CC BY
40
Журнал фундаментальной медицины и биологии оригинальные статьи
УДК 616.314.17 - 008 - 022.7 - 036:615.831
Л.И. Васильева1, Н.Ю. Желтухина1, Л.Е. Брагина1, Д.Г. Пасечник2, А.К. Логвинов2
СОСТАВ МИКРОФЛОРЫ ПАРАДОНТАЛЬНОГО КАРМАНА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ГЕНЕРАЛИЗОВАННОМ ПАРАДОНТИТЕ
Ростовский государственный медицинский университет, 1 Кафедра микробиологии и вирусологии № 1, 2 ЦНИЛ,
Россия, 344022, Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский 29.
Цель: изучить видовой состав парадонтальной микрофлоры при хроническом генерализованном парадонтите (ХГП).
Материалы и методы: изучена микрофлора парадонтального кармана (ПК) 105 больных ХГП в возрасте от 46 до 65 лет с помощью стандартного микробиологического метода и полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения парадонтопатогенных микроорганизмов.
Результаты: у всех пациентов в ПК присутствовали 8-10 компонентные ассоциации из стабилизирующих и пара-донтопатогенных видов микроорганизмов с доминированием парадонтопатогенных анаэробных бактерий, обладающих агрессивными свойствами в отношении тканей парадонта.
Заключение: для повышения уровня диагностики ХГП и выбора адекватной терапии необходимо использовать не только микробиологический метод, но и ПЦР для плохо культивируемых и некультивируемых парадонтопатогенных микроорганизмов.
Ключевые слова: хронический генерализованный парадонтит, парадонтопатогенная микрофлора, полимеразная цепная реакция.
L.I. Vasilieva1, N.Yu. Geltuhina1, L.E. Bragina1, D.G. Pasechnic2, A.K. Logvinov2
SPECIFIC COMPOSITION OF MICROFLORA OF PERIODONTAL POCKET IN CHRONIC GENERALIZED PERIODONTITIS
Rostov State Medical University department of microbiology and virology №1, 2CNIL,
29 Nakhichevansky st., Rostov-on-Don, 344022, Russia.
Purpose: To research of specific structure of periodontal microflora in chronic generalized periodontitis (CGP).
Material and methods: Microflora of periodontal pockets (PP) of 105 patients aged from 46 to 65 years with CGP were studied by traditional microbiological method and polymerase chain reaction (PCR) for detection periodontopathogenic microorganisms.
Results: Microbiotic assotiations of 8-10 stabilized and periodontal species were detected in all patients with prevalence periodontopathogenic anaerobic bacteria possessing aggressive effect on periodontal tissue.
Summery: It is necessary to use not only microbiological method but also PCR for bad cultivated and not cultivated periodontopathogenic microorganisms to increase the level of diagnostics and to make choice of an adequate treatment of CGP.
Key words: chronic generalized periodontitis, periodontal microflora, polymerase chain reaction.
оригинальные статьи
Журнал фундаментальной медицины и биологии
Введение
Среди стоматологических заболеваний хронический генерализованный парадонтит (ХГП) занимает ключевую позицию и сопровождается прогрессирующей деструкцией всех тканей парадонта и альвеолярной кости, что приводит к выпадению зубов [1, 2]. По современным данным [2, 3, 4, 5], ведущую роль в развитии этого заболевания играют симбионтные парадонтопатогенные микроорганизмы, обладающие выраженной агрессивностью в отношении тканей парадонта.
В норме в ротовой полости доминирует резидентная (стабилизирующая) симбионтная микрофлора, обеспечивающая колонизационную резистентность описываемого биотопа. Но при снижении местного иммунитета, развивается дисбиоз ротовой полости, характеризующийся значительным увеличением количества парадон-топатогенных симбионтов на фоне снижения удельного веса стабилизирующей микрофлоры, что приводит к формированию зубных бляшек и развитию парадонтита [2,6].
Основная сложность в изучении анаэробных пара-донтопатогенных микроорганизмов обусловлена техническими проблемами их культивирования. В связи с этим возникает необходимость в проведении расширенного лабораторного метода диагностики этого заболевания с использованием не только стандартного микробиологического исследования, но и ПЦР, для плохо культивируемых и некультивируемых парадонтопатогенных микроорганизмов, с целью уточнения этиологии ХГП и обоснованного назначения антибактериальной терапии (7).
Цель исследования: изучение спектра парадонтопато-генной и стабилизирующей микрофлоры парадонталь-ного кармана при ХГП.
