CC BY
46
МЕДИКО-БМОЛОГИНЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ
Сочетанное действие гестагенов и доксорубицина на клетки культур опухолевых линий HeLa и MCF-7
К.А.Атрошкин1, Н.Л.Шимановский1, А.В.Семейкин1, В.М.Ржезников2, М.А.Секирина1, Е.А.Кирсанова1, Т.А.Федотчева1
Российский государственный медицинский университет, кафедра молекулярной фармакологии и радиобиологии медико-биологического факультета, Москва (зав. кафедрой - чл-кор. РАМН, проф. Н.Л.Шимановский);
2Научно-исследовательский институт витаминов, лаборатория химии природных биорегуляторов, Москва (зав. лабораторией - д.м.н. В.М.Ржезников)
Изучались эффекты, оказываемые гестагенами при сочетанном действии с доксорубицином на клетки опухолевых линий рака шейки матки человека HeLa и рака молочной железы человека MCF-7, а также молекулярные механизмы действия гестагенов на пролиферацию клеток данных опухолевых линий. Исследование проводили с использованием методов МТТ-теста, а также колориметрического измерения активности каспазы-3, иммуноцитохимического исследования уровня фактора bcl-2 и электрофореза экстракта геномной ДНК клеток. Было показано, что гестагены ^a-аце-токси-3р-бутаноилокси-6-метилпрегна-4,6-диен-20-он (АБМП), медроксипрогестерона ацетат, прогестерон и левонор-гестрел обладают цитостатической активностью в отношении исследуемых опухолевых клеток. Также было показано, что гестагены усиливают цитостатический эффект доксорубицина, в наибольшей степени при использовании комбинации «АБМП+доксорубицин», и при совместном действии АБМП и доксорубицина в течение 72 ч на клетки HeLa происходит активация каспазы-3, но не изменяется уровень фактора bcl-2.
Ключевые слова: прогестерон, прогестагены, доксорубицин, рак молочной железы, рак шейки матки, апоптоз
Combined action of gestagens and doxorubicine on MCF-7 and HeLa cancer cell cultures
K.A.Atroshkin1, N.L.Shimanovsky1, A.V.Semeykin1, V.M.Rzheznikov2, M.A.Sekirina1, E.A.Kirsanova1, T.A.Fedotcheva1
1 Russian State Medical University, Department of Molecular Pharmacology and Radiobiology, Medico-Biological Faculty, Moscow
(Head of the Department - Corresponding Member of RAMS, Prof. N.L.Shimanovsky) 2Research Institute of Vitamins, Laboratory of Natural Bioregulators Chemistry, Moscow (Head of the Laboratory - MD V.M.Rzheznikov)
We studied the effects of the combination of doxorubicine with different progestagens on cancer cells (HeLa and MCF-7, respectively human cervical and breast cancer cell cultures), and also possible mechanisms of the action of this combination on the cancer cell proliferation and death. The MTT-assay and also bcl-2 immunostaining, colorimetric caspace-3 assay and electrophoretic imaging of DNA extracts were used as study methods. It was shown that the exposition of the target cells to 17-a-acetoxy-3-b-butanoiloxy-6-metilpregna-4,6-dien-20-on (ABMP), progesterone, levonorgestrel, and medroxiprogesterone acetate can result in the decrease of cancer cell proliferation. Also it was shown that gestagens can force the effect of doxorubicine, with maximal effect in the case of ABMP + doxorubicine combination. Within 72 hours of incubation of cells with that combination there was a clear effect on caspase-3 activation however without any influence on the bcl-2 levels.
Key words: progesterone, progestagens, doxorubicine, breast cancer, cervical cancer, apoptosis
Для корреспонденции:
Атрошкин Кирилл Андреевич, аспирант кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии медико-биологического факультета Российского государственного медицинского университета
Адрес: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1 Тел. (499) 246-6942 e-mail: [email protected]
Статья поступила 17.03.2008 г., принята к печати 19.11.2008 г.
