CC BY
35
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология репродукции Immunology of reproduction
жёлых» молекул, однако данный механизм требует дальнейшего изучения.
Заключение. Таким образом, проведенные исследования показали, что, несмотря на отсутствие клиники, при бессимптомной бактериоспермии наблюдается секреция иммуноглоублинов классов M и G в спермоплазму, а уровень иммуноглобулина А существенно снижается.
Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ и Администрации Пермского края в рамках научного проекта «р_а 16-44-590429».
ПРОДУКЦИЯ IN VITRO ЦИТОКИНОВ Th1/Th2-ТИПА КЛЕТКАМИ ЦЕЛЬНОЙ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЖЕНЩИН С ИДИОПАТИЧЕСКИМ ПРИВЫЧНЫМ ВЫКИДЫШЕМ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ИММУНОЦИТОТЕРАПИИ
Вторушина В.В., Кречетова Л.В., Тетруашвили Н.К.
ФГБУ«Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Патогенез идиопатического привычного выкидыша (ПВ) связывают с дисбалансом иммунных реакций, происходящих между иммунной системой матери и феталь-ными клетками, который приводит к нарушению формирования толерантности к аллоантигенам плода и, следовательно, к отторжению плода на ранних сроках гестации. Признание иммунного генеза ранних потерь, с одной стороны, способствует поиску маркеров нарушенной толерантности, а с другой, поискам методов иммунокор-ригирующей терапии, самым дискуссионным из которых является иммуноцитотерапия (ИЦТ). Противоречивость выводов об эффективности ИЦТ связана с разнообразием методов подготовки клеток для введения, протоколов иммунизации, неоднородностью выборок пациентов для терапии. Сформулированы различные гипотезы о механизмах ее иммуномодулирующего действия. Наиболее распространенной была гипотеза о необходимости смены активного иммунного ответа провоспалительной направленности (Thl-типа), на фоне которого беременность у женщин с ПВ не пролонгируется, на ответ противовоспалительной направленности (1Ь2-типа). При отсутствии четких подтверждений этой гипотезы становится очевидной необходимость исследований соотношения Thl-типа и 1Ь2-типа ответов на ИЦТ у женщин с привычным выкидышем при разных исходах данной беременности.
Целью настоящей работы была оценка цитокиновой продукции митоген-стимулированными in vitro клетками цельной периферической крови пациенток с идиопати-ческим ПВ после предгестационной ИЦТ и в I триместре наступившей беременности.
В исследование были включены 26 пациенток с ПВ, 12 фертильных женщин вне беременности и 6 женщин в 12 недель физиологической беременности. Предгеста-ционная ИЦТ проводилась дважды с интервалом в один месяц на 5-9 день менструального цикла, заключалась во внутрикожном введении 50 млн клеток лейкоцитарной взвеси партнера в ладонную поверхность предплечья в 10-12 точек. Во время наступившей беременности ИЦТ проводили на сроке 5-6 и 8-9 недель гестации. Забор периферической крови производили вне беременности до проведения ИЦТ и после 2-х процедур ИЦТ на 18-22 день менструального цикла, во время беременности — на сроках 5-6, 8-9 и 12 недель. Для получения супернатантов
клеток цельной крови использовали набор «Цитокин-стимул-бест» (Вектор-Бест, Россия). В соответствии с рекомендацией производителя стимулирование цельной крови осуществлялось в СО2-инкубаторе при 37 °С в течение 24-х часов. Концентрацию цитокинов провоспалительной (IFNy, TNFa IL-ф, IL-2, IL-6, IL-8, Ш-12р70) и противовоспалительной (IL-4, IL-10) направленности оценивали с помощью мультиплексного анализа с использованием стандартного набора Human Th1/Th2 11-plex Ready-to-Use Kit (eBioscience, США) на проточном цитофлуориметре FACSCalibur (Becton Dickinson, США). Расчет результатов производили с помощью программы FlowCytomix-Pro-3.0.
