CC BY
74
Труды Карельского научного центра РАН № 12. 2015. С.142-148 DOI: 10.17076/eb266
УДК 581.1;58.085
СОДЕРЖАНИЕ ФИТОГОРМОНОВ В КАЛЛУСНОЙ ТКАНИ ПРИ ИНДУКЦИИ СОМАТИЧЕСКОГО ЭМБРИОГЕНЕЗА У ЗАРОДЫШЕЙ ЕЛИ ОБЫКНОВЕННОЙ (PICEA ABIES [L.] KARST.)
К. А. Хмара
Институт экологических проблем Севера УрО РАН
У зародышей Picea abies [L.] Karst. индуцировали соматический эмбриогенез добавлением в питательную среду 2,4-Д и БАП. На различных этапах формирования каллусной ткани с помощью иммуноферментного анализа определяли содержание ИУК, АБК, зеатин-рибозид и изопентениладенин (2иП) + изопентениладенозин (ИПА). Процесс образования эмбриогенного каллуса зависел от содержания ИУК и АБК в культивируемых тканях. В зародышах, способных образовывать эмбрио-генный каллус, содержалось в 5-6 раз больше ИУК, чем у зародышей, не способных к соматическому эмбриогенезу. Содержание АБК у зародышей, способных образовывать эмбриогенный каллус, было в два раза выше, чем у зародышей, не способных к эмбриогенезу. В самом эмбриогенном каллусе наблюдался достаточно высокий уровень АБК. Одним из условий формирования эмбриогенного каллуса является высокое содержание цитокининов в культивируемых зародышах. Полученные данные показали, что эмбриогенный каллус содержит значительно меньшее количество цитокининов, чем культивируемая ткань зародышей. Эмбриогенный каллус имел низкое содержание фитогормонов по сравнению с каллусом, на котором он образовывался. Существование градиента концентрации фитогормонов - больших различий между эмбриогенным и неэмбриогенным каллусами - говорит об особой роли чувствительности тканей зародыша к регуляторам роста, которые определяют его компетентность и готовность воспринимать экзогенный гормональный сигнал и реагировать на него определенным образом.
Ключевые слова: Picea abies; ИУК; АБК; цитокинины; соматический эмбриогенез.
K. A. Hmara. THE CONTENT OF PLANT HORMONES IN CALLUS TISSUE DURING THE INDUCTION OF SOMATIC EMBRYOGENESIS IN EMBRYOS OF NORWAY SPRUCE (PICEA ABIES [L.] KARST.)
Somatic embryogenesis was induced in embryos of Picea abies by adding 2,4-D and BAP to the culture medium. The content of IAA, ABA, zeatin-ribosid and 2ip was determined at various stages of callus tissue formation using ELISA. The process of embryogenic callus formation depended on the content of IAA and ABA in cultured tissues. The embryos capable of forming embryogenic callus contained 5-6 times more IAA than those incapable of somatic embryogenesis. The ABA content in embryos capable of forming embryogenic callus was two times higher than in embryos incapable of embryogenesis. A sufficiently high level of ABA was observed in embryogenic callus. One of the conditions for the formation of embryogenic callus was a high content of cytokinins in cultured embryos. The data showed that embryogenic callus contained a significantly smaller amount
of cytokinins than the cultured tissue of embryos. The level of phytohormones observed in embryogenic callus was low compared to the callus it was formed on. The concentration gradient of phytohormones or a major difference between embryogenic and nonem-bryogenic callus showed special embryo tissue sensitivity to the growth regulators that determined its competence and readiness to accept exogenous hormonal signal and respond to it in a certain way.
Keywords: Picea abies; plant hormones; IAA; ABA; cytokinins; somatic embryogenesis.
Введение
Известно, что семеношение хвойных пород подвержено значительному колебанию, поэтому лесное хозяйство испытывает недостаток в семенах. Для решения проблемы нехватки посадочного материала ведутся интенсивные исследования в области разработки методов размножения хвойных пород с помощью соматического эмбриогенеза [Белоруссова, Третьякова 2008; Третьякова, Ижболдина, 2008; Шалаев, Третьякова, 2011; Третьякова, Барсукова, 2012]. При индукции соматического эмбриогенеза у зародышей Picea abies [L.] Karst. наблюдается низкий эмбриогенный потенциал [von Arnold, 1987]. Применение в качестве экс-плантов незрелых зародышей приводит к увеличению количества зародышей, способных образовывать эмбриогенный каллус [Becwar et al., 1987].
