CC BY
51
K^Jvlребёнка
¡нфекцп в д1тей / Infections in Children
УДК 576.858.53-091.818-053.2 КРАМАРЕВ С.А.1, ТАРААИЙ H.H.2, ВЫГОВСКАЯ О.В.1 Национальный медицинский университет имени А.А. Богомольца, г. Киев
2Международный центр астрономических и медико-экологических исследований НАНУ, г. Киев
СОСТОЯНИЕ АПОПТОЗА ПРИ ОСТРОЙ
V V V
ЭПШТЕЙНА — БАРР ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ
Резюме. В статье представлен научный обзор, посвященный изучению вопроса апоптоза иммуноком-петентных клеток при патологических процессах, в том числе и при Эпштейна — Барр вирусной инфекции. Также представлены данные собственного исследования, выявившие нарушение экспрессии маркеров апоптоза иммунокомпетентных клеток у детей с острой Эпштейна — Барр вирусной инфекцией. Уровень ¥а$/Аро-1 превышал контрольное значение в 2,9раза, Вс1-2 — в 2,3раза, Вах — в 3,2раза, — в 3,1 раза, ТИ¥-а — в 3раза, аннексина V— в 2,5раза по сравнению с показателями в группе сравнения.
Ключевые слова: апоптоз, дети, Эпштейна — Барр вирусная инфекция, острая инфекция.
Введение
Роль апоптоза при вирусных инфекциях представляет фундаментальный интерес для понимания патогенетических процессов иммунной системы, имеет прикладное значение для объективного обоснования назначаемой терапии. В последние годы этот процесс представляет интерес c позиции молекулярной биологии, биохимии и генетики.
Апоптоз (от греч. apoptosis — листопад) представляет собой форму гибели клетки, которая выявляется с помощью морфологической идентификации: конденсации хроматина, уменьшения размера клетки, фрагментации ядра и цитоплазмы, образования апоптотических телец [1, 2]. Большинство вирусов, передающихся воздушно-капельным путем, в том числе Эпштейна — Барр вирус (ЭБВ), могут вызывать апоптоз в клетках дыхательного эпителия, при этом процесс апоптоза может активироваться через фактор некроза опухоли a (TNF-a) — апоптозиндуци-рующий лиганд TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL), который приводит к селективному уничтожению инфицированных вирусом клеток [3—9]. TNF-a представляет собой растворимый цитокин, синтезируемый активированными Т-лимфоцитами и макрофагами в ответ на воспаление и инфекцию [10]. Связывание его с TNF-рецепторами (TNF-R) приводит к развитию той же реакции, что и при связывании Fas receptor (Fas-R) и Fas ligand (Fas-L or CD95L), с той лишь разницей, что мобилизуется белок TRADD (TNF receptor-associated death domain) [11, 12]. Это, в свою очередь, приводит к усилению транскрипции
фактора nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells (NF-kB) и активатора плазминогена-1 (АР-1) [13]. TNF-a стимулирует адгезию нейтрофи-лов на эндотелиальных клетках и их экстравазацию — миграцию к очагу воспаления из сосудистого русла (способствуя разрыхлению межклеточного матрик-са), способствует активации нейтрофилов, усиливая фагоцитоз и продукцию супероксидных радикалов, а также экспрессию рецепторов комплемента на ней-трофилах, индуцирует экспрессию дополнительных Fas-рецепторов на Т-лимфоцитах, human leukocyte antigen (HLA-DR) и экспрессию высокоаффинного рецептора интерлейкина-2 (IL-2) [11, 13]. Т-клетки под действием TNF-a ускоряют пролиферацию в ответ на IL-2, а также увеличивают IL-2-зависимый синтез интерферона у (IFN-у). TNF-a является ауто-кринным и паракринным активатором макрофагов, усиливая их способность убивать микроорганизмы. TNF-a служит хемоаттрактантом для макрофагов и клеток Лангерганса в коже, стимулирует продукцию IL-1, простагландина Е2 (PGE2), гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ). TNF-a действует преимущественно на начальных этапах воспалительного процесса. Для его завершения необходим transforming growth factor beta (TGF-P). Синтез TNF-a снижается уже через несколько часов после активации. TNF-a оказывает
© Крамарев С.А., Тарадий Н.Н., Выговская О.В., 2013 © «Здоровье ребенка», 2013 © Заславский А.Ю., 2013
сильное провоспалительное и катаболическое действие, обладает антимикробной и противоопухолевой активностью, взаимодействует с мембранным рецептором Fas-семейства (р55) [3, 10—13].
