CC BY
57
original article
-DQB1 alleles and haplotypes with rheumatoid arthritis in a Pakistani population. Arthr. Res Ther. 2013; 15(4): R95.
21. Lee H.-S., Lee K.w., Song G.G. et al. Increased susceptibility to rheumatoid arthritis in Koreans heterozygous for HLA—DRB1*0405 and *0901. Arthr. and Rheum. 2004; 50: 3468—75.
22. Oka S., Furukawa H., Kawasaki A. et al. Protective effect of the HLA-DRB1*13:02 allele in japanese rheumatoid arthritis patients. PLoS One. 2014; 9(6): e99453.
23. Chun-Lai T., Padyukov L., Dhaliwal J.S. et al. Shared epitope alleles remain a risk factor for anti-citrullinated proteins antibody (ACPA) — positive rheumatoid arthritis in three Asian ethnic groups. PLoS One. 2011; 6(6): e21069.
24. Molkentin J., Gregersen P.K., Lin X. et al. Molecular analysis of HLA-DR beta and DQ beta polymorphism in Chinese with rheumatoid arthritis. Ann. Rheum. Dis. 1993; 52(8): 610—2.
25. Djidjik R., Allam I., Douaoui S. et al. Association study of human leukocyte antigen-DRB1 alleles with rheumatoid arthritis in Algerian patients. Int. J. Rheum. Dis. doi: 10.1111/1756-185x.12272
26. Mourad J., Monem F. HLA-DRB1 allele association with rheumatoid arthritis susceptibility and severity in Syria. Rev. Bras. Reumatol. 2013; 53(1): 47—56.
27. Sandoughi M., Fazaeli A., Bardestani G., Hashemi M. Frequency of HLA-DRB1 alleles in rheumatoid arthritis patients in Zahedan, southeast Iran. Ann. Saudi Med. 2011; 31(2): 171—3.
28. Taukumova L.A., Guseva I.A. Alleles of HLA-DRB1 in patients with rheumatoid arthritis. Nauchno-prakticheskaya revmatologiya. 2004; (4): 29—34. (in Russain)
29. Deval'd V.I. Immunogenetic Characteristics of Rheumatoid Arthritis and HLA-genetic Profile of the Bashkir Population of the Southern Urals: Diss. Chelyabinsk; 2006. (in Russian)
30. Gregersen P.K., Shen M., Song Q.L. et al. Molecular diversity of HLA-DR4 haplotypes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA.1986; 83: 2642—6.
31. Gregersen P.K., Silver J., winchester R.J. The shared epitope hypothesis. An approach to understanding the molecular genetics of susceptibility to rheumatoid arthritis. Arthr. and Rheum. 1987; 30: 1205—13.
32. Huizinga T.w., Amos C.I., van der Helm-van Mil A.H. et al. Refining the
ЦИТОКИНЫ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017 УДК 616-092:612.017.1.014]-053.32-078.33
Жукова А.С., Ванько Л.В., Никитина И.В., Балашова Е.Н., Матвеева Н.К., Вторушина В.В., Кречетова Л.В., Ионов О.В., Муллабаева С.М., Дегтярев Д.Н.
СОДЕРЖАНИЕ ЦИТОКИНОВ В ПЛАЗМЕ КРОВИ НЕДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ В РАННЕМ НЕОНАТАЛЬНОМ ПЕРИОДЕ
ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России, 117997, Москва, Россия
Несмотря на непрерывное совершенствование медицинских технологий, частота преждевременных родов остается высокой. У недоношенных детей течение неонатального периода часто осложняется развитием инфекционно-воспалительных заболеваний. Наиболее быстро на внедрение патогенов реагируют клетки моноцитарно-макрофагального звена иммунной системы, что ведет к усилению синтеза и секреции цитокинов, способных влиять на пролиферацию, дифференцировку, функциональную активность клеток-мишеней. Методом мультиплексного анализа оценено содержание ряда хемокинов (ИЛ-8, MCP), провоспалительных ^OHy, ФНОа, ИЛ-Iß, ИЛ-6, ИЛ-12) и противовоспалительных (ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-13) цитокинов в плазме пуповинной и периферической крови недоношенных новорожденных детей с дыхательными нарушениями неинфекционного генеза и с врожденной пневмонией. Контрольную группу составили здоровые доношенные дети. Показано, что содержание хемокинов, про- и противовоспалительных цитокинов в пуповинной крови здоровых доношенных и недоношенных новорожденных без признаков инфекции соизмеримо. У детей с врожденной пневмонией уровень исследуемых цитокинов в плазме пуповин-ной крови был выше по сравнению с детьми сходного гестационного возраста без признаков инфекции. В возрасте 3 сут у здоровых доношенных детей содержание ИЛ-8, MCP, ИЛ-6, ИЛ-13, ИЛ-12, ИЛ-4 в плазме оказалось выше, чем в пуповинной крови. У детей с врожденной пневмонией уровень ИФ^, ИЛ-^, ИЛ-6, ФНОа, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-4 в периферической крови был ниже по сравнению с пуповинной кровью, что может быть результатом истощения секреторного потенциала иммунных клеток вследствие их ранней активации при пре- и интранатальном взаимодействии с условно-патогенными микроорганизмами. Содержание ИФ^, ИЛ-1 ß, ИЛ-12, ИЛ-4 в периферической крови у детей с
Для корреспонденции: Жукова Анастасия Сергеевна, мл. научн. сотр. лаб. клинической иммунологии ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова», E-mail: anastasia.s.belyaeva@gmail.com
complex rheumatoid arthritis phenotype based on specificity of the HLA-DRB1 shared epitope for antibodies to citrullinated proteins. Arthr. and Rheum. 2005; 52: 3433—8.