Одним из основных условий индукции эмбриогенеза в культуре ткани является присутствие в питательной среде определенного соотношения гормонов, которое играет основную роль в способности тканей зародыша образовывать эмбриогенный каллус. Скуг и Миллер установили, что при изменении соотношения между ауксином и цитокинином изменяется тип образующей меристемы: при высоком отношении ауксина к цитокининам из части клеток каллуса возникают зачатки корней, если концентрация цитокинина превышает концентрацию ауксина, то клетки дифференцируются в апикальные меристемы стебля [Skoog, Miller, 1957]. Часто эксплант, используемый для получения каллуса, является фрагментом органа и включает ткани, клетки которых различно дифференцированы и имеют разный уровень и соотношение гормонов. Онтогенетически молодые экспланты (незрелые зародыши, семена) продуцируют каллусы с более высокой долей морфотипов, способных к регенерации проростков, по сравнению с более зрелыми тканями [Mohan et al., 1988]. Возможно, разный потенциал развития незрелых зародышей и зрелых тканей обусловлен разной концентрацией гормонов.
Таким образом, эндогенные гормоны, такие как ауксины и цитокинины, играют важную роль при индукции соматического эмбриогенеза. Однако, несмотря на большое количество работ, посвященных изучению гормонального контроля эмбриогенеза, влияние гормонов на индукцию соматического эмбриогенеза изучено недостаточно [Kong et al., 1997; Vagner et al., 1999; Latkowska, Rakowski, 2000]. Так, до сих пор не понятно, какое количество и соотношение различных групп фитогормонов оказывает влияние на процесс формирования эмбриоген-ного каллуса и связан ли морфогенетический потенциал эксплантов с эндогенной концентрацией гормонов. Поэтому актуальной задачей является изучение содержания эндогенных фи-тогормонов в каллусе при индукции соматического эмбриогенеза в культуре ткани зародыша. Цель данной работы - определение количества фитогормонов в каллусной ткани при индукции соматического эмбриогенеза у зародышей Picea abies [L.] Karst. и изучение их влияния на процесс развития экспланта.
Материалы и методы
В качестве объекта исследования использовали зародыши семян Picea abies [L.] Karst. Семена были собраны на Устюженской лесосе-менной плантации в Вологодской области.
Для индукции соматического эмбриогенеза применяли питательную среду, содержащую минеральные соли, по Murashige and Skoog [1962]. В состав среды входили: 1 % сахарозы, 0,6 % агара, тиамин-HCl - 5 мг/л, пиридок-син - 1 мг/л, никотиновая кислота - 5 мг/л, инозит 100 мг/л. В питательную среду добавляли 2,4-Д - 2,2 мг/л и БАП - 1,1 мг/л. Экспланты культивировали на индукционной питательной среде в течение 28 дней, при температуре +21°, при 16-часовом освещении.
Определение содержания фитогормонов в культивируемых зародышах было разбито на этапы. Первый этап - это зародыши до введения в культуру ткани. Второй этап - 5 дней культивирования на индукционной питательной среде. Данный период культивирования на
индукционной питательной среде не способен вызвать эмбриогенез у тканей зародыша при пересадке их на питательную среду, в которой отсутствуют экзогенные регуляторы роста. Третий этап - после 15 дней культивирования на индукционных питательных средах, содержащих регуляторы роста. На данном этапе на поверхности каллусной ткани можно было обнаружить эмбриогенную каллусную ткань. Определение фитогормонов в культивируемых зародышах проводили в каллусной массе, на поверхности которой формировался эмбрио-генный каллус, и в каллусе, на поверхности которого эмбриогенез не наблюдался. Четвертый этап - после 28 дней культивирования на индукционных питательных средах, содержащих регуляторы роста. На данном этапе определяли количество фитогормонов в эмбриогенном каллусе и в органогенном каллусе.