Материалы и методы
Были обследованы 105 больных с ХГП средней степени тяжести в возрасте от 46 до 65 лет, подписавших протокол согласия с целями и характером работы. Критериями исключения являлись: другие формы парадонтита, гингивит, наличие в полости рта ортопедических конструкций, местное применение антибиотиков и антисептиков в течение последних 10 дней. Исследование проводили на базе ГУЗ «Областная стоматологическая поликлиника». Состав микрофлоры парадонтального кармана (ПК)
изучали стандартным микробиологическим методом с использованием аэробной и анаэробной техники культивирования, а также с помощью ПЦР. Интерпретацию результатов исследования проводили путем их сравнения с показателями нормоценоза поддесневой борозды (6). Забор материала из ПК проводили с помощью двух стерильных эндодонтических штифтов, один из которых помещали в пробирку с транспортной средой для микробиологического исследования, другой - в пробирку типа «эппендорф» объемом 2 мл, содержащую транспортную среду для ПЦР - диагностики. Материал забирали натощак или через 3-4 часа после еды. В день взятия пробы обследуемый должен был воздержаться от чистки зубов, применения лекарственных препаратов и полоскания полости рта.
Результаты и обсуждение
Установлено, что микробиоценозы парадонтального кармана в основном были представлены 8 - 10 компонентными ассоциациями из стабилизирующих и парадонтопатогенных микроорганизмов с доминированием «маркерных» парадонтопатогенных анаэробных бактерий (ПАБ) (T. forsytia, P. intermedia, P. gingivalis, T. denticola, F. spp) (табл.1). Особенности метаболизма этих бактерий и агрессивные свойства в отношении тканей парадонта могут оказывать существенное влияние на течение воспалительного процесса (1, 6).
Частота присутствия представителей парадонтопато-генной микрофлоры в ПК пациентов с ХГП была в 13,3 -16,5 раз выше (p < 0,001), чем в десневой борозде людей с нормальным стоматологическим статусом. Кроме того, количество культивируемых форм ПАБ, а именно фузо-бактерий, превышало на 3 порядка (р < 0,001) соответствующий нормативный показатель.
На фоне резкого нарастания частоты обнаружения ПАБ при исследуемой патологии, отмечалось достоверное снижение этого показателя для представителей стабилизирующей облигатно - анаэробной микрофлоры ПК, а именно вейлонелл (p < 0,001) и пропионибактерий (p < 0,01) (табл.1). Вместе с тем, частота обнаружения пептострептококков не имела существенных отличий (p > 0,05) от нормы. Однако их количество было на 3 порядка выше нормативного показателя. Аналогичная закономерность по интенсивности колонизации ПК выявлена для вейлонелл и пропионибактерий.
Таблица 1.
Облигатно-анаэробная микрофлора парадонтального кармана при ХГП
Микроорганизмы ХГП Нормативные показатели**
Частота обнаружения (%) Среднее кол-во (lg КОЕ/мл)* Частота обнаружения (%) Среднее кол-во (lg КОЕ/мл)
1 2 3 4 5
I. Стабилизирующая (резидентная) микрофлора
Peptostreptococcus spр. 79,2 6,2 ± 0,52 83,2 3,4 ± 0,21
Veilonella spр. 21,9 5,5 ± 0,41 89,6 3,5 ± 0,25
Propionibacterium spр. 38,1 5,9 ± 1,6 73,3 2,7 ± 0,36
Журнал фундаментальной медицины и биологии
оригинальные статьи
1 2 3 4 5
II. Парадонтопатогенная микрофлора
Tanerella forsytia*** 87,6 - 5,4 -
Prevotella intermedia*** 80,0 - 6,0 -
Porphyromonas gingivalis *** 69,5 - 4,2 -
Treponema denticola*** 60,0 - 4,4 -
Fusobacterium spp. 64,7 5,6 ± 1,3 3,8 2,1 ± 0,12
Примечание: здесь и табл. 2
*КОЕ - колониеобразующая единица
** - для условно-здоровых людей с нормальным стоматологическим статусом ***-определяли с помощью ПЦР (качественный метод)
Дисбиотические изменения при ХГП также выявлены среди симбионтов стабилизирующей факультативно - анаэробной микрофлоры (табл.2). В частности, в ПК у 18,2% пациентов отмечалось достоверное повышение (p < 0,001) количества гемофильных бактерий, а у 39,1% - количества коринебактерий по сравнению с нормативными показателями. Последние способны снижать окислительно - восстановительный потенциал в ПК, способствуя росту и размножению анаэробных па-радонтопатогенных микроорганизмов.
Относительно стабилизирующей кокковой микрофлоры при ХГП выявлены разнонаправленные изменения в зависимости от их родовой и видовой принадлежности. В частности, частота выявления S. sanquis и S. milleri при ХГП практически не отличалась от нормы, а для S. mutans этот показа-
тель снижался в 2,2 раза (р < 0,01). Вместе с тем, интенсивность колонизации ПК этими микроорганизмами была на 2-4 порядка выше, чем у людей с нормальным стоматологическим статусом. Аналогичные данные получены для S. salivarium на фоне снижения частоты их обнаружения в 3,7 раз (р < 0,001) по сравнению с нормой.