33. Kurko J., Besenyei T., Laki J. et al. Genetics of rheumatoid arthritis. A comprehensive review. Clin. Rev. Allergy Immunol. 2013; 45(2): 170—9.
34. van der Woude D., Alemayehu W.G., Verduijn W. et al. Gene-environment interaction influences the reactivity of autoantibodies to citrullinated antigens in rheumatoid arthritis. Nat. Genet. 2010; 42(10): 814—6.
35. Szodoray P., Szabo Z., Kapitany A. et al. Anti-citrullinated protein/pep-tide autoantibodies in association with genetic and environmental factors as indicators of disease outcome in rheumatoid arthritis. Autoimmun. Rev. 2010; 9(3): 140—3.
36. Padyukov L., Silva C., Stolt P. et al. A gene—environment interaction between smoking and shared epitope genes in HLA-DR provides a high risk of seropositive rheumatoid arthritis. Arthr. and Rheum. 2004; 50(10): 3085—92.
37. van der Helm-van Mil A.H.M., Verpoort K.N., le Cessie S. et al. The HLA-DRB1 shared epitope alleles differ in the interaction with smoking and predisposition to antibodies to cyclic citrullinated peptide. Arthr. and Rheum.2007; 56: 425—32.
38. Kapitany A., Szabo Z., Lakos G. et al. Associations between serum anti-CCP antibody, rheumatoid factor levels and HLA-DR4 expression in Hungarian patients with rheumatoid arthritis. Isr. Med. Assoc. J. 2008; 10(1): 32—6.
39. van der Woude D., Houwing-Duistermaat J.J., Toes R.E.M. et al. Quantitative heritability of anti-citrullinated protein antibody-positive and anti-citrullinated protein antibody-negative rheumatoid arthritis. Arthr. and Rheum.2009; 60: 916—23.
40. van der Woude D., Lie B.A., Lundstrom E. et al. Protection against anti-citrullinated protein antibody-positive rheumatoid arthritis is predominantly associated with HLA-DRB1*1301: A meta-analysis of HLA-DRB1 associations with anti-citrullinated protein antibody-positive and anti-citrullinated protein antibody-negative rheumatoid arthritis in four European populations. Arthr. and Rheum. 2010; 62: 1236—45.
Поступила 16.10.16 Принята в печать 03.11.16
оригинальные статьи
врожденной пневмонией ниже по сравнению с соответствующими показателями периферической крови у здоровых доношенных детей и недоношенных с респираторными нарушениями неинфекционного генеза.
Ключевые слова: цитокины; пуповинная кровь; недоношенные новорожденные; врожденная пневмония. Для цитирования: Жукова А.С., Ванько Л.В., Никитина И.В., Балашова Е.Н., Матвеева Н.К., Вторушина В.В., Кречетова Л.В., Ионов О.В., Муллабаева С.М., Дегтярев Д.Н. Содержание цитокинов в плазме крови недоношенных новорожденных детей в раннем неонатальном периоде. Иммунология. 2017; 38 (3): 143-147. DOI: http://dx.doi. org/10.18821/0206-4952-2017-38-3-143-147
Zhukova A.S., Van'ko L.V., Nikitina I.V., Balashova E.N., Matveeva N.K., Vtorushina V.V., Krechetova L.V., Ionov O.V., Mullabaeva S.M., Degtyarev D.N.
