исследования. В экспериментальную группу вошли 11 больных острым миелобластным лейкозом, находившихся на лечении в гематологическом отделении Республиканской клинической больницы №1 г. Чебоксары. Во всех случаях диагноз выставлен клиниколабораторным методом. Для верификации использовался цитологический материал, полученный методом стернальной пункции верхней трети тела грудины иглой Кассирского с последующим окраской по Романов-
скому - Гимзе и подсчетом миелограммы, явившейся референтным методом исследования. Во всех случаях пунктат красного костного мозга являлся клеточным с содержанием клеток пораженного клона более 30%. Во всех описываемых случаях клетки опухолевого клона имели характерные морфологические и гистохимические признаки миелобластов.
Референтную группу составили исследования цитологического материала, полученного методом стернальной пункции у трупов двух боль-йых, не имевших признаков неопластической патологии гемопоэза, умерших в раннем послеоперационном периоде от тромбэмболии легочной артерии (материал получен через 12 часов после смерти), а также у 4 пациентов РКБ №1 г. Чебоксары, у которых при обследовании не была выявлена патология кроветворения. Во всех вышеперечисленных случаях показатели миелограммы соответствовали нормальным.
Для избирательного выявления аминосодержащих структур красного костного мозга человека применялся люминесцентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа в модификации Е.М. Крохиной [4,10]. Мазки костного мозга рассматривались под люминесцентным микроскопом ЛЮ-МАМ-4, при этом продукты конденсации катехоловых аминов (КА) формальдегидом дают ярко-зеленую флуоресценцию, а карболины, которые в подобных реакциях формирует серотонин (С) - желтое свечение.
С целью идентификации гистаминсодержащих структур костного мозга использован люминесцентно-гистохимический метод Кросса, Эвена, Роста [9]. Данный метод основан на реакции гистамина с ортофталие-вым альдегидом с образованием сильно флюоресцирующих веществ.
Содержание КА, С и Г в структурах красного костного мозга оценивалось с помощью цитоспектрофлюориметрии, осуществляемой на люминесцентном микроскопе ЛЮМАМ-4 с применением микрофлюоримет-рической насадки ФМЭЛ-1А. Показания содержания БА снимались с вольтметра при напряжении 800 вольт с зондом 0,5. Для КА использовали фильтр «6» с длиной волны 480 нм, для С - «8» с длиной волны 525 "нм, для Г - 515 нм. Замер интенсивности свечения производился по шкале вольтметра в единицах флюоресценции (уел. ед.).
Статистический анализ полученных цифровых данных производился с вычислением следующих показателей: М - средняя арифметическая величина; т - ошибка средней арифметической величины. Статистическую достоверность определяли критерием Стьюдента (1). Вид распределения кол-личественных признаков определялся с использованием критерия Шапиро-Уилка [1,7]. .
Для выявления взаимосвязи между показателями интенсивности люминесценции КА, С и Г в изучаемых структурах красного костного мозга в норме и при изучаемой патологии применялся корреляционный анализ. Коэффициент корреляции определялся методом Пирсона [7].
Принята следующая классификация силы корреляции в зависимости от значения коэффициента корреляции г, который изменяется в интервале от -1 до 1: -0,25-0,25 - слабая корреляция; -0,75 - -0,25 и 0,25 - 0,75 -умеренная корреляция; -1 - -0,75 и 0,75 - 1 - сильная корреляция [1,2,7].
Кроме того, при анализе взаимосвязи между исследуемыми признаками существование и сила предполагаемой корреляции определялись путем проверки нулевой статистической гипотезы о равенстве нулю коэффициента корреляции (т.е. об отсутствии связи между признаками). Вычислялось значение вероятности (р): при значении р более 0,05 при любом значении коэффициента корреляции нулевая гипотеза (г=0) не'отклонялась и значение коэффициента г не подвергалось интерпретации. Коэффициент корреляции интерпретировался лишь при значениях р менее 0,05 [1].
Результаты исследования. При люминесцентно-гистохимическом исследовании препаратов красного костного мозга больных острым миелобластным лейкозом выявлены следующие биоаминсодержащие структуры: 1) клетки пораженного клона с ядерно-цитоплазматическим
соотношением, смещенным в сторону ядра; 2) флуоресцирующее зеленоватым свечением межклеточное вещество; 3) гранулы гранулярных лю-минесцирующих и тучных клеток, визуализирующихся в виде пылевидной зернистости. Целых гранулярных люминесцирующих и тучных клеток не выявлено.