По данным ВОЗ, смертность от злокачественных новообразований в развитых странах занимает третье место в структуре общей смертности, уступая лишь ише-мической болезни сердца и цереброваскулярным нарушениям [1]. Среди онкологических заболеваний существенную часть представляют гормонзависимые опухоли репродуктивной системы.
В современной клинической практике для лечения опухолей репродуктивной системы рекомендуют использовать ци-
тостатические препараты, нарушающие жизнедеятельность опухолевых клеток и блокирующие их митотическое деление. Широкое распространение и применение в клинической онкологии получили антрациклиновые антибиотики, в частности, доксорубицин. Однако применение доксорубицина, как и других химиотерапевтических средств, сопряжено с развитием побочных эффектов, в некоторых случаях требующих снижения дозы или полной отмены препарата. Кроме того, со временем развивается резистентность опухолевых клеток к цитостатическому действию доксорубицина. Поэтому ведется поиск различных веществ, способных снизить побочные эффекты доксорубицина и ингибировать развитие к нему резистентности. Среди таких веществ особый интерес представляют гестагены, которые могут не только регулировать развитие резистентности, но и сами по себе оказывать противоопухолевый эффект.
Цель исследования - изучить свойства гестагенов как противоопухолевых препаратов и модуляторов сенсибилизации опухолевых клеток к химиотерапии и выявить молекулярные механизмы действия гестагенов на пролиферацию клеток-мишеней.
Материалы и методы
В исследованиях использовали клеточные культуры HeLa (эпителиоидный рак шейки матки человека; предоставлена Институтом вирусологии им. И.И.Мечникова), MCF-7 (рак молочной железы человека; предоставлена Институтом вирусологии им. И.И.Мечникова). Культивирование клеток осуществлялось в стерильных условиях с использованием ла-минарбокса «Ламинар-С» («Ламинарные Системы», Россия). Клетки инкубировали при 37°С при 5% концентрации СО2 и относительной влажности воздуха 95%. При культивировании клеток использовали стандартную среду DMEM («GIBKO», США) с добавлением 20% термоинактивирован-ной эмбриональной телячьей сыворотки («Sigma», США), L-глутамина (Институт полиомиелита, Россия) в концентрации 100 мкг/мл и антибиотиков гентамицина сульфата («Ве-рофарм», Россия) и стрептомицина сульфата («Верофарм», Россия) в концентрации 40 мкг/мл.
В качестве исследуемых веществ были использованы прогестагены: прогестерон («Sigma», США), левоноргестрел («Sigma», США), медроксипрогестерона ацетат (МПА) («Sigma», США), а также новый прогестаген 17а-ацетокси-3р-бутаноилокси-6-метилпрегна-4,6-диен-20-он (АБМП, синтезирован в ЭНЦ и ОНЦ РАМН В.М.Ржезниковым с сотр. [2]).
CH3
CO
O
II
OCOCH3
CH2 CH3
CH3
Рис. 1. Структурная формула прогестагена 17а-ацетокси-30-бу-таноилокси-6-метил-прегна-4,6-диен-20-она (АБМП)
Введение в молекулу гестагена дополнительных функциональных групп предполагает более высокую гестагенную активность и химическую стабильность АБМП по отношению к прогестерону и ряду других прогестагенов (структурная формула АБМП приведена на рис. 1).
Влияние гестагенов и доксорубицина на жизнеспособность опухолевых клеток оценивали по методике МТТ-теста (МТТ - 3-(4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенил тетразолий бромистый), основанной на способности дегидрогеназ митохондрий живых и метаболически активных клеток превращать водорастворимый МТТ в нерастворимые окрашенные кристаллы формазана [3].