PLASMA CYTOKINE LEVELS IN PRETERM NEWBORNS IN THE EARLY NEONATAL PERIOD
«Academician V.I. Kulakov Research Center of Obstetrics, Gynecology and Perinatology», Ministry of Health of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russia
In this study we have investigated the plasma levels of chemokines (MCP, IL-8), proinflammatory (IFNy, TNFa, IL-6, IL-1b, IL-12) and anti-inflammatory (IL-4, IL-10, IL-13) cytokines. Full-term, preterm newborns with respiratory disorders noninfectious origin and preterm newborns with congenital pneumonia were included in this study. Plasma of umbilical cord blood and peripheral blood at the 3rd day of life of newborns were examined by multiplex analysis. We have demonstrated that the plasma levels of studied cytokines were independent of gestational age. The levels of cord blood chemokines, pro-and anti-inflammatory cytokines was higher in the group of preterm newborns with congenital pneumonia compared with full-term and preterm newborns without signs of infection. In peripheral blood of newborns with pneumonia plasma levels of IFNy, TNFa, IL-1b, IL-6, IL-12, IL-13, IL-4 were lower than in cord blood and the levels of IFNy, IL-1b, IL-12, IL-4 were lower than in peripheral blood of preterm newborns with respiratory disorders of noninfected origin. In the control group the levels of MCP, IL-8, IL-6, IL-13, IL-12, IL-4 were higher in peripheral blood compared with cord blood.
Keywords: cytokines; cord blood; preterm newborns; congenital pneumonia.
For citation: Zhukova A.S., Van'ko L.V., Nikitina I.V., Balashova E.N., Matveeva N.K., Vtorushina V.V., Krechetova L.V., Ionov O.V., Mullabaeva S.M., Degtyarev D.N. Plasma cytokine levels in preterm newborns in the early neonatal period. Immunologiya. 2017; 38 (3): 143-147. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-3-143-147
For correspondence: Zhukova Anastasiya Sergeevna, Junior researcher of laboratory of clinical immunology, "Academician V.I. Kulakov Research center for obstetrics, gynecology and Perinatology", E-mail: anastasia.s.belyaeva@gmail.com
conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Gratitude. The authors Express their appreciation to O.V. Tysyachnyy and E.A. Poltorabatko for assistance in creating a collection of biological material.
Acknowledgments. The study had no sponsorship. The study was performed in the framework of the state task of the Ministry of health of the Russian Federation ("Development of methods for preclinical detection and prevention of adverse effects of congenital and perinatal diseases in children", n AAAA-A15-115123110120-8).
Received 09.11.16 Accepted 14.04.17
Актуальность проблемы. В настоящее время частота преждевременных родов в развитых странах находится в диапазоне 5-10% от общего числа родоразрешений. Основной причиной преждевременных родов является развитие инфекционного процесса у плода [1]. Пренатальное заражение приводит к изменениям в иммунной системе, которые отмечаются в первые часы после рождения ребенка. Наиболее быстро реагируют клетки моноцитарно-макрофагального звена. Активация данных клеток ведет к усилению синтеза и секреции цитокинов, способных влиять на пролиферацию, диффе-ренцировку, функциональную активность клеток-мишеней и координировать работу иммунной, нервной, эндокринной, сердечно-сосудистой и других систем организма. В защите организма от патогенов важная роль принадлежит хемокинам, обеспечивающим миграцию иммунных клеток к месту инвазии, провоспалительным и противовоспалительным цитоки-нам. Провоспалительные цитокины направляют иммунный ответ по ТЫ-типу, который характеризуется активацией клеточного иммунитета, выраженным цитотоксическим действием субпопуляций естественных и Т-киллерных клеток. Напротив, противовоспалительные цитокины, ключевым из которых является ИЛ-4, активируют гуморальный ТЬ2-иммунный ответ [2]. Таким образом, изучение баланса про- и противовоспалительных цитокинов в крови новорожденных различного гестационного возраста является актуальной задачей при анализе особенностей течения их неонатального периода.
Цель работы - определить содержание ряда хемокинов,
провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в плазме крови новорожденных детей в зависимости от геста-ционного возраста и наличия врожденной пневмонии.
Материал и методы
В проспективное исследование включили 37 новорожденных детей, родившихся в ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России. Основную группу составили 27 недоношенных новорожденных, гестационный возраст которых составил 27-36 нед. Дети из данной группы наблюдались и проходили лечение в отделении реанимации и интенсивной терапии новорожденных. Клинический диагноз детям из основной группы устанавливали в возрасте 72 ч жизни на основании результатов клинико-лабораторного обследования, включающего анализ гемокультуры, рентгенологическое исследование органов грудной полости, оценку содержания С-реактивного белка, клинический анализ крови. Вывод о наличии у ребенка инфекционного заболевания делали на основании двух или более клинических симптомов и одного или более лабораторных признаков системной воспалительной реакции, а также при наличии инфильтратив-ных изменений в легких по данным рентгенографии органов грудной полости [3].