В препаратах референтной группы выявлены: 1) гранулярные лю-минесцирующие и тучные клетки; 2) межклеточное вещество; 3) трудно идентифицируемые клетки нормального костного мозга на различных этапах дифференцировки, которые не подвергались статистическому анализу.
Основные статистические показатели, полученные в исследовании, приведены в табл. 1.
В табл. 2 приведены коэффициенты корреляции для всех пар исследуемых признаков, в которых выявлена статистически достоверная корреляционная связь. Всего в обеих группах исследованы корреляционные связи в 36 парах признаков, при этом в референтной группе достоверных связей не выявлено, а при остром миелобластном лейкозе такая связь определена для трех пар. Во всех случаях выявлены корреляционные связи умеренной силы.
Обсуждение и выводы. При анализе полученных результатов обращает на себя внимание полное отсутствие при остром миелобластном лейкозе клеток-регуляторов биоаминного обеспечения красного костного мозга: гранулярные люминесцирующие и тучных клеток. В то же время при отсутствии каких-либо корреляционных связей между изученными признаками в группе с отсутствием неопластической патологии костного мозга при
остром миелобластном лейкозе появляются умеренной силы корреляционные связи в трех парах признаков: КА миелобластов - С гранул ГЛК и тучных клеток, Г гранул - С миелобластов, Г гранул - КА межклеточного вещества. Во всех трех описываемых корреляционных парах присутствуют гранулы тучных и гранулярных люминесцирующих клеток. Все это свидетельствует о вовлечении в патологический процесс автономной регуляции и напряжении медиаторных связей при остром лейкозе. Кроме того, пораженный клон клеток (миелобласты) содержит повышенные концентрации Г и более низкие С и КА. В литературе имеются сведения о том, что С способствует дифференцировке клеток костного мозга до конечных стадий, а Г супрессирует деление бластных форм. Тучные клетки в красном костном мозге человека являются основным депо Г. В миелобластах также накапливается Г.
Таблица 1
Основные статистические параметры содержания биогенных аминов в структурах костного мозга человека в референтной группе и при остром миелобластном лейкозе
Группы Субстрат БА м Нижняя граница 95% ДИ Верхняя граница 95% ДИ СКО ш
сч С5 С С 38,16 36,45 39,88 4,59 0,83
тучные клетки КА 20,30 19,03 21,56 3,39 0,61
& Г 75,3 73,81 76,78 3,97 0,72
1 £ С 24,66 23,69 25,63 2,60 0,47
й о сх ГЛК КА 17,76 16,26 19,26 4,02 0,73
о Си Г 58,43 57,03 59,83 3,74 0,68
С 15 13,77 16,22 3,26 0,59
межклеточное вещество КА 5,83 4,78 6,88 2,81 0,51
Г 31,53 30,38 32,67 3,07 0,56
се гранулы тучных клеток и ГЛК С 16,83 15,42 18,24 3,77 0,68
с Ч £ КА 7,33 6,02 8,63 3,49 0,63
к “ 25 ^ 2 Ч ® ю ^ Г 30,8 30,05 31,54 1,98 0,36
С 78,93 77,91 79,95 2,72 0,49
1 §1 и 2 Ц £ ж межклеточное вещество КА 48,96 48,01 49,92 2,56 0,46
Г 41,76 40,82 42,71 2,52 0,46
5 3 6 £• С 43,5 42,25 44,74 3,33 0,60
С 5 миелобласты КА 19,16 17,96 20,36 3,21 0,58
о Г 76,93 76,14 77,71 2,09 0,38
Таблица 2
Статистически достоверные корреляционные связи в биоаминсодержащих структурах красного костного мозга в исследуемых группах (р < 0,05).
Заболевание Корреляционная пара Коэффициент корреляции
Референтная группа Статистически достоверных коэффициентов корреляции не выявлено '
s § _ « 3 ю 5 S е- § й | КА миелобластов-С гранул клеток-регуляторов 0,41
Г гранул клеток-регуляторов - С миелобластов 0,38
X “ о С О s £ Г гранул клеток-регуляторов - КА межклеточного вещества 0,4
Выводы
Мы считаем, что гранулярные люминесцирующие и тучные клетки являются местными регуляторами кроветворения в красном костном мозге человека. Регуляция интенсивности и направления гемопоэза осуществляется посредством синтеза, накопления и распределения биогенных аминов в морфологических структурах костного мозга этими клетками.