В некоторых ситуациях апоптоз важен для жесткого регулирования в поддержании целостности тканей, функции и оборота клеток, поэтому, как правило, рассматривается как антивоспалительный процесс.
Роль апоптоза при вирусных инфекциях связана с ограничением масштабов инфекции, включая воспаление, и является общим клеточным ответом. Макрофагальные клетки, которые фагоцитировали апоптотические клетки, приобретают при этом противовоспалительные свойства. В таких макрофагах повышается экспрессия TGF-P и PGE2, уменьшается продукция IL-8, TNF-a, IL-1p, monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1). Макрофаги, которые фагоцитировали апоптотические клетки, способны ингибировать пролиферацию Т-лимфоцитов в отличие от макрофагов, фагоцитирующих некротическую клетку [15].
В последнее время уделяется большое внимание изучению биологической активности белков, относящихся к семейству аннексинов. Аннексин V (Ann V) относится к семейству Са+2- и фосфолипидсвязывающих белков, блокирующих фосфолипазу А. В механизме действия Ann V большое значение имеет его свойство связываться с отрицательно заряженными фосфоли-пидами, в том числе с фосфатидилсерином (ФС), экспозиция которого на клеточной мембране является одним из ранних признаков апоптоза [4]. Аннексин V, как и другие аннексины, не выделяется из нормальных клеток; источником внеклеточного Ann V являются апоптотические и разрушенные клетки [3, 16].
В исследованиях было показано, что B-cell lymphoma 2 (Bcl-2) напрямую или опосредованно препятствует высвобождению цитохрома С. Транслокация гена Bcl-2, приводящая к его гиперэкспрессии, характерна для В-клеточной лимфомы, некоторых форм рака и резистентности к химиотерапии [17—21]. Противовоспалительная и сохранная функция белка В^2 заключается в защите эндотелиальных клеток путем ингибирования ядерного фактора NF-кВ и снижения выработки провоспалительных генов [15, 22].
Проапоптозный белок Bax (apoptosis regulator BAX or bcl-2-like protein 4), перемещаясь из цитоплазмы на поверхность митохондрий, инактивирует антиапоп-тозные белки, что приводит к образованию пор в митохондриях и выходу цитохрома С и других проапоп-тозных молекул из межмолекулярного пространства [23]. Проапоптозные члены Bcl-2 также увеличивают проницаемость митохондриальной мембраны, что ведет к попаданию проапоптозных белков в цитоплазму. Подобно другим членам семейства, Bax состоит из константных доменов Bcl-2 гомологов 1 (ВН 1) и 2 (ВН 2), что предопределяет их гомо- или гетеродиме-ризацию с Bcl-2. Несмотря на то, что Bax сам по себе не вызывает апоптоз, повышение уровня Bax ускоряет развитие апоптоза после сигналов смерти, таких как цитокиновая депривация или взаимодействие Fas с Fas-лигандом [23]. Возникновение апоптоза опреде-
ляется соотношением гомодимеров Вах и Вах/Вс1-2 гетеродимеров. Когда Вс1-2 в избытке, апоптоз инги-бируется. Однако если уровень Вах увеличивается в ответ на сигнал смерти, это способствует клеточной смерти.
Чувствительность лимфоцитов разных классов к апоптозу существенно отличается. Так, Т-клетки более чувствительны к апоптозу, чем В-лимфоциты [25]. Это объясняется тем, что активация рецептора антигенного распознавания Т-лимфоцита приводит к резкому повышению чувствительности клетки к апоптозу, в то же время активация антигенраспознающего рецептора В-клеток обусловливает резистентность этих лимфоцитов к апоптозу. Несмотря на то, что активированные В-лимфоциты способны выживать после взаимодействия со специфическим аутоанти-геном, они не в состоянии развивать иммунный ответ без поддержки со стороны Т-хелперов.
Данные об образовании аннексина V, Fas/Apo1, Вах, Вс1-2, интрацеллюлярных Г№-у и TNF-a при ЭБВ-инфекции малочисленны и противоречивы [26].