Частота выявления энтерококков в ПК значительно повышалась (в 4,3 раза) при такой же количественной характеристике, как у людей с нормальным стоматологическим статусом.
Наиболее стабильными среди представителей резидентной факультативно-анаэробной микрофлоры при ХГП являлись Neisseria spp, сохранившие частоту и интенсивность колонизации, как при нормоценозе.
Таблица 2
Факультативно-анаэробная микрофлора парадонтального кармана при ХГП
Микроорганизмы ХГП Нормативные показатели
Частота обнаружения (%) Среднее кол-во (lg КОЕ/мл) Частота обнаружения (%) Среднее кол-во (lg КОЕ/мл)
Стабилизирующая (резидентная) микрофлора
Streptococcus spp:
S. sanguis 58,2 3,5 ± 0,70 60,4 1,5 ± 0,26
S. milleri 24,8 6,2 ± 0,93 21,2 1,5 ± 0,31
S. mutans 18,1 5,3 ± 1,01 39,8 2,3 ± 0,28
S. salivarius 12,4 4,4 ± 0,84 46,2 1,7 ± 0,12
Neisseria spp. 23,5 4,7 ± 0,34 28,4 4,2 ± 0,54
Enterococcus spp. 56,2 3,4 ± 0,67 13,1 3,2 ± 0,71
Corinebacterum spp. 39,1 5,4 ± 0,36 38,4 2,6 ± 0,94
Haemophilus spp. 18,2 7,7 ± 0,51 18,6 3,5 ± 0,84
Транзиторная микрофлора
Staphylococcus aureus 35,2 4,7 ± 0,52 0 0
Staphylococcus epidermidis 44,4 4,7 ± 0,41 10,4 1,5 ± 0,24
E. coli 16,2 3,3 ± 0,65 2,8 1,7 ± 0,16
Klebsiella spр. 5,7 2,8 ± 0,31 1,1 1,5 ± 0,12
оригинальные статьи
Журнал фундаментальной медицины и биологии
При изучении транзиторной факультативно -анаэробной микрофлоры ПК было установлено появление у 35,2% пациентов S. aureus в несвойственном ему биотопе в значительном количестве (lg 4,7 КОЕ/мл), а также существенное повышение частоты и интенсивности колонизации ПК условно -патогенными бактериями: S. epidermidis, E. coli, Klebsiella spp.
Выводы
В образцах, полученных из ПК больных ХГП, в 100% случаев присутствовали 8 - 10 компонентные ассоциации с доминированием парадон-топатогенных анаэробных бактерий, обладающих агрессивными свойствами в отношении тканей парадонта.
Среди ПАБ наибольший удельный вес имели T. forsythia (87,6 %), P. intermedia (80,0 %). Реже выделяли Porphyromonas gingivalis (69,5 %), Fusobacterium spp. (64,7%) и Treponema denticola (60,0 %).
Со стороны стабилизирующей микрофлоры ПК наиболее выраженные дисбиотические сдвиги выявлены среди представителей родов Veilonella, Propionibacterium, Corynebacterium, Haemophilus на фоне резкого нарастания частоты и интенсивности колонизации ПК представителями транзитор-ной микрофлоры.
Для повышения уровня диагностики ХГП и обоснованного выбора антимикробной терапии необходимо использовать не только традиционный микробиологический метод, но и ПЦР для плохо культивируемых и некультивируемых парадонто-патогенных микроорганизмов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Вольф Герберт Ф., Ратейцхак Эдит М., Ратейцхак Клаус. Парадонтопатология. М., 2008: 548.
2. Дж. Ламонт. Микробиология и иммунология для стоматологов. М., 2010: 502.
3. Botero J.E. Occurrence of periodontopathic and superinfecting bacteria in chronic and aggressive periodontitis subjects in a Colombian population. J. Periodontal. 2007;78 (4): 699-704.
4. Зырянова Н.В., Григорян А.С., Грудянов А.И. Видовой состав анаэробной микрофлоры парадонтального кармана в зависимости от стадии парадонтита. Стоматология. 2009; 4: 43-47.
5. Лукоянова Т.В., Николаева Е.В., Разумова С.Н. Распространенность парадонтопатогенной микрофлоры у больных хроническим парадонтитом в Нижегородском регионе. Dental Forum, 2013; 2: 2-4.
6. Рединова Т.Л., Иванова Л.А.. Мартюшева О.В. и др. Микробиологические и клинические характеристики дисбиотических состояний в полости рта. Стоматология. 2009; 6: 12.
7. Иванюшко Т.П., Тумбинская Л.В.. Донников А.Е. Исследование условно-патогенных микроорганизмов методом ПЦР в реальном времени у больных парадонтитом. Стоматология. 2011; 5: 22-26.
