CC BY
17
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ние. В последние годы было показано, что уровень функциональной активности CD4+ лимфоцитов определяется стадией их дифференцировки, Однако роль их в регуляции иммунного ответа при беременности остается мало изученной. Имеются лишь единичные данные об общем содержании Т-лимфоцитов в крови и в плаценте при не-осложненном течении беременности, а также при акушерской патологии, в частности, при гестозе и угрозе прерывания беременности (Кадырова Л.В. и соавт., 2014; Кудрявцев И.В., 2014).
Цель. Определение CD4+ лимфоцитов разной стадии дифференцировки в периферической крови, у женщин с привычным невынашиванием беременности (ПНБ).
Материалы и методы. На базе НИИ иммунологии ЮУГМУ г. Челябинска в 2016-2017 гг. было проведено комплексное обследование 30 женщин в возрасте от 20 до 36 лет, с диагнозом ПНБ. Диагноз был подтвержден врачами — гинекологами с помощью клинических и инструментальных и молекулярно-генетических методов исследования. Группу контроля составили 30 условно здоровых женщин, имеющих 2-х и более детей от одного мужчины. Все пациентки были разделены на две группы: 1- контроль (А) и 2- женщины с привычным невынашиванием беременности (В) Всем обследуемым было проведено иммунологическое исследование периферической крови методом проточной цитоф-люориметрии на аппарате Navios™ (Beckman Coulter, США) с использованием коньюгатов антител: CD45+-PerCP-Cy7 (ВС,США), CD4+- PerCP-Cy5.5 (eBioscience, США), CD8+ PerCP-Cy5.5 (eBioscience, США), CD45RA АРС (eBioscience, США), CD62L FITC (eBioscience, США). Статистический анализ осуществляли с применением пакета прикладных программ Statistica 9.0. Для сравнения групп использовали непараметрический критерий Манна—Уитни, различия считали достоверными при уровне значимости p < 0,05.
Результаты и обсуждение. При обследовании было установлено достоверное повышение абсолютного количества CD45RA+CD62L+ (Tn) наивных CD4+ лимфоцитов при одновременном снижении абсолютного и относительного количества CD45RA-CD62L- (Tem) эффектор-ных клеток памяти CD4+ у пациенток с ПНБ по сравнению с группой контроля. В настоящее время доказано, что наступление нормальной беременности сопровождается доминированием в крови пула CD4+ Tn на фоне снижения количества Tem и Temra (Сотникова Н.Ю., 2010), что соотносится с нашими данными. Возможно, что при ПНБ имеются другие нарушения иммунной системы, что требует дальнейшего более детального и расширенного изучения.
СОДЕРЖАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ РАЗНЫХ КЛАССОВ В СПЕРМОПЛАЗМЕ ПРИ БЕССИМПТОМНОЙ БАКТЕРИОСПЕРМИИ
Вавилов Н.В., Мальцев H.A., Годовалов А.П.
ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет им. акад. Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения РФ, Пермь, Россия
C 1980 г. отмечается неуклонное снижение встречаемости значений «нормы» среди показателей спермограм-мы. Также удельный вклад мужского фактора в структуру бесплодия составляет 20-45%. Показано, что у мужчин, состоящих в бесплодных браках, зачастую обнаружива-
ется бессимптомная бактериоспермия. Описано как прямое негативное влияние микроорганизмов на качество эякулята, так и опосредованное — через реакции макроорганизма. Как известно, одним из звеньев защиты от инфекции являются гуморальные факторы приобретённого иммунитета, поэтому интерес представляет оценка содержания иммуноглобулинов в зависимости от микробного спектра эякулята при бессимптомной бактериоспермии.
Цель. Оценить содержание иммуноглобулинов классов М, G, А и Е в спермоплазме мужчин с бессимптомной бактериоспермией.
Материалы и методы. Проведено исследование эякулята 51 мужчины, обратившихся в клинику по поводу бесплодного брака. Для бактериологического анализа исследуемых образцов готовили десятикратные разведения исходного материала. Бактериологическое исследование выполнено по общепринятой методике(Godovalov А.Р., Кагришпа Т.1., 2016). Для установления концентрации иммуноглобулинов (ВД класса М (^М), G (IgG), А (IgA) и Е (^Е) использовали иммуноферментный метод (Вектор-Бест, Россия). Общее микробное число выражали в ^ КОЕ/мл. Концентрацию ^ и альбумина выражали в мг/г общего белка. Статистический анализ результатов проводили с использованием методов описательной статистики и ^критерия Стьюдента для непарных данных.