Для исследования жизнеспособности клеток в условиях инкубации с препаратами клетки аденокарциномы молочной железы линии MCF-7 и аденокарциномы шейки матки HeLa инкубировали с гестагенами в течение 7 или 3 сут. В качестве контроля использовали клетки тех же линий, инкубируемые в тех же условиях, но в отсутствие исследуемых соединений. При оценке эффекта комбинации гестаген+доксорубицин клетки инкубировали в течение 72 ч с гестагеном с добавлением до-ксорубицина (в концентрации 5 х 10-6 М) в последние 24 ч инкубации. В этом случае в качестве дополнительного контроля использовали клетки, инкубируемые с доксорубицином в указанной концентрации в течение 24 ч после предшествующих 48 ч инкубации в отсутствие исследуемых веществ.
Оценку экспрессии онкобелка bcl-2 в клетках проводили с использованием метода иммуногистохимического окрашивания с использованием первичных моноклональных антител анти-Ьс1-2 и анти-IgG вторичных антител, меченных флуорес-цеином, согласно техническому протоколу фирмы-производителя («Dako», США). Микроскопическое исследование образцов проводили на флуоресцентном микроскопе «Axiostar» (Сarl Zeiss, Германия). После получения изображений проводили подсчет количества клеток в поле зрения, а также оценивали соотношение количества флуоресцирующих клеток к общему количеству клеток в поле зрения и вычисляли интегральную площадь, соответствующую значениям флуоресценции выше фоновых (в вычислениях использованы программы «Image Pro Plus 5.0», Mediacybernetics, США).
Оценку апоптоза на основании активности специфических ферментов проводили методом колориметрического измерения активности каспазы-3 (CaspACE™, Promega, США). Активность каспазы-3 оценивали по гидролизу специфического пептидного субстрата Ас-DEVD-pNA (ацетил-Асп-Глу-Вал-Асп-р-нитроаланин), приводящему к высвобождению хромофора - р-нитроаланина, согласно техническому протоколу фирмы-производителя (Promega, США). Для оценки активности каспазы-3 использовали культуру клеток HeLa. Клетки культуры MCF-7 не использовали по причине наличия у данной линии клеток мутации в гене каспазы-3, инактивирующей фермент [4].
Для оценки апоптоза в культуре опухолевых клеток MCF-7 использовали метод оценки апоптоза, основанный на анализе электрофореграмм экстракта геномной ДНК исследуемой культуры [5]. Регистрацию флуоресценции проводили на установке «Vilber Lourmat» (США) с использованием оптической системы производства «Nikon» (Япония). Последующую оценку электрофореграммы проводили с использованием программного обеспечения «Image
H2C
O
Сочетанное действие гестагенов и доксорубицина на клетки культур опухолевых линий HeLa и MCF-7
Pro Plus 5.0» («Mediacybernetics», США). В качестве оценочного параметра для определения степени апоптоза в культуре использовали коэффициент, отображающий соотношение областей нормализованной по площади и по средней величине интенсивности флуоресценции сильно и слабо фрагментированной ДНК. Клетки аденокарциномы молочной железы линии MCF-7 инкубировали с гестагена-ми в течение 72 ч. Контролем служили клетки, инкубируемые в тех же условиях, но в отсутствие соединений. При оценке эффекта комбинации гестаген+доксорубицин клетки инкубировали в течение 72 ч с гестагеном с добавлением доксорубицина (в концентрации 5 х 10-6 М) в последние 24 ч инкубации. В этом случае в качестве дополнительного контроля использовали клетки, инкубируемые с доксо-рубицином в указанной концентрации в течение 24 ч после предшествующих 48 ч инкубации в отсутствие исследуемых веществ.
Статистическая обработка полученных данных проводилась на персональном IBM-совместимом компьютере с помощью программы «Statistica 6.0» (Statsoft, США). Вычислялось среднее значение выборки (М), стандартное отклонение (SD), статистическую оценку проводили с использованием непараметрического рангового Т-критерия Уилкоксона (Манна-Уитни) и Т-критерия Стьюдента [6].