В связи с этим целью нашей работы стало изучение экспрессии в иммунокомпетентных клетках (ИКК) маркеров апоптоза Fаs/Apo-1, Вс1-2, Вах, Г№-у, TNF-a, аннексина V, количества ИКК, подвергшихся апоптозу в циркулирующей крови больных острой ЭБВ-инфекцией, для уточнения их роли в патогенезе заболевания.
Материалы и методы
Исследование проводилось среди 25 детей в возрасте от 3 до 18 лет, больных острой ЭБВ-инфекцией, которые находились на стационарном лечении в городской детской клинической инфекционной больнице города Киева с 2008 по 2012 год. Диагноз острой ЭБВ-инфекции устанавливали на основании данных анамнеза, клинического и лабораторного обследования (общий анализ крови, определение активности трансаминаз крови), выявления специфических маркеров ЭБВ-инфекции — антител классов ^М ^А, IgG ^А, IgG ЕА к ЭБВ, отсутствия в крови IgG EBNA, определения ДНК ЭБВ в крови и слюне.
Мальчиков было 45 %, девочек — 55 %. Детей от 3 до 6 лет — 35 %, 7-9 лет — 25 %, 10-14 лет — 20 %, старше 14 лет — 20 %; со среднетяжелой формой заболевания — 50 % детей, легкой — 25 %, тяжелой — 25 %. Анализ жалоб и данных объективного обследования показал, что у всех детей заболевание начиналось остро, с интоксикационного синдрома, который проявлялся в виде общей слабости, вялости, недомогания (100 %), снижения аппетита (75 %), головной боли (83,3 %), тошноты (50 %), у детей с тяжелыми формами — артралгии, миалгии, рвоты. Со стороны центральной нервной системы также наблюдались изменения у всех детей в виде эмоциональной лабильности, плаксивости, повышенной возбудимости, отрицательной реакции на осмотр, вялости, нарушение сна выявлено у 66,7 % пациентов. Экзантема встречалась у 40 % больных — преимущественно у детей, принимавших в домашних условиях ампициллин или его произ-
водные. У большинства больных сыпь появлялась на 4-7-й день от начала лечения и сохранялась в течение 10-14 дней. Преобладала пятнисто-папулезная сыпь (61,9 %) средних и/или больших размеров, расположенная по всей поверхности тела, у большинства пациентов сыпь носила сливной характер. У 23,8 % детей сыпь была мелкоточечной, у 14,3 % — геморрагической. Гипертермический синдром регистрировался у всех детей. Повышение температуры тела до 38 °С — у 37,0 %; 38,1-39 °С — у 35,2 %; 39-41 °С — у 27,8 % пациентов. Поражение лимфоидной ткани обнаружено у всех больных. Системный характер лимфаденопа-тии — у 76,7 % детей. Преимущественно отмечалось увеличение подчелюстных (73,3 %), передне-, задне-шейных (83,3 %), паховых групп (50 %) лимфатических узлов. Также были увеличены и другие группы лимфоузлов — подмышечные (50 %), затылочные (45 %), надключичные и подключичные (41,7 %). У всех больных наблюдалось поражение носоглотки: в виде заложенности носа — 86,8 % детей, отека лица и век — 52,8 %, затруднения носового дыхания — 75,5 %, храпа во время сна — 50 %. Выделения из носа появлялись после 4-го дня от начала болезни у 47,2 % пациентов. У всех детей имел место острый тонзиллит, который проявлялся дискомфортом, болью в горле при глотании, гиперемией слизистой оболочки ротоглотки, зернистостью мягкого неба, дужек, задней стенки глотки. На момент госпитализации наслоения на миндалинах наблюдались у 81,7 % больных. Из них у 65,3 % они были гнойные, у 34,7 % — пленчатые, у 25 % — творожистые. У 5 больных наслоений на миндалинах не было, у них отмечались лишь гиперемия и отечность слизистой оболочки ротоглотки. Постоянным симптомом заболевания была гепатомегалия, вы-
явленная у всех детей. Явления гепатита с синдромом цитолиза наблюдали у каждого третьего больного. У этих пациентов при отсутствии гипербилирубинемии регистрировалось повышение активности аланина-минотрансферазы (70,5 ± 7,8 ед.), аспартатамино-трансферазы (59,0 ± 2,8 ед.). При этом желтушность кожи и слизистых оболочек имела место только у 24,5 % больных. У этих детей наблюдалась умеренная гипербилирубинемия (90,0 ± 4,6 мколь/л). Сплено-мегалия отмечалась у 86,7 % больных. Гематологические нарушения наблюдались у всех детей. В крови у 73,3 % пациентов отмечались умеренный лейкоцитоз (14,4 ± 3,5 • 109/л), лимфоцитоз (88,3 %), моноцитоз (83,3 %). У 61,7 % больных были обнаружены атипичные мононуклеары (вироциты) (рис. 1), их количество в периферической крови колебалось от 10 до 55 %, СОЭ была повышенной у 70 % (25,0 ± 5,2 мм/ч).