Определение нативных фитогормонов проводили с помощью метода иммуноферментно-го анализа (ИФА) [Катаева и др., 1990]
Экстракция фитогормонов из растительного материала. Замороженный растительный материал растирали в агатовой ступке при температуре +4 °С до гомогенного состояния и экстрагировали в течение 2 часов охлажденным до 0 °С 80%-м метиловым спиртом, содержащим 0,1 % БМФ в качестве антиоксиданта, при постоянном перемешивании в темноте в атмосфере азота.
Полученный экстракт центрифугировали, осадок отделяли, ресуспензировали в 80%-м метаноле, содержащем 0,1 % бутил-метилфенола (БМФ), и проводили повторную экстракцию в тех же условиях еще 30 мин. Экстракт центрифугировали, осадок отбрасывали, супернатанты объединяли. Супернатант пропускали с помощью пластикового одноразового шприца через предколонки объемом 3 см3, заполненные обращенной фазой С-18 «Сепа-рон» (Чехия). Получали обесцвеченный экстракт, свободный от хлорофиллов, фенолов, каротиноидов и др. Затем экстракт делили на две равные части: одна часть для определения цитокининов, другая - для определения ИУК и АБК. Для определения потери фитогормонов при очистке в качестве стандартов применялись радиоактивные препараты. Радиоактивность образцов определяли на сцинтилляцион-ном счетчике 1919 Рак Бета «Спектраль» (ЛКБ, Швеция). В соответствии с полученными результатами учитывали потери при очистке.
Процедура ИФА. Полистироловые планшеты сенсибилизировали в течение 12 часов раствором антител в гидрокарбонате
натрия (рН 9,5-9,7) при температуре +4 °С. В каждую лунку вносили по 200 мкл соответствующей антисыворотки. После сенсибилизации планшеты трижды промывали ТБС в течение 15 мин, в каждую лунку вносили по 200 мкл 0,1%-го раствора бычьего сывороточного альбумина в триссолевом буфере (ТБС) и инкубировали 30 мин при температуре +37 °С (кроме вариантов для определения ИУК и АБК). Затем планшеты промывали и в лунки вносили по 50 мкл стандартного раствора гормона или растительного экстракта, перемешивали 1 мин и инкубировали 1 час (температура инкубации для цитокининов +37 °С, для ИУК И АБК +18...+22 °С). Через 1 час в инкубационную смесь добавляли по 150 мкл соответствующего конъюгата - щелочную фосфатазу (ЩФ-гор-мон), перемешивали 1 мин и инкубировали 1 час в тех же условиях. Планшеты промывали с добавлением в ТБС 0,01%-го раствора детергента Тритон Х-100, затем лунки заполняли 200 мкл субстрата (n-нитрофенилфосфат 1 мг/л в гидрокарбонате натрия, рН 9,5-9,7) и инкубировали 1 час при температуре +37 °С. Реакцию останавливали, добавляя в каждую лунку по 50 мкл 5N КОН. Оптическую плотность продукта реакции измеряли при 405 нм на спектрофотометре Multiscan МСС фирмы «Flow» (Англия).
Оценка результатов. В соответствии с методикой Родбард [Rodbard, 1974] определяли зависимость между ферментативной активностью при инкубации антител с возрастающими концентрациями гормона и ферментативной активностью при инкубации в аналогичных условиях без экзогенного гормона.
Все эксперименты проводили в четырех биологических повторностях. При проведении ИФА использовали пять аналитических повтор-ностей. В таблице приведены средние арифметические значения и их стандартные ошибки.
Результаты
В таблице приведены данные иммунофер-ментного анализа по содержанию различных групп фитогормонов в культивируемых тканях.
Содержание фитогормонов в каллусной
ткани после 5 дней культивирования
на индукционной питательной среде
При культивировании в течение 5 дней на индукционной питательной среде содержание ИУК в тканях зародыша увеличивалось в 24 раза.