В соответствии с клиническим диагнозом недоношенные дети были разделены на 2 подгруппы. В первую подгруппу включили 12 детей (4 девочки и 8 мальчиков), родившихся
original article
Таблица 1
Содержание хемокинов, про- и противовоспалительных цитокинов в плазме пуповинной крови новорожденных детей, пг/мл
Наименование Контрольная группа(до- Основная группа (недоношенные дети) Р
ношенные дети,n = 10) подгруппа 1 (n = 12) подгруппа 2 (n = 15) п/гр. 1-контр. п/гр. 2-контр. п/гр. 2-п/гр. 1
MCP 31,1 (12,42-42,19) 53,4 (20,15-200,14) 186,0 (94,17-323,01) 0,12 0,0001 0,026
ИЛ-8 13,6 (11,51-20,12) 22,0 (13,19-37,03) 51,1 (39,27-76,92) 0,22 0,0001 0,0013
ИФНу 17,7 (17,72-54,32) 43,0 (17,72-78,97) 100,1 (47,26-140,92) 0,29 0,0009 0,008
ИЛ-1Р 2,2 (1,68-2,90) 2,7 (1,81-3,74) 4,3 (3,05-5,69) 0,49 0,0027 0,010
ИЛ-6 6,2 (5,59-10,99) 13,9 (8,58-17,56) 25,3 (17,56-32,13) 0,17 0,0011 0,021
ФНОа 28,6 (12,80-68,94) 43,3 (16,17-88,42) 119,9 (55,81-211,68) 0,67 0,013 0,023
ИЛ-12 2,5 (1,10-6,88) 7,0 (2,45-13,90) 21,7 (6,88-47,18) 0,17 0,0054 0,040
ИЛ-10 3,2 (0,89-8,68) 2,9 (1,65-5,65) 13,3 (10,50-24,01) 0,90 0,0030 0,0003
ИЛ-13 3,8 (2,89-3,84) 4,6 (3,46-6,32) 7,2 (4,84-9,66) 0,14 0,0005 0,018
ИЛ-4 0,2 (0,14-1,00) 0,9 (0,16-3,52) 4,4 (1,75-6,54) 0,29 0,0014 0,012
ИФНу/ИЛ-4 88,4 (33,53-126,57) 60,2 (24,75-96,58) 23,0 (20,39-9,48) 0,22 0,025 0,054
ФНОа/ИЛ-4 74,8 (54,57-103,10) 32,3 (28,83-80,76) 31,5 (26,10-41,82) 0,035 0,0009 0,39
Примечание . В табл. 1, 2 результаты представлены как Ме (25-й-75-й процентили); п/гр. 1 - подгруппа 1; п/гр. 2 - подгруппа 2.
на 32-36-й неделе беременности, с респираторными нарушениями неинфекционного генеза (транзиторное тахипноэ, респираторный дистресс-синдром). Масса и длина тела у детей при рождении составили 1290-3096 г и 37-49 см соответственно, оценка по шкале Апгар колебалась в пределах 6-8 баллов на первой минуте и 7-9 баллов на пятой. Во вторую подгруппу включены 15 детей (2 девочки и 13 мальчиков) ге-стационного возраста 27-36 нед с врожденной пневмонией. Масса и длина тела при рождении составили 610-2690 г и 31-49 см соответственно, оценка по шкале Апгар на первой минуте изменялась в интервале 1-8 баллов, на пятой - 3-8 баллов. Состояние детей данной подгруппы оценивалось в первые сутки как тяжелое и крайне тяжелое за счет респираторных нарушений и течения инфекционно-воспалительного процесса. Критериями исключения из исследования являлись врожденные пороки развития и гемолитическая болезнь новорожденных.
Контрольную группу составили 10 здоровых доношенных детей (4 мальчика и 6 девочек) с оценкой по шкале Апгар на первой и пятой минутах 8 и 8-9 баллов соответственно. Геста-ционный возраст новорожденных из данной группы составил 38-40 нед, масса - 3160-4026 г и длина тела - 50-54 см.
Исследованы образцы плазмы крови, полученной из вены пуповины и из периферической вены в возрасте 3 сут жизни. Сбор крови для исследования осуществлялся в пробирки с ЭДТА одновременно с проведением обязательного клинико-лабораторного обследования. Родители новорожденных подписали добровольное информированное согласие на участие детей в исследовании. Данное исследование одобрено этическим комитетом ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России.
Анализ содержания хемокинов (ИЛ-8, MCP), провоспа-лительных (ИФНу, ФНОа, ИЛ-ф, ИЛ-6, ИЛ-12) и противовоспалительных (ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-13) цитокинов в плазме крови проводили методом мультиплексного анализа на анализаторе Bio-Plex 200 компании «Bio-Rad" (США), используя коммерческие наборы. Подсчет популяций лейкоцитов осуществляли методом проточной цитофлуориметрии на автоматизированном гематологическом анализаторе Sysmex XT-2000i (Япония).