Результаты. Установлено, что у 94% мужчин в эякуляте присутствуют микроорганизмы. Из них у 63% мужчин были обнаружены грамположительные кокки (1-я группа; 4,53±0,24 ^ КОЕ/мл), в трети случаев (31%) — грамо-трицательные палочки (2-я группа; 5,38±0,30 ^ КОЕ/мл, р < 0,05 к 1-й группе) и только у 6% мужчин рост микрофлоры отсутствовал (3-я группа). Показано, что у мужчин 3-й группы концентрация белка в спермоплазме составила 89,0±5,1 мг/мл, что существенно выше, чем в 1-й (58,9±2,7 мг/мл; р < 0,05) и 2-й группах (57,3±3,9 мг/мл; р < 0,05). Доля альбумина в общей белковой фракции во 2-й группе статистически значимо выше, чем в 1-й, однако обе группы не отличались по уровню этого белка от показателей 3-й группы. Наибольший уровень IgG и ^М наблюдался при высеве представителей семейства Enterobacteriaceae (табл.). В противоположность этому максимальный уровень IgA обнаружен в 3-й группе, где в образцах спермоплазмы отсутствовал рост условно патогенной микрофлоры (табл.). Иммуноглобулины класса Е не обнаружены ни в одной пробе.
ТАБЛИЦА. СОДЕРЖАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В СПЕРМОПЛАЗМЕ МУЖЧИН С БЕССИМПТОМНОЙ БАКТЕРИОСПЕРМИЕЙ
Группы Концентрация иммуноглобулинов, мг/г белка
IgG IgM igA
1 206,6±13,5*# 3,7±0,5* 35,8±3,2*#
2 261,9±23,0# 5,6±0,7# 27,3±2,6#
3 154,5±24,6 2,4±0,7 72,8±10,7
Примечание. * — р < 0,05 при сравнении с данными 2-й группы, # — р < 0,05 при сравнении с данными 3-й группы.
Повышение концентраций ^М и альбумина во 2-й группе можно объяснить более выраженным действием грамотрицательной флоры на микроциркуляторное русло, в результате чего усиливается транссудация таких «тя-
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология репродукции Immunology of reproduction
жёлых» молекул, однако данный механизм требует дальнейшего изучения.
Заключение. Таким образом, проведенные исследования показали, что, несмотря на отсутствие клиники, при бессимптомной бактериоспермии наблюдается секреция иммуноглоублинов классов M и G в спермоплазму, а уровень иммуноглобулина А существенно снижается.
Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ и Администрации Пермского края в рамках научного проекта «р_а 16-44-590429».
ПРОДУКЦИЯ IN VITRO ЦИТОКИНОВ Th1/Th2-ТИПА КЛЕТКАМИ ЦЕЛЬНОЙ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЖЕНЩИН С ИДИОПАТИЧЕСКИМ ПРИВЫЧНЫМ ВЫКИДЫШЕМ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ИММУНОЦИТОТЕРАПИИ
Вторушина В.В., Кречетова Л.В., Тетруашвили Н.К.
ФГБУ«Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Патогенез идиопатического привычного выкидыша (ПВ) связывают с дисбалансом иммунных реакций, происходящих между иммунной системой матери и феталь-ными клетками, который приводит к нарушению формирования толерантности к аллоантигенам плода и, следовательно, к отторжению плода на ранних сроках гестации. Признание иммунного генеза ранних потерь, с одной стороны, способствует поиску маркеров нарушенной толерантности, а с другой, поискам методов иммунокор-ригирующей терапии, самым дискуссионным из которых является иммуноцитотерапия (ИЦТ). Противоречивость выводов об эффективности ИЦТ связана с разнообразием методов подготовки клеток для введения, протоколов иммунизации, неоднородностью выборок пациентов для терапии. Сформулированы различные гипотезы о механизмах ее иммуномодулирующего действия. Наиболее распространенной была гипотеза о необходимости смены активного иммунного ответа провоспалительной направленности (Thl-типа), на фоне которого беременность у женщин с ПВ не пролонгируется, на ответ противовоспалительной направленности (1Ь2-типа). При отсутствии четких подтверждений этой гипотезы становится очевидной необходимость исследований соотношения Thl-типа и 1Ь2-типа ответов на ИЦТ у женщин с привычным выкидышем при разных исходах данной беременности.