Группу сравнения составили 25 практически здоровых детей — спортсменов в возрасте от 7 до 14 лет, которые были обследованы в соответствии с международным этическим протоколом.
Лимфоциты выделяли из стабилизированной эти-лендиаминтетрауксусной кислоты (50 ммоль/10 мл) венозной крови, разведенной 1 : 2 средой RPMI 1640 (Sigma, США) с добавлением 10% инактивирован-ной фетальной телячьей сыворотки (GidcoBRL, Англия) в градиенте плотности фиколл-верографина (Pharmacia, плотность 1,077), трехкратно отмывали раствором PBS (рН 7,2; Flow Labs, Великобритания). Жизнеспособность клеток составляла 95—98 %. Фиксацию препаратов проводили на предметных стеклах в маркированных лунках (1 • 106 клеток в 1 мл) в течение 3 минут в парах 10% нейтрального формалина. Перед окрашиванием мазки дважды промывали в
Рисунок 1. Препараты больного острой Эпштейна — Барр вирусной инфекцией: а — скопления моно-нуклеаров (> 10 ут) с крупными фрагментированными ядрами и лимфоцитов между зелеными тяжами ДНК и красными конгломератами РНК из разрушенных клеток (окраска акридиновым оранжевым свежевыделенныхлимфоцитов — ДНК — зеленый цвет, РНК — красный); Ь — мононуклеар в контакте с лимфоцитом. По результатам КЛСМ (а, Ь), в 3D-проекции (Ь). Маркер 10 ут (собственные данные)
PBS (pH 7,2). Маркеры апоптоза исследовали в сочетании с маркерами дифференцировки CD4, CD8, CD25, CD20. На фиксированные клетки наносили по 20 мкл моноклональных антител, меченных FITC или Су5, к CD4 или CD8,CD25, CD20 (НПЦ «Мед-БиоСпектр», Москва, ОНЦ РАМН) в оптимальной концентрации (< 0,5 мкг), инкубировали 15—30 мин при 4 °С в темноте, дважды промывали PBS. Маркеры апоптоза Bax, Bcl-2, iNOs, Fas/Apo, интрацел-люлярный INF-у и TNF-a, аннексин V выявляли с помощью моноклональных антител (Pharmingen, США), конъюгированных с флуоресцентными метками разного спектра свечения (FITC/519 — зеленый, PE/578 — желтый, Cy5/667 — красный, PerCP/678 — темно-красный). После окрашивания поверхностных антигенов препараты пермеабилизировали в 20 мкл раствора Cytofix/Cytoperm (BD™PhosFlow) в течение 10—20 мин при 4 °С, дважды промывали в растворе Perm/Wash (BD™PhosFlow). Затем окрашивали клетки АТ к рецепторам INF-у и TNF-a, конъюги-рованным с FITC, в соответствии с индивидуальным для каждого маркера протоколом (BD Transduction Laboratories, Pharmingen™, США). Bax исследовали непрямым иммунофлюоресцентным методом с применением очищенных мышиных моноклональных антител против человеческого Bax (Pharmingen™, США) в конечной концентрации 5 мкг/мл на 106 ИКК. Связавшиеся первичные антитела визуализировали с помощью вторичных АТ, меченных PerCP(exc488/532, em-max 678). Вторичные АТ — кроличьи антимышиные IgG1, конъюгированные с PerCP (Pharmingen™, США), — светятся в красной части спектра. Bcl-2 выявляли после фиксации раствором 1% сапонина в PBS и пермеабилизации в 20 мкл Су^к/ Cytoperm (BD™PhosFlow) 10 мин при 4 °С, дважды! промывали PBS и окрашивали моноклональны-ми антителами, меченными PE (Pharmingen, США), 30 минут при 4 °С в темноте. Свечение учитывали в желтом спектре (Lazer 514 nm, фильтр BP 560—615). INOs определяли с помощью моноклональных антител, конъюгированных с FITC, в соответствии с протоколом BD Transduction Laboratories (Pharmingen™, США). Окрашивали препараты с помощью набора Pharmingen™ (США) для выявления аннексина V/пропидия йодида в соответствии с протоколом фирмы Pharmingen. Ядра лимфоцитов окрашивали Hoetch (Sigma) в синий цвет. Результаты учитывали на двух конфокальных лазерных сканирующих микроскопах: Axioskop-2 LSM 5 PASCAL и Axiocam HRO LSM PASCAL 510 META (Carl ZEISS) с гелий-неоновым и аргоновым лазерами (Lazer 488 nm, фильтр BP 505— 530; Lazer 514 nm, фильтр BP 560—615, Lazer 543 nm, фильтр LP650). Объектив — 100/1,4 160/017, окуляр 10(23), масляная иммерсия. Полученные изображения сканировали и обрабатывали с помощью компьютерной программы LSV510.