Согласно полученным нами результатам до проведения ИЦТ у женщин с ПВ продукция TNFa, IL-1P, IL-2, IL-6, IL-8 была значимо ниже, чем у женщин контрольной группы, а продукция IFNy имела выраженную тенденцию к снижению. Проведение 2-х процедур ИЦТ в качестве предгестационной подготовки не оказало влияния на уровень продукции цитокинов у женщин с ПВ. При этом сохранились отличия, выявленные до ИЦТ, от продукции цитокинов у женщин контрольной группы — продукция TNFa, IL-1P, IL-2, IL-6, IL-8 осталась сниженной, а уровень IL-4 был значимо ниже. В 5-6 недель наступившей беременности после предгестацион-ной ИЦТ у пациенток с ПВ не наблюдалось изменений в характере цитокиновой продукции по сравнению с результатами, полученными после 2-ой процедуры ИЦТ вне беременности. После проведения 2-х процедур ИЦТ в I триместре беременности при обследовании в 8-9 и 12 недель гестации у женщин с ПВ достоверно преобладала продукция IFNy по сравнению с результатами после 2-ой процедуры ИЦТ вне беременности.
Полученные результаты указывают на преобладание ^2-направленности иммунного ответа у женщин с иди-опатическим привычным выкидышем до назначения им-муноцитотерапии. Проведение иммуноцитотерапии в качестве предгестационной подготовки и во время I триместра беременности приводит к преобладанию TM-типа цитокиновой продукции, необходимой для успешной пролонгации беременности. Для понимания значимости иммуноцитотерапии в программе лечения пациенток с идиопатическим привычным выкидышем требуется проведение дальнейших исследований.
ВЛИЯНИЕ КАРНИТИНА НА ЦИТОКИНОВЫЙ СТАТУС СЕМЕННОЙ ПЛАЗМЫ ПРИ БЕСПЛОДИИ
Галимова Э.Ф., Гайсина А.Р., Травников О.Ю., Хайбуллина З.Г., Баймурзина Ю.Л., Гайсина А.Ф., Галимов Ш.Н.
Башкирский государственный медицинский университет, Уфа, Россия
Введение. Группу информативных маркеров репродуктивной функции образуют цитокины и родственные соединения — хемокины и ростовые факторы. Большинство известных цитокинов экспрессируется в зрелом яичке независимо от воспаления или активации иммунных процессов, т.е. их функции не ограничиваются регуляцией иммунитета. Цитокины важны для зачатия посредством как прямых воздействий на зародышевые клетки, эмбрион и негемопоэтические структуры в гонадах и матке, так и косвенного влияния путем создания иммуноло-гически восприимчивой среды для образования гамет,
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
имплантации и развития оплодотворенной яйцеклетки. Ранее нами был выявлен дефицит и дисбаланс фактора стромальных клеток SDF-1a и трансформирующего фактора роста TGF-P в сыворотке крови и семенной плазме бесплодных пациентов. Понимание, какие цитокины и каким образом вовлечены в снижение фертилизацион-ного потенциала эякулята, принципиально для дизайна терапии репродуктивной патологии различного происхождения, в том числе идиопатических форм мужского бесплодия.
Цель. Оценка влияния препарата карнитина на уровень некоторых хемокинов и факторов роста в семенной плазме при инфертильности неясного генеза.
Материалы и методы. Под наблюдением находилось 69 мужчин в возрасте 23-39 лет, состоящих в бесплодном браке от 1 года до 8 лет (основная группа). Пациенты получали L-карнитина тартрат (по 0,5 г дважды в сутки пе-рорально) в течение 3 мес., что соответствует продолжительности сперматогенеза. Группу сравнения (контроль) составили 30 фертильных мужчин, имеющих 1-3 здоровых детей. Исследование спермы проводили по протоколу Всемирной организации здравоохранения (2010). В семенной плазме определяли уровень цитокинов им-муноферментным методом с помощью наборов фирмы BCM Diagnost (США) по стандартному протоколу согласно рекомендациям производителя. Для статистической обработки использовали пакет программ MS Excel 2003 SPSS 12.0 для Windows. О достоверности различий между средними величинами судили по t-критерию Стьюдента.
Результаты. При анализе спермограмм пациентов при приеме препарата статистически значимых изменений концентрации сперматозоидов, содержания патологических форм и двигательной активности установлено не было, несмотря на выраженную тенденцию к нормализации последнего показателя, что не соответствует литературным данным о положительном эффекте карнитина на моторику и другие свойства гамет.