Целью настоящей работы была оценка цитокиновой продукции митоген-стимулированными in vitro клетками цельной периферической крови пациенток с идиопати-ческим ПВ после предгестационной ИЦТ и в I триместре наступившей беременности.
В исследование были включены 26 пациенток с ПВ, 12 фертильных женщин вне беременности и 6 женщин в 12 недель физиологической беременности. Предгеста-ционная ИЦТ проводилась дважды с интервалом в один месяц на 5-9 день менструального цикла, заключалась во внутрикожном введении 50 млн клеток лейкоцитарной взвеси партнера в ладонную поверхность предплечья в 10-12 точек. Во время наступившей беременности ИЦТ проводили на сроке 5-6 и 8-9 недель гестации. Забор периферической крови производили вне беременности до проведения ИЦТ и после 2-х процедур ИЦТ на 18-22 день менструального цикла, во время беременности — на сроках 5-6, 8-9 и 12 недель. Для получения супернатантов
клеток цельной крови использовали набор «Цитокин-стимул-бест» (Вектор-Бест, Россия). В соответствии с рекомендацией производителя стимулирование цельной крови осуществлялось в СО2-инкубаторе при 37 °С в течение 24-х часов. Концентрацию цитокинов провоспалительной (IFNy, TNFa IL-ф, IL-2, IL-6, IL-8, Ш-12р70) и противовоспалительной (IL-4, IL-10) направленности оценивали с помощью мультиплексного анализа с использованием стандартного набора Human Th1/Th2 11-plex Ready-to-Use Kit (eBioscience, США) на проточном цитофлуориметре FACSCalibur (Becton Dickinson, США). Расчет результатов производили с помощью программы FlowCytomix-Pro-3.0.
Согласно полученным нами результатам до проведения ИЦТ у женщин с ПВ продукция TNFa, IL-1P, IL-2, IL-6, IL-8 была значимо ниже, чем у женщин контрольной группы, а продукция IFNy имела выраженную тенденцию к снижению. Проведение 2-х процедур ИЦТ в качестве предгестационной подготовки не оказало влияния на уровень продукции цитокинов у женщин с ПВ. При этом сохранились отличия, выявленные до ИЦТ, от продукции цитокинов у женщин контрольной группы — продукция TNFa, IL-1P, IL-2, IL-6, IL-8 осталась сниженной, а уровень IL-4 был значимо ниже. В 5-6 недель наступившей беременности после предгестацион-ной ИЦТ у пациенток с ПВ не наблюдалось изменений в характере цитокиновой продукции по сравнению с результатами, полученными после 2-ой процедуры ИЦТ вне беременности. После проведения 2-х процедур ИЦТ в I триместре беременности при обследовании в 8-9 и 12 недель гестации у женщин с ПВ достоверно преобладала продукция IFNy по сравнению с результатами после 2-ой процедуры ИЦТ вне беременности.
Полученные результаты указывают на преобладание ^2-направленности иммунного ответа у женщин с иди-опатическим привычным выкидышем до назначения им-муноцитотерапии. Проведение иммуноцитотерапии в качестве предгестационной подготовки и во время I триместра беременности приводит к преобладанию TM-типа цитокиновой продукции, необходимой для успешной пролонгации беременности. Для понимания значимости иммуноцитотерапии в программе лечения пациенток с идиопатическим привычным выкидышем требуется проведение дальнейших исследований.
ВЛИЯНИЕ КАРНИТИНА НА ЦИТОКИНОВЫЙ СТАТУС СЕМЕННОЙ ПЛАЗМЫ ПРИ БЕСПЛОДИИ
Галимова Э.Ф., Гайсина А.Р., Травников О.Ю., Хайбуллина З.Г., Баймурзина Ю.Л., Гайсина А.Ф., Галимов Ш.Н.
Башкирский государственный медицинский университет, Уфа, Россия
Введение. Группу информативных маркеров репродуктивной функции образуют цитокины и родственные соединения — хемокины и ростовые факторы. Большинство известных цитокинов экспрессируется в зрелом яичке независимо от воспаления или активации иммунных процессов, т.е. их функции не ограничиваются регуляцией иммунитета. Цитокины важны для зачатия посредством как прямых воздействий на зародышевые клетки, эмбрион и негемопоэтические структуры в гонадах и матке, так и косвенного влияния путем создания иммуноло-гически восприимчивой среды для образования гамет,