Статистическую обработку полученных данных проводили с применением программы MedCalc (Бельгия). Про-
верку гипотезы о нормальном распределении осуществляли, используя критерий Шапиро-Уилка. Для оценки различий в выборках, где распределение данных отличалось от нормального, применяли непараметрические критерии: ^-критерий Манна-Уитни для независимых выборок и критерий Вилкок-сона для зависимых. Результаты представлены как медиана (25-й - 75-й процентили). Различия считали достоверными при уровне значимости р < 0,05. Корреляционные связи оценивали исходя из показателей коэффициента корреляции Спирмена. Для сравнения качественных признаков использовали критерий х2.
Результаты и обсуждение
В зависимости от наличия, степени выраженности и динамики дыхательных нарушений новорожденным из основной группы проводили различные типы респираторной терапии. Дети с врожденной пневмонией чаще нуждались в дыхательной поддержке по сравнению с недоношенными новорожденными без признаков инфекции (100% против 58,3%; р = 0,0098). Трое детей из второй подгруппы находились на искусственной вентиляции легких (ИВЛ) с первых суток жизни, у одного ребенка потребовалось применение высокочастотной осцилляторной вентиляции легких. К 3-м суткам жизни на самостоятельное дыхание были переведены все новорожденные из первой подгруппы и 2 ребенка из второй. Все дети с врожденной пневмонией получали антибактериальные препараты с первых суток жизни [4].
Результаты анализа содержания про- и противовоспалительных цитокинов в пуповинной крови детей из основной и контрольной групп представлены в табл. 1.
Не выявлено статистически значимых различий в содержании ряда хемокинов, про- и противовоспалительных цитоки-нов в плазме пуповинной крови недоношенных детей с респираторными нарушениями неинфекционного генеза (подгруппа 1) по сравнению с контрольной группой. Полученные нами данные согласуются с результатами других авторов, которые показали, что при отсутствии активационного стимула внутриклеточное содержание ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12, ИФНу в моноцитах, лимфоцитах и естественных киллерных клетках соизмеримо у новорожденных детей различного гестационно-го возраста. Для оценки уровня цитокинов авторы использовали метод проточной цитофлуориметрии, который в отличие от мультиплексного анализа позволяет оценивать содержание
оригинальные статьи
Таблица 2
содержание хемокинов, про- и противовоспалительных цитокинов в плазме периферической крови новорожденных, пг/мл
Наименование Контрольная группа (доношенные дети, n = 10) Основная группа (недоношенные дети) р
подгруппа 1 (n = 12) подгруппа 2 (n = 15) п/гр. 1-контр. п/гр. 2-контр. п/гр. 2-п/гр. 1
MCP 120,8 (78,34-199,48) 197,7 (128,96-264,97) 296,5 (208,48-488,96) 0,22 0,017 0,15
ИЛ-8 39,0 (28,50-58,55) 51,2 (33,18-61,53) 48,6 (21,92-75,59) 0,56 0,76 0,87
ИФНу 91,5 (39,45-165,87) 91,5 (37,82-119,43) 24,6 (17,72-37,82) 0,85 0,011 0,0042
ИЛ-1Р 3,4 (2,91-4,74) 3,3 (2,47-4,65) 2,2 (1,81-2,91) 0,91 0,032 0,020
ИЛ-6 28,9 (22,53-40,88) 16,8 (11,70-35,89) 22,1 (12,06-58,90) 0,15 0,71 0,43
ФНОа 110,4 (65,07-177,07) 57,0 (17,66-110,35) 17,8 (7,53-27,79) 0,19 0,002 0,086
ИЛ-12 19,9 (10,39-73,49) 17,8 (5,34-30,20) 3,1 (1,13-6,88) 0,37 0,008 0,012
ИЛ-10 10,1 (4,32-21,32) 7,5 (2,86-16,87) 4,7 (2,87-9,31) 0,49 0,20 0,47
ИЛ-13 8,1 (6,74-9,89) 5,3 (4,04-6,74) 3,8 (3,65-4,63) 0,082 0,004 0,072
ИЛ-4 2,4 (0,90-4,09) 2,2 (0,40-4,65) 0,2 (0,14-0,87) 0,94 0,012 0,016
ИФНу/ИЛ-4 53,4 (38,22-86,61) 51,1 (35,22-86,71) 110,1 (53,75-160,01) 0,94 0,15 0,27
ФНОа/ИЛ-4 59,6 (45,65-97,65) 28,9 (15,53-43,92) 51,2 (32,19-104,47) 0,015 0,71 0,031
искомых молекул в заданной популяции клеток до момента их секреции во внеклеточную среду [5, 6].