Отсутствие гранулярных люминесцирующих и тучных клеток при остром миелобластном лейкозе приводит к нарушению распределения биогенных аминов в структурах костного мозга, способствуя тем самым делению бластных форм без их последующей дифференцировки, и, как следствие этого, пролиферации опухолевого клона.
Список сокращений
Г - гистамин;
ДИ - доверительный интервал;
КА - катехоловые амины;
М - средняя арифметическая;
ш - стандартная ошибка среднего значения;
С - серотонин;
СКО - среднее квадратичное отклонение.
Литература
1. Власов В.В. Введение в доказательную медицину // М.: Медиа Сфера. 2001. 392 с.
2. Глаиц С. Медико-биологическая статистика // М.: Практика, 1999. 459 с.
3. Корнева Е.А., Шхинек Э.К. Гормоны и иммунная система // Л.: Наука, 1988. 250 с.
4. Крохина Е.М., Александров П.Н. Симпатический (адренергический) компонент эфферентной иннервации сердечной мышцы // Кардиология. 1969. Т 3. С. 97-103.
5. Любовцева JI.A. Люминесцентно-гистохимическое исследование аминсодержащих структур костного мозга, тимуса и крови при действии нейромедиаторов и антигенов // Чебоксары: Изд-во Чуваш, ун-та, 1993. 99 с.
6. Любовцева Л.А. Функциональная активность аминосодержащих структур костного мозга, тимуса и крови при действии нейромедиаторов и антигенов: Автореф. ... дис. докт. биол. наук. М., 1994. 34 с.
7. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. М.: Медиа Сфера, 2002.305 с.
8. Blalock J. Edwin. The syntax of immune-neuroendocrine communication // Immunol. Today. 1994. V. 15, №11. P. 504-511.
9. Cross S.A., Ewen S. W., Rost F. W. A study of methods available for cytochemical localization of histamine by fluorescence induced with o-phtaldehyde or acetaldehyde // Hystochem. J. 1971. V.3, N.6. P. 471-476.
10. Falk B., Hillarp N.A. et al. Fluorescence of catecholamines and related compounds condensed with formaldehyde // J. Histochem. Cytochem. 1962. V. 10, P. 348-354.
11. Kalgutkar Amit S., Castagnoli Neal, Testa Bernard. Selective inhibitors of monoamine oxidase (MAO-A and MAO-B) as probes of its catalytic site and mechanism // Med. Res. Rev. 1995. V. 15, № 4. P. 325-388.
ЛЮБОВЦЕВА ЛЮБОВЬ АЛЕКСЕЕВНА родилась в 1948 г. Окончила химико-биологический факультет Чувашского педагогического института им. И.Я. Яковлева. Доктор биологических наук, профессор, заведующая кафедрой цитологии, эмбриологии, гистологии Чувашского государственного университета. Имеет более 70 научных работ в области гистологии, эмбриологии и иммунологии.
АГАФОНКИН СЕРГЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ родился в 1977 г. Окончил Чувашский государственный университет. Аспирант кафедры цитологии, эмбриологии, гистологии Чувашского университета.
АГАФОНКИНА ТАТЬЯНА ВСЕВОЛОДОВНА родилась в 1978 г. Окончила Чувашский государственный университет. Ассистент кафедры функциональной и лабораторной диагностики Чувашского университета._________________________
УДК 616.89-008.441
И.Е. БУЛЫГИНА, А.В. ГОЛЕНКОВ
ОСОБЕННОСТИ ПОТРЕБЛЕНИЯ ПСИХОАКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ И РАЗРАБОТКА КОНЦЕПЦИИ НАРКОЛОГИЧЕСКОЙ ПОМОЩИ НЕСОВЕРШЕННОЛЕТНИМ В ЧУВАШСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ
В последние 5-10 лет проблема употребления психоактивных веществ (ПАВ) в молодежной среде стала особенно актуальной для России. Этому способствовали большое количество вовлеченных в нее подростков, появление новых и трансформация известных форм зависимости от наркотических, токсических веществ и алкоголя [5]. Основная часть потребителей ПАВ находится вне поля