Результаты исследования и их обсуждение
Влияние гестагенов на жизнеспособность опухолевых клеток. При исследовании влияния АБМП и препаратов сравнения (левоноргестрел, МПА, прогестерон) на жизнеспособность опухолевых клеток гормончувствительных клеточных культур MCF-7 и HeLa был выявлен их цитостатический эффект - подавление жизнеспособности клеток. Для всех изучаемых гестагенов наблюдали выраженную концентраци-
онную зависимость цитостатического эффекта на опухолевые клетки. Антипролиферативная активность АБМП при инкубации в течение 72 ч (подавление жизнеспособности составило менее 36% при концентрации 10-6 М) уступала таковой левоноргестрела (подавление жизнеспособности составило более 50%). Однако, как было показано в последующих экспериментах, комбинация АБМП с доксорубицином оказывала значительно более выраженный эффект на пролиферацию клеток линии аденокарциномы шейки матки HeLa. Полученные результаты представлены на диаграмме (рис. 2).
Показано, что сочетание АБМП с доксорубицином в значительно большей степени приводило к угнетению пролиферации клеток линии рака молочной железы линии MCF-7 по сравнению с доксорубицином отдельно, а также при сочетании доксорубицина с другими гестагенами. Так, при сочетании АБМП в концентрации 10-6 М и доксорубицина в концентрации 10-5 М подавление жизнеспособности составляло более 40%, а при инкубации клеток только с цитостатиком в той же концентрации - не более 20%. Таким образом, АБМП в сравнении с другими гестагенами (МПА, левоноргестрел) продемонстрировал наиболее выраженную антипролифера-тивную активность в отношении клеток рака молочной железы линии MCF-7 в сочетании с доксорубицином. Полученные результаты представлены на диаграмме (рис. 3).
Полученные нами данные показывают, что сочетание АБМП и доксорубицина, даже при концентрации гестагена 10-8 М, приводило к угнетению жизнеспособности клеток линии HeLa более чем на 50%. При этом сочетание того же ци-тостатика с другими прогестинами обладало меньшим анти-пролиферативным эффектом и приводило к подавлению жизнеспособности на 27,7% и 27,1% при инкубации с ЛГ и МПА соответственно. Таким образом, АБМП в сравнении с другими гестагенами (МПА, левоноргестрел) продемонстрировал выраженную антипролиферативную активность в от-
45 40 35 30 25 20 15 10 5 0
1 2 3
10-5 M 10-6 M
10-8 M
Рис. 2. Подавление жизнеспособности клеток линии MCF-7 при инкубации с доксорубицином (концентрация 10-5 моль/л) и гестагенами (АБМП, левоноргестрел, медроксипрогестерона ацетат, концентрации 10-6 и 10-8 моль/л) в течение 72 ч: 1 - доксорубицин, 2 - АБМП в сочетании с доксорубицином, 3 - медроксипрогестерона ацетат в сочетании с доксорубицином, 4 - левоноргестрел в сочетании с доксорубицином. Ось ординат - уровень подавления жизнеспособности клеток по данным МТТ-теста, значения для контрольных образцов приняты за 0%; * - достоверные отличия от контроля при р < 0,05.
70 60 50 40 30 20 10 0
** ♦
1 2 3 4
10-5 M 10-6 M 10-8 M
Рис. 3. Подавление жизнеспособности клеток линии HeLa при инкубации с доксорубицином и гестагенами в течение 72 ч:
1 - доксорубицин, 2 - АБМП в сочетании с доксорубицином, 3 - медроксипрогестерона ацетат в сочетании с доксорубицином, 4 - левоноргестрел в сочетании с доксорубицином. Ось ординат - уровень подавления жизнеспособности клеток по данным МТТ-теста, значения для контрольных образцов приняты за 0%; * - достоверные отличия от контроля, р < 0,05; ** - достоверные отличия от контроля, р < 0,001. ♦ - достоверные отличия по отношению к веществам сравнения, р < 0,05.