Особенностью цитокинового статуса семенной жидкости фертильных пациентов явилось преобладание хемокинов и ростовых факторов (SDF-1a, IL-8, IL-7 и TGF-P), превалирование уровня отдельных противовоспалительных цитокинов (IL-4 и IL-5) и относительно низкое содержание провоспалительных медиаторов (IL-1P, IL-18 и TNFa). Доминирование фактора стро-мальных клеток и трансформирующего фактора роста обеспечивает создание привилегированного иммунного положения сперматогенного эпителия и низкую имму-ногенность эякулята, которые ранее связывали главным образом с гематотестикулярным барьером. У бесплодных пациентов обнаружены выраженные сдвиги цитокино-вого зеркала семенной плазмы: снижение концентрации и нарушение соотношения SDF-1a и TGF-P, регуляторов иммунных/пролиферативных процессов в гаметах, причастных также к индукции молекулярных и клеточных изменений в эндометрии при имплантации. Что касается провоспалительных цитокинов, то увеличения их содержания, которое является серьезным препятствием для осуществления основной функции сперматозоидов, не найдено.
Для коррекции выявленных изменений нами был использован L-карнитин, обладающий выраженной анти-оксидантной, мембранопротекторной и липотропной активностью. Цитокиновый профиль спермоплазмы пациентов основной группы на фоне препарата претерпевал определенные изменения. Прием карнитина
сопровождался статистически значимым увеличением концентрации SDF-1a, IL-7 и TGF-ß практически до показателей фертильных мужчин. Нормализация уровня этих цитокинов имеет первостепенное значение для восстановления оплодотворяющей способности сперматозоидов, поскольку им принадлежит ключевая роль в формировании толерантности половых клеток и повышении рецептивности матки к оплодотворенной яйцеклетке.
Заключение. Таким образом, карнитин является эффективным средством коррекции цитокинового статуса эякулята, что позволяет рекомендовать его включение в качестве базисного компонента эмпирической терапии идиопатического бесплодия.
РЕГУЛЯЦИЯ ЭНДОГЕННЫМ МЕЛАТОНИНОМ Т-КЛЕТОЧНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ Th17 И Treg В ПЕРИОД ГЕСТАЦИИ
Глебездина Н.С.1, Олина А.А.2, Некрасова И.В.1, Куклина Е.М.1
1 Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь, Россия
2 ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения РФ, Пермь, Россия
Эпифизарный гормон мелатонин регулирует широкий спектр биологических реакций, в том числе играет важную роль во время беременности: будучи эффективным антиоксидантом, он защищает ткани плода и плаценты от окислительных повреждений. В то же время, гормон является эффективным иммунорегулятором, и изменение его уровня в период гестации должно сказываться на активности иммунных процессов. Особый интерес представляет роль мелатонина в контроле баланса двух Т-клеточных субпопуляций, Th17 и Treg: с одной стороны, этот баланс важен для успешного развития беременности; с другой стороны, клетки Th17 и Tregs находятся под непосредственным контролем мелатонина, поскольку экспрессируют специфические мембранные рецепторы для гормона, МТ1 и МТ2, а один из двух диф-ференцировочных факторов для Th17 — RORa — эффективно регулируется мелатонином и до недавнего времени рассматривался как третий, внутриклеточный, рецептор для данного гормона.
Цель. Оценить роль эндогенного мелатонина в регуляции дифференцировки Th17/Treg на разных стадиях беременности.
Объектами исследования служили лейкоциты женщин, находящихся в I и III триместрах беременности, и лейкоциты здоровых небеременных женщин репродуктивного возраста. Уровень и активность Th17 и Treg оценивали ex vivo и in vitro, в ответ на поликлональную активацию (анти-CD3/CD28), — по экспрессии маркеров дифференцировки Th17/Treg — транскрипционных факторов RORyt и FoxP3, а также по продукции ключевых цитокинов этих клеток, IL-17A и TGF-ß. Вклад эндогенного мелатонина в дифференцировку определяли при культивировании лимфоцитов в присутствии аутологич-ной сыворотки (как источника гормона) на фоне блокады мембранных рецепторов для мелатонина, МТ1/МТ2. Одновременно ex vivo определялись уровень мелатонина в сыворотке, а также экспрессия CD4+Т-лимфоцитами ключевого мембранного рецептора для мелатонина, МТ1, и мелатонин-регулируемого фактора RORa.