Зародыши имели высокое содержание эндогенной АБК (163 нг/г сухого веса). После
©
Содержание фитогормонов в каллусе в процессе индукции соматического эмбриогенеза на питательной среде, содержащей 2,4-Д и БАП
Содержание фитогормонов, в нг/г сухого веса
Тип экспланта ИУК АБК Зеатин+зеатин-рибозид 2иП+ИПА
зародыши 83 ± 2 164 ± 1 109 ± 8 4 ± 1
после 5 дней культивирования 1982±201 127 ± 3 7402±194 4300±121
после 15 дней культивирования (зародыши, способные к соматическому эмбриогенезу) 99400±11217 2638±21 10505±157 65304±3103
после 15 дней культивирования (зародыши, не способные к соматическому эмбриогенезу) 15658±309 1454± 11 12094 ± 267 68902 ± 6960
после 28 дней культивирования (зародыши, не способные к соматическому эмбриогенезу) 27000 ± 800 874 ± 5,6 8816±12 62840±3211
эмбриогенный каллус 74 ± 26 1241±109 4256 ± 272 1029±117
5 дней культивирования на индукционной питательной среде наблюдалось незначительное снижение содержания АБК в культивируемых зародышах до 127 нг/г сухого веса.
После 5 дней культивирования на индукционной питательной среде содержание зеатина и зеатин-рибозида в зародышах увеличивалось до 7402 нг/г сухого веса. Количество эндогенных зеатина и зеатина-рибозида в культивируемых зародышах в течение первых 5 дней увеличивалось в 70 раз.
В первые дни культивирования происходило значительное увеличение содержания цитокининов ряда 2иП и ИПА в культивируемых зародышах.
Содержание фитогормонов в каллусной ткани после 15 дней культивирования на индукционной питательной среде
Культивирование в течение 15 дней приводило к увеличению содержания ИУК в зародышах, на поверхности которых формировался эмбриогенный каллус, в 1200 раз. Зародыши, не способные к соматическому эмбриогенезу, имели уровень ИУК значительно ниже, увеличение составило 190 раз.
Содержание АБК в культивируемых зародышах, способных к эмбриогенезу, было высоким - 2638 нг/г сухого веса. Зародыши, не способные к соматическому эмбриогенезу, имели уровень АБК 1454 нг/г сухого веса.
К 15-му дню культивирования содержание зеатина и зеатин-рибозида в зародышах, способных к индукции соматического эмбриогенеза, было 10 505 нг/г сухого веса. Зародыши, не способные к соматическому эмбриогенезу, имели уровень 12 094 нг/г сухого веса.
Содержание цитокининов ряда 2иП и ИПА в зародышах, формирующих эмбриогенный
каллус, было 65 304 нг/г сухого веса. Зародыши, не способные к соматическому эмбриогенезу, имели уровень 2иП и ИПА 68 902 нг/г сухого веса. Количество эндогенных цитокининов ряда 2иП и ИПА в культивируемых зародышах, способных образовывать эмбриогенный каллус, в течение первых 15 дней увеличилось в 16 326 раз.
Содержание фитогормонов в каллусной ткани после 28 дней культивирования на индукционной питательной среде
В зародышах, не способных формировать эмбриогенный каллус, содержание ИУК достигало 27 000 нг/г сухого веса. Содержание ИУК в эмбриогенном каллусе - 74 нг/г сухого веса.
Содержание АБК в эмбриогенном каллусе достигало 1241 нг/г сухого веса, что значительно превышало содержание ее в каллусе, не способном образовывать эмбриогенный каллус.
Эмбриогенный каллус содержал зеатина и зеатин-рибозида 4256 нг/г сухого веса, что в два раза меньше, чем у зародышей, не способных к органогенезу.
Зародыши, не способные к органогенезу, содержали цитокинины ряда 2иП и ИПА 62 840 нг/г сухого веса. В эмбриогенном каллусе - 1029 нг/г сухого веса.
Обсуждение
Одним из факторов, влияющих на диффе-ренцировку клетки, является воздействие фитогормонов. По нашим данным [Хмара, 2011], способность зародышей in vitro к органогенезу зависит от соотношения цитокининов к АБК в культивируемых тканях, а при индукции соматического эмбриогенеза основную роль играет ИУК.