*
*
*
*
*
т *
*
*
*
*
ношении клеток рака шейки матки линии Не1_а. Сочетание АБМП с доксорубицином также приводило к более эффективному угнетению пролиферации клеток этой линии.
Для изучения возможных механизмов усиления гестаге-нами цитостатического эффекта доксорубицина было изучено влияние данных препаратов на апоптоз и активность каспазы-3.
Влияние гестагенов на апоптоз клеток в культуре МОР-7.
При сроке инкубации 72 ч с гестагенами и 24 ч с доксорубицином в концентрации 5 х 10-6 М выраженность апоптоза при воздействии гестагенов в комбинации с доксорубицином на культуру клеток не выявила достоверных отличий от контроля (данные не представлены).
Отсутствие корреляции эффекта снижения жизнеспособности по данным МТТ-теста и эффекта индукции апоптоза при совместном действии гестагенов и доксорубицина можно объяснить следующим образом: по нашему мнению, ин-гибирование роста клеток в присутствии гестагенов обусловлено замедлением репликативных процессов. Клетки переходят в секреторную фазу или фазу дифференцировки, запускается каскад ферментативных реакций, приводящий с течением времени к гибели клеток. На это указывает и тот факт, что цитостатическое действие гестагенов развивается при длительной инкубации (более 3 сут). Такое время наступления эффекта соотносится со временем деления клеток исследуемых культур. Так, по данным микроскопии, время удвоения для клеток МСР-7 составляло 22 ч, для клеток Не1_а - 18 ч. При этом доксорубицин в концентрации 5 х 10-6 М вызывал торможение роста клеток более чем на 50% уже при инкубации в течение 48 ч, как это было показано на клетках линии МСР-7.
Следовательно, для осуществления цитостатического эффекта доксорубицина должны пройти 1-2 клеточных цикла. Такой быстрый эффект доксорубицина связан с прямым воздействием на ДНК делящейся опухолевой клетки (ДНК-алкилирующее действие). В отношении гестагенов необходимо упомянуть, что по данным литературы, например, МПА оказывает на клетки линии рака молочной железы человека Т-470 двухфазное действие: при инкубации в течение 24 и 48 ч - стимулирует пролиферацию, а при времени инкубации 72 ч - ингибирует ее [7].
При анализе экспрессии антиапоптотического белка Ьс!-2 в культуре клеток МСР-7 при инкубации с гестагенами и доксорубицином с помощью иммуноокрашивания не было выявлено достоверных отличий от контроля при времени инкубации 72 ч. Это позволяет предположить отсутствие значимого влияния исследуемых веществ на экспрессию фактора Ьс!-2. Следовательно, реализация цитостатического действия гестагенов происходит без участия фактора Ьс!-2 (данные не представлены ввиду отсутствия статистически значимых отличий).
Влияние гестагенов на активность каспаз в культуре клеток ИеЬа. Показано, что при сроке инкубации 72 ч активность каспазы-3 при инкубации с АБМП превышала таковую при инкубации с другими гестагенами и в контрольной группе, однако данные отличия не являются достоверными (данные не представлены).
Наибольшей величины уровень активности каспазы-3 достигал при инкубации клеток с АБМП в комбинации с доксору-
Таблица. Активность каспазы-3 в культуре инкубации с гестагенами и доксорубицином клеток ИеЬа при
Соединения Концентрация веществ, Активность каспазы-3, моль/л усл. ед.
МПА+ Доксорубицин 10-6 0,22 ± 0,04
ЛГ+ Доксорубицин 10-6 0,24 ± 0,08
АБМП + Доксорубицин 10-6 0,41 ± 0,09*
Доксорубицин 5 х 10-6 0,27 ± 0,06
Контроль 0,23 ± 0,06
* достоверные отличия от контроля, р < 0,05.