По имеющимся данным многие провоспалительные ци-токины участвуют в запуске процесса самопроизвольных родов [7]. Нами показано, что отношение концентрации ФНОа к ИЛ-4 было значимо выше в группе здоровых доношенных детей по сравнению с недоношенными. ФНОа - ключевой провоспалительный цитокин, активирующий естественные киллерные клетки, стимулирующий продукцию ИЛ-1, ИЛ-6, индуцирующий экспрессию молекул адгезии на эндотелиаль-ных клетках сосудов. Можно предположить, что более выраженное преобладание ФНОа над противовоспалительным ИЛ-4 в контрольной группе во многом обусловлено доношенным сроком беременности к моменту родоразрешения, при этом тип родоразрешения не влияет на содержание цитокинов в пуповинной крови [8]. Следует отметить, что в группах доношенных и недоношенных новорожденных детей без признаков инфекции существовала прямая корреляционная зависимость между абсолютным количеством нейтрофильных гранулоцитов в пуповинной крови и отношением содержания ФНОа к ИЛ-4 (г = 0,75; р = 0,0001). Содержание МСР-1 прямо коррелировало как с количеством нейтрофилов (г = 0,48; р = 0,03), так и с количеством моноцитов (г = 0,62; р = 0,004) в пуповинной крови. Действие данного хемокина направлено на привлечение и последующую активацию моноцитов/макрофагов, его секреция иммунными и другими клетками организма усиливается при действии провоспалительных цитокинов, ростовых факторов, продуктов окислительного стресса [9].
У недоношенных детей с врожденной пневмонией (подгруппа 2) было достоверно повышено содержание ряда хе-мокинов, про- и противовоспалительных цитокинов в плазме пуповинной крови по сравнению с соответствующими показателями у детей сходного гестационного возраста без признаков инфекции (подгруппа 1). В работе Г.В. Якорновой показано, что в пуповинной крови детей, у которых течение раннего неонатального периода сопровождалось развитием инфекционно-воспалительных заболеваний, уровень ИЛ-1Р, ИЛ-6, ФНОа был повышен по сравнению со здоровыми детьми того же гестационного возраста [10]. Поскольку преобладание ТЫ-иммунного ответа характерно для бактериальных, вирусных и грибковых инфекций, в настоящее время повышенное содержание провоспалительных цитокинов в сыворотке крови, амниотической жидкости, матке, родовых путях рассматривается как диагностический маркер инфекционных заболеваний у новорожденных детей [11-13].
При сравнении уровня цитокинов в плазме периферической крови детей в возрасте 3 сут выявлено, что в подгруппе 2 уровень ИФНу (р < 0,01), ИЛ-ф, ИЛ-12, ИЛ-4 (р < 0,05) ниже по сравнению с соответствующими показателями у здоровых доношенных детей и недоношенных с дыхательными нарушениями неинфекционного генеза (табл. 2).
Анализ содержания исследуемых цитокинов в пуповинной и периферической крови одних и тех же новорожденных показал, что к 3-м суткам жизни в группе здоровых доношенных детей достоверно повышалось содержание MCP, ИЛ-8, ИЛ-6, ИЛ-13 (р < 0,01), ИЛ-12, ИЛ-4 (р < 0,05). В подгруппе недоношенных детей без признаков инфекции повышалось содержание хемо-кина ИЛ-8 (р < 0,05). В процессе и сразу после рождения ребенка устанавливается тесный контакт стерильного организма новорожденного с экзогенными антигенами. Взаимодействие микроорганизмов со слизистыми оболочками приводит к активации эпителиальных, иммунных и других клеток, повышению миграционной активности лейкоцитов, что связано с заселением ими барьерных тканей. Данные процессы сопровождаются усилением синтеза и секреции цитокинов и хемокинов.
В подгруппе недоношенных детей с врожденной пневмонией содержание ИФНу, ИЛ-lß, ИЛ-6, ФНОа, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-4 в плазме периферической крови было существенно ниже уровня данных цитокинов в пуповинной крови (р < 0,01). Вероятно, пре- и интранатальное взаимодействие незрелой иммунной системы плода с антигенами условно-патогенных микроорганизмов приводит к истощению ответа цитокинпродуцирующих клеток. Подобное явление также отмечается при продолжительной инкубации in vitro иммунных клеток в среде, содержащей патогенный стимул (бактериальный липополисахарид) [6]. Снижение продукции цитокинов может быть в свою очередь следствием правильно подобранной антимикробной терапии, которая направлена на элиминацию патогенного стимула и как следствие привела к снижению стимуляции иммунных клеток.
Отношение содержания ФНОа к ИЛ-4 (р < 0,05) и ИФНу к ИЛ4 (р < 0,01) было достоверно выше на 3-и сутки жизни детей из второй подгруппы по сравнению с пуповинной кровью. Наряду с обнаруженной прямой корреляционной зависимостью средней силы между уровнем С-реактивного белка и содержанием ИЛ-6 в плазме периферической крови детей в этом возрасте (r = 0,58; р = 0,036), это может свидетельствовать о наличии воспаления и более выраженном ТЫ-иммунном ответе у недоношенных детей с врожденной пневмонией [14].