Содержание ИУК
Содержание цитокининов
В первые дни культивирования зародышей в условиях, стимулирующих образование эмб-риогенного каллуса, происходило увеличение содержания ИУК в тканях. Аналогичные данные были получены при индукции органогенеза [Хмара, 2011]. К 15-му дню культивирования уровень ИУК в тканях превосходил исходный уровень более чем в 1000 раз. По нашим данным [Хмара, 2011], при индукции органогенеза содержание ИУК к 12-му дню культивирования увеличивалось в 166 раз. К концу пассажа содержание ИУК в тканях при индукции соматического эмбриогенеза было таким же, как и при индукции органогенеза. В зародышах, способных образовывать эмбриогенный каллус, содержалось в 5-6 раз больше ИУК, чем у зародышей, не способных к соматическому эмбриогенезу. В эмбриогенном каллусе содержание ИУК было низким и соответствовало исходному уровню в зародышах. Вагнер [Vagner et al., 1999] отмечал в эмбриогенном каллусе Norway spruce пониженное содержание ИУК. Полученные нами и литературные данные свидетельствуют о влиянии концентрации ИУК на способность тканей зародыша к соматическому эмбриогенезу, но при этом сам эмбриогенный каллус содержал значительно меньшее количество ИУК.
Содержание АБК
После 5 дней культивирования содержание АБК в тканях зародыша снижалось. По нашим данным [Хмара, 2011], снижение содержания АБК на первом этапе культивирования - необходимое условие для начала развития зародышей in vitro. При дальнейшем культивировании происходило увеличение уровня АБК. При индукции органогенеза у зародышей in vitro наблюдается увеличение содержания АБК в культивируемых тканях, связанное с интенсивным накоплением биомассы [Хмара, 2011]. К 28-му дню культивирования уровень ее снижался. Содержание АБК у зародышей, способных образовывать эмбриогенный каллус, было в два раза выше, чем у зародышей, не способных к эмбриогенезу. В самом эмбриогенном каллусе наблюдался достаточно высокий уровень АБК. Конг [Kong et al., 1997] наблюдал высокое содержание АБК в зиготических эмбриоидах. Таким образом, на первом этапе развития зародыша происходит снижение содержания АБК в тканях, при дальнейшем культивировании происходит накопление АБК в тканях, но при этом в эмбриогенном каллусе наблюдалось высокое содержание АБК.
Содержание цитокининов группы зеати-нов в культивируемых зародышах возрастало первые 5 дней культивирования. При дальнейшем культивировании содержание их существенно не менялось. Содержание цитоки-нинов группы изопентениладенина к 5-му дню культивирования значительно возрастало, а к 15-му дню культивирования происходило значительное увеличение содержания их в тканях экспланта и превышало уровень содержания их на 5-й день культивирования более чем в 30 раз. По нашим данным [Хмара, 2011], при индукции органогенеза у зародышей увеличивалось количество цитокининов группы зеати-нов. К концу пассажа содержание цитокини-нов группы изопентениладенина также было достаточно высоким. Эмбриогенный каллус содержал значительно меньшее количество цитокининов по сравнению с каллусной тканью зародышей. Полученные данные показали, что одним из условий формирования эмбриоген-ного каллуса является высокое содержание цитокининов в культивируемых зародышах. Полученные данные показали, что эмбриоген-ный каллус содержит значительно меньшее количество цитокининов, чем культивируемая ткань зародышей.
Основным фактором, вызывающим индукцию эмбриогенного каллуса, является высокое содержание фитогормонов в культивируемых зародышах. При этом сам эмбриогенный каллус имел низкое содержание фитогормонов, лишь содержание АБК в нем было достаточно высоким. Данный фактор указывает на то, что эмбриогенный каллус обладает автономной гормональной регуляцией, так как даже высокое содержание фитогормонов в питательной среде не способно значительно повысить уровень фитогормонов в эмбриогенном каллусе.
Значительные отличия в содержании фито-гормонов между каллусной тканью зародышей, способных образовывать эмбриогенный каллус, и каллусной тканью зародышей, не способных формировать эмбриогенный каллус, говорят о том, что не только влияние экзогенных фитогормонов определяет путь развития экс-планта, но и способность самих тканей к биосинтезу эндогенных гормонов определяет путь развития экспланта в культуре ткани.