Статистическую обработку результатов исследования проводили с помощью MS Excel 2007. Определялись средние показатели (t-тест Student) и стандартные отклонения (М ± SD). Разницу частот определяли по
методу оценки разницы между частотами появления признака в отдельных сериях наблюдения, статистически достоверной считали разницу, если р < 0,05 [27].
Результаты исследования
Сравнительное исследование маркеров апоптоза при острой ЭБВ-инфекции показало высокую степень их экспрессии (рис. 1). Все изучаемые маркеры апоптоза: Fas/Apo-1, Вах, Г№-у, Т№-а, аннексина V, Вс1-2 — превышали контрольные значения в 2—3 и более раза (р < 0,05) (рис. 2).
У детей с острой ЭБВ-инфекцией при госпитализации в стационар уровень Fas/Apo-1 превышал контрольное значение в 2,9 раза, Вс1-2 — в 2,3 раза, Вах — в 3,2 раза, Г№-у—в 3,1 раза, Т№-а — в 3 раза, аннексина V — в 2,5 раза (р < 0,05) (табл. 1).
На рис. 3 для примера представлена экспрессия Вс1-2 и Вах в CD4-, CD20-, CD25-лимфоцитах при острой ЭБВ-инфекции.
Обсуждение результатов
Роль изучаемых маркеров апоптоза на течение ЭБВ-инфекции у детей, с одной стороны, указывает на компенсаторные возможности иммунной системы за счет усиления экспрессии гена Вс1-2 и усиления экспрессии гена Вах в субпопуляциях CD4 и CD8. Активация экспрессии проапоптозного рецептора к Т№-а в основном пуле клеток приводит к индукции экспрессии дополнительных Fas-рецепторов. Высокая экспрессия Fas-R на ИКК у больных ИМ ЭБВ-этиологии детей с одновременной активацией экспрессии дифферен-цировочного маркера СD8 (потенциально несущие Fas-L) свидетельствует о направлении апоптоза по ок-сидазотному и Fas-опосредованному пути. Основную роль в элиминации инфицированных клеток у больных ЭБВ-инфекцией детей выполняют цитотоксиче-ские Т-супрессоры. Активизация экспрессии маркеров апоптоза способствует высвобождению большого количества оксида азота, который индуцирует выделение токсических для патогенов субстанций, способствуя усилению апоптотической гибели внутриклеточ-но персистировавших патогенов. Низкое количество апоптозных клеток в популяции Т-хелперов зависит от высокой экспрессии в них антиапоптозного гена
Fas Bcl-2 Bax INF-у TNF-a Ann V
□ Острая ЭБВ □ Группа сравнения
Рисунок 2. Экспрессия маркеров апоптоза имму-нокомпетентных клеток при острой Эпштейна — Барр вирусной инфекции у детей: по вертикальной оси — абсолютное количество ИКК • 109/л (Г/л); * — достоверность разницы между показателями у детей с острой ЭБВ-инфекцией и группой сравнения (p < 0,05)
Bcl-2, который защищает клетки от апоптоза. Еще одним аргументом в пользу компенсаторных реакций иммунной системы при ИМ у детей можно отнести нормальный уровень экспрессии внутриклеточного INF-y, представляющего собой резерв макрофагаль-ной и цитотоксической активности в антивирусной и антипролиферативной защите.