Таким образом, нами установлено, что содержание хемо-
кинов, про- и противовоспалительных цитокинов в пуповин-ной крови доношенных и недоношенных детей без признаков врожденной инфекции соизмеримо. У недоношенных детей с врожденной пневмонией уровень исследуемых цитокинов в плазме пуповинной крови выше по сравнению с таковым у детей сходного гестационного возраста без признаков инфекции. В периферической крови детей с врожденной пневмонией в возрасте 3 сут жизни выявлено более низкое содержание ИФНу, ИЛ-lß, ИЛ-6, ФНОа, ИЛ-12, ИЛ-13, ИЛ-4 по сравнению с пуповинной кровью. У здоровых доношенных детей в периферической крови содержание ИЛ-8, MCP, ИЛ-6, ИЛ-13, ИЛ-12, ИЛ-4 было выше, чем в пуповинной крови.
Заключение
У детей без признаков врожденной инфекции спонтанная секреторная активность продуцирующих цитокины клеток иммунной системы не зависит от гестационного возраста. Течение процесса ранней неонатальной адаптации у новорожденных без признаков врожденной инфекции сопровождается повышением содержания ряда цитокинов в плазме крови. Результатом пре- и интранатального взаимодействия незрелой иммунной системы плода с антигенами условно-патогенных микроорганизмов является повышение секреторной активности цитокинпродуцирующих клеток с последующим истощением секреторного потенциала иммунных клеток в течение раннего неонатального периода.
Благодарности. Авторы выражают свою признательность О.В. Тысячному и Е.А. Полторабатько за помощь в создании коллекции биоматериала.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследование выполнено в рамках государственного задания Министерства здравоохранения РФ (тема «Разработка методов доклинического выявления и предупреждения неблагоприятных последствий врожденных и перинатальных заболеваний у детей», № АААА-А15-115123110120-8).
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Menon R. Preterm birth: a global burden on maternal and childhealth. Pathogensandglobal health. 2012; 106 (3): 139-40.
2. Симбирцев А.С. Цитокины: классификация и биологические функции. Цитокины и воспаление. 2004; 3 (2): 16-23.
3. Милая О.В., Ионов О.В., Дегтярева А.В., Левадная А.В., Дегтярев Д.Н. Клинико-лабораторные проявления врожденных инфекционно-воспалительных заболеваний у детей с экстремально низкой и очень низкой массой тела при рождении. Акушерство и гинекология. 2014; 10: 66-71.
4. Ионов О.В., Никитина И.В., Зубков В.В., Митрохин С.Д., Кро-хина К.Н., Киртбая А.Р. и др. Порядок обследования новорожденных с подозрением на инфекционную патологию и правила назначения антибактериальной терапии, принятые в отделении реанимации и интенсивной терапии новорожденных ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии иперинатологии имени В.И. Кулакова» Минздрава России. Неонатология: новости, мнения, обучение. 2014; 1: 95-106.
5. Peoples J.D., Cheung S., Nesin M., Lin H., Tatad F., Hoang D., Perlman J.M., Cunningham-Rundles S. Neonatal cord blood subsets and cytokine response to bacterial antigens. American journal of perinatology. 2009; 26 (9): 647-57.
6. Shultz C., Rott C., Temming P., Schlenke P., Möller J.C., Bucsky P. Enhanced interleukin-6 and iterleukin-8 synthesis in term and preterm infants. Pediatr. Res. 2002; 51 (3): 317-22.
7. Румянцева В.П., Баев О.Р., Верясов В.Н. Роль лейкоцитов и ци-токинов в развитии и регуляции родовой деятельности при своевременных родах. Акушерство и гинекология. 2011; 8: 11-5.
8. Tutdibi E., Hunecke A., Lindner U., Monz D., Gortner L. Levels of cytokines in umbilical cord blood in relation to spontaneous labor. J. perinatal. med. 2012; 40 (5): 527-32.
9. Deshmane S.L., Kremlev S., Amini S., Sawaya B.E. Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1): an overview. Journal of interferon & cytokine research. 2009; 29 (6): 313-26.
original article
10. Якорнова Г.В., Ремизова И.И., Чистякова Г.Н., Устьянцева Л.С. Динамика провоспалительных цитокинов у детей, родившихся у женщин с осложненной беременностью, в зависимости от течения раннего периода адаптации. Российский вестник перина-тологии и педиатрии. 2015; 60 (4): 50-6.