Существование градиента концентраций фитогормонов - больших различий между эмбриогенным и неэмбриогенным каллусами, а также между зародышами, способными образовывать эмбриогенный каллус,
©
и зародышами, не способными образовывать его, свидетельствует:
- об определенной роли складывающегося гормонального баланса в индукции морфогенеза in vitro;
- об особой роли чувствительности тканей зародышей к регуляторам роста, которые определяют его компетентность и готовность воспринимать экзогенный гормональный сигнал и реагировать на него определенным образом.
Литература
Белоруссова А. С., Третьякова И. Н. Особенности формирования соматических зародышей у лиственницы сибирской: эмбриологические аспекты // Онтогенез. 2008. Т. 39, № 2. С. 106-115.
Бутенко Р. Г. Гормональная регуляция диффе-ренцировки растительной клетки в культуре in vitro // Рост и гормональная регуляция жизнедеятельности растений. Иркутск: Наука, 1974, С. 67-85.
Катаева Н. В., Александрова И. Г., Карягина Т. Б., Машкова А. Х. Возможности метода иммунофер-ментного анализа для определения фитогормонов в культивируемых in vitro побегах // Физиология растений. 1990. Т. 37, № 4. С. 813-821.
Кулаева О. Н. Цитокинины, их структура и функции. М.: Наука, 1973. 264 с.
Меняйло Л. Н. Гормональная регуляция ксилоге-неза хвойных. Новосибирск: Наука, 1987. 185 с.
Полевой В. В. Фитогормоны. Ленинград: ЛГУ, 1982. 183 с.
Третьякова И. Н., Ижболдина М. В. Особенности роста эмбриогенного каллуса и получение соматических зародышей у кедра сибирского // Хвойные бореальной зоны. 2008. Т. 25, № 1-2. С. 71-76.
Третьякова И. Н., Барсукова А. В. Соматический эмбриогенез в культуре in vitro трех видов лиственницы // Онтогенез. 2012. Т. 43, № 6. С. 425-435.
Хмара К. А. Динамика содержания фитогормонов в каллусной ткани при индукции органогенеза in vitro зародышей Picea abies L. Karst // Труды КарНЦ РАН. 2011. № 3. С. 131-136.
Чайлахян М. Х., Ложникова В. Н. Фитогормоны и цветение растений // Регуляторы роста и развития растений. Киев, 1989. С.117-132.
Шалаев Е. А., Третьякова И. Н. Индукция соматического эмбриогенеза у ели саянской в культуре in vitro // Хвойные бореальной зоны. 2011. Т. 28, № 1-2. С. 69-71.
Becwar M., Noland T., Wann S. Somatic embryo development and plant regeneration from embryogenic
Norway spruse callus // Tappi, 1987. Vol. 70, Nо 2. P. 155-160.
Burrows W. Cytokinins // Biochem. Soc. Trans, 1978. Vol. 6. Р. 1395-1400.
Hmara K. A., Kataeva N. V. Effect of plant genotype and cytokinin-like substances Norway Spruce (Picea abies L.) in vitro organogenesis // Russian Journal of Plant Physiology. 1993. Vol. 40, Nо 5. P. 802-803.
Kong L., Attree S. M., Fowke L. C. Changes of endogenous hormone levels in developingseeds, zygotic embryos and megagametophytes in Picea glauca // Physiol. Plant. 1997. Vol. 101. P. 23-30.
Label Ph., Sotta B., Miginiac E. Endogenous levels of ABA and IAA during in vitro rooting of Wild Cherry explants produced by micropropagation // Plant Growth Red. 1989. Vol. 8. Р. 325-333.
Latkowska M. J., Rakowski K. Endogenous levels of phytohormones in the embryogenic tissue of Norway spruce // Quality enhancement of plant production through tissue culture. Working Group 2, Advanced propagation techniques. Inaugural meeting in Tampere. (Finland, 7-10 july. 2000 г.). Finland, 2000. P. 23-25.