В доступной нам литературе встречаются единичные работы по изучению апоптоза при ЭБВ-инфекции. Так, Г.Ф. Железникова и соавт. провели изучение апоптоза при инфекционном мононуклеозе ЭБВ-этиологии у детей и получили данные, свидетельствующие о том, что нарастающая выраженность клинических симптомов острого инфекционного монону-клеоза у детей ассоциирована с изменением ведущего профиля механизмов иммунной защиты, снижением экспрессии Fas/CD95 и склонности к спонтанному апоптозу in vitro. Высокий ответ Т-лимфоцитов в ФГА-РБТЛ, повышенный уровень TNF-a, относительно низкий уровень синтеза IgA и IgE, накопления ЦИК у детей с относительно легким течением инфекционного мононуклеоза косвенно свидетельствуют о преимущественно клеточно-опосредованной направленности иммунного ответа. Напротив, супрессия ФГА-РБТЛ, преобладание IL-4 при сниженной концентрации TNF-a в крови, повышенное содержание в крови CD21+ В-лимфоцитов и плазматических клеток, активация синтеза IgA и особенно IgE, усиленное накопление ЦИК у детей с клинически более выраженным инфекционным мононуклеозом позволяют
предположить у них смещение баланса Th1/Th2 в сторону превалирования Th2 и гуморальной формы иммунного ответа. Это сопровождается снижением экспрессии рецептора апоптоза CD95 на циркулирующих лимфоцитах и повышением выживаемости клеток в культуре [26].
Патогенетическая значимость модуляции иммуногенеза и апоптоза при острой Эпштейна — Барр вирусной инфекции остается неясной, что диктует необходимость дальнейших исследований. Не исключено, что при данной инфекции снижение экспрессии CD95 и готовности лимфоцитов к спонтанному апоп-тозу in vitro является неблагоприятным признаком, так как оно ассоциировано с переключением на менее эффективный при вирусной инфекции гуморальный путь иммунной защиты с присущими такому переключению проявлениями иммуносупрессии, прежде всего в виде подавления пролиферативного ответа Т-лимфоцитов на ФГА [26].
Таким образом, данная работа по изучению состояния апоптоза иммунокомпетентных клеток при острой ЭБВ-инфекции является актуальной и требует дальнейшего исследования.
Выводы
1. У детей с острой Эпштейна — Барр вирусной инфекцией имеет место нарушение экспрессии маркеров апоптоза иммунокомпетентных клеток.
2. У детей уровень Fas/Apo-1 превышал контрольное значение в 2,9 раза, Bcl-2 — в 2,3 раза, Bax — в 3,2
Таблица 1. Экспрессия маркеров апоптоза иммунокомпетентных клеток при острой Эпштейна — Барр вирусной инфекции у детей
Группы Fas/Apo-1 Bcl-2 Bax INF-y TNF-a Ann V
Группа сравнения, n = 25 1,18 ± 0,09 0,96 ± 0,08 1,14 ± 0,11 1,29 ± 0,10 1,15 ± 0,12 0,45 ± 0,04
ИМ ЭБВ-этиологии, n = 25 3,37 ± 0,18* 2,24 ± 0,14* 3,63 ± 0,29* 4,00 ± 0,24* 3,40 ± 0,17* 1,11 ± 0,07*
Примечание: * — достоверное различие с группой сравнения (р < 0,0005).
m
Рисунок 3: a — дислокация Bcl-2 и Bax в CDA-лимфоцитах при ИМ ЭБВ-этиологии. Репрезентативный результат больного М.А. (6,5 года), маркер 5 ym, zoom 3,9; b — экспрессия Bcl-2 и Bax в CD20-лимфоцитах при ИМ ЭБВ-этиологии. Репрезентативный материал больной Г.М. (5 лет), маркер 5 ym, zoom 5,4; c — дислокация Fas/Apo в ИКК, экспрессирующих CD25 при ИМ ЭБВ-этиологии. Результат больной Г.И. (5лет), маркер 5ym, zoom 3,2. По результатам КЛСМ. Масл. иммерсия, 100х/1,4
(собственные данные)
раза, INF-у — в 3,1 раза, TNF-a — в 3 раза, аннексина V — в 2,5 раза по сравнению с показателями в группе сравнения.
Список литературы
1. Ярилин А.А. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология. — 1996. — № 6. — С. 10-15.
2. Робинсон М.В., Труфакин В.А Апоптоз клеток иммунной системы// Успехи совр. биол. — 1991. — Т. 111, № 2. — С. 246-259.