бицином. Активность каспаз при инкубации с МПА (0,16 ед.) и ЛГ (0,21 ед.) была значительно ниже, чем при инкубации с АБМП (0,3 ед.), и при этом отличалась от таковой в контрольной группе незначительно (0,25 ед.). Значение активности каспазы-3 при воздействии на клетки доксорубицина совместно с АБМП превышало активность фермента в группе контроля, и данное отличие было статистически значимо (р < 0,05; таблица).
Повышение активности каспазы-3, наблюдаемое при комбинированном применении доксорубицина и АБМП, позволяет предположить, что при данной дозе и времени действия наблюдается активация системы апоптоза с участием каспаз и данный эффект превышает таковой при воздействии цитостатического препарата доксорубицина и гестагена АБМП отдельно друг от друга.
Возможные механизмы, обусловливающие синергизм в ци-тостатическом действии гестагенов и доксорубицина, связаны с изменениями метаболизма опухолевых клеток, 1) не затрагивающими при коротких сроках инкубации факторы, определяющие инициацию апоптоза или дифференцировки клеток, 2) не приводящими к инициации апоптоза при условии применения гестагена как самостоятельного средства, и 3) приводящими к активации внутриклеточных систем, участвующих в реализации клеточной гибели посредством апоптоза, причем в случае применения комбинации «синтетический гестаген (АБМП)+антрациклиновый антибиотик» этот эффект активации достигал максимума. В то же время эффект активации сигнальных систем (каспазы-3) не является определяющим в апоптозе клеток некоторых клеточных популяций (в частности, линии клеток МСР-7), что позволяет предполагать реализацию цитостатического действия гестагенов в комбинации с цито-статиками через изменения метаболизма на уровне различных клеточных структур.
Эффект может быть реализован: 1) со стороны гестагенов - через быстрые эффекты, опосредуемые мембранными рецепторами, влияющими на градиенты биологически активных веществ в клетке и контролирующими клеточный цикл, стимулируя деление [8], 2) со стороны цитоста-тика - его перераспределением под влиянием гестагенов [9], а также быстрой возможностью реализации эффекта цитостатика при инициации деления клетки. Кроме того, имеются данные об изменении активности системы муль-тилекарственной резистентности клеток под воздействием гестагенов [10].
Известно, что доксорубицин является препаратом первой линии терапии как при раке шейки матки, так и при раке молочной железы. В качестве препарата второй линии при этих заболеваниях в клинике применяется гестаген МПА. Проведенное исследование обосновывает целесооб-
Сочетанное действие гестагенов и доксорубицина на клетки культур опухолевых линий HeLa и MCP-7
разность применения этих препаратов в комбинации при терапии рака шейки матки и рака молочной железы. Полученные данные также свидетельствуют о цитостатической и противоопухолевой активности нового гестагена АБМП. АБМП обладает химиосенсибилизирующей активностью и может быть рекомендован для последующего изучения с перспективой использования в клинической практике в качестве универсального модулятора эффекта химиотера-певтических средств.
Выводы
1. АБМП, МПА, прогестерон и левоноргестрел обладают цитостатической активностью в отношении опухолевых клеток рака молочной железы человека MCF-7 и рака шейки матки человека HeLa.
2. Гестагены усиливают цитостатический эффект доксорубицина. В наибольшей степени это усиление выражено в случае АБМП в клетках MCF-7 и в клетках HeLa.
3. При совместном действии гестагенов и доксорубицина в течение 72 ч на клетки HeLa происходит активация ферментных систем (каспазы-3), участвующих в реализации апоптоза клеток, но не изменяется уровень белка bcl-2.
Литература
1. Всемирная организация здравоохранения. 1G ведущих причин смерти // Бюл. Всемирной организации здравоохранения, 2GG8.
2. Сергеев П.В., Федотчева Т.Д., Ржезников В.М. и соавт. Новый отечественный гестаген с противоопухолевой активностью // Вестн. РДМН. - 2GG7. - №5. -С.27-32.
3. Mealey K.L., Barhoumi R., Burghart R.C. et al. Doxycycline induces expression of P-glycoprotein in MCF-7 breast carcinoma cells // Antimicrob. Agents Chemother. - 2GG2. - V.46. - №3. - Р.755-761.