Mohan C. J., Wenton R. J., Soltes E. J. Enhancement of somatic embryogenesis in Norway spruce (Picea adies L.) // Theor Appl Genet. 1988. Vol. 76, No 4. P. 501-506.
Murashige Т., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures // Physiol. Plant. 1962. Vol. 5, No 95. P. 473-497.
Rodbard D. Statistical quality control and routhine data processing for radioimmunoassay and immuno-radiometric assays // Clin. Chem. 1974. Vol. 20, No 8. P. 1255-1261.
Skoog F., Miller W. Chemical regulation of growth and organ formation in vitro // Symp. Soc. Exp. Biol., 1957. Vol. 11. Р. 118-121.
Stabel P., Eriksson T., Engstrom P. Changes in Protein Synthesis upon Cytokinin-Mediated Adventitious Bud Induction and during Seedling Development in Norway Spruce, Picea abies // Plant Physiol. 1990. Vol. 92. Р. 1174-1183.
Vagner M., Vondrakova Z., Spackova J. et al. Norway spruce somatic embryogenesis: Endogenous levels of phytohormones during somatic embryo development // In: Plant Biotechnology and In Vitro Biology in the 21 Century (Altman A. et al. eds.), Kluwer Ac. Publ., Netherlands. 1999. P. 93-96.
von Arnold S. Improved efficiency of somatic embryogenesis in mature embryos of Picea abies (L.) Karst. // J. Plant Physiol. 1987. Vol. 128, No 2. P. 233-244.
Walton D. Biochemistry and physiology of ab-scisic acid // Annu. Rev. Plant Physiol. 1980. Vol. 31. Р. 453-489.
Поступила в редакцию 02.11.2015
References
Belorussova A. S., Tret'yakova I. N. Osobennosti formirovaniya somaticheskih zarodyshej u listvennicy sibirskoj: ehmbriologicheskie aspekty [Patterns of somatic embryo formation in Siberian larch: embryological
aspects]. Ontogenez [Russ. J. Developmental Biol.]. 2008. Vol. 39, No 2. P. 106-115.
Chajlahyan M. H., Lozhnikova V. N. Fitogormony i cvetenie rastenij [Phytohormones and flowering of
plants]. Regulyatory rosta i razvitiya rastenii [Regulators of growth and development in plants]. Kiev, 1989. P. 117-132.
Hmara K. A. Dinamika soderzhaniya fitogormonov v kallusnoj tkani pri indukcii organogeneza in vitro zaro-dyshej Picea abies L. Karst [Dynamics of phytohormones in callus tissue during the induction of organogenesis in embryos of Picea abies L. Karst in vitro]. Trudy KarNC RAN [Trans. KarRC RAS]. 2011. No 3. P. 131-136.
Kataeva N. V., Aleksandrova I. G., Karyagina T. B., Mashkova A. H. Vozmozhnosti metoda immunofer-mentnogo analiza dlya opredeleniya fitogormonov v kul'tiviruemyh in vitro pobegah [Possibilities of enzyme-linked immunosorbent assay for determining phytohormones in in vitro grown shoots]. Fiziologiya rastenij [Russ. J. PlantPhysl.]. 1990. Vol. 37, No 4. P. 813-821
Kulaeva O. N. Citokininy, ih struktura i funkcii [Cyto-kinins, their structure and functions]. Moscow: Nauka, 1973. P. 9-23.
Menyajlo L. N. Gormonal'naya regulyaciya ksilo-geneza hvojnyh [Hormonal regulation of xylogenesis in conifers]. Novosibirsk: Nauka, 1987. 185 p.
Polevoj V. V. Fitogormony [Phytohormones]. Leningrad: LGU, 1982. 183 p.
Shalaev E. A., Tret'yakova I. N. Indukciya so-maticheskogo ehmbriogeneza u eli ayanskoj v kul'ture in vitro [Induction of somatic embryogenesis by Picea aja-nensis in culture in vitro]. Hvojnye boreal'nojzony [Conifers of the boreal zone]. 2011. Vol. 28, No 1-2. P. 69-71.
Tret'yakova I. N., Barsukova A. V. Somaticheskij ehmbriogenez v kul'ture in vitro trekh vidov listvennicy [Somatic embryogenesis in in vitro culture of three larch species]. Ontogenez [Russ. J. Developmental Biol.]. 2012. Vol. 43, No 6. P. 425-435.