3. KotelkinA., Prikhod'koE.A., Cohen J.I., Collins P.L., BukreyevA. Respiratory syncytial virus infection sensitizes cells to apoptosis mediated by tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand // J. Virol. — 2003. — 77(17). — 9156-9172.
4. Clarke P., Meintzer S.M., Gibson S. et al. Reovirus-induced apoptosis is mediated by TRAIL// J. Virol. — 2000. — 74(17). — 8135-8139.
5. Barber G.N. Host defense, viruses and apoptosis// Cell Death Differ. — 2001. — 8(2). —113-126.
6. Yamada K., Elliott W.M., Brattsand R.. et al. Molecular mechanisms of decreased steroid responsiveness induced by latent adenoviral infection in allergic lung inflammation // J. Allergy Clin. Immunol. — 2002. — 109(1). — 35-42.
7. Azevedo A.M., Durigon E.L., Okasima V. et al. Detection of influenza, parainfluenza, adenovirus and respiratory syncytial virus during asthma attacks in children older than 2 years old// J. Allergol. Immuno-pathol. (Madr.). — 2003. — 31(6). — 311-317.
8. Yamada K., Elliott W.M., Hayashi S. et al. Latent adenoviral infection modifies the steroid response in allergic lung inflammation // J. Allergy Clin. Immunol. — 2000. — 106(5). — 844-851.
9. Lyles D.S. Cytopathogenesis and inhibition of host gene expression by RNA viruses//Microbiol. Mol. Biol. Rev. — 2000. — 64(4). — 709-724.
10. Gao H.X., Campbell S.R., Burkly L. еt al. TNF-like weak inducer of apoptosis (TWEAK) induces inflammatory and proliferative effects in human kidney cells//Cytokine. — 2009. — V. 114, № 2. — Р. 113-120.
11. Harry G.J., Lefebvre d'Hellencourt C, McPherson CA, Funk J.A., Aoyama M., Wine R.N. Tumor necrosis factor p55 and p75 receptors are involved in chemical-induced apoptosis of dentate granule neurons// J. Neurochem. — 2008. — V 106, № 1. — Р. 281-298.
12. Lehmann W., Edgar CM, Wang K. et al. Tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) coordinately regulates the expression ofspecific matrix metalloproteinases (MMPS) and angiogenic factors during fracture healing// Bone. — 2005. — V 36, № 2. — P. 300-310.
13. Sheng W.S, Hu S, Ni H.T., Rowen T.N. et al. TNF-alpha-induced chemokine production and apoptosis in human neural precursor cells// J. Leukoc Biol. — 2005. — V 78, № 6. — Р. 1233-1241.
14. Cui L.Y, Liu S.L., Ding Y, Huang D.S. et al. IL-1beta sensitizes rat intervertebral disc cells to Fas ligand mediated apoptosis in vitro //Acta Pharmacol. Sin. — 2007. — V 28, № 10. — Р. 1671-1676.
Крамарев C.O.1, Тарадм H.H.2, Виговська O.B.1 Нацюнальний медичний унверситет ¡мен! O.O. Богомольця, м. Кив
2М!жнародний центр астроном!чних ! медико-еколопчних дослджень НАНУ, м. Ки1в
СТАН АПОПТОЗУ ПРИ rOCTPÎÉ ЕПШТЕЙНА — БАРР BiPyCHiÉ ¡НФЕКЦИ В AÎTEÉ
Резюме. У статп надано науковий огляд, присвячений вивченню питання апоптозу iмунокомпетентних клггин при патолопчних процесах, у тому чи^ й при Епштей-на — Барр вiруснiй шфекцП. Також наведеш даш власного дослщження, що виявили порушення експресП маркерiв апоптозу iмунокомпетентних клггин у дггей i3 гострою Епштейна — Барр вiрусною шфекщею. Рiвень Fas/Apo-1 перевищував контрольне значення у 2,9 раза, Bcl-2 — у 2,3 раза, Bax — у 3,2 раза, INF-y — у 3,1 раза, TNF-a — у 3 рази, анексину V — у 2,5 раза порiвняно з показниками у грут порiвняння.
Kro40BÎ слова: апоптоз, дни, Епштейна — Барр вiрусна шфекц1я, гостра шфекц1я.
15. Kiener P.A., Davis P.M., StarlingG.C. et al. Differential induction ofapoptosis by Fas- Fas-ligand interactions in human monocytes and macrophages // J. Exp. Med. —1997. — Vol. 185. — P. 1511-1516.