11. Machado J.R., Soave D.F., da Silva M.V., de Menezes L.B., Etchebehere R.M. et al. Neonatal Sepsis and inflammatory mediators. Mediators of inflammation. 2014: 269681. Available at: https://www. ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4295603/.
12. Железникова Г.Ф. Цитокины как предикторы течения и исхода инфекций. Цитокины и воспаление. 2009; 8 (1): 10-7.
13. Кулаков В.И., Сухих Г.Т., Кан Н.Е., Верясов В.Н., Орджоникидзе Н.В. Содержание цитокинов в амниотической жидкости, пупо-винной крови и сыворотке крови женщин с внутриутробной инфекцией. Акушерство и гинекология. 2005; 5: 14-7.
14. Жукова А.С., Никитина И.В., Ванько Л.В., Матвеева Н.К., Кре-четова Л.В., Ионов О.В. и др. Особенности продукции активных форм кислорода фагоцитами периферической крови у недоношенных новорожденных в раннем неонатальном периоде. Неонатология: новости, мнения, обучение. 2016; 2: 89-95.
REFERENCES
1. Menon R. Preterm birth: a global burden on maternal and childhealth. Pathogensandglobal health. 2012; 106 (3): 139-40.
2. Simbirtsev A.S. Cytokines - classification and biologic functions. Tsitokiny i vospalenie. 2004; 3 (2): 16-23. (in Russian)
3. Milaya O.V., Ionov O.V., Degtyareva A.V., Levadnaya A.V., Degtyarev D.N. Clinical and laboratory manifestations of congenital infectious and inflammatory diseasesd very low birth weight infants. Akusherstvo i ginekologiya. 2014; 10: 66-71. (in Russian)
4. Ionov O.V., Nikitina I.V., Zubkov V.V., Mitrokhin S.D., Krokhina K.N., Kirtbaya A.R. et al. The procedure for the examination of newborns suspected of infectious pathology and rules of antibacterial therapy, adopted at the Department of resuscitation and intensive therapy of newborn Scientific center of obstetrics, gynecology and Perinatology named V.I. Kulakov" Ministry of health of Russia. Neonatologiya: novosti, mneniye, obuchenie. 2014; (1): 95-106. (in Russian)
5. Peoples J.D., Cheung S., Nesin M., Lin H., Tatad F., Hoang D., Perlman J.M., Cunningham-Rundles S. Neonatal cord blood subsets and cytokine response to bacterial antigens. American journal of perinatology. 2009; 26 (9): 647-57.
6. Shultz C., Rott C., Temming P., Schlenke P., Möller J.C., Bucsky P. Enhanced interleukin-6 and iterleukin-8 synthesis in term and preterm infants. Pediatr. Res. 2002; 51 (3): 317-22.
7. Rumyantseva V.P., Baev O.R., Veryasov V.N. Role of leukocytes and cytokines in the development and regulation of labor activity at term birth. Akusherstvo i ginekologiya. 2011; 8: 11-5. (in Russian)
8. Tutdibi E., Hunecke A., Lindner U., Monz D., Gortner L. Levels of cytokines in umbilical cord blood in relation to spontaneous labor. J. perinatal. med. 2012; 40 (5): 527-32.
9. Deshmane S.L., Kremlev S., Amini S., Sawaya B.E. Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1): an overview. Journal of interferon & cytokine research. 2009; 29 (6): 313-26.
10. Yakornova G.V., Remizova I.I., Chistyakova G.N., Ustyantseva L.S. Time course of changes in proinflammatory cytokines in infants born to women with complicated pregnancy in relation to the course of an early adaptation period. Rossiyskiy vestnik perinatologii i pediatrii. 2015; 60 (4): 50-6. (in Russian)
11. Machado J.R., Soave D.F., da Silva M.V., de Menezes L.B., Etchebehere R.M. et al. Neonatal Sepsis and inflammatory mediators. Mediators of inflammation. 2014: 269681. Available at: https://www. ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4295603/.
12. Zheleznikova G.F. Cytokines as predictors of infection course and outcome. Tsitokiny i vospalenie. 2009; 8 (1): 10-7. (in Russian)
13. Kulakov V.I., Sukhikh G.T., Kan N.E., Veryasov V.N., Ordzhonikidze N.V. Cytokine levels in the amniotic fluid, cord blood and serum of women with intrauterine infection. Akusherstvo i ginekologiya. 2005; 5: 14-7. (in Russian)
14. Zhukova A.S., Nikitina I.V., Van'ko L.V., Matveeva N.K., Krecheto-va L.V., Ionov O.V., Timofeeva L.A., Degtyarev D.N. Production of reactive oxygen species by peripheral blood phagocytes in preterm infants in the early neonatal period. Neonatologiya: novosti, mneniye, obuchenie. 2016; 2: 89-95. (in Russian)
Поступила 09.11.16 Принята к печати 14.04.17