4. Kurokawa H., Nishio K., Fukumoto H. et al. Alteration of caspase-3 (CPP32/Yama/apopain) in wild-type MCF-7, breast cancer cells // Oncol. Rep. -1999. - V.6. - №1. - Р.33-37.
5. Allen P.D., Newland A.C. Electrophoretic DNA analysis for the detection of apop-tosis // Mol. Biotechnol. - 1998. - V.9. - №3. - Р.247-251.
6. Платонов Д.Е. Статистический анализ в медицине и биологии. - М.: Изд-во РДМН, 2GGG.
7. Thuneke I., Shulte H.M., Bamberger A.M. Biphasic effect of medroxyprogesterone-acetate (MPA) treatment on proliferation and cyclin D1 gene transcription in T47D breast cancer cells // Breast Cancer Res. Treat. - 2000. - V.63. - №3. - Р.243-248.
8. Boonyaratanakornkit V., McGowan E., Sherman L. et al. The role of extranuclear signaling actions of progesterone receptor in mediating progesterone regulation of gene expression and the cell cycle // Mol. Endocrinol. - 2007. - V.21. - №2. - Р.359-375.
9. Altinoz M.A., Bilir A., Gedikoglu G. et al. Medroxyprogesterone and tamoxifen augment anti-proliferative efficacy and reduce mitochondria-toxicity of epirubicin in FM3A tumor cells in vitro // Cell. Biol. Int. - 2007. - V.31. - №5. - Р.473-481.
10. Федотчева Т.А. Влияние гестагенов на пролиферацию и факторы мультиле-карственной резистентности опухолевых клеток. - Автореф. дис. к.м.н. - М., 2003. - 20 с.
Сведения об авторах:
Шимановский Николай Львович, член-корреспондент РАМН, профессор,
заведующий кафедрой молекулярной фармакологии и радиобиологии
медико-биологического факультета Российского государственного
медицинского университета
Адрес: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1
Телефон: (499) 246-6942
e-mail: [email protected]
Семейкин Александр Владимирович, кандидат медицинских наук,
доцент, доцент кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии
медико-биологического факультета Российского государственного
медицинского университета
Адрес: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1
Телефон: (499) 246-6942
e-mail: [email protected]
Федотчева Татьяна Александровна, кандидат медицинских наук,
заведующая учебной лабораторией кафедры молекулярной фармакологии
и радиобиологии медико-биологического факультета Российского
государственного медицинского университета
Адрес: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1
Телефон: (499) 246-6942
e-mail: [email protected]
Секирина Мария Алексеевна, аспирант кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии медико-биологического факультета Российского государственного медицинского университета Адрес: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1 Телефон: (499) 246-6942 e-mail: [email protected]
Кирсанова Елена Александровна, лаборант кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии медико-биологического факультета Российского государственного медицинского университета Адрес: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1 Телефон: (499) 246-6942 e-mail: [email protected]
Ржезников Владимир Маркович, доктор химических наук, заведующий лабораторией химии природных биорегуляторов НИИ витаминов
Адрес: 117246, Москва, Научный проезд, 14а Телефон: (495) 324-9605 E-mail: [email protected]
научная жизнь
28-29 сентября 2009 года IV Ежегодный конгресс специалистов перинатальной медицины
Гостиница «Рэдиссон САС Славянская» (Москва, Площадь Европы, 2) Телефоны Оргкомитета для справок:
Профессор Дегтярев Дмитрий Николаевич (научная программа Конгресса) Телефон: (495) 612-7881, е-таИ: [email protected]; [email protected]
Макарова Татьяна Владимировна (участие коммерческих компаний в выставке и научной программе) Телефоны: (495) 517-7055, 414-9835, телефон/факс: (495) 414-8947, е-тшП: [email protected]
Дополнительная информация на сайте www.congress-raspm.ru