Tret'yakova I. N., Izhboldina M. V. Osobennosti rosta ehmbriogennogo kallusa i poluchenie somaticheskih zarodyshej u kedra sibirskogo [Peculiarities of embryo-genic callus growth and obtaining somatic embryos of Pinus sibirica]. Hvojnye boreal'noj zony [Conifers of the boreal zone]. 2008. Vol. 25, No 1-2. P. 71-76.
Becwar M., Noland T., Wann S. Somatic embryo development and plant regeneration from embryo-genic Norway spruse callus. Tappi, 1987. Vol. 70, No 2. P. 155-160.
Burrows W. Cytokinins. Biochem. Soc. Trans, 1978. Vol. 6. P. 1395-1400.
Hmara K. A., Kataeva N. V. Effect of plant genotype and cytokinin-like substances Norway Spruce (Picea
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРЕ:
Хмара Константин Алексеевич
научный сотрудник, к. б. н.
Институт экологических проблем Севера УрО РАН Набережная Северной Двины, 23, Архангельск, Россия, 163000 эл. почта: KAX1961@yandex.ru
abies L.) in vitro organogenesis. Russian Journal of Plant Physiology. 1993. Vol. 40, No 5. P. 802-803.
Kong L., Attree S. M., Fowke L. C. Changes of endogenous hormone levels in developingseeds, zygotic embryos and megagametophytes in Picea glauca. Physiol. Plant. 1997. Vol. 101. P. 23-30.
Label Ph., Sotta B., Miginiac E. Endogenous levels of ABA and IAA during in vitro rooting of Wild Cherry explants produced by micropropagation. Plant Growth Red. 1989. Vol. 8. P. 325-333.
Latkowska M. J., Rakowski K. Endogenous levels of phytohormones in the embryogenic tissue of Norway spruce. Quality enhancement of plant production through tissue culture. Working Group 2. Advanced propagation techniques. Inaugural meeting in Tampere. (Finland, 7-10 july. 2000 r.). Finland, 2000. P. 23-25.
Mohan C. J., Wenton R. J., Soltes E. J. Enhancement of somatic embryogenesis in Norway spruce (Picea adies L.). Theor Appl Genet. 1988. Vol. 76, No 4. P. 501-506.
Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant. 1962. Vol. 5, No 95. P. 473-497.
Rodbard D. Statistical quality control and routhine data processing for radioimmunoassay and immuno-radiometric assays. Clin. Chem. 1974. Vol. 20, No 8. P. 1255-1261.
Skoog F., Miller W. Chemical regulation of growth and organ formation in vitro. Symp. Soc. Exp. Biol., 1957. Vol. 11. P. 118-121.
Stabel P., Eriksson T., Engstrom P. Changes in Protein Synthesis upon Cytokinin-Mediated Adventitious Bud Induction and during Seedling Development in Norway Spruce, Picea abies. Plant Physiol. 1990. Vol. 92. P. 1174-1183.
Vagner M., Vondrakova Z., Spackova J., Cvikro-va M., Eder J., Lipavska H., Albrechtova J., Svobodo-va H., Machackova I. Norway spruce somatic embryogenesis: Endogenous levels of phytohormones during somatic embryo development. In: Plant Biotechnology and In Vitro Biology in the 21 Century (Altman A. et al. eds.), Kluwer Ac. Publ., Netherlands. 1999. P. 93-96.
von Arnold S. Improved efficiency of somatic embryogenesis in mature embryos of Picea abies (L.) Karst. J. Plant Physiol. 1987. Vol. 128, No 2. P. 233-244.
Walton D. Biochemistry and physiology of abscisic acid. Annu. Rev. Plant Physiol. 1980. Vol. 31. P. 453-489.
Received November 02, 2015
CONTRIBUTOR:
Hmara, Konstantin
Institute of Ecological Problems of the North, Ural Branch, Russian Academy of Sciences 23 Severnaya Dvina Emb., 163000 Arkhangelsk, Russia e-mail: KAX1961@yandex.ru