16. Петрищев Н.Н., Васина Л.В. Аннексин А5 и дисфункция эндотелия // Ученые записки Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. академика И.П. Павлова. —
2004. — Т. XI, № 3 (Приложение). — С. 45-47.
17. Cadden I.S., Johnston B.T., Connolly R. et al. An investigation into the role of Bcl-2 in neuroendocrine differentiation // Biochem. Bio-phys. Res. Commun. — 2005. — V. 326, № 2. — P. 442-448.
18. Královcová D., Pejchalová M., Rudolf E, Cervinka M. Quantitative analysis of expression level of BCL2 and BAX genes in Hep-2 and HL-60 cells after treatment with etoposide //Acta Medica (Hradec Kralove). — 2008. — V. 51, № 3. — P. 191-195.
19. Floros K.V., Thomadaki H, Florou D. et al. Alterations in mRNA expression of apoptosis-related genes BCL2, BAX, FAS, caspase-3, and the novel member BCL2L12 after treatment of human leukemic cell line HL60 with the antineoplastic agent etoposide // Ann. NY Acad. Sci. — 2006. — V. 109, № 6. — P. 89-97.
20. Herrera-Esparza R., Bollain-y-Goytia J., Ruvalcaba C. et al. Apoptosis and cell proliferation: the paradox of salivary glands in Sjogren's disease//Acta Reumatol. Port. — 2008. — V. 33, № 3. — P. 299-303.
21. Lei X., Huang Z, Zhong M. et al. Bcl-XL small interfering RNA sensitizes cisplatin-resistant human lung adenocarcinoma cells //Acta Biochim. Biophys. Sin. (Shanghai). — 2007. — V. 39, № 5. — Р. 344350.
22. Strasser A., Harris A.W, Huang D.C.S. et al. Bcl-2 and Fas/ APO-1 regulates distinct pathways to lymphocyte apoptosis // Eur. Mol. Biol. Organ. J. —1995. — Vol. 14. — P. 6136-47.
23. Hou Q, Hsu Y.T. Bax translocates from cytosol to mitochondria in cardiac cells during apoptosis: development of a GFP-Bax-stable H9c2 cell line for apoptosis analysis // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. —
2005. — V. 289, № 1. — P. 477-4887.
24. Magalska A, Brzezinska A, Bielak-Zmijewska A., Piwocka K., Mosieniak G., Sikora E. Curcumin induces cell death without oligo-nucleosomal DNA fragmentation in quiescent and proliferating human CD8+ cells //Acta Biochim. Pol. — 2006. — V. 53, № 3. — P. 531-538.
25. Хаитов Р.М., Игнатьева А.Г., Сидорович И.Г. Иммунология. — М.: Медицина, 2000. — 432 с.
26. Железникова Г.Ф, Васякина Л.И., Монахова Н.Е., Павленко МА., Новожилова Е.В., Попова НА., Родионова О.В. Апоптоз и иммунный ответ у детей с острым инфекционным мононуклео-зом// Иммунопатология. Аллергология. Инфектология. — 2000. — № 4. — С. 87-94.
27. Методы обработки медицинской информации: Учеб. пособие / О.П. Минцер, Б.Н. Угаров, В.В. Власов. — К.: Вища школа, 1991. — 271 с.
Получено 23.09.13 □
KramarevS.A.1, Taradiy N.N.2, Vygovskaya O.V.1 National Medical University named after A.A. Bogomolets, Kyiv
2International Center for Astronomical, Medical and Ecological Researches of National Academy of Sciences of Ukraine, Kyiv, Ukraine
STATE OF APOPTOSIS IN ACUTE EPSTEIN — BARR VIRUS INFECTION IN CHILDREN
Summary. The paper presents an scientific review on the study of the question of apoptosis of immunocompetent cells in pathological processes, including at the Epstein — Barr virus infection. Also we present data of our own investigations which revealed a violation of the expression of markers of apoptosis of immunocompetent cells in children with acute Epstein — Barr virus infection. Fas/Apo-1 level exceeded the reference value of 2.9 times, Bcl-2 — 2.3 times, Bax — 3.2 times, INF-y — 3.1 times, TNF-a — 3 times, annexin V — 2.5 times as compared with the comparison group.
Key words: apoptosis, children, Epstein — Barr virus infection, acute infection.
